DCM018-8 Urinary Cortisol CE_fr
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1. La s paration libre li est obtenue par simple lavage de la phase solide L enzyme pr sent dans la fraction li e r agit avec le substrat H505 et le substrat TMB TMB en d veloppant une coloration bleue qui vire au jaune apr s ajout de la solution d arr t H2SO L intensit de la couleur d velopp e est proportionnelle la concentration d antig ne marqu et est donc inversement proportionnelle la concentration de cortisol urinaire dans l chantillon 3 REACTIFS MATERIAUX ET INSTRUMENTS 3 1 R actifs et mat riaux fournis dans le coffret 1 talon cortisol 5 flacons 1 mL chaque STDO R F DCE002 1806 0 STD1 R F DCE002 1807 0 STD2 R F DCE002 1808 0 STD3 R F DCE002 1809 0 STD4 R F DCE002 1810 0 2 Tampon d incubation 1 flacon 100 mL Tampon phosphat 50 mM pH 7 4 BSA 1 g L DCE001 0 3 Conjugu 1 flacon 1 mL Cortisol conjugu avec de la peroxydase DCE002 1802 0 4 Microplaque coat e 1 microplaque s cable IgG anti cortisol adsorb e sur microplaque DCE002 1803 0 5 Substrat TMB 1 flacon 15 mL H O TMB 0 26 g L viter le contact avec la peau DCE004 0 6 Solution d arr t 1 flacon 15 mL Acide sulfurique 0 15 mol L viter le contact avec la peau DCE005 0 7 Contr le bas 1 flacon 1 mL Pr t l emploi DCE045 1801 0 8 Contr le lev 1 flacon 1 mL Pr t l emploi DCE045 1802 0 3 2 R actifs n cessaires non fournis dans le coffret Ea2. ouverts ils sont stables pendant 6 mois 2 8 C 5 2 Pr paration du conjugu dilu Pr parer imm diatement avant l emploi Ajouter 10 uL de conjugu r actif 3 1 mL de tampon d incubation r actif 2 Mettre agiter d licatement sur un agitateur rotatif pendant au moins 10 minutes Stable pendant 3 heures temp rature ambiante 22 28 C 5 3 Pr paration de l chantillon Recueillir les urines sur 24 heures dans un r cipient unique Si le dosage n est pas effectu le jour m me du pr l vement conserver l chantillon 2 8 C Stable pendant une semaine Pour des p riodes plus longues conserver 20 C Diluer les chantillons d urine 1 1 avec le tampon d incubation par ex 100 uL 100 pL 5 4 Proc dure Puisqu il faut op rer en double pr parer deux puits pour chaque point de la courbe d talonnage 96 54 deux pour chaque chantillon et un pour le blanc talon Contr les talon So S4 Contr les 10 pL chantillons Conjugu Laisser incuber 1 h 37 C Retirer le contenu de chaque puits laver les puits 2 fois avec 400 uL de eau distill e Substrat TMB 100 uL 100 uL 100 uL Laisser incuber 15 minutes temp rature ambiante 22 28 C l abri de la lumi re Solution 100 uL 100 uL 100 uL Agiter doucement la microplaque Lire l absorbance 450 nm en mettant z ro avec le blanc 6 CONTR LE DE QUALIT Chaque laboratoire devrait analyser l
3. 49 y Cortisol urinaire Diametra x Cortisol Immunotech RIA 11 DISPOSITIONS RELATIVES L LIMINATION DES D CHETS Les r actifs doivent tre jet s conform ment aux lois en vigueur BIBLIOGRAPHIE 1 Foster L B and Dunn R T Clin Chem 20 3 365 1974 2 De Lacerda et al J Clin Endocr and Metab 36 227 1973 Rolleri E et al Clin Chim Acta 66 319 1976 Kobayashi Y et al Steroids 32 no 1 1978 Akarawa et al Anal Biochem 97 248 1979 O1 A Ed 12 2010 DCM018 8 DiaMetra S r l Si ge social Via Garibaldi 18 20090 SEGRATE MI Italie T l 0039 02 2139184 02 26921595 Fax 0039 02 2133354 Fabricant Via Giustozzi 35 35a Z I Paciana 06034 FOLIGNO PG Italie T l 0039 0742 24851 Fax 0039 0742 316197 Courriel info diametra com O DIA METRA SRL o NOTICE D INFORMATION NEM piegazione dei simboli xplanation of symbols xplication des symboles 1gnificado de los simbolos Verwendete Symbole Explicagao dos simbolos In vitro Diagnostikum Producto sanitario para diagn stico In vitro Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostic Medical Device Dispositivo medico diagnostico in vitro Dispositivos medicos de diagnostico in vitro Bestellnummer N mero de cat logo R fer nc s du catalogue Catalogue number Numero di Catalogo N mero do cat logo Verwendbar bis Establa hasta usar antes de ltimo d a del mes Utiliser avan
4. DiaMletr URINARY FREE CORTISOL pour analyses de routine D termination immunoenzymatique de cortisol urinaire libre LOT IVD Ca Voir l tiquette externe 8 C ZU A V 96 tests DKO018 USAGE PR VU M thode immunoenzymatique colorim trique par comp tition pour la d termination quantitative de la concentration de cortisol libre dans les urines Le kit Urinary Free Cortisol est destin exclusivement un usage en laboratoire 1 SIGNIFICATION CLINIQUE Le cortisol est une hormone st roidienne lib r e par le cortex de la surr nale en r ponse l hormone ACTH produit par l hypophyse il est impliqu dans la r ponse au stress il augmente la pression sanguine la glyc mie et peut tre cause de st rilit chez les femmes il supprime le syst me immunitaire Le cortisol agit travers les r cepteurs intracellulaires sp cifiques et a des effets sur de nombreux syst mes physiologiques y compris le syst me immunitaire la r gulation du glucose le tonus vasculaire l utilisation du substrat et le m tabolisme osseux Le cortisol est excr t avant tout dans les urines sous forme non li e libre Le cortisol dans le plasma est li par la globuline liant les corticost roides CBG transcortine avec une affinit lev e avec l albumine Seul le cortisol libre est disponible aux r cepteurs Les fonctions endog nes normales sont la base des cons quences physiologiqu
5. appliquer la formule suivante ng mL x Vol mL urines 24 h 1 000 ug cortisol 24 heures 9 VALEURS DE R F RENCE Les concentrations urinaires de cortisol sur 24 h sont comprises dans les intervalles suivants 50 190 ug 24 heures 10 PARAMETRES CARACT RISTIQUES 10 1 Pr cision 10 1 1 Intra essai La variabilit l int rieur du m me coffret a t d termin e en r pliquant 10x la mesure de trois s rums de contr le diff rents La variabilit intra essai est lt 796 10 1 2 Inter essai La variabilit entre dosages diff rents a t d termin e en r pliquant 10x la mesure de trois s rums de contr le diff rents avec des coffrets appartenant des lots diff rents La variabilit inter essai est lt 996 10 2 Exactitude L preuve de r cup ration conduite sur un chantillon enrichi avec 25 50 100 200 ng mL de cortisol a donn une valeur moyenne SD de 101 89 4 5596 10 3 Sensibilit La concentration minimale de cortisol urinaire mesurable est de 2 0 ng mL avec une limite de confiance de 95 95 10 4 Sp cificit L anticorps employ pr sente les r actions crois es suivantes calcul es 50 96 selon Abraham lt 1x10 10 5 Corr lation avec le dosage RIA Le coffret de Cortisol urinaire Diametra a t compar avec un coffret disponible en commerce 50 chantillons de s rum ont t test s La courbe de r gression est y 1 10 x 1 56 r 0 9
6. e l essai non distribution du conjugu contamination du conjugu et ou du substrat erreurs dans l ex cution du dosage par ex distribution accidentelle des r actifs dans le mauvais ordre ou en provenance des mauvais flacons etc R action trop faible DO trop basse conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop court temp rature d incubation trop basse R action trop intense DO trop lev e conjugu non appropri par ex ne provenant pas du coffret original temps d incubation trop long temp rature d incubation trop lev e mauvaise qualit de l eau utilis e pour la solution de lavage bas degr de d ionisation lavages insuffisants conjugu non enti rement limin Valeurs inexplicablement hors plage contamination des pipettes embouots ou r cipients lavages insuffisants conjugu non enti rement limin CV intra essai lev les r actifs et ou les bandes n ont pas atteint la temp rature ambiante avant usage le laveur de microplaques ne lave pas correctement suggestion nettoyer la t te du laveur CVS inter essai lev conditions d incubation non constantes temps ou temp rature contr les et chantillons non distribu s en m me temps avec les m mes intervalles contr ler l ordre de distribution variabilit intrins que des op rateurs
7. es chantillons dans la gamme des niveaux lev s normaux et bas de cortisol urinaire pour v rifier les prestations de l analyse Ces chantillons devraient tre trait s comme inconnus et les valeurs d termin es devraient tre dans chaque test effectu Les tableaux de contr le de la qualit devraient tre observ s afin de suivre les prestations des r actifs fournis Des m thodes statistiques appropri es devraient tre employ es pour v rifier la tendance Le laboratoire devrait d finir des limites d acceptabilit des prestations d analyse Les autres param tres qui devraient tre contr l s incluent les interceptions de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage pour valuer la reproductibilit De plus la capacit d absorption maximale devrait tre constante avec l exp rience pr c dente La d viation significative par rapport aux prestations tablies peut indiquer un changement non observ des conditions exp rimentale ou une d gradation des r actifs du coffret Dans ce cas il est conseill d utiliser des r actifs frais afin de d terminer le motif des variations 7 LIMITATIONS DE LA PROC DURE 7 1 Prestations de l analyse Ne pas utiliser des chantillons microbiologiquement contamin s ou des chantillons fortement lip miques ou h molys s Il est important que le temps de r action de chaque puits soit le m me aux fins de la reproductibilit Le temps de distribution des puits ne doit pas t
8. es du stress chronique la s cr tion prolong e de cortisol provoque l effort musculaire et l hyperglyc mie et supprime les r ponses immunitaires inflammatoires les m mes cons quences r sultent de l usage prolong de m dicaments base de glycocorticoides Le cortisol libre repr sente la fraction m taboliquement active du cortisol En conditions normales moins de 1 est excr t comme tel dans les urines Dans des conditions pathologiques syndrome de Cushing les taux de cortisol urinaire libre sont tr s lev s du fait que le cortisol plasmatique en exc s ne se lie pas la CBG et est limin dans les urines Pendant la grossesse ou le traitement aux oestrog nes et progestines on note une augmentation du cortisol plasmatique r sultant du renforcement de la synth se de la prot ine de transport mais les taux de cortisol urinaire libre restent normaux indiquant un bon fonctionnement de la surr nale Ce dosage est tr s utile pour valuer le fonctionnement r el de la surr nale du moment que la partie libre est dos e et est donc m taboliquement active De plus l valuation du cortisol urinaire libre est le meilleur param tre pour le diagnostic du syndrome de Cushing 2 PRINCIPE DE LA M THODE Le cortisol urinaire antig ne pr sent dans l chantillon rentre en comp tition avec l antig ne marqu la peroxydase par rapport l anticorps anti cortisol adsorb sur microplaque phase solide
9. re sup rieur 10 minutes S il se prolonge au del des 10 minutes il est recommand de suivre l ordre de distribution Si vous devez utiliser plus d une microplaque il est conseill de r p ter la courbe dose r ponse L ajout de substrat TMB entraine une r action cin tique qui se termine par l ajout de la solution d arr t L ajout du substrat et de la solution d arr t doit advenir dans le m me ordre afin d liminer des temps de r action diff rents Les lecteurs de plaques mesurent les DO verticalement Ne pas toucher le fond des puits Une aspiration incompl te de la solution de lavage dans les puits peut entrainer des r plicats de mauvaise qualit et de faux r sultats 7 2 Interpr tation des r sultats Si un ordinateur a t utilis pour calculer les r sultats il faut imp rativement que les valeurs des calibrateurs tombent dans les 10 des concentrations assign es 8 R SULTATS 8 1 Extinction moyenne Calculer l extinction moyenne Em de chaque point de la courbe d talonnage So S4 et de chaque chantillon 8 2 Courbe d talonnage Tracer le graphique d absorbance en fonction des concentrations des talons So S4 par ex trac logistique quatre param tres 8 3 Calcul des r sultats our le graphique faire une interpolation des valeurs d absorbance relatives chaque chantillon et en lire la concentration correspondante en ng mL Pour calculer les concentrations dans les urines
10. t dernier jour du mois indiqu Use by last day of the month Utilizzare prima del ultimo giorno del mese Utilizar antes ultimo dia do m s Gebrauchsanweisung beachten Consultar las instrucciones Consulter le mode d emploi Consult instructions for use Consultare le istruzioni per l uso Consultar instru es para uso Ausreichend f r n Tests 393 43 Contenido suficiente para n tests 66 499 Contenu suffisant pour n tests 66 499 Contains sufficient for n tests Contenuto sufficiente per n saggi 66 499 Cont m o suficiente para n testes Temperaturbereich L mitaci n de temperatura Limites de temp rature de conservation Temperature limitation Limiti di temperatura Temperaturas limites de conserva o Hergestellt von Elaborado por Fabriqu par Manufacturer Produttore Produzido por Herstellungs datum Fecha de fabricacion Date de fabrication Date of manufacture Data di produzione Data de produc o Biogef hrdung Riesco biol gico Risque biologique Biological risk Rischio biologico Risco biol gico Chargenbezeichnung Codigo de lote Numero de lot Batch code Codice del lotto Codigo do lote Inhalt Contenido del estuche Contenu du coffret Contents of kit Contenuto del kit Conte do do kit NENNEN DIA METRA SRL MEE SUGGESTIONS POUR LA R SOLUTION DES PROBLEMES D PANNAGE ERREUR CAUSES POSSIBLES SUGGESTIONS Aucune r action colorim trique d
11. u distill e 3 3 Mat riaux et instruments auxiliaires Distributeurs automatiques Lecteur pour microplaques 450 nm Remarques Conserver tous les r actifs 2 8 C l abri de la lumiere N ouvrir le sachet de R actif 4 Microplaque Coat e qu apr s avoir amen celui ci temp rature ambiante et refermez le tout de suite apr s avoir pr lev les bandes utiliser Eviter de d tacher la feuille adh sive des bandes qui ne sont pas utilis es pendant l analyse en cours 4 PR CAUTIONS D USAGE e Les r actifs contiennent du Proclin 300 comme conservateur e viter l exposition du r actif TMB H5O la lumi re directe du soleil aux m taux et aux substances oxydantes e Observer la plus grande pr cision dans la reconstitution et la distribution des r actifs e Ne pas utiliser les r actifs appartenant des lots diff rents e Ne pas utiliser des chantillons fortement h molys s e Cette m thode permet de d terminer des concentrations de cortisol de 10 ng mL 500 ng mL e l administration de st roides naturels ou synth tiques peut alt rer les taux urinaires de cortisol 5 PROC DURE 5 1 Pr paration des talons S S Avant utilisation laisser sur l agitateur rotatif pendant au moins 5 minutes Les talons ont les concentrations suivantes de cortisol 8 S S S S pngmE O0 10 s50 150 500 Stables jusqu la date de p remption du coffret Une fois
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