M46 MICROGEN CAMPYLOBACTER REF IVD
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1. Do not freeze any of the kit reagents Do not allow the latex reagent dropper to touch the positive control or bacterial samples 7 Ensure the agglutination slide is clean and dry prior to use OUIAWN STORAGE AND SHELF LIFE Microgen Campylobacter should be stored at 2 8 C when not in use The kit should not be used after the expiry date printed on the carton label SPECIMENS Faecal samples should be inoculated on to blood free selective agar plates Modified CCDA Preston see Appendix at a concentration of 0 2 0 3g sample per plate Plates should be incubated in a microaerophilic atmosphere at 42 C for 48 hours Colonies with morphology resembling Campylobacter are removed for testing with Microgen Campylobacter see below PROCEDURE Quality Control The following check with the Positive Control should be performed each time the kit is used to confirm that the reagents are functioning correctly 1 A single 50uL drop of Positive Control should be dispensed on to two adjacent areas on the test slide 2 These should be tested with the Test and Control Latex Reagents as described in Test Procedure below 3 Deterioration of a reagent should be suspected if e _ There is no reaction between the Test Latex Reagent and the Positive Control OR the reaction shows a significant loss of strength with time e The Control Latex Reagent reacts with the Positive Control e A latex reagent becomes discoloured or forms lumps2. C a continuaci n a ada en condiciones as pticas un vial de suplemento selectivo de cefoperazona Oxoid SR125 4 Mezcle bien y vierta en placas petri est riles 15 a 20 ml por placa USO PREVISTO Microgen Campylobacter un test rapido di agglutinazione al lattice previsto per l identificazione confermativa di campilobatteri termofili enteropatogeni messi in coltura su mezzi solidi selettivi da campioni fecali di pazienti con sospetta enterite batterica Il kit solo per uso professionale in laboratorio PRINCIPIO DEL TEST Le particelle di lattice sono rivestite di immunoglobuline di coniglio dirette verso preparazioni antigeniche derivate da sierotipi selezionati di Campylobacter jejuni Quando le particelle di lattice sensibilizzate vengono miscelate con una soluzione contenente antigeni di Campylobacter enteropatogeni si verifica una reazione immunochimica sensibile e specifica che provoca l agglutinazione delle particelle di lattice finemente disperse in aggregati facilmente visibili a occhio nudo CONT PRESENTAZIONE DEL KIT TEST M46a Reagente al Lattice per il Test 2 5 ml Particelle di lattice rivestite di anticorpi di coniglio contro antigeni di Campylobacter Con 0 099 di azide sodica come conservante Tappo blu CONTROL M46b Reagente al Lattice di Controllo 2 5 ml Particelle di lattice rivestite di immunoglobuline di coniglio non specifiche Con 0 099 di azide sodica come conservante Tap
3. 1 4 4 ooooo ooooo o ooooo ooo 0 mn nn A LVL 4 ooooo ooooo o ooooo oo 1 stark 0 Alle untersuchten thermophilen Campylobacter Erreger reagierten mit Microgen Campylobacter Nicht thermophile Campylobacter Erreger reagierte nicht obgleich 3 der 11 untersuchten St mme eine schwache nicht spezifische Agglutination zeigten Von einer Gruppe eng verwandter Bakterien waren 2 Helicobacter pylori Isolate von 12 in dem Test schwach reaktiv und 2 Isolate von Helicobacter cinaedi zeigten Kreuzreaktionen Eine breite Auswahl anderer nicht verwandter Bakterien wurde ebenfalls untersucht Keine reagierten in dem Test obgleich ein Isolat von Acinetobacter baumanii eine starke nicht spezfische Agglutination zeigte REPRODUZIERBARKEIT Die Intrachargenreproduzierbarkeit wurde durch Testen der Sensitivit t und Spezifit t von 1 Produktcharge im Vergleich zu einer Verd nnungsreihe von Referenz und Kit Kontrollantigenen bei drei separaten Durchg ngen untersucht Die Endpunkttiter die mit den Referenz Kontrollantigenen ermittelt wurden waren in den drei Assays identisch Die Interchargenreproduzierbarkeit wurde durch Testen der Sensitivit t von 3 Produktchargen im Vergleich zu einer Verd nnungsreihe von Referenz und Kit Kontrollantigenen untersucht Zwischen den drei Chargen wurden keine signifikanten Unterschiede bei den Endpunkttitern festgestellt ANHANG Herstellung bl
4. contenenti acido devono essere neutralizzati prima di trattarli 4 Il controllo positivo stato inattivato durante il processo di fabbricazione In ogni caso deve essere manipolato come se fosse potenzialmente infetto Procedurali 1 Utilizzare Microgen Campylobacter in conformit alle istruzioni del kit 2 Attendere che i reagenti raggiungano la temperatura ambiente prima dell uso 3 Non diluire i reagenti del kit 4 Non scambiare tra loro reagenti provenienti da kit di lotti diversi 5 Non congelare i reagenti del kit 6 Fare in modo che il contagocce del reagente al lattice non tocchi il controllo positivo o i campioni batterici 7 Assicurarsi che il vetrino per agglutinazione sia pulito e asciutto prima dell uso 8 CONSERVAZIONE E PERIODO DI VALIDITA Conservare Microgen Campylobacter a 2 8 C quando non viene utilizzato Non utilizzare il kit dopo la data di scadenza stampata sull etichetta del contenitore CAMPIONI Inoculare i campioni fecali sulle piastre di agar selettive prive di sangue CCDA Preston modificate vedere l Appendice alla concentrazione di 0 2 0 3 g di campione per piastra Incubare le piastre in atmosfera microaerofila a 42 C per 48 ore Le colonie morfologicamente assomiglianti a Campylobacter vengono rimosse per esaminarle con Microgen Campylobacter vedere sotto PROCEDURA Controllo di Qualit Ogni volta che si usa il kit si deve eseguire la seguente verifica con il C
5. di Reagente al Lattice per il Test all altra sospensione batterica 5 Miscelare le sospensioni batteriche con i reagenti al lattice utilizzando una bacchetta per miscelazione iniziando con il Reagente al Lattice di Controllo Spargere le miscele ai margini delle zone ovali 6 Ruotare delicatamente il vetrino per mantenere costantemente in movimento le sospensioni liquide per 2 minuti Osservare alla ricerca dell agglutinazione 7 Leggere i risultati del test vedere sotto INTERPRETAZIONE 8 Eliminare le bacchette per miscelazione e i vetrini usati in un disinfettante adatto INTERPRETAZIONE L aggregazione visibile delle particelle di lattice indica una reazione di agglutinazione L intensit della reazione pu variare e pu essere valutata in base alle seguenti linee guida reazione granularit fine ma ben visibile su uno sfondo lattescente reazione granularit grossolana su uno sfondo lattescente reazione pesanti agglomerati di particelle attorno alla periferia dell ovale del test su uno sfondo trasparente risultati di Microgen Campylobacter devono essere cos interpretati Reazione con Reazione con il Lattice per il il Lattice di Interpretazione Test Controllo Presenza di campilobatteri Campilobatteri presenti in numero insufficiente per essere individuati dal test n x Agglutinazione non specifica Risultato non decisivo Un campione che provo
6. 0 C Salmonella flexneri 1 0 1 0 Shigella dysenteriae 1 0 1 0 Shigella sonnei 1 0 1 0 Aeromonas 1 0 1 0 hydrophila Staphylococcus 1 0 1 0 aureus Enterobacter 2 0 2 0 agglomerans Yersinia 1 0 1 0 enterocolitica Clostridium difficile 1 0 1 0 Vibrio spp 3 0 3 0 Vibrio cholera 1 0 1 0 Vibrio 0 1 0 parahaemolyticus Hafnia alvei 1 0 1 0 Acinetobacter spp 1 0 1 0 Acinetobacter 1 0 0 1 fuerte baumanii Levadura il 0 1 0 cultivados N mero Microgen Campylobacter a de Reaccion Microorganismo aislado Pos Neg no s espec fica Campylobacter termof licos C jejuni 37 37 0 0 C jejuni subsp 3 3 0 0 doylei C coli 4 4 0 0 C upsaliensis 13 13 0 0 C laridis 1 1 0 0 C fetus 2 0 0 Campylobacter no termof licos C concisus 5 0 3 2 d bil C hyointestinalis 3 0 3 0 C sputorum faecalis 1 0 0 1 d bil C curvis 2 0 2 0 Bacterias estrechamente relacionadas Helicobacter pylori 12 2 d bil 10 0 Helicobacter 5 0 5 0 fennelliae Helicobacter cinaedi 4 2 2 0 Arcobacter butzleri 4 0 4 0 Arcobacter skirrowii 1 0 1 0 Otras bacterias no relacionadas Providencia stuartii 1 0 1 0 Providencia 1 0 1 0 acalifaciens Escherichia coli 5 0 5 0 Pseudomonas 2 0 2 0 aeruginosa Citrobacter spp 9 0 0 Citrobacter freundii 1 0 1 0 Estreptococo 4 2 0 0 Todas las Campylobacter termof licas examinadas fueron reactivas con Microgen Campylobacter Las Campylobacter no termofil
7. al 0 099 Tap n blanco Instrucciones de uso L minas de aglutinaci n desechables Varillas para mezclar desechables Requisitos adicionales e Asas bacteriol gicas Placas de cultivo de agar s lido semiselectivas para Campylobacter ver m s adelante e Tubos para muestras de pl stico desechables capacidad 1 ml e Recipientes de gas para mantener las condiciones microaerof licas del cultivo e Incubadora a 41 C si no se dispone de sta una incubadora a 37 C es aceptable ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Seguridad 1 Los reactivos suministrados en este kit son s lo para uso diagn stico in vitro 2 La azida s dica que se emplea como conservante en los reactivos del kit puede reaccionar con las ca er as de plomo o cobre para formar azidas met licas potencialmente explosivas Elimine aclarando con un gran volumen de agua para evitar la acumulaci n de azidas 3 Al manipular o eliminar elementos potencialmente pat genos se deber n tomar precauciones especiales La descontaminaci n del material infeccioso se puede obtener con hipoclorito de sodio a una concentraci n final del 3 durante 30 minutos Los desechos l quidos que contienen cido se deben neutralizar antes del tratamiento 4 El control positivo se ha inactivado durante el proceso de fabricaci n Sin embargo se deber manipular como si fuera potencialmente infeccioso Procedimiento 1 Microgen Campylobacter se deber utilizar seg n la
8. water by boiling 2 Sterilise by autoclaving at 121 C for 15 minutes 3 Cool to 50 C then add 1 vial Cefoperazone Selective Supplement Oxoid SR125 aseptically 4 Mix thoroughly and pour into sterile petri dishes 15 20mL dish ZWECKBESTIMMUNG Microgen Campylobacter ist ein schneller Latexagglutinationstest der zur best tigenden Identifikation von enteropathogenen thermophilen Campylobacter Erregern bestimmt ist die auf ausgew hlten festen Medien aus Stuhlproben von Patienten mit Verdacht auf bakterielle Enteritis kultiviert worden sind Das Kit sollte nur von Fachpersonal zu Laborzwecken verwendet werden TESTPRINZIP Latexpartikel werden mit Kaninchen Immunglobulinen beschichtet die gegen Antigenpr parate aus ausgew hlten Campylobacter jejuni Serotypen gez chtet worden sind Wenn die sensibilisierten Latexpartikel mit einer L sung die enteropathogene Campylobacter Antigene enth lt gemischt werden findet eine sensitive und spezifische Immunreaktion statt die dazu f hrt dass die fein verteilten Latexpartikel in Aggregate agglutinieren die mit dem blo en Auge leicht zu erkennen sind CONT INHALT DES KITS TEST M46a Test Latexreagenz 2 5 ml Latexpartikel behandelt mit Kaninchen Antik rpern gegen Campylobacter Antigene Konserviert mit 0 099 Natriumazid Blauer Verschluss CONTROL M46b Kontroll Latexreagenz 2 5 ml Latexpartikel behandelt mit unspezifischen Kaninchen Immunglobulinen Konserviert m
9. 099 sodium azide white cap Instructions for Use Disposable agglutination slides Disposable mixing sticks Additional Requirements Bacteriological loops Campylobacter semi selective solid agar culture plates see below Disposable plastic specimen tubes capacity 1mL Gas jars for maintaining microaerophilic culture conditions 42 C incubator if not available a 37 C incubator is acceptable WARNINGS AND PRECAUTIONS M46 MICROGEN CAMPYLOBACTER Safety 1 The reagents supplied in this kit are for in vitro diagnostic use only 2 Sodium azide which is used as a preservative in the kit reagents can react with lead or copper plumbing to form potentially explosive metal azides Dispose by flushing with a large volume of water to prevent azide build up 3 Appropriate precautions should be taken when handling or disposing of potential pathogens Decontamination of infectious material can be achieved with sodium hypochlorite at a final concentration of 3 for 30 minutes Liquid waste containing acid must be neutralised before treatment 4 The positive control has been inactivated during the manufacturing process However it should be handled as though potentially infectious Procedural k Microgen Campylobacter should be used according to the kit instructions Allow all reagents to reach room temperature before use Do not dilute any of the kit reagents Do not intermix reagents from different batches of kits
10. MICROGEN BIOPRODUCTS M Microgen Campylobacter is a rapid latex agglutination test intended for confirmatory identification of enteropathogenic thermophilic campylobacters cultured on selective solid media from faecal samples from patients with suspected bacterial enteritis The kit is intended for professional laboratory use only INTENDED USE PRINCIPLE OF THE TEST Latex particles are coated with rabbit immunoglobulins raised against antigen preparations from selected Campylobacter jejuni serotypes When the sensitised latex particles are mixed with a solution containing enteropathogenic Campylobacter antigens a sensitive and specific immunochemical reaction takes place causing the finely dispersed latex particles to agglutinate into aggregates that are easily visible to the unaided eye CONT KIT PRESENTATION TEST M46a Test Latex Reagent 2 5mL Latex particles coated with rabbit antibodies to Campylobacter antigens Preserved with 0 099 sodium azide Blue cap CONTROL M46b Control Latex Reagent 2 5mL Latex particles coated with non specific rabbit immunoglobulins Preserved with 0 099 sodium azide Yellow cap CONTROL M46c Positive Control 1 0mL Suspension of inactivated Campylobacter antigens reactive with Test Latex Reagent and non reactive with Control Latex Reagent Preserved with 0 099 sodium azide Black cap SAMP DIL M46d Sample Diluent 50mL 0 85 Isotonic Saline preserved with 0
11. NS Les chantillons f caux doivent tre inocul s sur des plaques de g lose s lectives exemptes de sang CCDA Preston modifi voir l Annexe une concentration de 0 2 0 3 g d chantillon par plaque Les plaques doivent tre incub es dans une atmosph re microa rophile 42 C pendant 48 heures Les colonies dont la morphologie ressemble celle du campylobacter ne sont pas test es avec Microgen Campylobacter voir plus bas MODE OPERATOIRE Contr le qualit Le contr le suivant qui s applique au contr le positif doit tre effectu chaque utilisation de la trousse afin de confirmer que les r actifs fonctionnement correctement 1 Une goutte de contr le positif 50 ul doit tre vers e sur deux zones voisines de la lame de test 2 Ces zones doivent tre test es avec les r actifs latex test et de contr le comme d crit dans la Proc dure de test suivante 3 Suspecter une d t rioration d un r actif si e Aucune r action n est constat e entre le r actif latex test et le contr le positif O si la r action indique une baisse significative de son titre avec le temps e Le r actif latex de contr le r agit au contr le positif Un r actif latex se d colore ou forme des grumeaux qui ne se dispersent pas apr s avoir t l g rement secou s Procedure de test 1 Amener tous les r actifs temp rature ambiante Secouer doucement les r actifs latex pour obtenir une suspension ho
12. Natriumhypochlorit bei einer Endkonzentration von 3 ber 30 Minuten erfolgen Fl ssige Abfallstoffe die S uren enthalten m ssen vor der Behandlung neutralisiert werden 4 Die Positivkontrolle wurde w hrend des Herstellungsprozesses inaktiviert Trotzdem sollte dieses Produkt als potenziell infekti s behandelt werden Anwendung 1 Microgen Campylobacter sollte gem der Gebrauchsanweisung benutzt werden 2 Alle Reagenzien sollten vor der Verwendung Raumtemperatur haben 3 Keines der Reagenzien im Kit darf verd nnt werden 4 Reagenzien verschiedener Chargen d rfen nicht miteinander vermischt werden 5 Keines der Reagenzien im Kit darf eingefroren werden 6 Die Latexreagenzflasche sollte nicht mit der Positivkontrolle oder den Bakterienproben in Ber hrung kommen 7 Vergewissern Sie sich dass der Objekttr ger vor der Verwendung sauber und trocken ist AUFBEWAHRUNG UND HALTBARKEIT Microgen Campylobacter sollte bei Nichtverwendung bei 2 8 C gelagert werden Das Kit darf nach dem Verfallsdatum auf dem Verpackungsetikett nicht mehr benutzt werden PROBEN Sie Stuhlproben sollten auf den blutfreien selektiven Agarplatten Modified CCDA Preston siehe Anhang mit einer Konzentration von 0 2 0 39 Probe pro Platte inokuliert werden Die Platten m ssen unter einer mikroaerophilen Atmosph re 48 Stunden lang bei 42 C inkubiert werden Kolonien mit einer Campylobacter hnlichen Morphologie werden zum Testen mi
13. ONES DE USO 1 Los resultados deber n ser interpretados por el cl nico en el contexto de toda la informaci n cl nica y de laboratorio 2 La aglutinaci n no espec fica del reactivo de l tex de control no descarta la presencia de Campylobacter pero el resultado se debe informar como no concluyente La muestra deber ser analizada mediante otro m todo 3 Una cantidad muy baja de Campylobacter puede dar un resultado negativo Para aumentar al m ximo el crecimiento de las bacterias se deber n usar cultivos de 48 horas CARACTER STICAS DE RENDIMIENTO Se ha evaluado Microgen Campylobacter como prueba de confirmaci n de cultivo tanto en dos centros externos independientes como internamente En total se cultivaron 527 muestras de heces en placas de agar selectivo durante 48 horas y las colonias se analizaron mediante Microgen Campylobacter Microgen Campylobacter Positivas Pe Total M todos de rosivas 143 2 145 referencia a va 1 381 382 Total 144 383 527 Sensibilidad 143 145 98 6 Especificidad 381 382 99 7 Eficacia 524 527 99 4 Se ha confirmado de la especificidad de Microgen Campylobacter mediante el an lisis de una gran variedad de microorganismos Estreptococo 8 0 1 0 Klebsiella 0 1 0 pneumoniae Klebsiella edwardsii 1 0 1 0 Proteus mirabilis 2 0 2 0 Proteus vulgaris 3 0 3 0 Salmonella spp 11 0 11 0 Salmonella grupo 1 0 1 0 B Salmonella grupo 1 0 1
14. acteriana El kit est indicado nicamente para uso en laboratorios profesionales PRINCIPIO DE LA PRUEBA Las part culas de l tex est n recubiertas con inmunoglobulinas de conejo formadas contra preparaciones de ant geno a partir de de serotipos seleccionados de Campylobacter jejuni Cuando las part culas de l tex sensibilizadas se mezclan con una soluci n que contiene ant geno de Campylobacter enteropat geno se produce una reacci n inmunoqu mica sensible y espec fica que hace que las part culas de l tex finamente dispersas se aglutinen r pidamente en agregados que son f cilmente visibles a simple vista CONT PRESENTACI N DEL KIT M46a Reactivo de l tex de prueba 2 5 ml 4 m v Las part culas de l tex est n recubiertas con anticuerpos de conejo dirigidos contra los ant genos de Campylobacter Conservado con azida s dica al 0 099 Tap n azul CONTROL M46b Reactivo de l tex de control 2 5 ml Las part culas de l tex est n recubiertas con inmunoglobulinas de conejo no espec ficas Conservado con azida s dica al 0 099 Tap n amarillo CONTROL M46c Control positivo 1 0 ml Suspensi n de ant genos de Campylobacter inactivados reactivos con el reactivo de l tex de prueba y no reactivos con el reactivo de l tex de control Conservado con azida s dica al 0 099 Tap n negro SAMP DIL M46d Diluyente de la muestra 50 ml 0 85 Soluci n salina conservada con azida s dica
15. ant la sensibilit d 1 lot de produit par rapport des dilutions en s rie d antigenes de contr le positif de la trousse et de r f rence 3 moments s par s Les titres de r f rence obtenus avec les antig nes de r f rence de contr le se sont r v l s identiques dans les trois dosages La reproductibilit inter lots a t examin e en testant la sensibilit de 3 lots de produit par rapport des dilutions en s rie d antig nes de contr le positif de la trousse et de r f rence Aucune diff rence significative n a t constat e entre les trois lots au niveau des titres de r f rence ANNEXE Pr paration d un milieu s lectif exempt de sang CCDA Preston modifi Dissoudre en menant bullition 22 75 g de base de g lose s lective exempte de sang de campylobacter Oxoid CM739 dans 500 ml d eau distill e 2 St riliser par autoclave 121 C pendant 15 minutes 3 Laisser refroidir 50 C puis ajouter 1 flacon de suppl ment s lectif de Cefoperazone Oxoid SR125 selon une technique aseptique 4 M langer vigoureusement et verser dans des bo tes de Petri st riles 15 20 ml boite INDICACIONES DE USO Microgen Campylobacter es una prueba r pida de aglutinaci n en l tex indicada para la identificaci n confirmatoria de Campylobacter enteropat genos y termofilicos cultivados en medios s lidos selectivos de muestras fecales de pacientes en los que se sospecha enteritis b
16. as se deber n analizar con los reactivos de l tex de prueba y de control tal como se describe en Procedimiento de la prueba m s adelante 3 Se deber sospechar el deterioro de un reactivo si No existe reacci n entre el reactivo de l tex de prueba y el control positivo o si la reacci n muestra una p rdida significativa de intensidad con el tiempo El reactivo de l tex de control reacciona con el control positivo Un reactivo de l tex se decolora o forma grumos que no se dispersan al agitar con cuidado Procedimiento de la prueba 1 Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente Agite con cuidado los reactivos de l tex para asegurar una suspensi n homog nea 2 Coloque 50 ul de diluyente de la muestra en cada uno de dos valos de la l mina de aglutinaci n 3 Utilice un asa de inoculaci n para eliminar varias colonias con morfolog a similar a la de Campylobacter Si hay pocos indicios de crecimiento microbiano efect e un barrido amplio de la superficie de agar Mezcle en la l mina las bacterias de cada una de las dos gotas de diluyente de la muestra para formar suspensiones uniformes 4 A ada una gota 50 ul de reactivo de l tex de control a una de las suspensiones bacterianas de la l mina De manera similar coloque una gota 50 ul de reactivo de l tex de prueba en la otra suspensi n bacteriana 5 Mezcle las suspensiones bacterianas con los reactivos de l tex usando una varilla para m
17. ca l agglutinazione del Reagente al Lattice di Controllo non pu essere testato con il Microgen Campylobacter LIMITAZIONI D USO 1 I risultati devono essere interpretati dallo specialista nel contesto di tutte le informazioni disponibili cliniche e di laboratorio 2 L agglutinazione non specifica del Reagente al Lattice di Controllo non preclude la presenza di campilobatteri ma il risultato deve essere registrato come non decisivo Il campione deve essere testato con un metodo alternativo 3 Un numero molto ridotto di campilobatteri pu dar luogo a un risultato negativo del test Per massimizzare la crescita batterica tenere in coltura per 48 ore CARATTERISTICHE DELLE PRESTAZIONI Microgen Campylobacter stato valutato come test colturale di conferma in due centri indipendenti esterni e internamente In totale 527 campioni fecali sono stati messi in coltura su piastre di agar selettive per 48 ore e sottoposti al test con Microgen Campylobacter Microgen Campylobacter Positivo Negativo Totale iti 2 14 Metodi di Positivo 143 5 riferimento Negativo 1 381 382 Totale 144 383 527 Sensibilit 143 145 98 6 Specificit 381 382 99 7 Efficienza 524 527 99 4 La specificit di Microgen Campylobacter stata confermata sottoponendo al test una vasta gamma di microrganismi messi in coltura di isolati Pos Neg Reazione non specifica Campilobatteri termof
18. e per Campylobacter Oxoid CM739 in 500 ml di acqua distillata facendola bollire 2 Sterilizzare in autoclave a 121 C per 15 minuti 3 Raffreddare a 50 C quindi aggiungere 1 fiala di Cefoperazone come Supplemento selettivo Oxoid SR 125 in condizioni di asepsi 4 Miscelare accuratamente e versare in capsule di Petri sterili 15 20 ml capsula Microgen Bioproducts Ltd 1 Admiralty way Camberley Surrey GU15 3DT UK WF2864 2006 04
19. erie en plomb ou en cuivre pour former des azides metalliques potentiellement explosifs liminer en nettoyant grande eau pour pr venir une accumulation d azide Prendre toutes les mesures appropri es lors de la manipulation ou de l limination des pathog nes potentiels D contaminer les produits infectants avec une solution d hypochlorite de sodium une concentration finale de 3 pendant 30 minutes Les d chets liquides contenant de l acide doivent tre neutralis s avant traitement Le contr le positif a t inactiv lors du processus de fabrication Il doit n anmoins tre manipul comme s il tait potentiellement infectieux D w gt Proc dure 1 Utiliser Microgen Campylobacter conform ment aux instructions de la trousse D Laisser tous les r actifs atteindre la temp rature ambiante avant utilisation Ne diluer aucun r actif de la trousse Ne pas intervertir les r actifs de trousses de diff rents lots Ne congeler aucun r actif de la trousse Ne pas laisser le compte gouttes de r actif latex entrer en contact avec le contr le positif ou les chantillons bact riens 7 V rifier que la lame d agglutination est propre et s che avant utilisation DB CONSERVATION ET DUREE DE CONSERVATION Microgen Campylobacter doit tre conserv 2 8 C lorsqu il n est pas utilis La trousse ne doit pas tre utilis e apr s la date de p remption imprim e sur l emballage SPECIME
20. eux r action granularit grossi re sur un fond laiteux r action groupement massif de particules autour de la p riph rie de l ovale test sur un fond clair Les r sultats Microgen Campylobacter doivent tre interpr t s comme suit R action au r actif latex test R action au r actif latex de contr le Interpr tation Pr sence de campylobacters Campylobacters non pr sents en nombre suffisant pour pouvoir tre d tect s par le test Agglutination non sp cifique R sultat peu concluant 2 Un sp cimen qui entraine l agglutination du r actif latex de contr le ne peut pas tre test avec le test Microgen Campylobacter LIMITES D UTILISATION 1 Les r sultats doivent tre interpr t s par le m decin a la lumi re des autres informations cliniques et de laboratoire disponibles 2 Une agglutination non sp cifique du r actif latex de contr le n exclut pas la pr sence de campylobacters mais le r sultat doit tre rapport comme tant peu concluant L chantillon doit tre test avec une autre m thode 3 Des nombres tr s faibles de campylobacters peuvent entra ner un r sultat de test n gatif Les cultures de 48 heures doivent tre utilis es pour optimiser la croissance des bact ries CARACTERISTIQUES DE PERFORMANCE Microgen Campylobacter a t valu en tant que test de confirmation en culture par deux tablissements exter
21. ezclar comenzando con el reactivo de l tex de control Esparza las mezclas hacia los bordes de las zonas ovaladas 6 Balancee con cuidado la l mina para mantener las suspensiones de l quido en movimiento constante durante dos minutos Observe la presencia de aglutinaci n 7 Lea los resultados de la prueba vea Interpretaci n m s adelante 8 Deseche las varillas para mezclar y las l minas usadas con un desinfectante adecuado INTERPRETACI N Cualquier reacci n de aglutinaci n es indicada por la agregaci n visible de las part culas de l tex La intensidad de la reacci n puede variar y se puede evaluar seg n las siguientes pautas reacci n granularidad fina pero f cilmente discernible contra un fondo lechoso reacci n granularidad gruesa contra un fondo lechoso grumos grandes de part culas alrededor de la periferia del valo de prueba contra un fondo claro reacci n Los resultados de Microgen Campylobacter se deber n interpretar tal como se indica a continuaci n Reacci n con Reacci n con l tex de l tex de Interpretaci n prueba control Campylobacter presente Campylobacter no presente en cantidad suficiente para ser detectado por la prueba y Aglutinaci n no espec fica Resultado no concluyente Una muestra que produce la aglutinaci n del reactivo de l tex de control no se puede analizar con Microgen Campylobacter LIMITACI
22. icas fueron no reactivas aunque 3 de las 11 cepas examinadas mostraron una aglutinaci n no espec fica d bil De un grupo de bacterias estrechamente relacionadas dos aislados de Helicobacter pylori de 12 fueron d bilmente reactivos con la prueba y 12 aislados de Helicobacter cinaedi presentaron reacci n cruzada Se examin tambi n una amplia variedad de bacterias no relacionadas Ninguna fue reactiva con la prueba aunque un aislado de Acinetobacter baumanii present una aglutinaci n no espec fica intensa REPRODUCIBILIDAD La reproducibilidad intralote se estableci examinando sensibilidad de un lote de producto contra diluciones seriadas de ant genos de referencia y de control positivo del kit en tres ocasiones distintas Los t tulos de valoraci n obtenidos con los ant genos de referencia y de control fueron id nticos en los tres an lisis La reproducibilidad entre lotes se estableci examinando la sensibilidad de tres lotes de producto contra diluciones seriadas de ant genos de referencia y de control positivo del kit No se observ ninguna diferencia significativa en los t tulos de valoraci n entre los tres lotes AP NDICE Preparaci n de medio selectivo sin sangre CCDA Preston modificado 1 Disuelva 22 75 g de base de agar selectivo sin sangre Campylobacter Oxoid CM739 en 500 ml de agua destilada mediante ebullici n 2 Esterilice mediante autoclavado a 121 C durante 15 minutos 3 Enfrie a 50
23. ili C jejuni C jejuni subsp doylei C coli C upsaliensis C laridis C fetus oooooo oooooo Campilobatteri non termofili C concisus C hyointestinalis C sputorum faecalis C curvis D 0 oooo D WwW 2 debole 0 1 debole 0 Batteri strettamente correlati Helicobacter pylori Helicobacter fennelliae Helicobacter cinaedi Arcobacter butzleri Arcobacter skirrowii debole oono o oooo Altri batteri non correlati Providencia stuartii Providencia acalifaciens Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Citrobacter spp Citrobacter freundii 4 Streptococco Streptococco B Klebsiella pneumoniae Klebsiella edwardsii Proteus mirabilis Proteus vulgaris Salmonella spp Salmonella Gruppo B Salmonella Gruppo C Salmonella flexneri Shigella dysenteriae Shigella sonnei Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus Enterobacter agglomerans Yersinia enterocolitica Clostridium difficile Vibrioni spp Vibrio cholera Vibrio parahaemolyticus Hafnia alvei Acinetobacter spp Acinetobacter baumanii Lievito ON N 00 D al e dA ddl aga 4 oo oo 00000000000 ooooo o ooooo ooo 0 No TWN 4MN 0 pare dA dd On 8 gt 4 oo oo 00000000000 ooooo o ooooo oo 1 forte 0 Organismo Numero Microgen Campylobacter Tutti i campilobatteri termofili sott
24. it 0 099 Natriumazid Gelber lt D T oO Q 3 D 2 CONTROL M45c Positivkontrolle 10 ml Suspension inaktivierter Campylobacter Antigene die mit dem Test Latexreagenz jedoch nicht mit dem Kontroll Latexreagenz reagieren Konserviert mit 0 099 Natriumazid Schwarzer Verschluss SAMP DIL M46d Probenverd nnung 50 ml 0 85 Kochsalzl sung konserviert mit 0 099 Natriumazid Wei er Verschluss Gebrauchsanweisung Einwegobjekttr ger f r die Agglutination Einwegr hrst bchen Zus tzlich werden ben tigt e _ Bakterien sen Campylobacter semiselektive feste Agarkulturplatten siehe unten Einwegkunststoffprobenr hrchen Fassungsverm gen 1 ml e GasgefaBe zum Erhalt der mikroareophilen Kulturbedingungen e 42 C Inkubator falls nicht verf gbar ist ein 37 C Inubator akzeptabel WARNHINWEISE UND SICHERHEITSVORKEHRUNGEN Sicherheit 1 Die Reagenzien in diesem Kit sind nur f r die n vitro Diagnostik gedacht 2 Natriumazid das als Konservierungsmittel f r die Reagenzien verwendet wird kann mit in Abflussinstallationen vorhandenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Anreicherung von explosiven Metallaziden f hren Bei Entsorgung mit reichlich Wasser nachsp len um eine Anreicherung des Azids zu vermeiden 3 Beim Umgang oder der Beseitigung von potenziellen Pathogenen sollten entsprechende Sicherheitsvorkehrungen getroffen werden Die Dekontamination infekti sen Materials kann mit
25. lobacter Conserv es avec de l azide de sodium 0 099 capuchon bleu CONTROL M46b R actif latex de contr le 2 5 ml Particules de latex enrob es d immunoglobulines de lapin non sp cifiques Conserv es avec de l azide de sodium a 0 099 capuchon jaune CONTROL M46c Contr le positif 1 0 ml Suspension d antigenes de campylobacter inactives r agissant au r actif latex test mais ne r agissant pas au r actif latex de contr le Conserv e avec de l azide de sodium 0 099 capuchon noir SAMP DIL M46d Diluant d chantillon 50 ml Solution saline 0 85 conserv e avec de l azide de sodium a 0 099 capuchon blanc Mode d emploi Lames d agglutination jetables B tonnets de m lange jetables Mat riels suppl mentaires requis ses bact riologiques Plaques de culture la g lose solides semi s lectives de campylobacter voir plus bas Tubes de sp cimen en plastique jetables capacit de 1 ml Cuves de gaz permettant de maintenir des conditions de culture microa rophiles Incubateur 42 C en cas d indisponibilit il est possible d utiliser un incubateur 37 C AVERTISSEMENTS ET MESURES DE SECURITE Mesures de s curit _ Les r actifs fournis dans cette trousse sont destin s une utilisation diagnostique in vitro uniquement L azide de sodium qui est utilise en tant que conservateur dans les r actifs de la trousse peut pr cipiter avec une tuyaut
26. mog ne 2 Verser 50 ul de diluant d chantillon sur chacun des deux ovales de la lame d agglutination 3 Utiliser une boucle inoculante pour retirer plusieurs colonies pr sentant une morphologie similaire celle du campylobacter Si la croissance microbienne n appara t pas clairement balayer toute la surface de la g lose M langer les bact ries dans chacune des deux gouttes de diluant d chantillon sur la lame afin de former des suspensions r guli res 4 Ajouter 1 goutte 50 ul de r actif latex de contr le l une des suspensions bact riennes figurant sur la lame De m me verser 1 goutte 50 ul de r actif latex test dans lautre suspension bact rienne 5 M langer les suspensions bact riennes comprenant les r actifs latex avec un b tonnet de m lange en commen ant par le r actif latex de contr le Etaler le m lange vers les bords des zones ovales 6 Secouer doucement la lame pendant 2 minutes afin de garder les suspensions de fluide en mouvement Rechercher une agglutination 7 Lire les r sultats du test voir la section INTERPRETATION plus bas 8 Jeter les b tonnets de m lange et les lames usag s dans un d sinfectant appropri INTERPRETATION L agglutination est indiqu e par une agr gation visible des particules de latex L intensit de la r action peut varier et tre d termin e selon les crit res suivants r action granularit fine mais ais ment perceptible sur un fond lait
27. nes ind pendants et en interne Un total de 527 sp cimens f caux ont t cultiv s sur des plaques de g lose s lectives pendant 48 heures et les colonies ont t test es avec le test Microgen Campylobacter Microgen Campylobacter Positif N gatif Total M thodes Positif 143 2 145 de reference N gatif 1 381 382 Total 144 383 527 Sensibilit 143 145 98 6 Sp cificit 381 382 99 7 Efficacit 524 527 99 4 La sp cificit du test Microgen Campylobacter a t confirm e par des tests effectu s sur une grande vari t de micro organismes cultiv s Microgen Campylobacter Nombre R action Organisme d isolat z non s Pos Neg sp cifiqu e Campylobacters thermophiles C jejuni 37 37 0 0 C jejuni subsp 3 3 0 0 doylei C coli 4 4 0 0 C upsaliensis 13 13 0 0 C laridis 1 1 0 0 C fetus 2 2 0 0 Campylobacters non thermophiles C concisus 5 0 3 2 faible C hyointestinalis 3 0 3 0 C sputorum faecalis 1 0 0 1 faible C curvis 2 0 2 0 Bact ries troitement li es Helicobacter pylori 12 2 faible 10 0 Helicobacter 5 5 0 fennelliae Helicobacter cinaedi 4 2 2 0 Arcobacter butzleri 4 0 4 0 Arcobacter skirrowii 1 0 1 0 Autres bact ries non li es Providencia stuartii 1 0 1 0 Providencia 1 0 1 0 acalifaciens Escherichia coli 5 0 5 0 Pseudomonas 2 0 2 0 aeruginosa Citrobacter s
28. ontrollo Positivo per avere la conferma del corretto funzionamento dei reagenti 1 Dispensare una singola goccia da 50 ul di Controllo Positivo su due zone adiacenti del vetrino per il test 2 Esaminarle con i Reagenti al Lattice per il Test e di Controllo come descritto nella Procedura del test qui sotto 3 Si deve sospettare il deterioramento di un reagente se Non avviene alcuna reazione tra il Reagente al Lattice per il Test e il Controllo Positivo OPPURE la reazione mostra una notevole perdita di intensit nel tempo Il Reagente al Lattice di Controllo reagisce con il Controllo Positivo e Un reagente al lattice sbiadisce o forma dei grumi che non si disperdono agitando delicatamente Procedura del test 1 Portare tutti i reagenti a temperatura ambiente Agitare delicatamente i reagenti al lattice per garantire che la sospensione sia omogenea 2 Dispensare 50 ul di Diluente del Campione su ciascuno dei due ovali del vetrino di agglutinazione 3 Utilizzare un ansa da inoculo per rimuovere diverse colonie morfologicamente simili a Campylobacter Se i segni della crescita microbica sono sparsi raccogliere un ampio tratto della superficie dell agar Miscelare i batteri in ciascuna delle due gocce di Diluente del Campione sul vetrino per formare sospensioni omogenee 4 Aggiungere 1 goccia 50 pl di Reagente al Lattice di Controllo a una delle sospensioni batteriche sul vetrino Allo stesso modo aggiungere 1 goccia 50 ul
29. oorganismen best tigt Organismus Anzahl Isolate Microgen Campylobacter Pos Neg Nicht spezifische Reaktion Thermophile Campylobacter Erreger C jejuni C jejuni Unterart doylei C coli C upsaliensis C laridis C fetus oo oooo oo oooo Nicht thermophile Campylobacter Erreger C concisus C hyointestinalis C sputorum faecalis C curvis ND 00 oooo D 2 schwach 0 1 schwach 0 Eng verwandte Bakterien Helicobacter pylori Helicobacter fennelliae Helicobacter cinaedi Arcobacter butzleri Arcobacter skirrowii AAO 2 schwac CONOD gt ANOO oooo Andere eng verwandte Bakterien Providencia stuartii Providencia acalifaciens Escherichia coli Pseudomonas aeruginosa Citrobacter spp Citrobacter freundii 4 Streptococcus B Streptococcus Klebsiella pneumoniae Klebsiella edwardsii D O1 D 060 oo o00o0oo0oo D O1 D 60 oo oo oooooo Proteus mirabilis Proteus vulgaris Salmonella spp Salmonella Gruppe B Salmonella Gruppe C Salmonella flexneri Shigella dysenteriae Shigella sonnei Aeromonas hydrophila Staphylococcus aureus Enterobacter agglomerans Yersinia enterocolitica Clostridium difficile Vibrio spp Vibrio cholera Vibrio parahaemolyticus Hafnia alvei Acinetobacter spp Acinetobacter baumanii Hefe 11 dd dA La di LVL
30. oposti al test sono risultati reattivi a Microgen Campylobacter campilobatteri non termofili sono risultati non reattivi anche se 3 degli 11 ceppi testati hanno mostrato una debole agglutinazione non specifica Di un gruppo di batteri strettamente correlati 2 isolati su 12 di Helicobacter pylori sono risultati debolmente reattivi nel test e 2 isolati di Helicobacter cinaedi hanno provocato una reazione crociata Inoltre amp stata sottoposta al test un ampia gamma di altri batteri non correlati Nessuno risultato reattivo nel test bench un isolato di Acinetobacter baumanii abbia mostrato una forte agglutinazione non specifica RIPRODUCIBILITA La riproducibilita intra lotto amp stata accertata analizzando la sensibilit di un lotto contro diluizioni seriali di antigeni di riferimento e di antigeni del controllo positivo del kit in 3 diverse occasioni Il punto finale delle titolazioni ottenute con gli antigeni di riferimento controllo risultato identico nelle tre prove La riproducibilit inter lotti stata esaminata analizzando la sensibilit di 3 lotti di prodotto contro diluizioni seriali di antigeni di riferimento e di antigeni del controllo positivo del kit Non sono state osservate differenze significative del punto finale delle titolazioni fra i tre lotti APPENDICE Preparazione di un mezzo selettivo privo di sangue CCDA Preston modificato 1 Sciogliere 22 75 g di base di agar selettivo privo di sangu
31. po giallo CONTROL M46c Controllo Positivo 1 0 ml Sospensione di antigeni inattivati di Campylobacter reattiva con il Reagente al Lattice per il Test e non reattiva con il Reagente al Lattice di Controllo Con 0 099 di azide sodica come conservante Tappo nero SAMP DIL M46d Diluente del Campione 50 ml Soluzione salina 0 85 conservata con 0 099 di azide sodica Tappo bianco Istruzioni per Uso Vetrini per agglutinazione monouso Bacchette per miscelazione monouso Ulteriore materiale necessario Anse batteriologiche Piastre di coltura di agar solido semiselettive per Campylobacter vedere sotto Provette di plastica monouso per i campioni capacit 1 ml Giare ermetiche per il mantenimento di condizioni di coltura microaerofile Incubatrice a 42 C se non disponibile accettabile un incubatrice a 37 C AVVERTENZE E PRECAUZIONI Sicurezza _ reagenti forniti nel kit sono esclusivamente per uso diagnostico in vitro 2 L azide sodica utilizzata come conservante nei reagenti del kit pu reagire con le tubature in piombo o in rame formando azidi metalliche potenzialmente esplosive Smaltire sciacquando abbondantemente con acqua per evitare l accumulo di azidi 3 Prendere le precauzioni del caso quando si manipolano o si smaltiscono potenziali patogeni Per la decontaminazione del materiale infetto utilizzare ipoclorito di sodio a una concentrazione finale del 3 per 30 minuti Gli scarti liquidi
32. pp 9 0 9 0 Citrobacter freundii 1 0 1 0 4 Streptococcus 2 0 2 0 B Streptococcus 1 0 1 0 Klebsiella 1 0 1 0 pneumoniae Klebsiella edwardsii 1 0 1 0 Proteus mirabilis 2 0 2 0 Proteus vulgaris 3 0 3 0 Salmonella spp 11 0 11 0 Salmonella Groupe 1 0 1 0 B Salmonella Groupe 1 0 1 0 C Salmonella flexneri 1 0 1 0 Shigella dysenteriae 1 0 1 0 Shigella sonnei 1 0 1 0 Aeromonas 1 0 1 0 hydrophila Staphylococcus 1 0 1 0 aureus Enterobacter 2 0 2 0 agglomerans Yersinia 1 0 1 0 enterocolitica Clostridium difficile 1 0 1 0 Vibrio spp 3 0 3 0 Vibrio cholera 1 0 1 0 Vibrio 1 0 1 0 parahaemolyticus Hafnia alvei 1 0 1 0 Acinetobacter spp 1 0 1 0 Acinetobacter 1 0 0 1 fort baumanii Levure 1 0 1 0 Tous les campylobacters thermophiles test s ont r agi au test Microgen Campylobacter Les campylobacters non thermophiles n ont pas r agi bien que 3 des 11 souches test es aient montr une faible agglutination non sp cifique Sur un groupe de bact ries troitement li es 2 isolats de Helicobacter pylori sur 12 ont montr une faible r action au test et 2 isolats de Helicobacter cinaedi ont pr sent une r action crois e Une vaste plage d autres bact ries non li es a galement t test e Aucune n a r agi au test bien qu un isolat de Acinetobacter baumanii ait pr sent une forte agglutination non sp cifique REPRODUCTIBILITE La reproductibilit intra lots a t d termin e en test
33. r 1 0 0 1 strong gative SA baumanii Positive 143 2 145 Yeast 1 0 1 0 Reference Methods Negative 1 381 382 All thermophilic Campylobacters tested were reactive with Microgen Campylobacter Non thermophilic campylobacters were non reactive Total 144 383 527 although 3 of the 11 strains tested showed weak non specific agglutination Sensitivity 143 145 98 6 Of a group of closely related bacteria 2 Helicobacter pylori isolates Specificity 381 382 99 7 of 12 were weakly reactive in the test and 2 isolates of Helicobacter cinaedi cross reacted A wide range of other non related bacteria was also tested None were reactive in the test although one isolate of Acinetobacter baumanii exhibited strong non specific agglutination REPRODUCIBILITY Intra batch reproducibility was established by testing sensitivity of 1 batch of product against serial dilutions of reference and kit positive control antigens on 3 separate occasions End point titres obtained with reference control antigens were identical in the three assays Inter batch reproducibility was examined by testing sensitivity of 3 batches of product against serial dilutions of reference and kit positive control antigens No significant differences in end point titres were seen across the three batches APPENDIX Preparation of Blood Free Selective Medium Modified CCDA Preston a Dissolve 22 75g Campylobacter Blood Free Selective Agar Base Oxoid CM739 in 500mL distilled
34. s instrucciones del kit Espere que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso No diluya ninguno de los reactivos del kit No mezcle entre s los reactivos de diferentes lotes del kit No congele ninguno de los reactivos del kit No deje que el gotero del reactivo de l tex toque el control positivo ni las muestras bacterianas 7 Aseg rese de que la l mina de aglutinaci n est limpia y seca antes de su uso D PINE ALMACENAMIENTO Y PER ODO DE VALIDEZ Microgen Campylobacter se deber almacenar a una temperatura de 2 a 8 C cuando no se utilice El kit no se deber usar despu s de la fecha de caducidad impresa en la etiqueta de la caja MUESTRAS Las muestras fecales se deber n inocular en placas de agar selectivo y desprovisto de sangre CCDA Preston modificado consulte el ap ndice a una concentraci n de 0 2 a 0 3 g de muestra por placa Las placas se deber n incubar en una atm sfera microaerof lica a 42 C durante 48 horas Las colonias con morfolog a similar a la de Campylobacter se eliminan para analizar con Microgen Campylobacter vea m s adelante PROCEDIMIENTO Control de calidad Cada vez que se utilice el kit se deber n hacer la siguiente comprobaci n con el control positivo para confirmar que los reactivos funcionan correctamente 1 Se deber colocar una sola gota de 50 ul de control positivo en dos zonas adyacentes de la l mina de prueba 2 Est
35. ses the Control Latex reagent to agglutinate Klebsiella pneumoniae 1 0 1 0 cannot be tested by Microgen Campylobacter Klebsiella edwardsii 1 0 1 0 Proteus mirabilis 2 0 2 0 LIMITATIONS OF USE Proteus vulgaris 3 0 3 0 1 Results should be interpreted by the clinician in the context of all Salmonella spp 11 0 11 0 available clinical and laboratory information Salmonella Group B 1 0 1 0 2 Non specific agglutination of the Control Latex reagent does not Salmonella Group C 1 0 1 0 preclude the presence of Campylobacters but the result has to Salmonella flexneri 1 0 1 0 be reported as inconclusive The sample should be tested by an Shigella dysenteriae 1 0 1 0 alternative method Shigella sonnei 1 0 1 0 3 Very low numbers of Campylobacters may result in a negative Aeromonas hydrophila 1 0 1 0 test result 48 hour cultures should be used to maximise growth Staphylococcus 1 0 1 0 of the bacteria aureus Enterobacter 2 0 2 0 PERFORMANCE CHARACTERISTICS agglomerans Microgen Campylobacter has been evaluated as a culture Yersinia enterocolitica 1 0 1 0 confirmation test at two independent external centres and in house Clostridium difficile 1 0 1 0 In total 527 faecal specimens were cultured on selective agar plates Vibrio spp 3 0 3 0 for 48 hours and colonies tested by Microgen Campylobacter Vibrio cholera 1 0 1 0 Vibrio 1 0 1 0 parahaemolyticus Microgen Hafnia alvei 0 1 0 Campylobacter Acinetobacter spp 1 0 1 0 Positive Negati Total Acinetobacte
36. st nachgewiesen zu werden Nicht spezifische Agglutination Kein eindeutiges Ergebnis Eine Probe die zur Agglutination des Kontroll Latexreagenzes f hrt kann mit Microgen Campylobacter nicht getestet werden ANWENDUNGSBESCHR NKUNGEN 1 Die Ergebnisse sollten durch den Arzt immer im Kontext aller vorhandenen klinischen und Laborparameter interpretiert werden Eine nicht spezifische Agglutination schlie t die Anwesenheit von Campylobacter Erregern nicht aus das Ergebnis muss aber als nicht eindeutig berichtet werden alternativen Methode untersucht werden 3 Sehr niedrige Zahlen von Campylobacter Erregern k nnen zu Zur Maximierung des Bakterienwachstums sollten 48 Stunden Kulturen verwendet einem negativen Testergebnis f hren werden LEISTUNGSDATEN Die Probe muss mit einer Microgen Campylobacter ist als Kulturbest tigungstest in zwei unabh ngigen Zentren und intern bewertet worden Insgesamt wurden 527 Stuhlproben 48 Stunden lang auf selektiven Agarplatten kultiviert und die Kolonien mit Microgen Campylobacter getestet Microgen Campylobacter Positiv Negativ Gesamt Refe Positiv 143 2 145 renzme thoden Negativ 1 381 382 Gesamt 144 383 527 Sensitivit t 143 145 98 6 Spezifit t 381 382 99 7 Effizienz 524 527 99 4 Die _ Spezifit t von Microgen Campylobacter wurde durch Untersuchung mit einer Vielzahl kultivierter Mikr
37. t Microgen Campylobacter entfernt siehe unten VERFAHREN Qualit tskontrolle Die folgende Pr fung mit der Positivkontrolle muss jedes Mal wenn das Kit verwendet wird durchgef hrt werden um zu best tigen dass die Reagenzien richtig wirken 1 Auf zwei benachbarte Bereiche auf dem Testtr ger muss ein einzelner 50ul Tropfen Positivkontrolle gegeben werden Diese m ssen wie unten unter Testverfahren beschrieben mit den Test und Kontroll Latexreagenzien untersucht werden Reagenzien k nnten unter folgenden Bedingungen verdorben sein e Es tritt keine Reaktion zwischen dem Test Latexreagenz und der Positivkontrolle auf ODER die Reaktion wird mit der Zeit betr chtlich schw cher e Das Kontroll Latexreagenz reagiert mit der Positivkontrolle e Ein Latexreagenz verf rbt sich oder bildet Klumpen die sich nicht durch sanftes Sch tteln aufl sen Testverfahren 1 Alle Reagenzien Raumtemperatur erreichen lassen Die Latexreagenzien sanft sch tteln um eine homogene Suspension zu gew hrleisten 50ul der Probenverd nnung in jedes der beiden Ovale auf dem Agglutinationsobjekttr ger verteilen Eine Impf se zum Entfernen verschiedener Kolonien mit Campylobacter hnlicher Morphologie verwenden Wenn die Anzeichen mikrobiellen Wachstums sp rlich sind breit ber die Agaroberfl che streichen Die Bakterien in jeden der beiden Tropfen Probenverd nnung auf dem Tr ger mischen um gleichm ige Suspensionen z
38. u bilden 1 Tropfen 50pl Kontroll Latexreagenz in eine der bakteriellen Suspensionen auf dem Tr ger geben Gleicherma en 1 Tropfen 50ul Test Latexreagenz in die andere Bakteriensuspension geben Die Bakteriensuspensionen mit den Latexreagenzien mithilfe eines R hrst bchens mischen Dabei mit dem Kontroll Latexreagenz beginnen Die Mischungen bis an die Kanten der Ovalbereiche verteilen Den Tr ger 2 Minuten lang sanft schwenken um die Fl ssigkeitssuspensionen in st ndiger Bewegung zu halten Auf Agglutination achten Die Testergebnisse ablesen siehe INTERPRETATION unten Die benutzten R hrst bchen und Objekttr ger in geeigneter Desinfektionsl sung entsorgen INTERPRETATION Eine Agglutinationsreaktion wird durch eine sichtbare Aggregation der Latexpartikel angezeigt Die St rke der Reaktion kann schwanken und kann gem der folgenden Richtlinien bewertet werden Die Ergebnisse von Microgen Campylobacter Reaktion feine leicht erkennbare Granularit t vor einem milchigen Hintergrund Reaktion grobe Granularit t vor einem milchigen Hintergrund schwere Verklumpung von Partikeln um die Peripherie des Testovals vor einem klaren Hintergrund Reaktion sollten wie folgt interpretiert werden Reaktion mit Kontrolllatex Reaktion mit Testlatex Interpretation Campylobacter Erreger x vorhanden Campylobacter Erreger nicht in ausreichender Zahl vorhanden um von dem Te
39. utfreien selektiven Mediums Modified CCDA Preston 1 22 759 Campylobacter Blutfreie Selektive Agarbasis Oxoid CM739 in 500ml destilliertem Wasser durch Kochen aufl sen 2 Bei 121 C 15 Minuten im Autoklaven sterilisieren 3 Auf 50 C abk hlen dann aseptisch 1 Fl schchen Cefoperazone Selektives Supplement Oxoid SR125 hinzugeben 4 Gr ndlich und in sterile Petrischalen geben 15 20ml Schale USAGE PREVU Microgen Campylobacter est un test d agglutination rapide au latex concu pour identifier avec certitude les campylobacters thermophiles ent ropathog nes cultiv s sur un support solide s lectif pr lev partir d chantillons f caux de patients pr sentant une ent rite bact rienne pr sum e La trousse est uniquement destin e aux laboratoires PRINCIPE DU TEST Les particules de latex sont enrob es d immunoglobulines de lapin dirig es contre les pr parations d antig ne provenant de s rotypes s lectionn s de Campylobacter jejuni Lorsque les particules de latex sensibilis es sont m lang es une solution contenant des antig nes de campylobacter ent ropathog ne une r action immunochimique sensible et sp cifique se produit amenant les particules de latex finement dispers es s agglutiner en agr gats facilement perceptibles l oeil nu CONT PRESENTATION DE LA TROUSSE TEST M46a R actif latex test 2 5 ml Particules de latex enrob es d anticorps de lapin d antigenes de campy
40. utination C fetus 2 2 0 0 7 Read the test results see INTERPRETATION below 8 Discard the used mixing sticks and slides into a suitable Non thermophilic disinfectant campylobacters C concisus 5 0 3 2 weak INTERPRETATION soit pi C hyointestinalis 3 0 3 0 An agglutination reaction is indicated by visible aggregation of the C sputorum faecalis 1 0 0 1 weak latex particles The strength of the reaction may vary and can be C curvis 2 0 2 0 assessed according to the following guidelines reaction fine but readily discernible granularity Closelv related d against a milky background Helicobacter pylori 12 2 weak 10 0 reaction coarse granularity against a milky Helicobacter fennelliae 5 0 5 0 background Helicobacter cinaedi 4 2 2 0 reaction heavy clumping of particles around the Arcobacter butzleri 4 0 4 0 periphery of the test oval against a Arcobacter skirrowii 4 0 4 0 clear background Microgen Campylobacter results should be interpreted as follows Other non related Reaction with Reaction with bacteria Test Latex Control Latex Interpretation a stuarti l 0 i 3 Campylobacters present acalifaciens Escherichia coli 5 0 5 0 Campylobacters not present Pseudomonas 2 0 2 0 in sufficient numbers to be aeruginosa detected by the test Citrobacter spp 9 0 9 0 7 x Non specific agglutination Citrobacter freundii 1 0 1 0 Inconclusive result 4 Streptococcus 2 0 2 0 B Streptococcus 1 0 1 0 A specimen that cau
41. which do not disperse with gentle shaking Test Procedure 1 Bring all reagents to room temperature Gently shake the latex Efficiency 524 527 99 4 reagents to ensure a homogeneous suspension 2 Dispense 50uL of Sample Diluent on to each of two ovals of the The specificity of Microgen Campylobacter has been confirmed by agglutination slide testing a wide variety of cultured microorganisms 3 Use an inoculating loop to remove several colonies with Campylobacter like morphology If evidence of microbial growth Microgen Campylobacter is sparse take a broad sweep of the agar surface Mix the Number Non bacteria into each of the two drops of Sample Diluent on the Organism 23 0 Pos Neg specific slide to form even suspensions isolates reaction 4 Add 1 drop 50uL of Control Latex reagent to one of the Thermophilic bacterial suspensions on the slide Similarly dispense 1 drop Campylobacters 50uL of Test Latex reagent to the other bacterial suspension C jejuni 37 37 0 0 5 Mix the bacterial suspensions with the latex reagents using a C jejuni subsp doylei 3 3 0 0 mixing stick starting with the Control Latex reagent Spread C coli 4 4 0 0 the mixtures to the edges of the oval areas C upsaliensis 13 13 0 0 6 Gently rock the slide to keep the fluid suspensions in constant C laridis 1 1 0 0 movement for 2 minutes Observe for aggl
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