Gélose de KLIGLER
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1. NF T 90 461 Escherichia coli RIVM WR1 j j Pseudomonas aeruginosa CIP 82 118 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 STOCKAGE CONSERVATION Milieu d shydrat 2 30 C La date de p remption est mentionn e sur l tiquette Milieu pr par en tubes non inclin s 6 mois 2 8 C titre indicatif Milieu pr par en tubes inclin s 8 jours 2 8 titre indicatif 4 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PRESENTATION Code Milieu d shydrat Flacon de 500 g BKO34HA REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES RUSSELL F F 1911 The isolation of typhoid bacilli from urine and feces with the description of a new double sugar tube medium J Med Red Res 25 217 229 KLIGLER I J 1917 A simple medium for the differentiation of the members of the typhoid paratyphoid group American Journal of Public Health 7 1042 1044 KLIGLER I J 1918 Modifications of culture media used in the isolation and differentiation of typhoid dysentery and allied bacilli Journal of Experimental Medicine 28 319 322 BUTTIAUX R 1951 L Analyse bact riologique des eaux de consommation Editions m dicales Flammarion Paris BUTTIAUX R BEERENS H et TACQUET A 1962 Manuel de techniques bact riologiques Editions m dicales Flammar2. G lose de KLIGLER DOMAINE D UTILISATION Le milieu de Kligler permet l identification des ent robact ries par la mise en vidence rapide de la fermentation du lactose et du glucose avec ou sans production de gaz ainsi que de la production de sulfure d hydrog ne HISTORIQUE En 1911 Russell d crivit un milieu deux sucres pour l isolement de bacilles typhiques dans les urines Six ans plus tard Kligler d veloppa un milieu nutritif avec glucose indicateur d Andrade et ac tate de plomb pour la diff renciation des bact ries des groupes typhi et paratyphi Alors qu il exp rimentait ce milieu avec d autres combinaisons d ingr dients Kligler se rendit compte que le milieu de Russell avec indicateur d Andrade et ac tate de plomb permettait une excellente diff renciation des salmonelles Par la suite Bailey et Lacey pr conis rent l utilisation de rouge de ph nol comme indicateur pH qui se substituait ainsi l indicateur d Andrade moins adapt ce type de r action Sulkin et Willett utilis rent le thiosulfate de sodium et le sulfate ferreux pour mettre en vidence la production de sulfure d hydrog ne PRINCIPES Les fermentations du lactose et du glucose qui permettent la diff renciation des ent robact ries se traduisent par une acidification qui fait virer au jaune le rouge de ph nol indicateur pH Les microorganismes qui fermentent le glucose mais pas le lactose salmonelles ou shigelles
3. e gaz Apparition de bulles de gaz dans le culot 4 Formation d HS Production d une coloration noire entre le culot et la pente ou le long de la piq re 2 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr Les r actions typiques obtenues sont pr sent es dans le tableau suivant ESPECES PENTE CULOT Salmonella Typhi Salmonella Paratyphi A Salmonella Choleraesuis Salmonella Pullorum Salmonella Paratyphi B Salmonella Typhimurium Salmonella Enteritidis Salmonella Gallinarum Shigella dysenteriae Shigella flexneri Shigella sonnei Shigella boydii Proteus vulgaris Proteus mirabilis Proteus morganii Proteus rettgeri HER etehete ozz Jeee Serratia marcescens Enterobacter hafniae Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Escherichia coli Citrobacter freundii Klebsiella pneumoniae Alcaligenes faecalis Pseudomonas aeruginosa Yersinia enterocolitica DIE Certaines souches d Escherichia coli ne fermentent le lactose que tr s tardivement Au cas o l interpr tation peut laisser suspecter la pr sence de salmonelles il est possible d effectuer partir des cultures sur milieu de Kligler la recherche de la B galactosidase de l
4. ion Paris NF EN ISO 10273 V 08 027 D cembre 2003 Microbiologie des aliments M thode horizontale pour la recherche de Yersinia enterocolitica pr sum es pathog nes XP CEN ISO TS 11133 2 V 08 104 2 Janvier 2004 Microbiologie des aliments Guide pour la pr paration et la production des milieux de culture Partie 2 Guide g n ral pour les essais de performance des milieux de culture XP X 33 018 F vrier 2004 Caract risation des boues D nombrement des Sa monella M thode de d nombrement en milieu liquide m thode du nombre le plus probable NPP NF V 04 504 Mars 2006 Microbiologie des aliments D nombrement des Pseudomonas spp dans les viandes et produits base de viande et les volailles Methode de routine NF T 90 461 juillet 2001 NF T 90 461 A1 juin 2005 et NF T 90 461 A2 mai 2007 Qualit de l eau Contr le qualit des milieux de culture NF U 47 100 Juillet 2007 M thodes d analyse en sant animale Recherche par l isolement et identification de tout s rovar ou de s rovar s sp cifi s de salmonelles dans l environnement des productions animales NF U 47 101 Novembre 2007 M thodes d analyse en sant animale Isolement et identification de tout s rovar ou de s rovar s sp cifi s de salmonelles chez les oiseaux NF U 47 102 Janvier 2008 M thodes d analyse en sant animale Isolement et identification de tout s rovar ou de s rovar s sp cifi s de salmonelles chez les
5. mammif res Les mentions port es sur les tiquettes sont pr dominantes sur les formules ou les instructions d crites dans ce document Les informations et les sp cifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2010 10 13 Elles sont susceptibles d tre modifi es tout moment sans pr avis Code document BK034 F 2001 04 9 5 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr
6. on sous agitation constante et l y maintenir durant le temps n cessaire sa dissolution R partir en tubes St riliser l autoclave 121 C pendant 15 minutes Incliner les tubes de mani re obtenir un culot de 3 cm de hauteur et une pente oblique NOTA 1 Une liqu faction partielle de l agar entra nera in vitablement une alt ration significative de la consistance du gel du milieu solidifi apr s st rilisation et refroidissement NOTA 2 Il est recommand lorsque le milieu n est pas utilis dans les 8 jours qui suivent sa pr paration de le r g n rer au bain marie bouillant et de le solidifier nouveau en bonne position MODE D EMPLOI A partir d une colonie suspecte pr lev e sur un milieu d isolement s lectif ensemencer le culot par piq re centrale et la surface inclin e par des stries serr es Il est n cessaire d utiliser des cultures pures pr lev es au centre de colonies bien isol es sinon les r actions crois es rendent l identification impossible r aliser Incuber 37 C pendant 24 heures capsules desserr es de mani re favoriser les changes gazeux LECTURE Le milieu de Kligler fournit quatre renseignements principaux 1 Fermentation du glucose Culot rouge glucose non ferment Culot jaune glucose ferment 2 Fermentation du lactose Pente inclin e rouge lactose non ferment Pente inclin e jaune lactose ferment 3 Production d
7. produisent initialement une pente jaune due l acidification obtenue par fermentation du glucose pr sent en faible quantit Lorsque le glucose est compl tement utilis dans l environnement a robie de la pente la r action s alcalinise par oxydation des acides produits ph nom ne aboutissant l apparition d une coloration rouge en surface Cette alcalinisation n appara t pas en profondeur dans le culot o la coloration se maintient au jaune Les germes fermentant le lactose et le glucose font virer au jaune la pente et le culot par une production importante d acide ce qui suffit maintenir un pH acide en surface Les microorganismes ne fermentant aucun des deux glucides ne modifient pas la couleur du milieu La production d HS se manifeste dans le culot par l apparition d une coloration noire de sulfure de fer qui est due la r duction du thiosulfate en pr sence de citrate ferrique La production de gaz H2 CO r sultant des fermentations sucr es se traduit par l apparition de bulles ou bien par la fragmentation de la g lose 1 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr PREPARATION Mettre en suspension 58 0 g de milieu d shydrat BK034 dans 1 litre d eau distill e ou d min ralis e Porter lentement le milieu bulliti
8. ur ase et de la lysine d carboxylase 3 5 Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B P 10245 F60002 Beauvais Cedex France T l 33 0 3 44 14 33 33 Fax 33 0 3 44 14 33 34 www biokar diagnostics fr FORMULE TYPE pouvant tre ajust e de fa on obtenir des performances optimales Pour 1 litre de milieu PION E sienne Nate 20 0 g Extrait autolytique de levure 3 0 g Extrait de viande ses 3 0 g SOUCIS E aa den a de 1 09 LACIOSO ed E no 10 0 g Chlorure SOUL nn en 5 0 g Thiosulfate d SO ILNIS nee nt 0 5 g Citrate ferrique ammoniacal nne 0 5 g Rouge dE Ph n l oen scanri n Ra ate 25 0 mg Agar agar bact riologique ss ssesseneeesenrtrsererrtrsteressrrrnneerrnnenenne 15 0 g pH du milieu pr t l emploi 25 C 7 4 0 2 CONTR LE QUALITE Milieu d shydrat poudre ros e fluide et homog ne Milieu pr par g lose rouge orang R ponse culturale apr s 24 heures d incubation 37 C XP CEN ISO TS 11133 2 Escherichia coli ATCC 25922 bonne score 2 Escherichia coli RIVM WR1 bonne score 2 Citrobacter freundii CIP 57 32T bonne score 2 Proteus vulgaris ATCC 13315 bonne score 2 Salmonella Enteritidis CIP 82 97 bonne score 2 Pseudomonas aeruginosa CIP 82 118 bonne score 2 R ponse culturale de croissance apr s 24 48 h d incubation 36 C ISO 65340
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