Coffret Pak Lx™
Contents
1. 628025 20X 9 Microbilles de contr le et d talonnage Luminex 628006 CAL1 REF 628007 CAL2 REH 628008 CON 1 REF628009 CON2 10 Eau distill e 11 Agitateur ou vortex avec adaptateur de plaque 12 Plaques filtres Multiscreen Millipore 1 pipettes r glables de 5 ul 50 ul avec des pointes de pipettes appropri es 2 Pipette multicanal de 250 ul avec pointes filtre appropri es 3 Microtubes de1 5 ml pour dilutions de conjugu 4 Tubes essai 5 chronom tre 6 Marqueur 7 8 888633 Millipore MSBVN1210 MSBVN1250 MABVNI1210 MABVN1250 13 Laveur vide pour microplaque 888315 Millipore MAVMO960R Qiagen 19504 Pall 5017 14 Micro centrifugeuse 15 Fichier mod le de lecture Luminex Acquisition Template disponible sur le site web e Fichier IDT pour IS 2 3 e Fichier LXT pour xXPONENT 3 1 16 Fichier de donn es lot sp cifique EDS disponible sur le site web 17 Instrument Luminex avec logiciel IS 2 3 ou xXPONENT 3 1 18 IPFS Plate Format Sheet Feuille de plan de plaque 19 PACD CD d installation du logiciel Anticorps anti plaquettes MATCHIT Logiciel d Anticorps anti plaquettes v1 0 1 MATCHIT Manuel de l utilisateur du Logiciel d Anticorps anti plaquettes disponible galement sur le site web MATCHIT Guide de r f rence rapide du Logiciel d Anticorps anti plaquettes disponible galement sur le site web Proc dure du test 1 T l charger le fichier mod le de lecture L2. Des microbilles h t rozygotes peuvent tre positives ou n gatives en fonction du titre de l anticorps dans l chantillon ou du niveau de bruit de fond sur les microbilles contr le n gatif Coffret Pak Lx 7 303285 IFUFR REV G Tout profil non repr sent dans le tableau ci dessus doit tre consid r comme un r sultat ind termin et peut tre du la pr sence d auto anticorps ou la combinaison d auto et d allo anticorps Il peut galement tre du une r activit sur d autres variants polymorphiques non identifi s dans le test LIMITES Ce produit n a pas t con u pour d tecter les anticorps de la classe d immunoglobuline IgA ou IgM Les r sultats de ce test ne doivent pas tre utilis s en tant que seule base de d cision clinique Un test positif indique uniquement la pr sence d anticorps sp cifiques pour les HLA classe GPIV ou HPA 1 HPA 2 HPA 8 HPA 4 et HPA 5 et n est pas destin diagnostiquer un tat clinique Les syst mes HPA surviennent diff rentes fr quences dans des populations diff rentes Les syst mes HPA de fr quence sont consid r s comme publics tandis que les syst mes HPA de faible fr quence sont consid r s comme priv s Le test Pak Lx utilise des glycoprot ines pr lev es sur des donneurs qui n ont t typ s que pour les syst mes HPA publics suivants HPA 1 2 3 4 et 5 Trois de ces syst mes HPA publics HPA 1 3 4 se pr sentent sur la m me
3. actifs apr s leur date de p remption Jeter tous les contr les positifs et n gatifs inutilis s dilu s et les conjugu s apr s usage Les r actifs contenus dans le kit ne doivent pas tre utilis s en combinaison avec un autre syst me de test Le remplacement par des composants diff rents de ceux fournis dans ce kit peut donner lieu des r sultats incoh rents ou erron s Lors de dilutions suivre les instructions du fabricant de pipette pour conna tre les techniques de distribution et de rin age appropri es convient de FAIRE TRES ATTENTION pour viter la contamination du diluant de conjugu ou du r actif IgG anti humain Une contamination par inadvertance de ces r actifs avec un s rum humain provoquera la neutralisation de l IgG anti humain et par cons quent un chec du test convient de faire tr s attention pendant le pipetage dans la microplaque filtre que les microbilles ne collent pas la paroi des puits tout en veillant ne pas toucher la membrane avec la pointe Le contact de la membrane avec la pointe de la pipette peut provoquer une piq re de la membrane et un chec du test faut s assurer pendant les tapes d incubation que les microbilles ne collent pas aux parois des puits Les contr les positifs et n gatifs doivent tre inclus chaque technique pour aider d terminer si une erreur technique ou des checs de r actifs ont eu lieu faut contr ler la force
4. rature ambiante Les billes sont ensuite lav es pour liminer l anticorps non li Un anticorps IgG anti humain conjugu la phyco rythrine PE est ensuite ajout Apr s incubation temp rature ambiante le m lange r actionnel est dilu et analys sur l instrument Luminex L intensit du signal provenant de chaque microbille est compar e l intensit du signal de trois microbilles contr le n gatif comprises dans le m lange de microbilles pour d terminer sa positivit ou sa n gativit l anticorps associ R ACTIFS Nombre maximum de tests par kit PLX 16 tests par kit Tous les r actifs doivent tre stock s conform ment aux instructions indiqu es sur l tiquette 403620 M lange de billes lyophilis es un m lange de billes auxquelles des glycoprot ines HPA GPIV et HLA de Classe ont t immobilis es avec quatre billes de contr le Les billes sont lyophilis es dans un tampon base de phosphate contenant de l albumine bovine et 0 02 de m thylisothiazolone et 0 02 de bromonitrodioxane comme conservateurs SENSIBLE A LA LUMIERE viter l exposition la lumi re directe pendant de longues dur es 3 heures ou moins Stocker 2 8 C dans l obscurit dans la bo te de la trousse PLXB PLBD 405160 Diluant de microbilles un tampon base de phosphate contenant du NaCl du Tween 20 du ProClin 800 de l albumine bovine et du s rum de souris Stocker 2 8 C CCX 405159 Conjug
5. glycoprot ine GPIlb Illa PRE Des chantillons de s rum peuvent avoir des anticorps dirig s contre un ou plusieurs de ces syst mes HPA publics et la pr sence d anticorps dirig s contre un syst me HPA peut masquer la pr sence d anticorps dirig s contre d autres syst mes Par exemple la pr sence d un titre lev d anticorps dirig contre un pitope HPA 4 peut masquer la pr sence d anticorps de titre inf rieur dirig s contre un des pitopes HPA 1 Pour de plus amples informations consulter la section d nomm e interpr tation des r sultats Le test Pak Lx utilise des glycoprot ines pr lev es sur des donneurs qui n ont pas t typ s pour les syst mes HPA priv s Des chantillons de s rum peuvent avoir des anticorps dirig s contre un ou plusieurs de ces syst mes HPA priv s La pr sence de tels anticorps peut simuler les profils de r activit qui indiqueraient la pr sence d un anticorps dirig contre un pitope HPA public et ou provoquer des r sultats ind termin s Quelques anticorps de faible titre de faible avidit incluant les anticorps dirig s contre les antig nes HLA classe de faible incidence peuvent ne pas tre d tect s par ce produit Ce test n a pas t valid pour une utilisation dans la d tection des auto anticorps DIAGNOSTIC DE PROBLEME CAUSE POSSIBLE SOLUTION A rE Employer une bonne technique de laboratoire y _Le s rum de contr le positif Contr le Positif contam
6. 4 44 1220 1225 6 Rebulla P A mini review on platelet refractoriness Haematologica 2005 90 247 253 7 Kanhai HH Porcelijn L Engelfriet CP et al Management of alloimmune thrombocytopenia Vox Sang 2007 93 370 385 8 Stroncek DF Rebulla P Platelet transfusions Lancet 2007 370 427 438 9 Arnold DM Smith JW Kelton JG Diagnosis and management of neonatal alloimmune thrombocytopenia Transfus Med Rev 2008 22 255 267 10 Bussel JB Primiani A Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia progress and ongoing debates Blood Rev 2008 22 33 52 11 Curtis BR McFarland JG Detection and identification of platelet antibodies and antigens in the clinical laboratory Immunohematology 2009 25 125 135 12 Vassallo RR Recognition and management of antibodies to human platelet antigens in platelet transfusion refractory patients Immunohematology 2009 25 119 124 13 Kaplan C Ni H Freedman J Alloimmune Thrombocytopenia In Michelson A eds Platelets 3rd Edition Academic Press Elsevier 2012 46 953 970 14 Rozman P Platelet antigens The role of human platelet alloantigens HPA in blood transfusion and transplantation Transpl Immunol 2002 10 165 181 15 Metcalfe P et al Nomenclature of human platelet antigens Vox Sang 2003 85 240 16 Santoso S Human platelet alloantigens Transfus Apher Sci 2003 28 227 236 17 Saw CL Szykoluk H Curtis BR et al Two cases of platelet transfusion refractoriness associated with a
7. 7 88 9 100 0 99 4 66 7 100 0 100 0 100 0 100 0 99 1 93 5 99 7 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 Intervalle de confiance de 95 97 9 99 8 93 1 100 0 97 6 99 8 98 4 99 1 56 5 98 0 98 9 100 0 97 9 99 8 30 0 90 3 98 9 100 0 97 7 100 0 51 0 100 0 97 7 100 0 97 4 99 7 79 3 98 2 98 1 99 9 303285 IFUFR REV G MAIPA GPIV Positif N gatif Test Pak Positif 0 Corr lation 99 4 H de confiance de 96 7 99 9 Lx i GPIV N gatif Co positivit 83 3 S de confiance de 43 6 97 0 Total Co n gativit 100 0 A de confiance de 97 7 100 0 LMX HLA CI Positif Test Pak Positif 67 Corr lation 97 7 A de confiance de 94 3 99 1 Lx x HLA CI N gatif 3 Co positivit 95 7 Ho de confiance de 8 1 98 5 Total 70 Co n gativit 99 0 Mervalle de confiancede 94 8 99 8 Pr cision Le test Pak Lx a pr
8. ATION DE MOUSSE Pr parer les chantillons en les vortexant Centrifuger gt 10 000 x g pendant au moins 60 secondes pour d canter la mati re insoluble avant l utilisation Enregistrer les informations relatives l chantillon sur la fiche de pr sentation de la plaque La fiche de pr sentation de la plaque est pr te tre t l charg e sur notre site web www immucor com Couvrir les puits non utilis s de la plaque filtre filtrante avec un couvercle de plaque Ajouter 250 ul de tampon de lavage aux puits utilis s a Laisser le tampon de lavage au repos dans les puits pendant au moins 3 minutes b Enlever le tampon de lavage par une aspiration douce en utilisant le laveur vide Voir les recommandations du fabricant pour une utilisation correcte M langer les microbilles reconstitu es par une s rie de pipetage environ 15 20 fois en veillant viter toute formation de mousse Ajouter 40 uL de microbilles reconstitu es chaque puits utilis sur la plaque filtre S assurer que les microbilles reconstitu es sont m lang es pendant leur distribution sur la plaque filtre Effectuer 2 3 pipetages aller retour tous les 2 3 puits ATTENTION Il est important de conserver les microbilles resuspendues afin d assurer leur distribution uniforme dans les puits Un mauvais m lange des microbilles pourra provoquer leur s dimentation dans le fond du flacon Une distribution in gale des microbilles dans les pui
9. MODE D EMPLOI OO T _ IMMUCOR PLX CE 8 C i se MATCHIT Logiciel d anticorps anti plaquettes v1 0 1 888622 onsulter la documentation ini tant A See d accompagnement MATCHIT Logiciel d anticorps anti plaquettes Manuel de l utilisateur LC1371 Photosensible MATCHIT Logiciel d anticorps anti plaquettes Guide de r f rence rapide REF LC1374 Q conserver l abri de la lumi re TABLE DES MATI RES UTILISATION nan turn ni at tr ra nr nee EE ann ee ur n tee Diet 2 R SUM ET EXPLICATION EE E EE E EE E A nee een ne run tu acte Een 2 PRINCIPE DE LA PROC DURE nn nneennnenennne nee en eenene nine 2 R AGTIRS usure nf mnt nana Stan annee in anneau 2 PR CAUTIONS sonnette ananas nine 3 MISE EN GARDES mana Nan D nn nn ANT 3 INSTRUMENTATION tannins AR nt E tente etes 3 PR L VEMENT ET STOCKAGE DES CHANTILLONS nrernnennnennennnennnennnnnnenniniee 3 PROC DURE SR RS Se E EE M nn nan nice tn nd Net 4 CONTROLE DE QUALIT E da nan naines 7 INTERPR TATION DES R SULTATS iirinninennennnnennnenninnnininee 7 LIMITES M ARS NE Re a nat re ten ne tn An 8 DIAGNOSTIC DE PROBL ME roiuisneneninlin sennnmguenniii nnnennennit anennenes 8 CARACT RISTIQUES SP CIFIQUES DES PERFORMANCES nnnnenninnnennienininiiinieee 9 R R RENCES E E dE AR Ne tn eau ie ae seit 10 Licence utilisation limit e En ouvrant l emballage contenant ce kit qui contient des microbilles marqu es par fluorescence autoris es par Lumin
10. ants de protection des v tements de protection un quipement de protection des yeux du visage P302 P352 EN CAS DE CONTACT AVEC LA PEAU laver abondamment l eau et au savon P333 P313 En cas d irritation ou d ruption cutan e consulter un m decin P501 liminer le contenu r cipient dans une installation d limination des d chets agr e Coffret Pak Lx 11 303285 IFUFR REV G
11. correct la collecte de donn es par l instrument Luminex sera incorrecte ou incompl te les donn es de l essai Diluer le conjugu en m langeant les volumes de conjugu concentr CCX avec le diluant de conjugu CDX comme indiqu dans le tableau 2 ci dessous Le nombre de flacons indiqu dans le Tableau 2 inclut un volume suffisant pour effectuer un contr le positif et un contr le n gatif avec le nombre d chantillons num r s dans la colonne 1 a Conserver le conjugu dilu dans l obscurit et temp rature ambiante jusqu utilisation b Remettre le reste de conjugu concentr et son diluant au r frig rateur 2 8 C dans l obscurit pour permettre leur utilisation ult rieure Tableau 2 Nombre Volume de CCX Volume de CDX d chantillons uL uL 1 20 0 180 0 2 25 0 225 0 3 30 0 270 0 4 35 0 315 0 5 40 0 360 0 6 45 0 405 0 7 50 0 450 0 8 55 0 495 0 9 60 0 540 0 10 65 0 585 0 11 70 0 630 0 12 75 0 675 0 13 80 0 720 0 14 85 0 765 0 15 90 0 810 0 16 95 0 855 0 Apr s l incubation de 60 minutes enlever le couvercle de la plaque et ajouter 200 uL de tampon de lavage chaque puits Enlever le tampon de lavage par une aspiration douce en utilisant le laveur vide ATTENTION L utilisation d un vide excessif provoquera l adh sion des microbilles sur la membrane et pourra donner lieu un chec pour cet chan
12. de billes sont obtenus pour un chantillon l erreur probl me de billes s affiche et tous les r sultats d anticorps de l chantillon affect sont consid r s non valides Veuillez consulter la section de diagnostic de probl me de ces instructions pour de plus amples d tails INTERPR TATION DES R SULTATS Interpr tation par le logiciel Le logiciel MATCHIT d anticorps anti plaquettes v1 0 1 est n cessaire pour interpr ter les r sultats Pour l analyse un fichier EDS sp cifique au lot est n cessaire et est disponible pour t l chargement sur le site web www immucor com D termination de la r activit des billes individuelles Afin de d terminer si une bille sp cifique un antig ne est positive ou n gative la MFI de la bille sp cifique l antig ne est divis e par les MFI de chaque bille contr le n gatif CON1 CON2 CON3 produisant ainsi trois ratios pour chaque bille sp cifique l antig ne Remarque lorsque la MFI d une bille CON est inf rieure la valeur du seuil minimum MC alors la MC est utilis e pour le calcul partir des trois ratios calcul s un ratio pr d termin le facteur d ajustement du bruit de fond BAF est soustrait chacun pour obtenir trois ratios ajust s e Une valeur positive pour deux ou plus des trois ratio ajust s indique une r action positive e Une valeur n gative pour deux ou plus des trois ratio ajust s indique une r action n gative Interpr tation de
13. du vide Une forte d pression peut provoquer l adh sion des microbilles la membrane provoquant un chec du d compte de billes Tout les s rums humains utilis s dans les contr les positifs et n gatifs pour ce produit a ont t test s et se sont av r s n gatifs aux anticorps anti HIV HCV et HBsAg par des m thodes approuv es par la FDA Aucune m thode de test ne peut toutefois offrir une garantie compl te que des agents HIV du virus de l h patite C du virus de l h patite B ou d autres agents infectieux sont absents Ces mat riels doivent donc tre manipul s comme tant potentiellement infectieux Certains r actifs contiennent de l azoture de sodium comme conservateur qui peut r agir avec le plomb et le cuivre contenus en plomberie pour former des azotures m talliques explosifs Utiliserz de grandes quantit s d eau lorsque vous jetez des r actifs dans les gouts Jeter tous les r actifs apr s usage selon les r glementations locales INSTRUMENTATION L instrument Luminex pilot par le logiciel Luminex IS 2 3 ou xXPONENT 3 1 doit tre utilis pour effectuer le test Pak Lx Le Luminex est bas sur les principes de cytom trie de flux et comprend l analyseur Luminex la plate forme de manipulation de plaque Luminex XT et le syst me de distribution de fluide de gaine Luminex SD le logiciel et le PC Le Syst me Luminex est la combinaison de trois technologies xXMAP essentielles La premi re est repr sent e
14. e Billes mal m lang es ouma soient totalement resuspendues retester resuspendues l chantillon Probl me de billes faible d compte Panne de l instrument hors talonnage Voir le Manuel de l instrument r p ter l essai d v nements avec les billes lt 60 7 te j Pann l instrument BI flux ve v nements collect s Po eA ument ocage du flu Voir le Manuel de l Instrument r p ter l essai Microbilles photod grad es Utiliser un nouveau kit retester l chantillon Vide trop fort billes coll es la membrane R duire la force du vide retester l chantillon Coffret Pak Lx 8 303285 IFUFR REV G R sultats impossibles interpr ter Utilisation d un fichier mod le d acquisition incorrect IDT LXT Utilisation d un fichier EDS BAF incorrect pour r aliser l analyse avec le logiciel MATCHIT Platelet Antibody V rifier si le num ro de lot dans le fichier IDT LXT utilis pour la saisie des donn es est conforme au kit Pak Lx utilis pour le test S il est incorrect r p ter l essai et saisir les donn es en utilisant le fichier IDT LXT appropri V rifier si le num ro de lot dans le fichier EDS utilis pour la saisie des donn es est conforme au kit Pak Lx utilis pour le test S il est incorrect r p ter l analyse des donn es en utilisant le fichier EDS appropri CARACT RISTIQUES SP CIFIQUES DES PERFORMANCES Les tableaux suivants num rent pour les chantillons t
15. est s la co positivit sensibilit la co n gativit sp cificit et la corr lation pour les anticorps dirig s contre chaque HPA ou GPIV avec les r sultats obtenus par la technique d immobilisation d anticorps monoclonaux d antig nes plaquettaires MAIPA ou des anticorps dirig s contre des antig nes HLA de classe par rapport aux r sultats obtenus avec le test LifeScreen Deluxe Assay LMX Ces donn es sont compil es partir de deux tudes cliniques r alis es au Service diagnostic de Sanquin Amsterdam Pays Bas et la BloodCenter of Wisconsin banque de sang Milwaukee Wisconsin Test Pak Lx HPA 1 Test Pak Test Pak Test Pak Lx HPA 4 Test Pak MAIPA HPA 1 Positif Positif 52 N gatif 0 Total MAIPA Positif HPA 2 N gatif Positif 0 N gatif Total Positif N gatif Positif 0 N gatif Total MAIPA Positif HPA 4 Positif N gatif Total Positif HPA 5 N gatif Positif 29 1 N gatif 2 Total Coffret Pak Lx Corr lation Co positivit Co n gativit Corr lation Co positivit Co n gativit Corr lation Co positivit Co n gativit Corr lation Co positivit Co n gativit Corr lation Co positivit Co n gativit 99 4 100 0 99 3 99
16. ex Corporation ou en utilisant ce kit de quelque mani re que ce soit vous acceptez d tre li s par les conditions g n rales suivantes Vous acceptez galement que les conditions g n rales suivantes constituent un contrat l galement valable et ex cutoire applicable votre encontre Si vous n acceptez pas toutes les conditions g n rales suivantes indiqu es ci dessous vous devez rapidement renvoyer ce kit afin d en obtenir le remboursement complet avant de l utiliser de quelque mani re que ce soit En tant que client vous acqu rez le droit selon les droits de brevet de Luminex Corporation s il y a lieu d utiliser ce kit ou toute partie de ce kit y compris mais de fa on non limitative les microbilles qu il contient uniquement avec l instrument laser d analyse par fluorescence de Luminex Corporation commercialis sous le nom d Instrument Luminex Coffret Pak Lx 1 303285 IFUFR REV G UTILISATION Le kit Pak Lx est un test immunologique qualitatif utiliser sur l instrument Luminex Le test Pak Lx est con u pour d tecter et diff rencier les anticorps IgG des HPA 1 HPA 2 HPA 3 HPA 4 HPA 5 GPIV et HLA de classe dans le s rum humain R SUM ET EXPLICATION Les plaquettes expriment une grande vari t de prot ines polymorphes Les changements polymorphiques au niveau des prot ines bien que n affectant pas la fonction prot ique peuvent devenir des cibles pour les anticorps suite une grossesse ou une trans
17. fusion La pr sence d anticorps qui se lient aux glycoprot ines des plaquettes est associ e des troubles h morragiques dangereux tels que la r sistance aux transfusions plaquettaires PR le purpura post transfusionnel PPT et la thrombocytop nie allo immune f tale et n onatale FNAITP Les glycoprot ines GP cibl es par les anticorps comprennent les GPIlb Illa GPIb IX et GPla lla GPIV et les antig nes leucocytaires humains de classe HLA Les pitopes trouv s sur GPIlb Illa GPIb IX et GPla lla ont t caract ris s dans des syst mes d antig nes plaquettaires humains HPA de deux all les chacun all les a et b Les HPA 1 HPA 3 et HPA 4 sont tous situ s sur les GPIlb Illa Le HPA 2 est situ sur la GPIb IX et le HPA 5 est situ sur la GPla lla Les pitopes de la GPIV sont pr sent s uniquement sous forme d iso antig nes En d autres termes le d veloppement d anticorps anti GPIV survient chez des individus qui n ont pas ou ont des niveaux consid rablement r duits d expression de GPIV mais qui ont t expos s la GPIV Le HLA de classe est cod par de nombreux all les exprimant un grand nombre d pitopes diff rents La grande majorit des anticorps produits en r ponse la grossesse ou la transfusion sera r active au HLA de classe hautement polymorphe PRINCIPE DE LA PROC DURE Les microbilles du Pak Lx sont reconstitu es et incub es avec un chantillon de s rum temp
18. in avec un autre compris des m thodes de pipetage correctes pour pr sente une r activit d anticorps chantillon liminer le transfert d chantillons vers des puits suppl mentaire non indiqu e dans adjacents r p ter l essai rtifi FE a 3 e cenificatde CQ R p ter l essai en suivant les instructions de lavage Employer une bonne technique de laboratoire y Le s rum de contr le n gatif Dress S compris des m thodes de pipetage correctes pour pr sente une r activit d anticorps Reacufscontamines liminer le transfert d chantillons vers des puits positive adjacents r p ter l essai Mauvais lavage R p ter l essai en suivant les instructions de lavage Pour le s rum de contr le n gatif la Conjugu photod grad Utiliser une nouvelle trousse r p ter l essai valeur de MFI sur les billes de contr le P 77 est R p ter l essai en suivant les instructions de lavage lt Pour les chantillons tester la Conjugu photod grad Utiliser une nouvelle trousse r p ter l essai valeur de MFI sur les billes de re z L contr le positif Sonde 77 est Mauvais lavage Retester l chantillon en suivant les instructions de lt 3 500 lavage Les valeurs de MFI sur les microbilles pr sentant les antig nes sont d environ 30 MFI tandis que la MFI de microbilles de contr le positif est gt 10 000 Echantillon non ajout Retester l chantillon Bien m langer avec la pipette pour que les billes a
19. nti CD36 Transfusion 2010 50 2638 2642 18 Klein J Sato A The HLA system N Eng J Med 2000 343 702 19 Wu GG Kaplan C Curtis BR Pearson HA Report on the 14th International Society of Blood Transfusion Platelet Immunology Workshop Vox Sang 2010 99 375 381 20 Smith GA Ranasinghe E Ouwehand WH The importance of using multiple techniques for detection of platelet antibodies Vox Sang 2007 93 306 308 21 Metcalfe P Ensuring quality in platelet immunology Vox Sang 2007 93 287 288 Coffret Pak Lx 10 303285 IFUFR REV G Ml Immucor GTI Diagnostics Inc Immucor Medizinische Diagnostik GmbH 20925 Crossroads Circle Adam Opel Strasse 26A Waukesha WI 53186 USA Rodermark 63322 Germany Informations de contact aux USA et l international Support technique waukeshatechsupport immucor com wWww immucor com LUMINEX et xMAP sont des marques commerciales enregistr es de Luminex Corporation MATCHIT Pak Lx Immucor et les logos associ s sont des marques commerciales et ou des marques d pos es de Immucor et ou de ses filiales aux Etats Unis et ou dans d autres pays 2012 2015 Immucor GTI Diagnostics Inc 303285 IFUFR Rev G 2015 05 29 Warning Attention H317 Peut provoquer une allergie cutan e P261 viter de respirer les poussi res fum es gaz brouillards vapeurs a rosols P272 Les v tements de travail contamin s ne devraient pas sortir du lieu de travail P280 Porter des g
20. ou faussement n gatives en raison de stockage inappropri ou de contamination de l chantillon Coffret Pak Lx 3 303285 IFUFR REV G Seul le s rum est adapt pour ce test Le s rum doit tre s par des globules rouges stock ou exp di Les pr l vements contenant des particules doivent tre clarifi s par centrifugation avant le test Des chantillons de s rum qui ne peuvent pas tre test s imm diatement doivent tre stock s 2 8 C pendant un maximum de 48 heures ou congel s Des chantillons congel s 20 C ou en dessous restent en bon tat pendant un maximum de 2 ans Eviter les cong lateurs d givrage automatique Eviter une cong lation et une d cong lation r p t es des chantillons de s rum PROC DURE Mat riel fourni voir la section R ACTIFS pour des informations plus sp cifiques Les flacons peuvent contenir davantage de r actif que ce qui est indiqu sur les tiquettes Assurez vous de mesurer le r actif avec un dispositif appropri lors de la r alisation de dilutions 3 x M langes de microbilles lyophilis es 1 x 850 uL Diluant de microbilles 1 x 120 uL de conjugu concentr 1 x 1 2 ml de diluant de conjugu 1 x 50 ml de tampon de lavage 1 x 80 ul de s rum de contr le positif 1 x 80 ul de s rum de contr le n gatif TN ON Mat riel suppl mentaire requis tel qu num r ou quivalent Couvercle de plaque Fluide de gaine Luminex REF 628005 1x
21. par les microbilles une famille de 100 microbilles de polystyr ne de 5 6 microns color es par fluorescence qui agissent la fois comme identifiant et comme surface solide pour r aliser le test La deuxi me est un instrument bas sur les principes de cytom trie de flux l analyseur Luminex qui int gre des composants de d tection essentiels tels que les lasers l optique la fluidique et les processeurs de signal num rique grande vitesse Le troisi me composant est le logiciel qui est con u pour la saisie de donn es bas e sur un protocole Des informations sur les caract ristiques du logiciel l installation le fonctionnement la maintenance et la s curit de l instrument figurent dans le Manuel de formation du Luminex IS L utilisateur doit contacter la soci t Luminex pour toute assistance concernant l instrument Luminex Les fichiers de protocole requis pour utiliser le test Pak Lx sont fournis par Immucor GTI Diagnostics sur leur site web et peuvent tre t l charg s par l utilisateur L utilisateur doit contacter Immucor GTI Diagnostics pour tout probl me li au produit Pak Lx L utilisateur doit contacter la soci t Luminex pour des services sp cifiques concernant le syst me Luminex PR L VEMENT ET STOCKAGE DES CHANTILLONS Pr lever du sang sans anticoagulant l aide d une technique aseptique Traiter le sang pendant qu il est frais pour r duire le risque d obtention de r actions faussement positives
22. s r sultats Se r f rer au rapport du logiciel MATCHIT pour les r sultats Le tableau ci dessous num re les r sultats possibles qui pourraient tre obtenus lors du test d un chantillon quelconque Antig ne GPIV HLA Classe HPA 1 3 4 HPA 2 HPA 5 l GPIlb IIla GPIb IX GPla Ila R sultat Pos Pos R actif Pos Pos possible Neg Neg Neg Neg Neg Ind termin Ind termin e Les r sultats pour les HLA Classe I GPIV HPA 2 et HPA 5 sont directement rapport s par le logiciel MATCHIT e Tous les r sultats ind termin s pour les HPA 2 et HPA 5 doivent tre r p t s en utilisant le test Pak Lx ou l aide d une m thode alternative e Pour d terminer la r activit des HPA 1 3 et 4 utiliser le tableau suivant HPA coat es sur les billes Mod le de r activit de bille HPA 1a 3a 4a Pos Neg Pos Neg Pos Neg HPA 1a 3b 4a Pos Neg Neg Pos Pos Neg HPA 1b 3a 4a Neg Pos Pos Neg Pos Neg HPA 1b 3b 4a Neg Pos Neg Pos Pos Neg HPA 1ab 3ab 4a Pos Pos Pos Pos Pos Neg HPA 1a 3ab 4b Pos Neg Pos Pos Neg Pos Interpr tation des r sultats Anticorps anti HPA 1 Anticorps anti HPA 3 Anticorps anti HPA 4 d tect s d tect s d tect s Ce mod le peut masquer la HPA 4b HPA 4b HPA 4b HPA 4b HPA 1a 1b HPA 1a pr sence d un anticorps r actif non masqu 3a 3b 1b 3a 3b avec non masqu
23. sent une corr lation de 100 dans les r sultats rapport s pour huit chantillons test s en duplicats avec un m me lot sur 20 s ries s par es et par deux op rateurs Les chantillons inclus avaient une gamme de r activit comprenant HPA 1a 1b 3a 4a 5b GPIV et HLA classe l Substances interf rentes Les tudes sur des substances interf rentes ont t r alis es en utilisant le test d interf rence CLSI EP07 A2 indiqu dans Chimie clinique Directive approuv e Les substances suivantes n ont pr sent aucune interf rence avec le test Pak Lx aux concentrations indiqu es H moglobine lt 500 mg dl Triglyc rides lt 500 mg dl Bilirubine lt 20 mg dl R F RENCES 1 Mueller Eckhardt C Mueller Eckhardt C Kiefel V Grubert A et al 348 cases of suspected neonatal alloimmune thrombocytopenia Lancet 1989 1 363 366 2 Mueller Eckhardt C Platelet allo and autoantigens and their clinical implications In Nance SJ eds Transfusion Medicine in the 1990s Arlington Va American Association of Blood Banks 1990 63 93 3 Brand A Immunological aspects of blood transfusions Transpl Immunol 2002 10 183 190 4 McFarland JG Detection and identification of platelet antibodies in clinical disorders Transfus Apher Sci 2003 28 297 305 5 Davoren A Curtis BR Aster RH McFarland JG Human platelet antigen specific alloantibodies implicated in 1162 cases of neonatal alloimmune thrombocytopenia Transfusion 200
24. tillon Appliquer le vide minimum requis pour laver les chantillons Se r f rer aux instructions du fabricant pour l utilisation des plaques filtre et du laveur par aspiration Ajouter 250 uL de tampon de lavage chaque puits aspirer R p ter deux fois l op ration ATTENTION Un lavage incomplet peut r duire la capacit du conjugu d tecter l IgG li e aux microbilles sensibilis es Ajouter 50 uL de conjugu dilu chaque puits Couvrir avec le couvercle de plaque Incuber pendant 30 minutes temp rature ambiante 21 24 C dans l obscurit sur un agitateur rotatif environ 200 rotations par minute ou un Vortex avec un adaptateur de plaque r gl une vitesse permettant un m lange correct sans claboussure des chantillons Ne pas garder le conjugu dilu pour une utilisation ult rieure Enlever le couvercle de plaque Ajouter 150 uL de tampon de lavage chaque puits contenant l chantillon Remettre le reste du tampon de lavage au r frig rateur 2 8 C pour permettre son utilisation ult rieure Collecter imm diatement les donn es avec l instrument Luminex en respectant les recommandations du fabricant NOTE Un minimum de 60 v nements doit tre collect par type de microbilles Coffret Pak Lx 6 303285 IFUFR REV G CONTR LE DE QUALIT Les s rums de contr le positif et n gatif servent de contr les externes pour l essai et doivent tre inclus dans chacune des s ries d anal
25. ts pouvant affecter les temps de lecture ainsi que r sultats Ajouter 10 ul de s rum du patient ou de s rum contr le en se r f rant au plan de plaque Remettre le reste des s rums contr le et des microbilles au r frig rateur 2 8 C dans l obscurit pour permettre leur utilisation ult rieure Couvrir la plaque pour la maintenir l obscurit Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante 21 24 C dans l obscurit sur un agitateur rotatif environ 200 rotations par minute ou sur un Vortex avec un adaptateur de plaque r gl une vitesse permettant un m lange correct sans claboussure des chantillons a Pendant cette incubation amener le conjugu concentr et le diluant de conjugu temp rature ambiante 21 24 C b Pendant cette Incubation pr chauffer et pr parer l instrument Luminex c Param trer le test sur l instrument Luminex en utilisant le fichier IDT LXT sp cifique au lot mod le de lecture t l charg sur le site web www immucor com Se r f rer au manuel du logiciel Luminex sur la fa on d ajouter importer un fichier mod le dans le logiciel Coffret Pak Lx 5 303285 IFUFR REV G 14 15 16 17 18 19 NOTE Pour l utilisation de la fonctionnalit Automated Batch Setup se r f rer au Manuel de l utilisateur disponible sur le CD d installation PACD et sur notre website www immucor com ATTENTION Si vous n utilisez pas le fichier IDT LXT
26. u concentr une IgG anti humaine de ch vre conjugu e de la phyco rythrine fournie dans un tampon de stockage base de phosphate contenant du NaCl du Tween 20 de l azoture de sodium lt 0 1 et de l albumine bovine SENSIBLE A LA LUMIERE Eviter l exposition la lumi re directe pendant de longues dur es 2 heures ou moins Stocker 2 8 C dans l obscurit Diluer 1 10 dans du Diluant pour conjugu avant l utilisation CDX 403586 Diluant de conjugu un tampon base de phosphate contenant du NaCl du Tween 20 0 1 d azoture de sodium de l albumine bovine et du s rum de souris Stocker 2 8 C 405314 Tampon de lavage un tampon base de phosphate contenant du NaCl du Tween 20 0 1 d azoture de sodium et de l albumine bovine Stocker 2 8 C LMWB 403595 S rum de contr le positif ce s rum ou m lange de s rums est obtenu partir d individus pr sentant des PCX anticorps anti HPA 1a avec ou sans anticorps HLA de classe l Stocker 2 8 C Contient 0 1 d azoture de sodium Coffret Pak Lx 2 303285 IFUFR REV G 403592 S rum de contr le n gatif ce s rum ou m lange de s rums est obtenu partir d individus sans NCX anticorps connus contre les antig nes HPA GPIV et HLA Stocker 2 8 C Contient 0 1 d azoture de sodium PR CAUTIONS Pour usage diagnostique in vitro Ne pas utiliser de r actifs qui soient troubles ou contamin s Ne pas utiliser de r
27. uminex sp cifique au lot fichier IDT LXT sur le site web www immucor com et l enregistrer sur l ordinateur connect l instrument Luminex Noter l emplacement du fichier enregistr Ce fichier sera import sur l instrument Luminex lors d une tape ult rieure Coffret Pak Lx 4 303285 IFUFR REV G 10 11 12 13 Porter tous les r actifs except le conjugu concentr et son diluant temp rature ambiante 21 24 C avant utilisation Reconstituer le m lange de lyophilis es comme indiqu dans le tableau 1 ci dessous Le nombre de flacons indiqu dans le Tableau 1 comprend un volume suffisant pour effectuer un contr le positif et un contr le n gatif avec le nombre d chantillons num r dans la colonne 1 Tableau 1 Nombre Flacon s de d chantillons M lange de microbilles lyophilis es 1 4 1 5 10 2 11 16 3 a Ajouter 275 uL de diluant de microbille chaque flacon de microbilles lyophilis es Laisser le flacon reconstitu temp rature ambiante pendant au moins 5 minutes b Ne pas m langer ou faire tourbillonner les microbilles lyophilis es avec le diluant de microbilles ce moment l e Les flacons reconstitu s peuvent tre stock s 2 8 C dans l obscurit pendant un maximum de 15 jours ATTENTION NE PAS REGROUPER LES FLACONS RECONSTITU S SUR DIFF RENTS JOURS EN UN SEUL ATTENTION NE PAS VORTEXER LES MICROBILLES PENDANT LE TEST AFIN D VITER LA FORM
28. yses Le s rum de contr le positif est pr par partir de s rum disponible de donneurs et peut changer d un lot l autre de Pak Lx Le s rum de contr le positif doit montrer un r sultat positif pour les anticorps qui sont repris dans le certificat de contr le de qualit Le s rum de contr le n gatif doit montrer un r sultat n gatif pour toutes les perles HPA GPIV ou HLA de classe Si ces exigences ne sont pas remplies les chantillons affect s devront tre consid r s comme non valides Le contr le de qualit de l essai Pak Lx est compris dans le syst me d analyse par inclusion de quatre perles de contr le une perle de contr le positif et trois perles de contr le n gatif La perle de contr le positif est tapiss e d IgG humaines et doit produire des valeurs d IMF intensit m diane de fluorescence gt 10 000 avec le s rum de contr le n gatif Si des valeurs d IMF sont lt 10 000 avec le s rum de contr le n gatif l essai peut avoir t insuffisamment lav ou le conjugu peut tre douteux Les chantillons peuvent pr senter une large fourchette de r activit avec la perle du contr le positif mais doivent produire un signal d IMF gt 3 500 Si ces exigences ne sont pas remplies les chantillons affect s devront tre consid r s comme non valides L interpr tation des donn es d chantillons est bas e sur le recueil d un nombre minimum de chaque bille pendant le test Lorsque trop peu d v nements
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