ProSpecT Astrovirus Microplate Assay [FR]
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1. 5 CONTENU DE LA TROUSSE 7 96 Chaque trousse contient suffisamment de produits pour 96 d terminations La dur e de conservation de la trousse est indiqu e sur l tiquette appos e sur l emballage Conserver tous les composants entre 2 et 8 C Avant utilisation laisser tous les r actifs atteindre la temp rature ambiante 20 25 C et m langer d licatement Apr s usage stocker tous les r actifs non utilis s entre 2 et 8 C Tous les r actifs l exception du tampon de lavage sont fournis pr ts l emploi Si le r actif est vers pour tre utilis avec des pipettes multicanaux ne pas r introduire le r actif en exc s dans le flacon Bey Mode d emploi Pipettes de transfert Couvercle de microplaque Certificat de contenu Fiche de proc dure Une plaque de microtitration de 96 puits compos e de douze barrettes s cables de 8 micropuits enduits d un anticorps polyclonal de lapin sp cifique des astrovirus Un sachet m tallis refermable contenant un dessiccatif est fourni pour la conservation des micropuits non utilis s Les micropuits peuvent tre utilis s jusqu 16 semaines apr s louverture initiale sous r serve qu ils aient t conserv s correctement dans le sachet Un flacon de chacun des composants suivants SAMPLE DILUENT Diluant pour chantillon 120 ml solution saline avec tampon tris contenant un agent antimicrobien et une teinture rouge Contr2. 6 19 Le tampon de lavage de force r active non utilis peut tre conserv jusqu 30 jours entre 2 et 8 C pour une utilisation ult rieure Lorsqu ils ne sont pas utilis s les r servoirs de tampon de lavage doivent tre rinc s l eau d min ralis e ou distill e et s cher a lair 6 20 L quipement de lavage manuel ou automatis doit tre exempt de toute contamination microbienne correctement talonn et entretenu conform ment aux instructions du fabricant 6 21 Lors de l utilisation de flacons de r actif compte gouttes tenir les flacons verticalement la buse se trouvant 5 mm environ au dessus du micropuits Serrer doucement le flacon et s assurer que les gouttes tombent directement dans les micropuits sans en toucher les c t s viter la contamination de toutes les buses compte gouttes 7 PR L VEMENT DES CHANTILLONS F CAUX Les chantillons f caux doivent tre pr lev s d s que possible apr s l apparition des sympt mes Les chantillons f caux destin s des tests directs doivent tre pr lev s dans des cuvettes exemptes de tout milieu conservateur s rum animal ions m talliques agents oxydants ou d tergents car tous ces additifs pourraient perturber le test ProSpecT Astrovirus En cas de pr l vement avec des couvillons rectaux ceux ci doivent contenir suffisamment de mati res f cales pour obtenir une suspension 10 de f ces voir la section 8 Les
3. la section 5 L utilisation du dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus pour le test direct d chantillons autres que f caux est d conseill e dans la mesure o une pr sence d antig nes insuffisante ou un pr l vement inappropri des chantillons pourraient engendrer des r sultats n gatifs trompeurs Un r sultat positif du test des chantillons f caux associ l existence de diarrh es est hautement vocateur d une gastro ent rite astrovirus Un r sultat positif n exclut pas la pr sence d autres pathog nes ent riques M me si la relation entre les astrovirus et la gastro ent rite est bien tablie3 4 une infection concomitante par d autres pathog nes microbiens est possible L utilisation d chantillons de m conium pour le dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus n a pas t valid e Les r sultats du test doivent tre interpr t s conjointement avec les informations obtenues gr ce aux tudes pid miologiques l valuation clinique du patient et d autres proc dures de diagnostic 12 VALEURS ATTENDUES Les taux de positivit peuvent varier en fonction de la pr valence des astrovirus dans diff rentes populations du lieu g ographique du pr l vement des chantillons de la manipulation de la conservation et du transport des chantillons du syst me de culture cellulaire employ et de l environnement sanitaire g n ral de la population de patients faisant
4. ProSpecT Astrovirus FR Dosage sur microplaque R2A0196 2e 1 INT R T Le test ProSpecT Astrovirus est un dosage immunoenzymatique qualitatif avec amplification destin a la d tection de l astrovirus dans les f ces humaines 2 R SUM Les astrovirus famille des Astroviridae sont des virus de petite taille 28 nm circulaires ARN simple brin polarit positive qui se caract risent par un aspect distinct en forme d toilet2 Huit s rotypes humains au moins ont t identifi s ce jour Les astrovirus sont aujourd hui reconnus comme tant fr quemment l origine de gastro ent rites virales chez le jeune enfant dans le monde entier La p riode d incubation dure de 3 4 jours et les sympt mes se manifestent habituellement pendant 2 a 3 jours mais ils peuvent persister jusqu 12 jours chez les personnes immunocomp tentes et sur une dur e significativement plus longue chez les patients immunod prim s De r cents rapports indiquent que l incidence de l infection astrovirus pourrait avoir t consid rablement sous estim e en raison des limites des m thodes diagnostiques disponibles Ces tudes laissent entendre qu apr s les rotavirus les astrovirus pourraient repr senter la seconde cause la plus fr quente de gastro ent rites virales infantiles et le troisi me pathog ne le plus fr quent derri re l esp ce des salmonelles et les rotavirus dans les diarrh es Les as
5. chantillons peuvent tre conserv s pendant 8 jours entre 2 et 8 C avant le test Pour une conservation long terme les chantillons f caux doivent tre stock s 20 C 8 PROC DURE MAT RIEL N CESSAIRE FOURNI Voir le contenu de la trousse la section 5 MAT RIEL N CESSAIRE MAIS NON FOURNI Conteneurs pour pr l vement d chantillons f caux Conteneurs jetables propres bouchon vis d une capacit minimale de 3 ml pour la pr paration des chantillons f caux Papier absorbant propre sur lequel les micropuits pourront tre s ch s Micropipettes de pr cision et pointes jetables permettant la distribution de volumes de 50 100 et 1000 ul Conteneur de mise au rebut avec d sinfectant frais ad quat Minuteur Flacon de lavage pour le tampon de lavage Eau distill e ou d min ralis e MAT RIEL FACULTATIF NON FOURNI Lecteur de microplaque capable d effectuer des lectures 450 nm avec une r f rence facultative 620 650 nm Agitateur vortex avec adaptateur de plaques ou incubateur agitateur de plaques Laveur de plaques automatis ou appareil ad quat pour le lavage de 8 barrettes de micropuits PROC DURE 8 1 Ouvrir le sachet m tallis retirer le nombre n cessaire de barrettes de microplaque et les placer dans un support de barrettes de microplaque Utiliser un puits pour le contr le n gatif et un puits pour le contr le positif Si moins de 8 puits doivent tre utili
6. ProSpecT Rotavirus ou ProSpecT Norovirus peuvent galement tre test s au moyen du test ProSpecT Astrovirus L utilisation d autres diluants pour chantillon n a pas t valid e 8 2 Ajouter 2 gouttes ou 100 ul de chaque chantillon dilu de contr le n gatif ou de contr le positif aux diff rents micropuits Un contr le n gatif et un contr le positif au moins doivent tre inclus dans chaque lot de tests 8 3 Apr s l ajout de tous les chantillons et contr les utiliser une micropipette pour ajouter 100 ul de conjugu dans chacun des micropuits et m langer d licatement pendant 20 30 secondes 8 4 Couvrir la plaque et incuber entre 20 et 30 C pendant 60 5 minutes 8 5 Aspirer ou d verser le contenu des puits Proc der au lavage en remplissant compl tement chaque puits avec du tampon de lavage dilu 350 400 ul par puits D verser tout le liquide des puits ou l aspirer apr s chaque lavage Proc der au lavage 5 fois au total Apr s le dernier lavage retirer le contenu et retourner la plaque sur des serviettes en papier propres ou aspirer En cas d utilisation d un laveur automatique celui ci doit tre programm pour effectuer 5 cycles de lavage Les laveurs doivent tre correctement talonn s afin de garantir que le remplissage et la vidange des micropuits sont complets entre chaque lavage Apr s le lavage final la plaque doit tre renvers e et tapot e sur du papier ab
7. l objet de l tude Les astrovirus se manifestent dans le monde entier avec une recrudescence en hiver et au printemps dans les zones temp r es Les nourrissons de moins de 12 mois sont fr quemment touch s et l ge de 5 ans plus de 80 des enfants montrent des preuves s rologiques d infection ant rieure Parmi les huit s rotypes humains le type 1 est de loin le plus pr valent gt 60 au Royaume Uni et certains signes indiquent que sa fr quence augmente une ann e sur deux Il est fr quent d observer des doubles infections par d autres pathog nes ent riques en particulier des rotavirus 13 CARACTERISTIQUES EN PERFORMANCES ETUDES CLINIQUES Le test ProSpecT Astrovirus a t valu de fa on ind pendante dans une tude clinique men e dans un centre de r f rence au Royaume Uni MATIERE DE L tude a t conduite sur des chantillons f caux pr lev s sur 94 patients consultant pour une gastro ent rite 51 de sexe f minin 42 de sexe masculin 1 de sexe inconnu tranches d ges de 0 1 88 4 ans L tude avait pour objectif de comparer les performances du test ProSpecT Astrovirus par rapport au test d j valid IDEIA Astrovirus La microscopie lectronique a t employ e pour confirmer le statut des chantillons positifs Les r sultats de l tude sont donn s dans le tableau 13 1 PERFORMANCE CLINIQUE Le test ProSpecT Astrovirus a montr une sensibilit de 100
8. le positif 4 ml astrovirus inactiv de type 1 prot ine recombinante non infectieuse dans une solution tamponn e contenant un agent antimicrobien CONTROL Contr le n gatif 4 ml solution saline avec tampon tris contenant un agent antimicrobien et une teinture rouge Conjugu polym re 12 ml anticorps monoclonal anti astrovirus sp cifique du genre conjugu a une structure polym re dextrane li e de multiples mol cules de peroxydase de raifort HRP dans une solution prot ique tamponn e contenant un agent antimicrobien et une teinture bleue CONJUGATE Tampon de lavage concentr 120 ml 10x solution tamponn e au phosphate contenant un agent antimicrobien et un d tergent WASH BUFFER x10 Diluer le tampon de lavage concentr 10x en ajoutant 1 volume de concentr a 9 volumes d eau distill e ou d min ralis e Le tampon de lavage dilu reste stable sur une dur e allant jusqu a 30 jours lorsqu il est conserv entre 2 et 8 C Substrat 12 ml 3 3 5 5 t tram thylbenzidine dans SUBSTRATE TMB un tampon l g rement acide Solution d arr t 12 ml acide sulfurique 0 46 mol l PRECAUTIONS Pour utilisation diagnostique in vitro Toute personne proc dant a un dosage avec ce produit doit tre form e a son utilisation et avoir l exp rience des proc dures de laboratoire STOP SOLUTION Se r f rer a la fiche de donn es de s curit du ma
9. TS DETERMINATION VISUELLE Tout chantillon donnant une couleur bleue plus intense que celle du contr le n gatif est positif Tout chantillon donnant une couleur quivalente celle du contr le n gatif ou moins intense que celle ci est n gatif Les micropuits pour lesquels l intensit de couleur est difficile interpr ter par rapport au contr le n gatif doivent tre lus par photom trie apr s ajout de la solution d arr t ou test s nouveau D TERMINATION PAR SPECTROPHOTOM TRIE 10 1 Les micropuits doivent tre lus par photom trie dans les 30 minutes suivant l ajout de la solution d arr t 10 2 M langer le contenu des micropuits et lire l absorbance de chaque micropuits a l aide d un spectrophotom tre r gl sur 450 nm Veiller ce que le fond des micropuits soit propre avant de proc der la lecture Le lecteur doit tre soumis un blanc sur l air avant que la plaque ne soit lue 10 3 Si le spectrophotom tre permet le recours a une longueur d ondes de r f rence 620 ou 650 nm une lecture en double longueur d ondes doit tre effectu e 10 4 Calculer la valeur de seuil en ajoutant 0 100 unit s d absorbance la valeur de contr le n gatif ou la valeur moyenne lorsque plusieurs contr les n gatifs sont utilis s 10 5 Interpr tation des r sultats du test Positif la valeur d absorbance de l chantillon clinique est gt la valeur seuil N gatif la val
10. activit crois e ont t effectu s sur des chantillons cliniques dont le statut microbien avait t d termin ou sur des cultures de laboratoire d organismes connus contenant 107 105 organismes viables ml environ La source des micro organismes est r f renc e dans la l gende ci dessous Virus Ad novirus Calicivirus Rotavirus Bact ries Acinetobacter sp Listeria monocytogenes Aeromonas hydrophila Neisseria gonorrhoea Bacteroides fragilis Peptococcus sp Campylobacter coli Peptostreptococcus sp Citrobacter freundii Proteus sp Clostridium difficilea Pseudomonas aeruginosa Clostridium perfringens Salmonella typhimurium Enterobacter cloacae Serratia marcescens Enterococcus faecalis Shigella sonnei Escherichia coli Staphylococcus aureus Gardnerella vaginalis Staphylococcus epidermidis Haemophilus influenzae Streptocoque B h molytique du groupe A Klebsiella sp Veillonella sp Lactobacillus sp Autres micro organismes Candida albicans L gende Micro organismes pr sents et test s dans les f ces Tous les autres micro organismes ont t cultiv s et test s dans un bouillon de culture 14 BIBLIOGRAPHIE 1 Madeley C R 1990 Viruses associated with Acute Diarrhoeal Disease In Principles and Practices of Clinical Virology eds A J Zuckerman et al John Wiley and Sons Ltd 188 189 2 Carter M J 1994 Genomic organisation and expression of astroviruses and caliciviruses Arch Vi
11. cks M M Carter M J and Madeley C R 1992 Astroviruses Reviews Med Virol 2 97 106 11 Willcocks M M Carter M J Silcock J G and Madeley C R 1991 A dot blot hybridisation procedure for the detection of astrovirus in stool samples Epidemiol Infect 107 405 410 12 Lee T W and Kurtz J B 1981 Serial Propagation of astrovirus in Tissue Culture with the Aid of Trypsin J Gen Virol 57 421 424 13 Willcocks M M Carter M J Laidler F R and Madeley C R 1990 Growth and characterisation of human faecal astrovirus in a continuous cell line Arch Virol 113 73 81 14 Jonassen T O Kjeldsberg E and Grinde B 1993 Detection of human astrovirus serotype 1 by the polymerase chain reaction J Virol Methods 44 83 88 15 Herrman J E Nowak N A Perron Henry D M Hudson R W Cubitt W D and Blacklow N R 1990 Diagnosis of Astrovirus Gastroenteritis by Antigen Detection with Monoclonal Antibodies J Infect Dis 161 226 229 16 Tanaka M Nakayama H Sagiyama K Haraoka M Yoshida H Hagiwara T Akazawa K Naito S 2000 Evaluation of a new amplified enzyme immunoassay EIA for the detection of Chlamydia trachomatis in male urine female endocervical swab and patient obtained vaginal swab specimens J Clin Path 5 350 354 17 Chernesky M Jand D Copes D Patel J Petrich A Biers K Sproston A Kapala J 2001 Comparis
12. et une sp cificit de 98 3 Tableau 13 1 Sensibilit et sp cificit compar es de ProSpecT Astrovirus et IDEIA Astrovirus IDEIA Astrovirus ProSpecT Astrovirus Sensibilit 98 3 58 59 Sp cificit 100 35 35 a Positivit de l chantillon confirm e par microscopie lectronique PR CISION Pr cision intra dosage La pr cision intra dosage a t valu e en utilisant trois chantillons f caux repr sentatifs d chantillons de positivit faible moyenne et haute Chaque pr paration de contr le a t test e 24 fois dans huit dosages effectu s par deux op rateurs L absorbance moyenne et le coefficient de variation moyen pour la pr cision intra dosage ont t d termin s Tableau 13 2 Pr cision intra dosage moyenne du test ProSpecT Astrovirus chantillon CV moyen en Faible 5 3 Moyenne 4 4 Haute 4 2 Pr cision inter dosages La pr cision inter dosages a t valu e en utilisant trois chantillons f caux Chaque dilution a t test e dans huit dosages effectu s par deux op rateurs et les valeurs d absorbance moyennes ainsi que le coefficient de variation ont t d termin s Tableau 13 3 Pr cision inter dosages du test ProSpecT Astrovirus chantillon CV moyen en Faible 5 7 Moyenne 5 1 Haute 3 7 R ACTIVIT CROIS E Les micro organismes suivants ont t test s et av r s n gatifs dans le test ProSpecT Astrovirus Des tests de r
13. eur d absorbance de l chantillon clinique est lt la valeur seuil Equivoque la valeur d absorbance de l chantillon clinique se situe a moins de 0 010 unit s d absorbance de la valeur seuil Ces chantillons doivent tre a nouveau test s ou bien le patient doit tre soumis a de nouveaux pr l vements 11 LIMITES DE PERFORMANCE 11 1 La validit des r sultats obtenus avec le dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus d pend du fait que les r actions des contr les se d roulent comme pr vu Voir le contr le de la qualit la section 9 11 2 Un r sultat n gatif n exclut pas la possibilit d une infection astrovirus chez le patient La non d tection de l astrovirus peut tre due des facteurs tels que le pr l vement de l chantillon un moment inad quat de la maladie alors que trop peu de virions taient pr sents un pr l vement inad quat une manipulation incorrecte de l chantillon Le test ProSpecT Astrovirus d tecte des prot ines virales sp cifiques du genre pr sentes dans les s rotypes humains d astrovirus Le test ne peut pas servir diff rencier les s rotypes d astrovirus ou d tecter des s rotypes d astrovirus non humains 11 4 Les r actifs sont fournis des concentrations de fonctionnement fixes La performance du test sera affect e n gativement si les r actifs sont modifi s ou conserv s dans des conditions autres que celles qui sont d taill es
14. ifique du genre La suspension f cale est ajout e au micropuits et l antig ne d astrovirus pr sent dans l chantillon se lie la phase solide L anticorps monoclonal sp cifique du genre conjugu la dextrane se lie l antig ne d astrovirus captur sur la phase solide liant ainsi le complexe conjugu polym re qui incorpore les multiples mol cules enzymatiques amplification des traceurs Un chromog ne est employ pour d tecter l enzyme li e et provoque un changement de couleur qui est arr t par l ajout d acide Une intensit de couleur nettement sup rieure aux niveaux d arri re plan indique la pr sence de l antig ne d astrovirus dans l chantillon Repr sentation sch matique du principe du dosage ProSpecT Astrovirus Phase solide Anticorps enduisant la plaque Vins S 8 Couleur Sur la base de l amplification des traceurs Mol cule de polym re Substrat HRP peroxydase de raifort LS gt Couleur Anticorps conjugu 4 D FINITIONS DES SYMBOLES Les symboles suivants sont utilis s dans l ensemble des informations relatives au produit Code et num ro de r f rence du produit Ci Consulter le mode d emploi N N contenu suffisant pour N tests Contenu suffisant pour N tests Fabriqu par l Dispositif m dical de diagnostic in vitro Code de lot Limites de temp rature de stockage
15. on of a polymer conjugate enhanced enzyme immunoassay to ligase chain reaction for diagnosis of Chlamydia trachomatis in endocervical swabs J Clin Micro 2306 2307 18 Kurtz J B and Lee T W 1987 Novel diarrhoea viruses Astroviruses human and animal Willey Chichester Ciba Foundation Symposium 128 92 107 19 Moe C L Allen J R Monroe S S et al 1991 Detection of Astrovirus in Paediatric Stool samples by Immunoassay and RNA probe J Clin Micro 29 2390 2395 20 Kurtz J B and Lee T W 1978 Astrovirus gastroenteritis Age distribution of antibody Med Microbiol Immunol 166 227 230 21 Lee T W and Kurtz J B 1994 Prevalence of human astrovirus serotypes in the Oxford region 1976 92 with evidence for two new serotypes Epidemiol Infect 112 187 193 22 Nazer H Rice S Walker Smith J A 1982 Clinical associations of stool Astrovirus in childhood J Pediatr Gastroenterol Nutr 1 555 5 ProSpecT est une marque d pos e mel Oxoid Ltd Wade Road Basingstoke Hants RG24 8PW UK X7599B r vis mai 2012 Pour obtenir une assistance technique veuillez contacter votre distributeur local
16. prim e sur les tiquettes Ne pas m langer ou intervertir les r actifs suivants sous peine de compromettre les performances plaque conjugu et contr les 6 10 Les r actifs communs suivants peuvent tre utilis s pour toute la gamme de produits ProSpecT tampon de lavage substrat TMB et solution d arr t 6 11 viter la contamination des r actifs 6 12 En cas d application d une m thode par flacon compte gouttes s assurer que tous les contr les et r actifs sont ajout s de la m me fa on L application combin e des m thodes par pipettes et par compte gouttes pourrait nuire aux performances de la trousse 6 13 Utiliser des pipettes jetables ou des pointes de pipettes diff rentes pour chaque chantillon contr le ou r actif si ce ne sont pas des flacons compte gouttes qui sont utilis s afin d viter la contamination crois e des chantillons des contr les ou des r actifs qui pourrait conduire des r sultats erron s 6 14 Stocker l eau d min ralis e ou distill e destin e la dilution du r actif concentr dans des r cipients propres afin d viter une contamination microbienne 6 15 viter la contamination par les ions m talliques et les agents oxydants 6 16 Ne pas utiliser de substrat pr sentant une couleur bleue avant son ajout dans les micropuits 6 17 Prot ger le conjugu et le substrat de la lumi re 6 18 Les micropuits ne sont pas r utilisables
17. rol Suppl 9 429 439 3 Walter J E and Mitchell DK 2000 Role of Astrovirus in childhood diarrhea Current Opinion in Pediatrics 12 275 279 4 Lew J F Glass R I Petric M et al 1990 Six year retrospective surveillance of gastroenteritis viruses identified at ten electron microscopy centres in the United States and Canada Ped Infect Dis J 9 709 714 5 Herrmann J E Taylor D N Echeverria P et al 1991 Astroviruses as a cause of gastroenteritis in children N Engl J Med 324 1757 1760 6 Oliver A R and Phillips A D 1988 An electron microscopical investigation of faecal small round viruses J Med Virol 24 211 218 7 Putzker M Sauer H Kirchner G and Malic A 2000 Community acquired diarrhea the incidence of astrovirus infections in Germany Clin Lab 46 269 273 8 Utagawa E T Nishizawa S Sekine S Hayashi Y Ishihara Y Oishi I Iwasaki A Yamashita I Miyamura K Yamazaki S Inouye S Glass R 1 1994 Astrovirus as a Cause of Gastroenteritis in Japan Journal of Clinical Microbiology 1841 1845 9 Oishi I Yamazaki K Kimoto T Minekawa Y Utagawa E Yamazaki S Inouye S Grohmann G S Monroe S S Stine S E Carcamo C Ando T Glass R I 1994 A large Outbreak of Acute Gastroenteritis Associated with Astrovirus among Students and Teachers in Osaka Japan Journal of Infectious Diseases 170 439 443 10 Willco
18. s s d tacher d une barrette le nombre n cessaire de puits et remettre les puits non utilis s dans le sachet m tallis contenant le dessiccatif REFERMER HERMETIQUEMENT LE SACHET AFIN D EVITER UINTRODUCTION D HUMIDIT ET REMETTRE EN STOCKAGE ENTRE 2 et 8 C DILUTION D ECHANTILLONS F CAUX Verser 1 ml de diluant pour chantillon dans un conteneur ad quat tiquet et l utiliser pour pr parer une suspension ou une dilution 10 de l chantillon f cal en ajoutant 0 1 g environ de f ces solides un morceau de la taille d un petit pois ou 100 ul environ de f ces liquides au moyen de pipettes de transfert M langer soigneusement et laisser la pipette de transfert dans le conteneur pour l utiliser ult rieurement Faire tourner les couvillons rectaux dans 1 ml de diluant pour chantillon tout en pressant l chantillon contre la paroi du conteneur pour lib rer les mati res f cales M langer soigneusement Les suspensions f cales pr alablement fix es dans du formol doivent tre nouveau dilu es dans du diluant pour chantillon ProSpecT Astrovirus afin de pr parer une suspension 10 de f ces avant le test Les chantillons en suspension dilution dans le diluant pour chantillon ProSpecT Astrovirus peuvent tre conserv s entre 2 et 8 C pendant une dur e maximale de 8 jours avant le test REMARQUE Les chantillons f caux pr par s dans du diluant pour chantillon ProSpecT Adenovirus
19. sorbant pour retirer les derni res traces de tampon de lavage 8 6 Ajouter 2 gouttes ou 100 ul de substrat dans chaque micropuits 8 7 Couvrir la plaque et incuber entre 20 et 30 C pendant 10 minutes 8 8 Lesmicropuits peuvent trelusvisuellementimm diatement apr s la deuxi me incubation voir les sections 9 et 10 8 9 Il est galement possible d arr ter la r action du substrat en ajoutant 2 gouttes ou 100 ul de solution d arr t dans chaque micropuits Veiller bien m langer les micropuits avant de lire les r sultats Le produit color est stable pendant 30 minutes au maximum apr s l ajout de la solution d arr t 8 10 Lire par spectrophotom trie 450 nm voir les sections 9 et 10 9 CONTR LE DE QUALIT Les contr les positif et n gatif doivent tre inclus lors de chaque r alisation du test D TERMINATION VISUELLE Tous les micropuits de contr le n gatif doivent tre incolores Si tel n est pas le cas les r sultats du test ne doivent pas tre d termin s visuellement Le micropuits de contr le positif doit pr senter une couleur bleue distincte et facile distinguer du contr le n gatif D TERMINATION PAR SPECTROPHOTOM TRIE La valeur du contr le n gatif ou la moyenne des valeurs de contr le n gatif doit tre inf rieure 0 150 unit s d absorbance La valeur du contr le positif doit tre sup rieure 0 500 unit s d absorbance 10 RESULTA
20. t riel MSDS et l tiquetage des produits pour prendre connaissance des informations relatives aux composants potentiellement dangereux CONSIGNES DE SANTE ET DE SECURITE 6 1 Le contr le positif contient une prot ine recombinante d astrovirus de type 1 qui pour sa manipulation et sa mise au rebut doit tre trait e comme potentiellement infectieuse 6 2 La solution d arr t contient de l acide sulfurique 0 46 mol l 6 3 Le tampon de lavage contient une substance qui peut s av rer sensibilisante au niveau cutan lt 1 v v viter tout contact avec la peau Porter des gants jetables en vinyle ou en nitrile 6 4 Ne pas manger boire fumer stocker ou pr parer des aliments ni appliquer des cosm tiques dans la zone de travail d sign e 6 5 Ne pas pr lever de produits dans une pipette par aspiration buccale 6 6 Porter des gants jetables pour manipuler les chantillons cliniques et les r actifs Toujours se laver les mains apr s avoir travaill sur des produits infectieux 6 7 Mettre au rebut tous les chantillons cliniques conform ment la l gislation en vigueur 6 8 Les r actifs ProSpecT Astrovirus contiennent un agent antimicrobien propri taire qui ne pr sente aucun risque pour l utilisateur si les pr cautions de s curit normales en laboratoire sont observ es PR CAUTIONS ANALYTIQUES 6 9 Les composants ne doivent pas tre utilis s apr s la date de p remption im
21. t1 15 La disponibilit d un antis rum sp cifique dirig contre des pitopes sp cifiques de groupe de genre ou de type a conduit la mise au point d immunodosages permettant la d tection directe des antig nes15 Il a t d montr que ces dosages affichent une sensibilit accrue par rapport la ME et offrent une m thode de d pistage plus conomique plus fiable et plus rapide R cemment une nouvelle g n ration d immunodosages avec amplification int grant une technologie d amplification des traceurs et des signaux a d montr une sensibilit am lior e comparable celle des m thodes d amplification mol culaire 517 Le test ProSpecT Astrovirus est un dosage immunoenzymatique qualitatif avec amplification destin la d tection rapide des astrovirus dans les chantillons de f ces humaines Le test utilise une association d anticorps monoclonaux et polyclonaux sp cifiques du genre ainsi qu une amplification des traceurs pour d tecter toutes les souches connues d astrovirus humains dans un immunodosage sur microplaque 3 PRINCIPE DU TEST Le dosage sur microplaque ProSpecT Astrovirus utilise un anticorps polyclonal et un conjugu polym re dextrane avec une forte incorporation de mol cules enzymatiques et d anticorps dans un immunodosage sur phase solide afin de d tecter l antig ne d astrovirus Les micropuits s cables sont enduits de l anticorps polyclonal anti astrovirus sp c
22. trovirus ont t associ s des pid mies de gastro ent rites dans des h pitaux des familles des communaut s et des instituts pour adultes Des pid mies de grande envergure m diation alimentaire ont galement t rapport es au Japon Jusqu une poque r cente l infection astrovirus tait traditionnellement diagnostiqu e par microscopie lectronique ME La ME repose sur une bonne pr servation de la morphologie de l chantillon et sur les comp tences de l op rateur N anmoins tant donn que seulement 10 des particules d astrovirus affichent la morphologie typique en toile la d tection peut souvent s av rer difficile et conduire une erreur de diagnostic De plus en raison de leur petite taille les astrovirus ne sont pas aussi faciles observer que les rotavirus et ils peuvent tre confondus avec d autres petits virus dont l aspect structurel est circulaire Par cons quent le fait de recourir uniquement la morphologie identifi e par ME en tant que crit re diagnostique a entra n une sous estimation de l incidence de ces virus Bien que des am liorations aient t apport es aux techniques de culture il s agit rarement de la m thode de pr dilection pour un diagnostic de routine cause d un manque de sensibilit Parmi les r centes avanc es en mati re de proc dures diagnostiques figurent l hybridation dot blot la PCR et les dosages immunoenzymatiques
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