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“DiaCell I+II” and “DiaCell I+II+III”

1. Controlli Si consiglia di includere sempre controlli noti positivi e negativi in conformit alle direttive vigenti in materia di garanzia di qualit Procedimentos L Test all antiglobulina umana con albumina bovina in 3 fasi to teste Prima dell uso portare i reagenti eritrocitici a temperatura ambiente 1 fase fase NaCl 1 Identificare le provette di prova con le corrispondenti emazie testo DiaCell l 11 0 DiaCell l 11 111 e l autocontrollo Pipettare in ogni provetta 1 goccia 50 uL delle corrispondenti emazie testo o della sospensione di eritrociti del paziente o del donatore per l autocontrollo Aggiungere a ciascuna provetta 2 gocce 100 uL del siero o del plasma da analizzare Miscelare delicatamente e incubare per 5 minuti a temperatura ambiente 18 25 C Centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione e o emolisi N 2 fase fase albumina 7 Pipettare in ogni provetta 3 gocce 150 uL di albumina bovina al 30 8 Miscelare delicatamente e incubare per 15 30 minuti a 37 C 9 Centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 10 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione 3 fase fase antiglobulina umana 11 Lavare il contenut
2. Coombs Control IgG Id n 16070 ver folheto informativo correspondente Outros Tubos de Suspens o materiais Suporte para tubos ERRE Pipeta necessarios Centr fuga imuno hematol gica Amostras Para obten o dos resultados ideais a determina o deve ser realizada numa amostra recentemente colhida ou em conformidade com os crit rios de aceita o do procedimento laboratorial local As amostras de sangue devem de prefer ncia ser colhidas em anticoagulante citrato EDTA ou CPD A Tamb m poss vel utilizar amostras colhidas em tubos limpos sem anticoagulante Sempre que for prefer vel utilizar soro em vez de plasma o soro deve ser bem limpo por centrifuga o a 1500 g durante 10 minutos antes de ser utilizado a fim de evitar res duos de fibrinas que poderiam interferir com o padr o da reac o Prepara o a Suspens o de eritr citos para autocontrolo da amostra de sangue Prepare uma suspens o de eritr citos a 3 5 em solu o isot nica salina do seguinte modo 1 Dispense 0 5 mL de solu o isot nica salina num tubo de vidro limpo 2 Adicione 1 gota 50 uL de sangue total ou 25 uL de concentrado de eritr citos misture suavemente b Plasma ou soro No caso das amostras n o serem testadas imediatamente dever o ser conservadas a 2 8 C ap s decanta o no m ximo durante 48 horas em seguida a 20 C Controlos Amostras positivas e negativas conhecidas devem ser inclu das
3. Deutsch DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 DiaCell I 11 und DiaCell I 11 111 Testerythrozyten f r den Antik rper Suchtest Einleitung Die Zuverl ssigkeit des Antik rpernachweises ist im wesentlichen von der Verf gbarkeit von Testerythrozyten mit geeigneten Antigenen und der Empfindlichkeit der verwendeten Methode abh ngig Die Anforderungen an die Antigen Konfiguration sind streng sie muss die Feststellung der gew hnlich auftretenden Antik rper mit potentieller klinischer Signifikanz erm glichen Da einige dieser Antik rper sich ber den Dosis Effekt manifestieren ist es empfehlenswert dass die Antigene des Rh Duffy Kidd und MNS Blutgruppensystem auf den Suchzellen in homozygoter Form vorliegen Bestimmte Richtlinien verlangen dass sowohl die Lewis Antigene als auch das seltene Kp a KEL3 vorhanden sein m ssen Es wird allgemein als sicherer betrachtet zwei Testmethoden zu kombinieren den indirekten Antiglobulintest IAT und die Enzymtechnik die die Reaktionen bestimmter Antik rper erh ht vor allem die vom Rh Kell und Kidd System In Anbetracht dieser Anforderung bietet DiaMed gebrauchsfertige Testerythrozyten f r den IAT die einstufige Enzymtechnik oder f r die Bestimmung von K lteagglutininen mit der entsprechenden Methode an Reagenzien Testerythrozyten der Blutgruppe O von Einzelspendern in einer Suspension von 3 0 1 0 in 10 mL Fl schchen Konservierungs
4. Folglich kann eine einzige Testmethode f r den Nachweis aller Antik rper unzureichend sein und es sollten unterschiedliche Verfahren miteinander kombiniert werden c Es ist bekannt dass bestimmte Medikamente positive Reaktionen im AHG Test hervorrufen k nnen d Einige Krankheitsbilder k nnen positive AHG Reaktionen hervorrufen e Bakterielle oder andere Kontaminationen des verwendeten Materials k nnen falsch positive oder falsch negative Ergebnisse verursachen f Striktes Befolgen der Anleitungen und Verwendung des erforderlichen Arbeitmaterials sind unerl sslich Das Arbeitsmaterial sollte regelm ssig entsprechend der GLP Richtlinien berpr ft werden g Eine unzureichende Waschphase oder das Vorliegen humaner Globuline in den verwendeten Glasger ten kann eine Neutralisation des Antihumanglobulinserums bewirken und folglich zu einer f lschlicherweise schwachen oder negativen Reaktion f hren h Zu starkes Aufsch tteln der Erythrozytensedimente kann eine Abschw chung der positiven Reaktionen bewirken Ces produits sont garantis quant leurs propri t s et qualit s stipul es sur l tiquette et dans le mode op ratoire Le fabricant d cline toute responsabilit pour les cas o ces produits seraient employ s ou vendus d autres usages DiaMed SA 1785 Cressier s Morat Suisse 0123 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks These products are guaranteed to perform as
5. 45230 Sim ees iere REF 109793 Si garantiscono per questi prodotti le prestazioni descritte sull etichetta e nel foglio di istruzioni II produttore declina ogni responsabilit derivante dall uso improprio o dalla vendita di questi prodotti per scopi diversi da quelli qui descritti DiaMed AG 1785 Cressier s Morat Svizzera 0123
6. o DiaCell l 11 111 utilizzati corrisponda al numero di lotto indicato dalla tabella degli antigeni Dal pattern di reazione e dalla configurazione degli antigeni si puo risalire al tipo degli anticorpi presenti Eseguire gli altri test consueti per identificare lVanticorpo Una reazione positiva per uno o pi delle emazie testo e un autocontrollo negativo possono far pensare alla presenza di un anticorpo specifico come descritto al punto Note Una reazione positiva con tutte le emazie testo e un autocontrollo positivo possono essere dovuti a un autoanticorpo Se tutte emazie testo e l autocontrollo presentano una reazione positiva ma almeno una della emazie testo presenta una reazione pi nettamente positiva rispetto allautocontrollo potrebbe essere presente un alloanticorpo e si dovranno effetuare ulteriori indagini Note 1 Si raccomanda di utilizzare siero di controllo DiaLISS per verificare l efficacia del test per l antiglobulina umana LISS consultare le istruzioni per l uso DiaLISS e DiaLISS control 2 L emolisi delle emazie testo in qualsiasi procedura deve essere interpretata come reazione positiva 3 Come per ogni procedura regolamentata dalle norme GLP per convalidare la sensibilit delle procedure sopra descritte si dovranno usare anticorpi di concentrazione nota ll reagente di riferimento DiaMed Anti D fornisce il mezzo per effettuare regolarmente controlli di tutte le procedure di ri
7. eine st rker positive Reaktion zeigen als die Eigenkontrolle so ist davon auszugehen dass neben der nichtspezifischen Reaktion eventuell ein spezifischer Antik rper vorhanden ist Die Probe des Patienten sollte weiteren Tests unterzogen werden 1 Es wird empfohlen DiaLISS Kontrollserum zu verwenden um den LISS Antihumanglobulintest zu best tigen siehe diesbez gliche Packungbeilage Dia LISS und DiaLISS control 2 Eine H molyse der Testerythrozyten in jedem Verfahren sollte als positive Reaktion interpretiert werden 3 Wie bei allen Methoden abgesichert durch GLP sollte die Sensitivit t der erw hnten Verfahren durch Antik rper mit bekannter Konzentration best tigt werden DiaMed Anti D Referenz Reagenz steht zur regelm ssigen Kontrolle aller Antik rper Nachweisverfahren zur Verf gung siehe diesbez gliche Packungsbeilage Fran ais A Division of Bio Rad B109796 04 08 English A Division of Bio Rad B109796 04 08 Deutsch IL Test enzymatique avec DiaBrom ll Enzyme test with DiaBrom 1 Identifier les tubes avec les h maties correspondantes de DiaCell I II ou DiaCell lU et l autocontr le 1 Identify test tubes with the respective cells of DiaCell l 11 or DiaCell lU and the autocontrol 2 Distribuer dans chaque tube 1 goutte 50 uL d h maties tests correspondantes et la suspension d h maties 2 Add to each tube 1 drop 50 uL of the corresponding test cells and the
8. mix gently b Plasma or serum Samples that are not for immediate testing should be stored at 2 8 C after separation for a maximum of 48 hours thereafter at 20 C Controls Known positive and negative samples should be included in accordance with the relevant guidelines of quality assurance Test procedures l 3 Step Anti human globulin test with bovine albumin Allow test cell reagents to reach room temperature before use 1st step NaCI phase 1 Identify test tubes with the respective cells of DiaCell or DiaCell 1 11 111 and the autocontrol 2 Add to each tube 1 drop 50 uL of the corresponding test cells or the patient s or donor s red cell suspension for the autocontrol Add to each tube 2 drops 100 uL of the serum or plasma to be tested Mix gently and incubate for 5 minutes at room temperature 18 25 C Centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination and or haemolysis AIR 2nd step Albumin phase 7 Add to each tube 3 drops 150 uL of bovine albumin 30 8 Mix gently and incubate for 15 30 minutes at 37 C 9 Centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 10 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination 3rd step Anti human globulin phase 11 Wash contents of tubes 3 times with isotonic saline s
9. the availability of test cells with appropriate antigens and on the sensitivity of the test methods used The requirements for antigen configuration are stringent it must allow the detection of commonly encountered antibodies of potential clinical significance Since some of these antibodies show a dosage effect it is advisable that screening cells possess antigens with presumed double dose expression within the Rh Duffy Kidd and MNS blood group systems Certain guidelines require that the Lewis antigen be present as should the rare antigen Kp a KEL3 It is generally considered most effective to combine two test methods the indirect antiglobulin test IAT and an enzyme technique which enhances the reactions of certain antibodies notably in the Rh Kell and Kidd Systems Considering these requirements DiaMed provides ready to use test cell reagents for the IAT one stage enzyme technique or for the detection of cold agglutinins by the appropriate technique Reagents Group O red cells from single donors in a suspension of 3 0 1 0 in 10 mL vials Preservatives the antibiotics trimethoprime and sulfamethoxazole DiaCell ll R4Rq R2R9 or RqWR7 R2R2 DiaCell alt RqwRq RoRo rr Caution The source materials from which these products were manufactured were found non reactive for HBsAg HCV and HIV 1 2 when tested with licensed reagents However no known test method can assure that infectious agents are absent Products from hum
10. y del autocontrol A ada a cada tubo 1 gota 50 uL de los eritrocitos de prueba correspondientes o de la suspensi n de eritrocitos del paciente o donante en el caso del autocontrol A ada a cada tubo 1 gota 50 uL de DiaBrom Mezcle cuidadosamente e incube durante 1 2 minutos a temperatura ambiente 18 25 C A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL del suero o plasma que debe analizarse Agite suavemente e incube durante 15 minutos a 37 C no supere los 15 minutos Centrifugue 20 segundos a 1000 g o 1 minuto a 125 g Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n o hemolisis N mim bn Ill T cnica de LISS con DiaLISS reactivo de LISS modificado 1er paso fase NaCl 1 Identifique los tubos de ensayo correspondientes a los distintos hemat es reactivo del DiaCell l 11 o DiaCell Lal y del autocontrol A ada a cada tubo 1 gota 50 uL de los eritrocitos de prueba correspondientes o de la suspensi n de eritrocitos del paciente o donante en el caso del autocontrol A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL del suero o plasma que debe analizarse Mezcle cuidadosamente e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Centrifugue 20 segundos a 1000 g o 1 minuto a 125 g Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si exi
11. 111 and the autocontrol 2 Distribuer dans chaque tube 1 goutte 50 uL d h maties tests correspondantes et la suspension d h maties 2 Add to each tube 1 drop 50 uL of the corresponding test cells and the patient s or donor s red cell suspension du patient ou du donneur pour l autocontr le for the autocontrol 3 Ajouter dans chaque tube 2 gouttes 100 uL du s rum ou plasma examiner 3 Add to each tube 2 drops 100 uL of the serum or plasma to be tested 4 M langer doucement et incuber pendant 5 minutes temp rature ambiante 18 25 C 4 Mix gently and incubate for 5 minutes at room temperature 18 25 C 5 Centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 5 Centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 6 Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination 6 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination and or macroscopique ou une ventuelle h molyse haemolysis 2 me phase phase LISS antiglobuline humaine 2nd step LISS Anti human globulin phase 7 Ajouter dans chaque tube 4 gouttes 200 uL de DiaLISS 7 Add to each tube 4 drops 200 uL of DiaLISS 8 M langer doucement et incuber pendant 5 10 minutes 37 C 8 Mix gently and incubate for 5 10 minutes at 37 C 9 Laver 3 fois le contenu des tubes avec la solution saline isotonique et d canter le surnageant 9 Wash contents of tu
12. 8 C despu s de la separaci n durante un m ximo de 48 horas y posteriormente a 20 C Controles Deben incluirse muestras positivas y negativas conocidas de acuerdo con las directrices de garant a de calidad aplicables Procedimientos I Prueba de la antiglobulina humanaen 3 pasos con alb mina bovina de las pruebas Deje que los hemat es reactivos alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos 1er paso fase NaCl 1 Identifique los tubos de ensayo correspondientes a los distintos hemat es reactivo de DiaCell l 11 0 DiaCell Lal y del autocontrol A ada a cada tubo 1 gota 50 uL de los hemat es reactivo correspondientes o de la suspensi n de eritrocitos del paciente o donante en el caso del autocontrol A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL del suero o plasma que debe analizarse Mezcle cuidadosamente e incube durante 5 minutos a temperatura ambiente 18 25 C Centrifugue 20 segundos a 1000 g 1 minuto a 125 g Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n o hem lisis N mF 2er paso fase de alb mina 7 A ada a cada tubo 3 gotas 150 uL de alb mina bovina al 30 8 Agite suavemente e incube durante 15 30 minutos a 37 C 9 Centrifugue 20 segundos a 1000 g 1 minuto a 125 g 10 Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de
13. an blood should be considered potentially infectious 8 C Stability see expiry date on label 2 C Additional 0 9 isotonic saline solution Potentiating agents such as bovine albumin 30 Id n 11940 reagents DiaLISS Id n 12060 required Enzyme reagent such as DiaBrom to be used in enzyme techniques dn 12140 Anti human globulin AHG serum such as DiaClon Coombs serum Id n 14060 or 14070 Cells coated with IgG such as Coombs Control IgG Id n 16070 see related package insert Further Suspension tubes materials Tube rack ired Pipette require Immunohaematological centrifuge Sample For optimal results the determination should be performed using a freshly drawn sample or in accordance material with local laboratory procedures for sample acceptance criteria Preferably blood samples should be drawn into citrate EDTA or CPD A anticoagulant Samples drawn into plain tubes no anticoagulant may also be used When the use of serum instead of plasma is required the serum must be well cleared by centrifugation at 1500 g for 10 minutes before use avoid fibrin residues which may interfere with the reaction pattern Preparation a Red cells suspension for autocontrol of blood sample Prepare a 3 5 red cell suspension in isotonic saline solution as follows 1 Dispense 0 5 mL of isotonic saline solution into a clean tube 2 Add 1 drop 50 uL of whole blood or 25 uL of packed cells
14. anticorps sp cifique peut tre pr sent et l chantillon du patient devra tre soumis d autres tests afin d tablir la sp cificit de Panticorps Remarques 1 ll est recommand d inclure le s rum de contr le DiaLISS pour v rifier l efficacit LISS antiglobuline humaine Remarks 1 It is advisable to use DiaLISS control serum to monitor the LISS anti human globulin test please consult Anmerkungen voir mode d emploi DiaLISS et DiaLISS control package inserts DiaLISS and DiaLISS control 2 Dans chaque proc dure l h molyse des h maties tests devrait tre interpr t e positive 2 Haemolysis of the test cells in any procedure should be interpreted as a positive reaction 3 Comme toutes les proc dures suivant les r gles des BPL la sensibilit des techniques tre valid e par 3 As for all procedures covered by GLP rules the sensitivity of the above procedures should be validated using l utilisation des anticorps avec concentration connue Le r actif de r f rence DiaMed anti D permet d effectuer antibodies of known potency The DiaMed Anti D reference reagent provides the means to regularly perform des contr les r guliers techniques de recherche d anticorps voir mode d emploi correspondant controls for all antibody detection procedures see related package insert Limites a Les m thodes enzymtatiques un temps sont connues comme tant moins sensibles pour la d tection Limitations a One sta
15. antig nes Selon le type de r action et la configuration number indicated on the antigen table Following the reaction pattern and the antigen configuration the type of antig nique la sp cificit de l anticorps pr sent peut dans la plupart des cas tre suspect Proc der aux tests antibody present may be indicated Perform the usual further tests to identify the antibody compl mentaires pour l identification de l anticorps A positive reaction with one or more test cells and a negative autocontrol suggest the presence of a specific Une r action positive avec une ou plusieurs des h maties tests et un autocontr le n gatif indiquent la pr sence antibody as described under Remarks d anticorps sp cifique voir Remarques A positive reaction with all test cells and a positive autocontrol may be due to an autoantibody Une r action positive avec toutes les h maties tests et un autocontr le positif est probablement due un Where there is a positive reaction with all test cells and a positive autocontrol but with one or more test cells auto anticorps showing a stronger positive reaction than the autocontrol the patient sample should be submitted for further Dans le cas d une r action positive avec toutes les h maties tests et un autocontr le positif mais avec une ou testing to investigate the possibility of an underlying allo antibody plusieures h maties tests montrant une r action positive plus forte que l autocontr le un
16. bes 3 times with isotonic saline solution and remove supernatant 10 Distribuer dans chaque tube 2 gouttes 100 uL de r actif DiaClon Coombs serum 10 Add to each tube 2 drops 100 uL of DiaClon Coombs serum 11 M langer doucement et centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 11 Mix gently and centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 12 Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination 12 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination macroscopique 13 Confirm negative reactions with DiaMed Coombs Control IgG 13 Confirmer les r actions n gatives avec les h maties DiaMed Coombs Control IgG IV Test pour d tection d anticorps froids IV Test for the detection of cold agglutinins 1 Identifier les tubes avec les h maties correspondantes de DiaCell LI ou DiaCell I et l autocontr le 1 Identify test tubes with the respective cells of DiaCell or DiaCell 1 11 111 and the autocontrol 2 Distribuer dans chaque tube 1 goutte 50 uL d h maties tests correspondantes et la suspension d h maties 2 Add to each tube 1 drop 50 uL of the corresponding test cells and the patient s or donor s red cell suspension du patient ou du donneur pour l autocontr le for autocontrol 3 Ajouter dans chaque tube 2 gouttes 100 uL du s rum ou plasma examiner 3 Add to each tube 2
17. cas enzim ticas Id n 12140 Suero antiglobulina humana AHG por ejemplo DiaClon Coombs serum Id n 14060 o 14070 Eritrocitos recubiertos con IgG por ejemplo Coombs Control IgG Id n 16070 v ase el prospecto correspondiente Otros Tubos de suspensi n materiales Gradilla para tubos Pipeta necesarios Centr fuga inmunohematol gica Muestras Para un resultado ptimo la determinaci n debe realizarse con una muestra reci n extra da o cumpliendo la normativa local del laboratorio en cuanto a criterios de aceptabilidad de las muestras Preferiblemente las muestras de sangre deben recogerse utilizando citrato EDTA o CPD A como anticoagulante Tambi n es posible utilizar muestras recogidas en tubos sin anticoagulante Cuando sea necesario emplear suero en vez de plasma el suero debe someterse a una centrifugaci n a 1500 g durante 10 minutos antes de su uso para evitar la presencia de residuos de fibrina que podr an interferir con el patr n de reacci n Preparaci n a Suspensi n de eritrocitos para autocontrol de las muestras de sangre Prepare una suspensi n de eritrocitos al 3 5 en soluci n salina isot nica como sigue 1 Pipetee 0 5 mL de soluci n salina isot nica en un tubo limpio 2 A ada 1 gota 50 uL de sangre completa o 25 uL de concentrado de eritrocitos y agite suavemente b Plasma o suero Las muestras que no vayan a analizarse inmediatamente deben conservarse a 2 y
18. ctas GLP g Una fase de lavado inadecuada o la presencia de globulinas humanas en el material de vidrio puede neutralizar el suero antiglobulina humana y dar lugar a una reacci n falsamente d bil o negativa h Una agitaci n inadecuada en el proceso final de lectura puede debilitar las reacciones positivas Bibliograf a 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks Productos DiaCell LI Id n 45220 ZIMIO ML ejidal REF 109792 DiaCell LO Id n 45230 Sim escocia REF 109793 Se garantiza que estos productos se comportar n seg n lo descrito en la etiqueta y en la hoja de instrucciones El fabricante declina toda responsabilidad en caso de que los productos se utilicen o vendan para cualquier otro uso diferente de los all descritos DiaMed AG 1785 Cressier s Morat Suiza 0123 DiaMed Italiano A Division of Bio Rad B109796 04 08 Il Test enzimatico con DiaBrom 1 Identificare le provette di prova con le corrispondenti emazie teste di DiaCell Li o DiaCell I e l autocontrollo 2 Pipettare in ogni provetta 1 goccia 50 uL deile corrispondenti emazie teste e della sospensione di eritrociti del paziente o del donatore per l autocontrollo 3 Aggiungere in ogni provetta 1 goccia 50 uL di DiaBrom 4 Miscelare delicatamente e incubare per 1 2 minuti a temperatura ambiente 18 25 C 5 Aggiungere a ciascuna provetta 2 gocce 100 uL del sie
19. described on the label and in the instruction sheet The manufacturer declines all responsibility arising out of the use or sale of these products in any way or for any purpose other than those described therein DiaMed AG 1785 Cressier s Morat Switzerland 0123 DiaCell I II Id n 45220 AROME sia REF 109792 DiaCell I 11 111 Id n 45230 Em EEE REF 109793 F r diese Produkte wird nur Garantie bernommen wenn sie gem ss den Angaben auf dem Etikett und der Anwendungsvorschrift verwendet werden Jegliche Verantwortung wird ausdr cklich abgelehnt wenn das Pr parat f r andere Zwecke gebraucht oder verkauft wird DiaMed AG 1785 Cressier s Morat Schweiz 0123 Italiano DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 DiaCell LI e DiaCell Lut Reagenti eritrocitici per screening anticorporale Introduzione Lattendibilit della rilevazione degli anticorpi dipende in larga misura da emazie testo con antigeni appropriati e dalla sensibilit dei metodi d analisi utilizzati Per l identificazione di anticorpi irregolari necessario che le emazie che costituiscono il pannello siano predisposte accuratamente dal punto di vista antigenico E anche opportuno per prevenire l effetto dose che gli antigeni appartenenti ai sistemi Rh Duffy Kidd e MNS siano presenti in forma omozigote Alcune direttive richiedono la presenza nel pannello degli antigeni appartenenti al sis
20. drops 100 uL of the serum or plasma to be tested 4 M langer doucement et incuber pendant 30 minutes 4 C 4 Mix gently and incubate for 30 minutes at 4 C 5 Centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 5 Centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 6 Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination 6 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination and or macroscopique ou une ventuelle h molyse haemolysis Interpr tation R actions pour la recherche d anticorps Interpretation Reactions for antibody screening Interpretation der des r sultats Une r action n gative indique l absence d anticorps irr gulier d tectable dans le s rum ou plasma du patient ou of the results A negative reaction indicates the absence of detectable irregular antibodies in the patient s or donor s serum or Ergebnisse donneur plasma Une r action positive indique la pr sence d anticorps irr guliers Inscrire les r sultats obtenus sur la table A positive reaction indicates the presence of irregular antibodies Enter the reactions obtained on the antigen d antig nes jointe V rifier que le num ro de lot des h maties tests DiaCell LI ou DiaCell ll table Verify that the lot number of the test cell reagents DiaCell I II or DiaCell ll corresponds to the lot corresponde au num ro de lot indiqu sur la table d
21. eficaz es combinar dos procedimientos la prueba de antiglobulina indirecta PAI y una t cnica enzim tica la cual intensifica la reactividad de determinados anticuerpos especialmente los dirigidos contra ant genos de los sistemas Rh Kell y Kidd Teniendo en cuenta estos requisitos DiaMed proporciona reactivos eritrocitarios para ser empleados en la pruebas de antiglobulina indirecta PAI para la t cnica enzim tica en una fase o para la detecci n de aglutininas fr as seg n el m todo correspondiente Reactivos Eritrocitos del grupo O de donantes nicos en una suspensi n al 3 0 1 0 en frascos de 10 mL Conservantes los antibi ticos trimetoprim y sulfametoxazol DiaCell elt RqRq R2R2 o R4 R1 R2R2 DiaCell LA RqWRq Ro2Ro rr Precauci n los materiales utilizados en la elaboraci n de estos productos resultaron ser no reactivos para HBsAg VHC y VIH 1 2 en pruebas con reactivos autorizados Sin embargo no se conoce ning n m todo de prueba que pueda garantizar completamente la ausencia de agentes infecciosos Los productos derivados de sangre humana deben considerarse como potencialmente infecciosos 8 C Estabilidad v ase fecha de caducidad en la etiqueta 2 C Reactivos Soluci n salina isot nica al 0 9 Agentes potenciadores por ejemplo alb mina bovina al 30 Id n 11940 adicionales E DiaLISS Id n 12060 necesarios Reactivos enzim ticos como DiaBrom para su uso en t cni
22. em conformidade com as directrizes relevantes para controlo da qualidade Procedimentos I Teste de antiglobulina humana com albumina bovina em 3 passos do teste Antes de utilizar deixe os eritr citos teste atingirem a temperatura ambiente 1 passo fase NaCl 1 Identifique os tubos de teste com os eritr citos correspondentes do DiaCell I ll ou do DiaCell lt e do autocontrolo A cada tubo adicione 1 gota 50 uL dos eritr citos teste correspondentes e da suspens o eritrocit ria do doente ou do dador Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL do soro ou plasma a testar Misture suavemente e incube durante 5 minutos temperatura ambiente 18 25 C Centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o e ou de hem lise sobre uma fonte de luz indirecta N mF 2 passo fase album nica 7 Adicione a cada tubo 3 gotas 150 uL de albumina bovina a 30 8 Misture bem e incube durante 15 30 minutos a 37 C 9 Centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g 10 Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o sobre uma fonte de luz indirecta 3 passo fase da antiglobulina humana 11 Lave o conte do dos tubos 3 vezes em soluc o isot nica salina e retire o sobrenadante 12 Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL de DiaClo
23. ension des Patienten oder Spender f r die Eigenkontrolle dazugeben 3 In jedes R hrchen 2 Tropfen 100 uL des zu untersuchenden Serums oder Plasmas dazugeben 4 Leicht mischen und 5 Minuten bei Raumtemperatur 18 25 C inkubieren 5 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 6 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination und oder H molyse beobachten 2 Stufe LISS Antihumanglobulinphase 7 In jedes R hrchen 4 Tropfen 200 uL DiaLISS dazugeben 8 Leicht mischen und 5 10 Minuten bei 37 C inkubieren 9 Inhalt der R hrchen 3 x mit isotonischer Kochsalzl sung waschen Ueberstand jeweils vollst ndig abgiessen 10 In jedes R hrchen 2 Tropfen 100 uL DiaClon Coombs serum dazugeben 11 Leicht mischen und 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 12 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination beobachten 13 Negative Reaktionen mit DiaMed Coombs Control IgG best tigen IV Test f r den Nachweis von K lteagglutininen 1 R hrchen mit den jeweiligen Zellen von DiaCell I II oder DiaCell 1 11 111 und der Eigenkontrolle beschriften 2 In jedes R hrchen je 1 Tropfen 50 uL der entsprechenden Testerythrozyten und der Erythrozytensuspension des Patienten oder Spender f r die Eigenkontrolle dazugeben 3 In jedes R hrche
24. ge enzyme methods are known to be less sensitive for antibody detection than the two stage Ein d anticorps que la m thode deux temps technique schr nkungen b Les conditions optimales de r action peuvent varier consid rablement d un type d anticorps un autre En b The optimal reaction conditions may vary considerably from one type of antibody to another Consequently cons quence toute proc dure de test unique peut tre insuffisante pour r v ler tous les anticorps et des one single test method may be insufficient to detect all antibodies and combined test procedures should be proc dures de tests combin s devront tre appliqu es applied c Certains m dicaments sont connus pour entra ner des r sultats positifs avec le test l antiglobuline humaine c Certain drugs are known to cause positive reactions in anti human globulin procedures d Quelques tats pathologiques ont t d crits lors de r sultats positifs avec le test l antiglobuline humaine d Some pathological conditions are also reported as causing positive reactions in anti human globulin e Des contaminations bact riennes ou autres du mat riel utilis peuvent provoquer des r sultats faussement procedures positifs ou faussement n gatifs e Bacterial or other contamination of materials used can cause false positive or false negative results f L observation stricte des m thodes et l emploi de l quipement recommand sont essentiels L quipement f Strict ad
25. herence to the procedures and recommended equipment is essential The equipment should be doit tre r guli rement contr l selon les proc dures des BPL checked regularly according to GLP procedures g Une phase de lavage incorrecte ou la pr sence de globulines humaines dans le tube peuvent neutraliser le g An inadequate wash phase or the presence of human globulins in the glassware may neutralise the r actif l antiglobuline humaine et tre ainsi l origine de r actions faussement faibles voire faussement anti humanglobulin serum resulting in a falsely weak or negative reaction n gatives h Inappropriate agitation of the completed test may downgrade positive reactions h Une agitation non appropri e en fin de proc dure peut alt rer le degr de positivit des r actions Bibliographie 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks Bibliography 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks Literatur Produits DiaCell I II Id n 45220 210 E REF 109792 Products DiaCell I II Id n 45220 CS ALR atriis REF 109792 Produkte DiaCell I 11 111 Id n 45230 BEE eege ee REF 109793 DiaCell lt Id n 45230 II Miss REF 109793 a Im Vergleich zur Zwei Stufen Enzymtechnik sind Ein Stufen Enzym Methoden als weniger empfindlich f r den Antik orpernachweis bekannt b Die optimalen Reaktionsbedingungen k nnen erheblich von einem Antik rpertyp zum anderen schwanken
26. iaClon Coombs serum 11 Miscelare delicatamente e centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 12 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione 13 Confermare le reazioni negative con DiaMed Coombs Control IgG IV Test per il rilevamento di agglutinine fredde 1 Identificare le provette di prova con le corrispondenti emazie testo di DiaCell l 11 o DiaCell l 11 111 e l autocontrollo 2 Pipettare in ogni provetta 1 goccia 50 uL deile corrispondenti emazie testo e della sospensione di eritrociti del paziente o del donatore per l autocontrollo 3 Aggiungere a ciascuna provetta 2 gocce 100 uL del siero o del plasma da analizzare 4 Miscelare delicatamente e incubare per 30 minuti a 4 C 5 Centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 6 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione e o emolisi Interpretazione Reazioni per screening degli anticorpi dei risultati Una reazione negativa indica l assenza di anticorpi irregolari rilevabili nel siero o plasma del paziente o del donatore Una reazione positiva indica la presenza di anticorpi irregolari Riportare nella tabella antigenica le reazioni ottenute Verificare che il numero di lotto dei reagenti eritrocitici DiaCell I II
27. ione 1 gota 50 uL dos eritr citos teste correspondentes e da suspens o eritrocit ria do doente ou do dador Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL do soro ou plasma a testar Misture suavemente e incube durante 5 minutos temperatura ambiente 18 25 C Centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o sobre uma fonte de luz indirecta N DEA 2 passo fase da antiglobulina humana LISS 7 Adicione a cada tubo 4 gotas 200 uL de DiaLISS 8 Misture suavemente e incube durante 5 10 minutos a 37 C 9 Lave 3 vezes o conte do dos tubos em solu o isot nica salina e remova o sobrenadante 10 Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL de DiaClon Coombs serum 11 Misture suavemente e centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g 12 Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o sobre uma fonte de luz indirecta 13 Confirme as reac es negativas com DiaMed Coombs Control IgG IV Teste de detecc o de aglutininas frias 1 Identifique os tubos de teste com os eritr citos correspondentes do DiaCell Ldl ou do DiaCell Al e do autocontrolo A cada tubo adicione 1 gota 50 uL dos eritr citos teste correspondentes e da suspens o eritrocit ria do doente ou do dador Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL do s
28. ires i o de tubes necessaires Centrifugeuse immunoh matologique Echantillons Afin d obtenir des r sultats fiables la d termination devrait se faire sur du mat riel fra chement pr lev ou conforme aux exigences du laboratoire auquel la demande d analyses est adress e l chantillon devrait tre pr lev de pr f rence sur anticoagulant citrate EDTA ou CPD A Du sang pr lev sans anticoagulant natif peut galement tre utilis Lorsque l utilisation de s rum est pr f rable celle de plasma le s rum doit tre obtenu par centrifugation 1500 g pendant 10 minutes pour viter des r sidus de fibrine qui pourraient interf rer avec la r action Pr paration a Suspension d h maties pour l autocontr le de l chantillon de sang Pr parer une suspension d h maties 3 5 en solution saline isotonique comme suit 1 Pipetter 0 5 mL de la solution saline isotonique dans un tube en verre propre 2 Ajouter 1 goutte 50 uL de sang total ou 25 uL de culot d h maties m langer doucement b Plasma ou s rum Si les chantillons ne sont pas test s imm diatement ils devront tre conserv s 2 8 C Pour une conservation sup rieure 48 heures il est conseill de les congeler 20 C Contr les Des chantillons positifs et n gatifs connus devront tre inclus en concordance avec les r gulations valables pour l assurance de qualit M thodes l Test l antiglobuline humaine en milieu albumine
29. is de los hemat es reactivo en cualquier t cnica debe interpretarse como reacci n positiva 3 Como en todos los procedimientos sujetos a las normas GLP pr cticas correctas de laboratorio la sensibilidad de los procedimientos descritos debe validarse utilizando anticuerpos de potencia conocida El reactivo de referencia DiaMed Anti D permite realizar controles peri dicos de todos los procedimientos para la detecci n de anticuerpos v ase el correspondiente prospecto Limitaciones a Se sabe que los m todos enzim ticos en una fase son menos sensibles en la detecci n de anticuerpos que la t cnica enzim tica en dos fases b Las condiciones de reacci n ptimas pueden variar considerablemente de un tipo de anticuerpo a otro Por consiguiente una nica t cnica en la detecci n de anticuerpos irregulares puede ser insuficiente para detectarlos todos es muy til emplear t cnicas combinadas para su estudio c Algunos f rmacos pueden dan lugar a reacciones positivas en las pruebas con antiglobulina humana d Tambi n se ha referido que algunos estados patol gicos pueden provocar reacciones positivas en este tipo de pruebas e La contaminaci n de los materiales empleados bacteriana o de otro tipo puede provocar falsos positivos o falsos negativos f Es esencial atenerse estrictamente a los procedimientos y equipos recomendados El equipo debe comprobarse peri dicamente seg n la normativa de pr cticas de laboratorio corre
30. izzarsi in tecniche enzimatiche Id n 12140 e siero all antiglobulina umana come DiaClon Coombs serum Id n 14060 o 14070 DiaLISS Id n 16070 consultare la relativa scheda tecnica Altri Provette per sospensione materiali Rack per provette Pipetta occorrenti Centrifuga per immunoematologia Campioni Per ottenere risultati attendibili si consiglia di eseguire la determinazione su un campione fresco o conforme alle procedure del laboratorio per i criteri di accettazione dei campioni campioni devono essere prelevati preferibilmente in citrato EDTA o CPD A Si possono comunque usare anche campioni prelevati in provette normali senza anticoagulante Se si richiede l uso di siero invece che di plasma il siero deve essere ben chiarificato mediante centrifugazione a 1500 g per 10 minuti prima dell uso per evitare ogni residuo di fibrina che possa interferire con il pattern di reazione Preparazione a Sospensione di eritrociti per autocontrollo del campione Preparare una sospensione di eritrociti al 3 5 in soluzione isotonica salina nel modo seguente 1 Pipettare 0 5 mL di soluzione salina isotonica in una provetta pulita 2 Aggiungere 1 goccia 50 uL di sangue intero o 25 uL di emazie concentrate mescolare delicatamente b Plasma o siero campioni che non devono essere analizzati immediatamente vanno conservati a 2 8 C dopo la separazione per un massimo di 48 ore successivamente a 20 C
31. levazione degli anticorpi vedere il foglio di istruzioni allegato Limitazioni a noto che i metodi enzimatici monofase sono meno sensibili per il rilevamento degli anticorpi rispetto alle tecniche a due fasi b Le condizioni di reazione ottimali possono variare considerevolmente da un tipo di anticorpo all altro Ne consegue che un singolo procedimento di prova risulta insufficiente per rilevare tutti gli anticorpi pertanto dovranno essere applicate procedure di prova combinate c E noto che certi medicinali possono causare reazioni positive nei test all antiglobuline umane d Anche alcune condizioni patologiche possono causare reazioni positive nei test all antiglobuline umane e Le contaminazioni batteriche o di altro tipo del materiale utilizzato possono essere causa di risultati falsamente negativi o positivi f E indispensabile seguire scrupolosamente le istruzioni e impiegare il materiale di lavoro raccomandato Il materiale di lavoro deve essere controllato regolarmente secondo le direttive GLP g Una fase di lavaggio inadeguata o la presenza di globuline umane nelle provette pu neutralizzare il siero antiglobulina e quindi produrre reazioni falsamente deboli o negative h Un agitazione inadeguata nella fase finale del test pu indebolire reazioni positive Bibliografia 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks Prodotti DiaCell LI Id n 45220 SIE ENRETE REF 109792 DiaCell LO Id n
32. luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n 3er paso fase de antiglobulina humana 11 Lave 3 veces el contenido de los tubos con soluci n salina isot nica y elimine el sobrenadante 12 A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL de DiaClon Coombs serum 13 Mezcle suavemente y centrifugue durante 20 segundos a 1000 g 1 minuto a 125 g 14 Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n 15 Confirme los resultados negativos con DiaMed Coombs Control IgG Portugu s DiaMed A Division of Bio Rad 8109796 04 08 DiaCell LI e DiaCell Lut Eritr citos teste pesquisa de anticorpos Introdu o A fiabilidade da detec o de anticorpos depende em grande medida da disponibilidade de eritr citos teste com os antig nios apropriados bem como da sensibilidade dos m todos de teste utilizados Os requisitos para configura o de anticorpos s o rigorosos t m de permitir a detec o de anticorpos com potencial significado cl nico Dado que alguns anticorpos apresentam efeito de dosagem os eritr citos de pesquisa deveriam possuir antig nios em forma supostamente dupla dentro dos grupos sangu neos Rh Duffy Kidd e MNS Certas directrizes exigem a presen a do ant geno Lewis bem como do antig nio raro Kp a KEL3 De um modo geral considerado mais eficaz combi
33. maties tests pr tes l emploi pour le TIA le test enzymatique un temps ou la d tection d anticorps froids par la m thode appropri e R actifs H maties tests du groupe sanguin O provenant de donneurs individuels en suspension 3 0 1 0 en flacons de 10 mL Conservateurs les antibiotiques trim thoprime et sulfam thoxazole DiaCell I II R4Rq R2R2 ou RqWRq R2R9 DiaCell lt RqWRq RoRo2 rr Attention Les mati res utilis es pour la fabrication de ces produits n ont montr aucune r action lors des d pistages de I AgHBs HIV1 HIV2 et HCV avec des r actifs licenci s Cependant aucune des m thodes connues ne peut assurer l absence d agents infectieux Les produits ayant pour origine du sang humain doivent tre consid r s comme des produits potentiellement infectieux 8 C Stabilit voir la date de p remption sur l tiquette 2 C R actifs Solution saline isotonique 0 9 5 H Agent de potentialisation tel que l albumine bovine 30 Id n 11940 suppl mentaires k iPP S DiaLISS Id n 12060 necessaires R actif enzymatique tel que DiaBrom utiliser en techniques enzymatiques dn 12140 R actif l antiglobuline humaine tel que le r actif DiaMed DiaClon Coombs serum Id n 14060 ou 14070 H maties enrob es d op telles que les h maties DiaMed Coombs Control IgG Id n 16070 voir mode d emploi correspondant Mat riaux Tubes pour suspensions suppl menta
34. mittel die Antibiotika Trimethoprim und Sulfamethoxazol DiaCell LI R4R1 R2R2 oder RqWR7 R2R9 DiaCell l 11 111 R4WRq R2R2 rr Achtung Die Ausgangsmaterialien aus denen diese Produkte hergestellt wurden haben sich bei der Pr fung mit zugelassenen Reagenzien als nicht reaktiv f r HBsAg HCV und HIV 1 und 2 erwiesen Allerdings kann kein verf gbares Testverfahren das Nichtvorhandensein infekti ser Substanzen garantieren Aus Humanblut gewonnene Produkte sollten immer als potentiell infekti s angesehen werden 8 C Stabilit t siehe Verfallsdatum auf dem Etikett 2 C Zus tzlich ben tigte Reagenzien 0 9 ige isotonische Kochsalzl sung Verst rkermedien z B Rinderalbumin 30 Id n 11940 DiaLISS Id n 12060 Enzymreagenzien z B DiaBrom f r die Enzymtechnik Id n 12140 Antihumanglobulinserum z B DiaClon Coombs serum Id n 14060 oder 14070 IgG beladene Erythrozyten z B Coombs Control IgG Id n 16070 siehe diesbez gliche Packungsbeilage Weitere erforderliche Materialien Suspensionsr hrchen R hrchenst nder Pipette Immunh matologische Zentrifuge Probenmaterial F r verl ssliche Resultate sollte die Bestimmung mit frisch abggenommenen Proben durchgef hrt werden oder in bereinstimmung mit lokalen Laborvorschriften f r die Akzeptanz von Probenmaterial erfolgen Vorzugsweise sollte die Probengewinnung in den Antikoagulan
35. n 2 Tropfen 100 uL des zu untersuchenden Serums oder Plasmas dazugeben 4 Leicht mischen und w hrend 30 Minuten bei 4 C inkubieren 5 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 6 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination und oder H molyse beobachten Reaktionen des Antik rper Suchtests Eine negative Reaktion deutet darauf hin dass im Serum oder Plasma des Patienten oder Spender keine nachweisbaren irregul ren Antik rper vorhanden sind Eine positive Reaktion weist auf irregul re Antik rper hin Die Reaktionen in die Antigentabelle eintragen berpr fen ob die Chargennummer der Testerythrozyten DiaCell I II oder DiaCell Lal der in der Antigentabelle angegebenen Chargennummer entspricht Anhand des Reaktionsmusters und der Antigenkonfiguration kann auf den Typ des vorhandenen Antik rpers geschlossen werden Die blichen weiteren Tests zur Identifizierung des Antik rpers ausf hren Eine positive Reaktion mit einer oder mehreren Testerythrozyten und eine negative Eigenkontrolle weisen auf einen spezifischen Alloantik rper hin siehe Anmerkungen Eine positive Reaktion mit allen Testerythrozyten und eine positive Eigenkontrolle sind wahrscheinlich auf Autoantik rper zur ckzuf hren Wenn bei allen Testerythrozyten und der Eigenkontrolle eine positive Reaktion auftritt jedoch eine oder mehrere Testerythrozyten
36. n Coombs serum 13 Misture suavemente e centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g 14 Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o sobre uma fonte de luz indirecta 15 Confirme os resultados negativos com DiaMed Coombs Control IgG Portugu s DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 ll Teste enzim tico com DiaBrom 1 Identifique os tubos de teste com os eritr citos correspondentes do DiaCell l 11 ou do DiaCell Al e do autocontrolo 2 A cada tubo adicione 1 gota 50 uL de eritr citos teste correspondentes e de suspens o de eritr citos do doente ou do dador para autocontrocolo 3 A cada tubo adicione 1 gota 50 uL de DiaBrom 4 Misture suavemente e incube durante 1 2 minutos temperatura ambiente 18 25 C 5 Adicione a cada tubo 2 gotas 100 uL do soro ou plasma a testar 6 Misture suavemente e incube durante 15 minutos a 37 C n o ultrapasse os 15 minutos 7 Centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g 8 Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o sobre uma fonte de luz indirecta Ill T cnica LISS com DiaLISS reagente LISS modificado 1 passo Fase NaCl 1 Identifique os tubos de teste com os eritr citos correspondentes do DiaCell Lou do DiaCell ltz e do autocontrolo A cada tubo adic
37. nar dois m todos de teste o teste de antiglobulina indirecto TAI e uma t cnica enzim tica a qual melhora a reactividade de certos anticorpos nomeadamente nos sistemas Rh Kell e Kidd Tendo em conta estas necessidades a DiaMed fornece eritr citos teste para o TAI uma t cnica enzim tica de um s passo para detec o de aglutinininas frias pelo m todo adequado Reagentes Eritr citos do grupo O de dadores nicos em suspens o a 3 0 1 0 em frascos de 10 mL Conservantes os antibi ticos trimetoprim e sulfametoxazol DiaCell I II R4R1 R2R2 ou R4 R1 R2R2 DiaCell LA R4WR1 R2R2 rr Aten o As mat rias primas com que estes produtos foram produzidos n o revelaram qualquer reac o a HBsAg VHC e VIH 1 2 quando foram testadas com os reagentes aprovados No entanto nenhum m todo de teste conhecido pode garantir a aus ncia de agentes infecciosos Os produtos origin rios de sangue humano devem ser considerados potencialmente infecciosos 8 C Estabilidade ver prazo de validade no r tulo 2 C Reagentes solu o isot nica salina a 0 9 adicionais Agentes potencializadores como a albumina bovina 30 Id n 11940 EE DiaLISS Id n 12060 necessarios Reagentes enzim ticos tais como DiaBrom para utiliza o em t cnicas enzim ticas Id n 12140 Soro de antiglobulina humana AGH como DiaClon Coombs serum Id n 14060 ou 14070 Eritr citos revestidos com IgG como no
38. o delle provette per 3 volte con soluzione salina isotonica quindi rimuovere il surnatante 12 Aggiungere ad ogni provetta 1 2 gocce 100 uL di DiaClon Coombs serum 13 Miscelare leggermente e centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 14 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione 15 Confermare le reazioni negative con DiaMed Coombs Control IgG Espa ol DiaMed A Division of Bio Rad 8109796 04 08 DiaCell LIT y DiaCell Lut Hemat es reactivo para el escrutinio de anticuerpos irregulares Introducci n La fiabilidad de los escrutinios de anticuerpos depende en gran medida de la disponibilidad de c lulas reactivo con una dotaci n adecuada y de la sensibilidad de los m todos empleados Los criterios de selecci n o los requerimientos de configuraci n antig nica de las c lulas son muy rigurosos deben asegurar la detecci n de todos los anticuerpos irregulares cl nicamente significativos Como algunos de estos anticuerpos presentan un efecto de dosis es recomendable que los hemat es reactivo posean ant genos con una expresi n homocig tica en los sistemas de grupo sangu neo Rh Duffy Kidd y MNS Algunas directrices exigen la presencia del ant geno Lewis y tambi n la del ant geno infrecuente Kp a KEL3 Generalmente se considera que lo m s
39. olution and remove supernatant 12 Add to each tube 2 drops 100 uL of DiaClon Coombs serum 13 Mix gently and centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 14 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination 15 Confirm negative results with DiaMed Coombs Control IgG Francais DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 DiaCell I 11 et DiaCell LI H maties tests pour la recherche d anticorps Introduction La fiabilit de la d tection d anticorps d pend largement de la disponibilit d h maties tests avec des antig nes appropri s et de la sensibilit des m thodes Les exigences de la configuration antig nique sont rigoureuses celles ci doivent permettre la d tection des anticorps cliniquement significatifs Certains de ces anticorps pr sentent un effet de dose il est donc souhaitable que les h maties tests soient homozygotes dans les syst mes antig niques concern s Rh sus Duffy Kidd et syst me MNSs Selon certaines directives l antigene Lewis ainsi que l antigene Kp a KEL3 devraient tre galement inclus ll est g n ralement admis comme plus s r de combiner le test indirect l antiglobuline TIA et la technique enzymatique qui augmente la r activit de certains anticorps notamment ceux des syst mes Rh Kell et Kidd En prenant en consid ration ces exigences DiaMed fournit des h
40. ones para detecci n de anticuerpos Una reacci n negativa indica la ausencia de anticuerpos irregulares detectables en el suero o plasma del paciente o donante Una reacci n positiva indica la presencia de anticuerpos irregulares Introduzca las reacciones obtenidas en la tabla de ant genos Verifique que el n mero de lote de los eritrocitos de prueba DiaCell I II o DiaCell lt corresponde al n mero de lote indicado en la tabla de ant genos El patr n de las reacciones y la configuraci n de ant genos pueden indicar el tipo de anticuerpo presente Realice las pruebas adicionales habituales para identificar el anticuerpo Una reacci n positiva con una o m s de las c lulas reactivas y un autocontrol negativo sugieren la presencia de un aloanticuerpo espec fico Una reacci n positiva con todos los hemat es reactivo y un autocontrol positivo puede deberse a un autoanticuerpo e Si existe una reacci n positiva con todas las c lulas reactivas y un autocontrol positivo pero a su vez se detecta que la reacci n positiva con una o varias de las c lulas reactivas es m s intensa que la observada en el autocontrol ser preciso descartar en la muestra del paciente la posible presencia de un aloanticuerpo subyacente Observaciones 1 Es recomendable utilizar suero de control DiaLISS para comprobar la prueba LISS antiglobulina humana consulte los prospectos de DiaLISS y DiaLISS control 2 La hemolis
41. ontrolo a amostra do doente deve ser sujeita a testes complementares para investigar a possibilidade de aloanticorpo subjacente Observac es 1 Recomenda se a utilizac o do soro de controlo DiaLISS para monitorizar a efic cia do teste LISS antiglobulina humana por favor consulte o folheto informativo do DiaLISS e DiaLISS control 2 A hem lise dos eritr citos teste em qualquer procedimento deve ser interpretada como reacc o positiva 3 Tal como com todos os procedimentos abrangidos pelas regras de BPL Boa Pr tica de Laborat rio a sensibilidade dos procedimentos acima deve ser validada atrav s da utilizac o de anticorpos de concentrac o conhecida O reagente de refer ncia DiaMed Anti D permite a realizac o de controlos regulares de todos os procedimentos de detec o de anticorpos ver folheto informativo correspondente Limita es a Os m todos enzim ticos de uma fase s o conhecidos por serem menos sens veis na detec o de anticorpos do que as t cnicas de duas fases b As condi es ideais de reac o podem variar consideravelmente de um tipo de anticorpo para outro Por conseguinte um nico m todo de teste pode revelar se insuficiente para detectar todos os anticorpos devendo combinar se diferentes procedimentos de teste c sabido que certos f rmacos desencadeiam reac es positivas em testes de antiglobulina humana d Tamb m foram descritos alguns estados patol gicos como
42. origem de reac es positivas em testes de antiglobulina humana e A contamina o bacteriana ou outra dos materiais utilizados pode originar resultados falsamente positivos ou falsamente negativos f O cumprimento estrito dos procedimentos e a utiliza o do equipamento recomendado s o essenciais O equipamento deve ser verificado regularmente em conformidade com os procedimentos de BPL g Uma fase de lavagem inadequada ou a presen a de globulinas humanas nos tubos pode neutralizar o soro da antiglobulina humana tendo por resultado uma reac o fraca ou falsamente negativa h A agita o inadequada no final do procedimento pode reduzir a positividade das reac es Bibliografia 1 Technical Manual 13th ed 1999 American Association of Blood Banks Produtos DiaCell I II Id n 45220 DiaCell LO Id n 45230 2x10 mL 3x10mL REF 109792 REF 109793 Estes produtos s o garantidos quanto ao seu comportamento funcional tal como descrito no r tulo e no folheto informativo O fabricante declina toda a responsabilidade decorrente da utiliza o ou venda destes produtos para fins diferentes dos a descritos DiaMed AG 1785 Cressier s Morat Su a 0123 Espa ol DiaMed A Division of Bio Rad 8109796 04 08 ll Prueba enzim tica con DiaBrom 1 Identifique los tubos de ensayo correspondientes a los distintos hemat es del DiaCell I 11 0 DiaCell I
43. oro ou plasma a testar Misture suavemente e incube durante 30 minutos a 4 C Centrifugue durante 20 segundos a 1000 g ou durante 1 minuto a 125 g Volte a suspender suavemente os eritr citos e verifique macroscopicamente sinais de aglutinac o e ou de hem lise sobre uma fonte de luz indirecta N Praw Interpreta o dos resultados Reac es para Pesquisa de Anticorpos Uma reac o negativa indica a aus ncia de anticorpos irregulares detect veis no soro ou plasma do doente ou dador Uma reac o positiva indica a presen a de anticorpos irregulares Introduza as reac es obtidas no quadro de antig nios Verifique se o n mero de lote dos eritr citos teste DiaCell l ll ou DiaCell l ll Ill corresponde ao n mero de lote indicado no quadro de antig nios Consoante o tipo de reac o e de configura o antig nica poss vel indicar o tipo de anticorpo presente Realize os testes complementares habituais para identificar os anticorpos Uma reac o positiva com um ou mais eritr citos teste e um autocontrolo negativo sugerem a presen a de um anticorpo espec fico tal como descrito em Observa es Uma reac o positiva com todos os eritr citos teste e um autocontrolo positivo podem dever se a um auto anticorpo No caso de uma reac o positiva com todos os eritr citos teste e um autocontrolo positivo mas com um ou mais eritr citos teste com reacc o positiva mais pronunciada do que o autoc
44. patient s or donor s red cell suspension du patient ou du donneur pour l autocontr le for the autocontrol 3 Ajouter dans chaque tube 1 goutte 50 uL de DiaBrom 3 Add to each tube 1 drop 50 uL of DiaBrom 4 M langer doucement et laisser reposer pendant 1 2 minutes temp rature ambiante 18 25 C 4 Mix gently and incubate for 1 2 minutes at room temperature 18 25 C 5 Ajouter dans chaque tube 2 gouttes 100 uL du s rum ou plasma examiner 5 Add to each tube 2 drops 100 uL of the serum or plasma to be tested 6 M langer doucement et incuber pendant 15 minutes 37 C ne pas d passer les 15 minutes 6 Mix gently and incubate for 15 minutes at 37 C do not exceed 15 minutes 7 Centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 7 Centrifuge for 20 seconds at 1000 g or 1 minute at 125 g 8 Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination 8 Gently resuspend the cells and over an indirect light source observe macroscopically for agglutination and or macroscopique ou une ventuelle h molyse haemolysis Ill Technique de LISS avec DiaLISS r actif de LISS mod Ill LISS technique with DiaLISS mod LISS reagent 1 re phase phase NaCl 1st step NaCI Phase 1 Identifier les tubes avec les h maties correspondantes de DiaCell LI ou DiaCell LU et l autocontr le 1 Identify test tubes with the respective cells of DiaCell or DiaCell 1 11
45. pfen 100 uL des zu untersuchenden Serums oder Plasmas dazugeben Leicht mischen und w hrend 5 Minuten bei Raumtemperatur 18 25 C inkubieren 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination und oder H molyse beobachten mb Stufe Albumin Phase In jedes R hrchen 3 Tropfen 150 uL Albumin 30 geben Leicht mischen und 15 30 Minuten bei 37 C inkubieren 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 0 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination beobachten BETEER 3 Stufe Antihumanglobulin Phase 11 Inhalt der R hrchen 3 x mit isotonischer Kochsalzl sung waschen berstand jeweils vollst ndig abgiessen 12 In jedes R hrchen 2 Tropfen 100 uL DiaClon Coombs serum dazugeben 13 Leicht mischen und 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 14 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination beobachten 15 Negative Reaktionen mit DiaMed Coombs Control IgG best tigen English DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 DiaCell LI and DiaCell I 11 11 Red cell reagents for antibody screening Introduction The reliability of antibody detection is largely dependent on
46. ro o del plasma da analizzare 6 Miscelare delicatamente e incubare per 15 minuti a 37 C non superare 15 minuti 7 Centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 8 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione e o emolisi Ill Tecnica LISS con DiaLISS reagente mod LISS 1 fase fase NaCl 1 Identificare le provette di prova con le corrispondenti emazie testo di DiaCell l 11 o DiaCell l 11 111 e l autocontrollo 2 Pipettare in ogni provetta 1 goccia 50 uL deile corrispondenti emazie testo e della sospensione di eritrociti del paziente o del donatore per l autocontrollo 3 Aggiungere a ciascuna provetta 2 gocce 100 uL del siero o del plasma da analizzare 4 Miscelare delicatamente e incubare per 5 minuti a temperatura ambiente 18 25 C 5 Centrifugare per 20 secondi a 1000 g o per 1 minuto a 125 g 6 Risospendere delicatamente gli eritrociti e su una sorgente luminosa indiretta sottoporre a osservazione macroscopica l eventuale agglutinazione e o emolisi 2 fase fase antiglobulina umana LISS 7 Aggiungere in ogni provetta 4 gocce 200 uL di DiaLISS 8 Miscelare delicatamente e incubare per 5 10 minuti a 37 C 9 Lavare il contenuto delle provette per 3 volte con soluzione salina isotonica quindi rimuovere il surnatante 10 Aggiungere ad ogni provetta 1 2 gocce 100 uL di D
47. s h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination macroscopique 15 Confirmer les r actions n gatives avec les h maties DiaMed Coombs Control IgG DiaMed DiaMed DiaMed A Division of Bio Rad B109796 04 08 II Enzymtest mit DiaBrom 1 R hrchen mit den jeweiligen Zellen von DiaCell I II oder DiaCell l 11 111 und der Eigenkontrolle beschriften 2 In jedes R hrchen je 1 Tropfen 50 uL der entsprechenden Testerythrozyten und der Erythrozytensuspension des Patienten oder Spender f r die Eigenkontrolle dazugeben 3 In jedes R hrchen 1 Tropfen 50 uL DiaBrom dazugeben 4 Leicht mischen und 1 2 Minuten bei Raumtemperatur 18 25 C inkubieren 5 In jedes R hrchen 2 Tropfen 100 uL des zu untersuchenden Serums oder Plasmas dazugeben 6 Leicht mischen und 15 Minuten bei 37 C inkubieren 15 Minuten nicht berschreiten 7 20 Sekunden bei 1000 g oder 1 Minute bei 125 g zentrifugieren 8 Erythrozyten vorsichtig resuspendieren und ber einer indirekten Lichtquelle makroskopisch auf Agglutination und oder H molyse beobachten 111 LISS Technik mit DiaLISS mod LISS Reagenz 1 Stufe NaCI Phase 1 R hrchen mit den jeweiligen Zellen von DiaCell I II oder DiaCell 1 11 111 und der Eigenkontrolle beschriften 2 In jedes R hrchen je 1 Tropfen 50 uL der entsprechenden Testerythrozyten und der Erythrozytensusp
48. ste aglutinaci n o hemolisis N mp 2er paso fase de LISS antiglobulina humana 7 A ada a cada tubo 4 gotas 200 uL de DiaLISS 8 Agite suavemente e incube durante 5 10 minutos a 37 C 9 Lave 3 veces el contenido de los tubos con soluci n salina isot nica y elimine el sobrenadante 10 A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL de DiaClon Coombs serum 11 Mezcle suavemente y centrifugue durante 20 segundos a 1000 g o 1 minuto a 125 g 12 Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n 13 Confirme las reacciones negativas con DiaMed Coombs Control IgG IV Prueba para detecci n de aglutininas fr as 1 Identifique los tubos de ensayo correspondientes a los distintos hemat es reactivo del DiaCell o DiaCell Lal y del autocontrol A ada a cada tubo 1 gota 50 uL de los eritrocitos de prueba correspondientes o de la suspensi n de eritrocitos del paciente o donante en el caso del autocontrol A ada a cada tubo 2 gotas 100 uL del suero o plasma que debe analizarse Mezcle suavemente e incube durante 30 minutos a 4 C Centrifugue 20 segundos a 1000 g o 1 minuto a 125 g Resuspenda cuidadosamente los eritrocitos y realice una observaci n macrosc pica sobre una fuente de luz indirecta comprobando si existe aglutinaci n o hem lisis N DEA Interpretaci n de los resultados Reacci
49. tema Lewis e dell antigene raro Kp a KEL3 In linea generale si considera pi efficace eseguire lo screening anticorpale sia con il test indiretto per l antiglobulina IAT che con tecniche enzimatiche poich questa combinazione aumenta la reattivit di determinati anticorpi in particolare quelli dei sistemi Rh Kell e Kidd In considerazioni di tali esigenze DiaMed offre reagenti eritrocitici pronti all uso per il test indiretto per l antiglobulina IAT e per la tecnica enzimatica monofase o il rilevamento di agglutinine fredde con procedimento appropriato Reagenti Eritrociti del gruppo sanguigno O di singoli donatori in una sospensione al 3 0 1 0 in flaconi da 10 mL Conservanti trimetoprim e sulfametoxazolo DiaCell I II R4R1 R2R2 o R4 R1 R2R2 DiaCell Lal R4WR1 R2R2 rr Attenzione i materiali originari da cui sono stati ottenuti questi prodotti sono risultati non reattivi a HBsAg HCV e HIV 1 2 all analisi con reagenti autorizzati Tuttavia non esiste alcun metodo di analisi noto che possa garantire l assenza di agenti infettivi prodotti derivati dal sangue umano devono essere sempre considerati potenzialmente infettivi 8 C Stabilit vedere la data di scadenza sull etichetta 2 C Altri soluzione salina isotonica allo 0 9 b agenti di potenziamento come albumina bovina 30 Id n 11940 reagenti e g o DiaLISS Id n 12060 occorrenti reagente enzimatico come DiaBrom da util
50. tien Citrat EDTA oder CPD A erfolgen Native Proben kein Antikoagulanz k nnen auch verwendet werden Wird Serum anstelle von Plasma verwendet sollte dieses vor Testansatz 10 Minuten bei 1500 g zentrifugiert werden damit keine st renden Fibrinreste in dem Testansatz gelangen Vorbereitung der Blutprobe a Erythrozytensuspension f r die Eigenkontrolle Eine 3 5 ige Erythrozytensuspension in isotonischer Kochsalzl sung wie folgt zubereiten 1 0 5 mL der isotonischen Kochsalzl sung in ein sauberes Glasr hrchen geben 2 1 Tropfen 50 uL Vollblut oder 25 uL Erythrozytenkonzentrat zugeben leicht mischen b Plasma oder Serum Wird das Plasma oder Serum nicht unmittelbar nach dem Zentrifugieren verwendet sollte es max 48 Stunden bei 2 8 C anschliessend bei 20 C aufbewahrt werden Kontrollen Bekannte Antigen positive und negative Erythrozyten sollten in bereinstimmung mit den g ltigen Richtlinien zur Qualit tssicherung mitgef hrt werden Test L 3 Stufen Antihumanglobulintest mit Rinder Albumin durchf hrungen Testerythrozyten vor Gebrauch auf Raumtemperatur bringen 1 Stufe NaCl Phase 1 R hrchen mit den jeweiligen Zellen von DiaCell 1 11 oder DiaCell 1 11 111 und der Eigenkontrolle beschriften 2 In jedes R hrchen je 1 Tropfen 50 uL der entsprechenden Testerythrozyten und der Erythrozytensuspension des Patienten oder Spender f r die Eigenkontrolle dazugeben In jedes R hrchen 2 Tro
51. ux en 3 phases Ramener les h maties tests temp rature ambiante avant utilisation 1 re phase phase NaCl 1 Identifier les tubes avec les h maties correspondantes de DiaCell I II ou DiaCell LU et l autocontr le 2 Distribuer dans chaque tube 1 goutte 50 uL d h maties tests correspondantes et la suspension d h maties du patient ou donneur pour l autocontr le Ajouter dans chaque tube 2 gouttes 100 uL du s rum ou plasma examiner M langer doucement et incuber pendant 5 minutes temp rature ambiante 18 25 C Centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination macroscopique ou une ventuelle h molyse GA 2 me phase phase albumine 7 Ajouter dans chaque tube 3 gouttes 150 uL d albumine bovine 30 8 M langer doucement et incuber pendant 15 30 minutes A 37 C 9 Centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 10 Resuspendre doucement les h maties et au dessus d un clairage indirect observer l agglutination macroscopique 3 me phase phase l antiglobuline humaine 11 Laver 3 fois le contenu des tubes avec la solution saline isotonique et d canter le surnageant 12 Distribuer dans chaque tube 2 gouttes 100 uL de r actif DiaClon Coombs serum 13 M langer doucement et centrifuger 20 secondes 1000 g ou 1 minute 125 g 14 Resuspendre doucement le

“DiaCell I+II” and “DiaCell I+II+III”

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