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Vivaspin 500 µl et 2 ml
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1. Sartorius Caract ristiques techniques et mode d emploi Vivaspin 500 ul et 2 ml usage in vitro uniquement renee sa ga 85032 539 17 Vivaspin 500 ul et 2 ml Introduction Conditions de stockage Dur e de vie Les colonnes centrifuger d ultrafiltration Vivaspin doivent tre stock es temp rature ambiante Les appareils doivent tre utilis s avant la date d expiration figurant sur l emballage Introduction Les concentrateurs Vivaspin sont des dispo sitifs d ultrafiltration jetables destin s la concentration des chantillons biologiques Le Vivaspin 500 convient aux volumes d chantillons de 100 500 pal et le Vivaspin 2 aux volumes d chantillons de 2 ml maximum Le Vivaspin 2 s utilise sur des rotors mobiles ou angle fixe pouvant accueillir des tubes centrifugeurs de 15 ml La membrane verticale et la chambre de filtration canal troit brevet s US 5 647 990 minimisent le colmatage de la mem brane et permettent des vitesses de centrifu gations lev es m me avec des solutions tr s charg es en particules Le Vivaspin 500 s utilise sur des rotors a angle fixe pouvant accueillir des tubes centrifugeurs de 2 2 ml Vivaspin 2 Le syst me Vivaspin 2 a t sp cialement con u avec une surface interne et une sur face de membrane faibles afin de permettre une r cup ration maximale de solutions tr s dilu es Une autre caract ristique du Vivaspin 2 est qu il
2. fourreau vu depuis l extr mit est ovale dans la coupe transversale Le tube est arrondi dans la coupe transversale pour un meilleur ajustement Pour retirer le tube du fourreau vous devez le pincer pour qu il prenne une forme ovale avant de l enlever par un mouvement de rotation Appuyer Appuyer gt lt Tube Fourreau Centrifugation invers e avec Vivaspin 2 Selon la pr f rence de l utilisateur ou le Centrifugation invers e avec besoin de stockage de l chantillon le Vivaspin 2 concentr peut tre r cup r par centrifuga tion inverse dans le bouchon de r cup ration lorsque un rotor angle fixe est utilis la face imprim e du dispositif doit tre orient e vers le haut l ext rieur Dans cette proc dure le tube de filtrat doit tre enlev le bouchon de r cup ration ins r dans le tube du filtrat puis le concentrateur retourn Le syst me complet doit tre centrifug jusqu 3 000 g pendant 2 minutes Le bouchon de r cup ration contenant le concentr peut tre ferm des fins de stockage Bouchon de r cup ration du concentr Dessalage Changement de tampon 1 Concentrez l chantillon jusqu au niveau souhait 2 Videz le r servoir de filtrat Tube de filtrat 3 Remplissez nouveau le concentrateur Position avec la face imprim e vers le haut l ext rieur Corps du concentrateur Concentr l aide d un solvant ad quat F
3. la membrane par centrifugation Elimi nez alors filtrat et concentr avant de traiter l chantillon Si vous ne souhaitez pas utili ser imm diatement le dispositif pr rinc conservez le au r frig rateur la surface de la membrane recouverte de tampon ou d eau Ne laissez PAS la membrane s cher 6 3 St rilisation des membranes en poly thersulfone Les dispositifs Vavispin ne doivent pas tre auto clav s car les hautes temp ratures vont augmenter fortement les seuils de coupure des membranes Pour les st riliser utilisez une solution d thanol 70 ou un m lange gazeux st rilisant 4 Compatibilit chimique Les concentrateurs Vivaspin sont destin s a tre utilis s avec des fluides biologiques et des solutions aqueuses Pour obtenir plus d informations sur la compatibilit chimique reportez vous au tableau 4 Performances Tableau 3a Performances Vivaspin 500 Temps min pour concentrer jusqu Concentr r cup r en 30x a 20 C Volume initial 500 yl 500 yl Aprotinine 0 25 mg ml 6 500 MW 3 000 coupures de membrane PES 30 96 BSA 1 mg ml 66 000 MW 5 000 coupures de membrane PES 15 96 10 000 coupures de membrane PES 96 30 000 coupures de membrane PES 95 IgG 0 25 mg ml 160 000 MW 30 000 coupures de membrane PES 10 96 50 000 coupures de membrane PES 10 96 100 000 coupures de membrane PES 10 96 7 Tableau 3b Perfor
4. 00 000 MWCO 100 VS0262 0 2 um 25 V50271 0 2 um 100 VS0272 Pack starter 5 de chaque 5 K 10 K 30 K 50 K 100 K 25 VS02S1 12 Vivaspin 2 Triac tate de cellulose Conditionnement R f 5 000 coupures de membrane 25 VSO2U1 5 000 coupures de membrane 100 VSO2U2 10 000 coupures de membrane 25 VSO2V1 10 000 coupures de membrane 100 VSO2V2 20 000 coupures de membrane 25 VS02X1 20 000 coupures de membrane 100 VS02X2 Vivaspin 2 Hydrosart Conditionnement R f 2 000 coupures de membrane 25 VS02H91 2 000 coupures de membrane 100 VS02H92 5 000 coupures de membrane 25 VSO2H11 5 000 coupures de membrane 100 VSO2H12 10 000 coupures de membrane 25 VSO2H01 10 000 coupures de membrane 100 VSO2H02 30 000 coupures de membrane 25 VSO2H21 30 000 coupures de membrane 100 VSO2H22 13 Sartorius Stedim Biotech GmbH August Spindler Strasse 11 37079 Goettingen Allemagne T l phone 49 551 308 0 Fax 49 551 308 3289 www sartorius com Copyright de Sartorius Stedim Biotech GmbH Goettingen Allemagne Tous droits r serv s La r impression ou la transmission totale ou partielle de cette documentation sous quelque forme et par quelque moyen que ce soit est interdite sans l accord crit pr alable de Sartorius Stedim Biotech GmbH Les informations caract ris tiques techniques et illustrations contenues dans ce manuel sont fournies telles qu elles taient connues la date indiqu e ci
5. centr Choisissez une membrane en poly ther sulfone PES pour une concentration plus rapide Choisissez une membrane en triac tate de cellulose TCA pour l limination de prot ines ou la r cup ration du filtrat Choisissez une membrane Hydrosart pour une r cup ration maximale de fractions d immunoglobulines Ig Vivaspin 500 Poly thersulfone Conditionnement R f 3 000 coupures de membrane 25 VS0191 3 000 coupures de membrane 100 VS0192 5 000 MWCO 25 VSO111 5 000 MWCO 100 VSO112 10 000 MWCO 25 VS0101 10 000 MWCO 100 VS0102 30 000 MWCO 25 VS0121 30 000 MWCO 100 VS0122 50 000 MWCO 25 VS0131 50 000 MWCO 100 VS0132 100 000 MWCO 25 VS0141 100 000 MWCO 100 VS0142 300 000 MWCO 25 VS0151 300 000 MWCO 100 VS0152 1 000 000 MWCO 25 VS0161 1 000 000 MWCO 100 VS0162 0 2 um 25 VS0171 0 2 pm 100 VS0172 Pack starter 5 de chaque 5 K 10 K 30 K 50 K 100 K 25 VSO1S1 11 Vivaspin 2 Poly thersulfone Conditionnement Ref 3 000 coupures de membrane 25 VS0291 3 000 coupures de membrane 100 VS0292 5 000 MWCO 25 VS0211 5 000 MWCO 100 VS0212 10 000 MWCO 25 VS0201 10 000 MWCO 100 VS0202 30 000 MWCO 25 VS0221 30 000 MWCO 100 VS0222 50 000 MWCO 25 VS0231 50 000 MWCO 100 VS0232 100 000 MWCO 25 VS0241 100 000 MWCO 100 VS0242 300 000 MWCO 25 VS0251 300 000 MWCO 100 VS0252 1 000 000 MWCO 25 VS0261 1 0
6. de 10 NO NO Dim thylsulfoxide 5 OK NO NO thanol 70 OK OK OK Ac tate d thyle 100 NO NO NO Formald hyde 30 OK OK OK Acide formique 5 OK OK Glyc rine 70 OK OK OK Guanidine HCI 6 M OK OK Hydrocarbures aromatiques NO NO NO Hydrocarbures chlor s NO NO NO Acide chlorhydrique 1 0 M OK NO OK Imidazole 300 mM OK NO Alcool d isopropyle 70 OK OK OK Acide lactique 5 OK NO OK Mercapto thanol 1 0 M NO NO OK M thanol 60 OK Acide nitrique 10 OK NO NO 9 Solutions PES CTA HY Plage de pH compatible pH 1 9 pH 4 8 pH 1 9 Ph nol 1 NO Tampon de phosphates 1 M OK OK OK Glycol poly thyl nique 10 OK Pyridine 100 NO NO NO Carbonate de sodium 20 OK NO D soxycholate de sodium 5 OK Dod cylsulfate de sodium 0 1 M OK OK OK Hydroxyde de sodium 2 5 M NO NO NO Hypochlorite de sodium 200 ppm OK NO NO Nitrate de sodium 1 0 OK OK Acide sulfamique 5 OK NO T trahydrofuranne 5 NO NO NO Toluene 1 NO NO NO Acide trifluoroac tique 10 OK NO OK Tween 20 0 1 OK OK OK Triton X 100 0 1 OK OK OK Ur e 8 M OK OK OK Acceptable tester NO Non recommand 10 Informations de commande Conseils pour la prise de commande Choisissez une membrane avec une porosit au moins 50 inf rieure celle de la mol cule retenir dans le con
7. dessous Sartorius Stedim Biotech GmbH se r serve le droit de modifier sans pr avis les technologies fonctions caract ristiques techniques et l aspect du mat riel Date janvier 2014 Sartorius Stedim Biotech GmbH Goettingen Allemagne Imprim en Allemagne sur papier blanchi sans chlore W N de publication SLU6093 f140104 Ver 01 2014
8. est possible de r cup rer le concentr soit par pipettage direct dans la chambre de r tention de s curit plac e au fond du dis positif soit dans le bouchon de r cup ration apr s centrifugation inverse Le bouchon peut galement tre ferm pour stockage de l chantillon 2 Diff rentes membranes Outre la disponibilit d une membrane en poly thersulfone PES permettant un flux important et recommand pour la plupart des solutions le Vivaspin 2 peut tre propos avec une membrane en triac tate de cellulose CTA et Hydrosart La membrane en CTA est particuli rement recommand e lorsqu un taux de r cup ra tion important dans le filtrat est n cessaire La membrane Hydrosart est une membrane base de cellulose stabilis e qui a t optimis e pour l industrie biotechnologique La membrane Hydrosart est un polym re stable qui supporte une vaste plage de pH L Hydrosart est galement extr mement hydrophile emp chant ainsi la fixation des prot ines ce qui la rend pratiquement non colmatante et permet un flux important Hydrosart est disponible avec un seuil de coupure de 5 10 et 30 kilo Dalton kDa Le comportement de la membrane est forte ment d pendant des caract ristiques de la solution a traiter Sartorius Stedim Biotech recommande aux utilisateurs de tester diff rentes membranes afin d optimiser les per formances du dispositif et de son utilisation quipement n ce
9. iltrat 4 Concentrez nouveau l chantillon et r p tez le processus jusqu a ce que la r duc tion de la concentration de microsolut s contaminants soit suffisante Habituelle a I ment trois cycles de lavage vont permettre F destiveda de r duire de 99 la teneur en sels initiale stockage quipement n cessaire Vivaspin 500 Vivaspin 2 Centrifugeuse Type de rotor angle fixe Mobile ou angle fixe Angle minimal du rotor 40 25 Cavit du rotor Pour des tubes inf rieurs Pour des tubes inf rieurs coniques de 2 2 ml 11 mm coniques de 15 ml 17 mm R cup ration du concentr Type de pipette volume fixe ou variable volume fixe ou variable Recommandation Embout fin pour chargement des gels 4 Embout fin pour chargement des gels Caract ristiques techniques Tableau 1 Caract ristiques techniques Vivaspin 500 Vivaspin 2 Capacit du concentrateur Rotor mobile Ne pas utiliser 3 ml Rotor angle fixe 500 yl 2 ml Dimensions Longueur totale 50 mm 126 mm Largeur 11 mm 17 mm Zonre active de la membrane 0 5 cm 1 2 cm Volume mort lt 5 pl lt 10 pl membrane et support Volume a but e fixe 5 pl 8 yl Mat riaux de construction Corps Polycarbonate Polycarbonate Cuve de filtrat Polypropyl ne Polycarbonate Capuchon du concentrateur Polycarbonate Polycarbonate Membrane Poly thersulfone PES CTA HY Tablea
10. mances Vivaspin 2 Temps min pour concentrer jusqu Concentr r cup r en 30x 20 C Volume initial 2ml 2ml Cha ine d insuline A 0 1 mg ml 2 535 MW 2 000 coupures de membrane Hydrosart 35 95 Aprotinine 0 25 mg ml 6 500 MW 3 000 coupures de membrane PES 50 96 BSA 1 mg ml 66 000 MW 5 000 coupures de membrane PES 12 98 5 000 coupures de membrane CTA 50 96 5 000 coupures de membrane Hydrosart 22 98 10 000 coupures de membrane PES 8 98 10 000 coupures de membrane CTA 10 96 10 000 coupures de membrane Hydrosart 12 98 20 000 coupures de membrane CTA 5 96 30 000 coupures de membrane PES 8 97 30 000 coupures de membrane Hydrosart 5 97 IgG 0 25 mg ml 160 000 MW 20 000 coupures de membrane CTA 6 97 30 000 coupures de membrane PES 10 96 50 000 coupures de membrane PES 10 96 100 000 coupures de membrane PES 8 95 8 Compatibilit chimique Tableau 4 Compatibilit chimique temps de contact de 2 heures Solutions PES CTA HY Plage de pH compatible pH 1 9 pH 4 8 pH 1 9 Acide ac tique 25 OK NO OK Ac tone 10 NO NO NO Ac tonitrile 10 NO NO NO Hydroxyde d ammonium 5 OK OK Hydroxyde d ammonium satur OK Benz ne 100 NO NO NO n Butanol 70 NO Chloroforme 1 NO NO NO Dim thylformami
11. ssaire 1 Centrifugeuse avec rotor mobile ou angle fixe minimum 25 Dispositif Support requis Vivaspin 500 2 2 ml 11 mm Y Vivaspin 2 15 ml 17 mm Y 2 Des pipettes Pasteur pour le d p t et le retrait de l chantillon Pour une r cup ra tion maximale des embouts fins pour chargement des gels sont recommand s Fonctionnement 1 S lectionnez la membrane la plus ad quate pour votre chantillon Pour une r cu p ration maximale s lectionnez une cou pure de membrane inf rieure d au moins 50 la taille mol culaire de l esp re donn e 2 Remplissez le concentrateur jusqu aux volumes maximum indiqu s dans le tableau 1 V rifiez que le bouchon vis est bien ferm 3 Ins rez l ensemble du concentrateur dans la centrifugeuse en cas d utilisation de rotors angle fixe la face imprim e doit tre orient e vers le haut l ext rieur 4 Effectuez la centrifugation aux vitesses recommand es dans le tableau 2 en prenant soin de ne pas d passer la force g maximale variable selon le type de membrane et la coupure de la membrane 5 D s que la concentration souhait e est atteinte voir les tableaux 3a et 3b pour conna tre les dur es de centrifugation retirez l ensemble et r cup rez l chantillon au fond de la poche de concentr s l aide d une pipette Le tube filtrat peut tre ferm des fins de stockage Retrait du corps Vivaspin 2 du tube de filtrat Le
12. u 2 Vitesse de centrifugation recommand e xg Dispositif Vivaspin 500 Vivaspin 2 Membrane angle fixe angle fixe Mobile 3 50 000 PES 15 000 12 000 4 000 gt 100 000 PES 15 000 9 000 4 000 5 20 000 CTA 8 000 4 000 Hydrosart 8 000 4 000 Volume but e fixe comme dessin dans l outil de fraisage Ce volume peut varier selon l chantillon la concentration de l chantillon la temp rature de fonctionnement et le rotor de la centrifugeuse 5 Conseils d utilisation 1 D bit La vitesse de filtration varie selon plusieurs param tres tels que la coupure de mem brane la porosit la concentration de l chantillon la viscosit la force centrifuge et la temp rature Il faut s attendre des dur es de rotation beaucoup plus longues pour des solutions initiales de plus de 5 de solides une temp rature de fonctionne ment de 4 C les d bits sont environ 1 5 fois plus lents qu 25 C Les solutions visqueuses comme la glyc rine 50 prendront jusqu 5 fois plus de temps pour se concentrer que les chantillons dans des solutions tampons 2 Rin age pr alable Les membranes fix es sur les concentrateurs Vivaspin contiennent des traces de glyc rine et d acide de sodium Si ces dernierent affec tent l analyse elles peuvent tre limin es par rin age en remplissant le dispositif concentrateur avec une solution tampon ou de l eau d sionis e et en la faisant traverser par
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