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Amersham WB system Mode d`emploi

1. Bloc de la vanne de sondage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 53 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 3 Circuits des liquides 3 3 3 Circuits des liquides Introduction 54 Cette section montre les circuits des liquides de transfert et de sondage dans l unit Western et en d crit les principes de fonctionnement de base Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 3 Circuits des liquides Illustration du circuit du liquide de transfert L illustration ci dessous montre un sch ma d taill du processus de transfert Le sch ma montre les interconnexions entre les composants de l instrument Les tiquettes blanches font r f rence aux tiquettes de la tubulure Les nombres bleus font r f rence aux composants de l instrument 5 T WASTE T BUFFER T WATER Le tableau ci dessous d crit les composants qui apparaissent dans le sch ma Description 1 Bloc de la vanne de transfert Pour s lectionner la solution qui doit tre pomp e dans le circuit du liquide 2 R servoir de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 55 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 3 Circuits des liquides Description Pompe de transfert Pour pomper la solution par le circuit du liquide Unit de refroidissement du transfert Pour refroidir le tampon de transfert et le garder temp rature
2. 3 Utilise le trou fait pour saisir et retirer le filtre 4 Placer le nouveau filtre et l appuyer d licatement sur le joint d tanch it Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement Remplacer les filtres d entr e Remplacer le filtre d entr e si n cessaire par exemple quand les filtres se colmatent Mat riel requis Ensemble filtre d entr e Suivre les instructions ci dessous pour remplacer un filtre d entr e et un filet de maintien tape Action 1 Retirez le filtre d entr e et le filet de maintien du support de filtre A Placer le nouveau filet de maintien et le filtre d entr e sur le support du filtre d entr e et appuyer sur le filtre pour le mettre en position iLe Remplacer le fusible secteur AVERTISSEMENT Toujours d brancher l alimentation secteur avant de remplacer le fusible du secteur Pour une protection continue contre le risque d incendie ne remplacer un fusible que par un fusible du m me type comme indiqu sur le tiquettes de l instrument tape Action I Mettre l alimentation lectrique du Amersham WB analyzer hors tension en mettant les boutons d alimentation qui se trouvent sur les panneaux arri re des unit s Elpho amp scan et Western en position off 0 2 D brancher les cordons secteur des entr es d alimentation secteur des unit s Elpho amp s
3. Pour des informations relatives la commande de consommables s par s voir Amersham WB system User Manual Conservation des consommables Le tableau ci dessous r capitule les conditions de conservation et les conditions envi ronnementales des divers consommables La date de p remption des consommables est imprim e sur le conditionnement Consommable Temp rature de stockage Environnement Consommable pr marquage 15 C 30 C Maintenir les contenus l abri de la lumi re directe du soleil viter la r p tition des cycles cong lation d cong lation du r actif color Cy5 Le r actif color Cy5 dilu doit tre utilis dans les 30 min et ne doit pas tre congel Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 61 3 Description du syst me 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables Consommable Temp rature de stockage Environnement Amersham WB molecular 15 C 30 C Maintenir les marqueurs de weight markers masse mol culaire MW l abri de la lumi re directe du soleil Les marqueurs MW doivent toujours tre conserv s au cong lateur R duire la dur e de temps temp rature ambiante avant l utilisation et viter la r cong lation Les marqueurs MW dilu s dans le tampon de chargement avec DTT peuvent tre r partis en aliquotes pour tre utilis s en une seule fois s ils sont conge l s directement apr s la dilu tion Les aliquotes ne doivent pas tr
4. l int rieur de la caisse de li vraison du Amersham WB analyzer Amersham WB system Mode d emploi Ce manuel contient des informations n cessaires pour e installer manipuler et entretenir le Amersham WB system en toute s curit e ex cuter une analyse typique en toute s curit I contient galement des informations r glementaires et de s curit une des cription du syst me et des informations de r f rence Une version imprim e en anglais est livr e avec le Syst me Des versions traduites sont disponibles sous forme de fi chiers PDF sur le CD Manuel d utilisation 14 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 4 Amersham WB Documentation du system Document Contenu principal Amersham WB system User Ce manuel contient des informations Manual n cessaires pour e faire fonctionner et entretenir le Amersham WB system en toute s curit planifier ex cuter et valuer les analyses par lectrophor se et par transfert de type Western e d panner le syst me et les r sultats I contient galement une description du syst me des informations de r f rence et des informations relatives la commande Disponibilit Int gr au Amersham WB software en tant que manuel HTML dans le menu Aide galement disponible sous forme de fichier PDF sur le CD Manuel d utilisation Amersham WB software Le Amersham WB software Help He
5. Remarque Start Ready tor Trarvsf r Pendant l ex cution du transfert il est recom mand de pr parer et de connecter les solu tions utilis es au cours de l tape de sondage Voir Section 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps en page 169 pour plus d informations 164 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 4 Proc dures apr s le transfert 5 7 4 Proc dures apr s le transfert Introduction Cette section d crit les proc dures de nettoyage r aliser apr s le transfert Retirer le s support s de transfert tape Action 1 Ouvrir le couvercle du r servoir de transfert 2 Retirer les supports de transfert Les tenir en diagonale par la partie avant interne du r servoir de transfert au dessus du liquide Remarque Pour viter le s chage des membranes ne pas ouvrir les supports de transfert au cours de cette tape Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 165 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 4 Proc dures apr s le transfert Nettoyer le circuit de transfert Remarque Avant de proc der au nettoyage retirer le support de transfert tape Action 1 Quand le transfert est termin la bo te de dialogue Transfer Completed Clean Transfer Flow Path s ouvre Remarque Il est recommand de nettoyer le circuit de transfert apr s un
6. Remarque Une fois la chambre de sondage pr remplie e Iln estplus possible de change le type de la premi re tape du tableau s quentiel de sondage Cependant Dur min et Re peat peuvent tre modifi s e Le boutonPre Fill devient un bouton Start et le message d tat Ready for Probing est affich 174 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 2 Ex cuter le sondage tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Ouvrir le couvercle du comparti ment de sondage et utiliser le fer moir pour ouvrir le couvercle de la chambre de sondage Ouvrir le support de transfert et retirer l ponge et le papier de transfert en haut de la plaque PVDF e Retirer la plaque PVDF du support de transfert Maintenir les poign es de la plaque PVDF avec vos doigts ou l aide de pinces plates e Placer la plaque PVDF dans la chambre de sondage voir l tape 5 e Pour le nettoyage du support de transfert et la prise en charge des d chets voir Net toyer le support de transfert en page 167 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 175 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 2 Ex cuter le sondage tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Plaque Placer la plaque PVDF dans la chambre de sondage pr rem plie en faisant correspond
7. Dimensions L x P x H Inf rieur 80 dB A Donn es 47x51x27 cm Poids sans l ordinateur 25 kg Alimentation lectrique Tension 100 240 V AC 10 Fr quence 50 60 Hz Consommation lectrique Puissance max 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 7 Informations de r f rence 7 1 Sp cifications du syst me Sp cifications du scanner Param tre Donn es Capteur d image Photodiode en silicium D lai de chauffage Au moins 1 minute Remarque Le d lai de chauffage est inclus en mode Sensibilit automatique Lentille F1 0 13 mm Source lumineuse Cy5 Module de diode laser 635 nm 10 mW Cy3 Module de diode laser 532 nm 10 mW Fonctionnement Totalement automatique exposition au tomatique aucune mise au point ou autre r glage ou talonnage n cessaire Taille maximale d chantillon 2 chantillons d environ 80 x 65 mm chelle de gris 65 536 niveaux 16 bits Gamme dynamique 4 6 ordres de grandeur Sortie de l image chelle de gris 16 bits tif Sp cifications de la s paration Param tre Description Tension 250 600 V Courant 20 50 mA 1 Puissance maximum de 20 W plaque de gel Les valeurs maximum des param tres ne peuvent pas tre atteintes simultan ment Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 219 7 Informations de r f rence 7 1 Sp cifi
8. Guides du dispositif de s chage de la membrane Indicateur de position A et emplacements B de position Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 51 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 2 Compartiments de l unit Western Illustration du compartiment des anticorps 52 Unit L illustration ci dessous montre le compartiment des anticorps dans lequel des tubes de 15 ml de solutions d anticorps primaires et secondaires sont ins r s avant le sondage c t gauche Voir Connecter les tubes de la solution d anticorps en page 170 pour plus d informations Le c t droit du compartiment est utilis pour le stockage des Amersham WB membrane adapters adaptateurs de membrane Description 1 Porte tubes 2 Tubulure 3 Verrou de la porte magn tique 4 Adaptateurs de membrane 5 Support pour les adaptateurs de membrane 6 Verrou de la porte Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 2 Compartiments de l unit Western Pi ce Description 7 Voyant de position du tube de solution des anticorps A PRIMARY A SECON DARY B PRIMARY et B SECONDARY Illustration du compartiment d entretien Unit L illustration ci dessous montre le compartiment d entretien de l unit Western Description Bloc de la vanne de transfert Pompe de sondage Pompe de transfert Couvercle du compartiment du filtre air
9. PRIMARY Position devant tre utilis e pour les anticorps primaires dirig s vers la membrane en position dans la chambre de sondage A SECONDARY Position devant tre utilis e pour les anticorps secondaires dirig s vers la membrane en position A dans la chambre de sondage B PRIMARY Position devant tre utilis e pour les anticorps primaires dirig s vers la membrane en position B dans la chambre de sondage B SECONDARY Position devant tre utilis e pour les anticorps secondaires dirig s vers la membrane en position B dans la chambre de sondage 3 Fermer le couvercle du compartiment des anticorps Remarque Pour chaque membrane il y a un tube d anticorps pour les anticorps primaires et un tube pour les anticorps secondaires Cela concerne par exemple la s lection de deux anticorps principaux pour le marquage de la membrane dans Position A m lang s dans le m me tube d anti corps et mis en place A PRIMARY 172 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 2 Ex cuter le sondage 5 8 2 Ex cuter le sondage Introduction Cette section d crit comment e placer les plaques PVDF dans les chambres de sondage e d marrer et surveiller le sondage Pr cautions d emploi AVERTISSEMENT Apr s l lectrophor se ou apr s le transfert quand le sandwich de transfert a t ouvert et que la plaque PVDF a t plac e
10. Remarque S assurer que la plaque PVDF est recouverte de tampon de transfert pendant cette p riode 152 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Commencer construire le sandwich de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Placer le support de transfert avec le c t noir orient vers le bas e Ouvrir le support de transfert en appuyant sur les fermoirs et en soulevant le couvercle blanc e Pousser sur le couvercle jus qu ce que les goubpilles du rouleau atteignent les deux cavit s marqu es de cercles orange dans l image e Retirer le couvercle blanc en le soulevant par les des deux cavit s Placer la premi re ponge sur le couvercle noir Mouiller pr alablement un papier de transfert de tampon de trans fert et le placer sur l ponge sur le couvercle noir la poign e du pa pier de transfert doit tre position n e entre les goubpilles de gui dage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 153 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Illustration de pr sentation du d montage de la plaque de gel L illustration ci dessous montre une vue clat e des pi ces de la plaque de gel qui sont d mont es apr s une analyse par lectrophor se Le tableau ci dessous d
11. Si la proc dure de transfert choue la raison peut en tre des lectrodes de transfert d fectueuses Il est recommand de remplacer les deux lectrodes Les instructions ci dessous d crivent comment remplacer les lectrodes de transfert tape Action l Ouvrir le couvercle du r servoir de transfert Les lectrodes sont situ es de chaque c t Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 2 Sortir l lectrode 3 4 R p ter la m me proc dure avec l lectrode du c t droit 5 Fermer le couvercle du r servoir de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 211 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement Remplacer le filtre du r servoir de transfert ele Remarque Si le filtre de transfert est sale il n est pas possible de le retirer le nettoyer et le remettre en place Le filtre doit tre remplac Les instructions ci dessous d crivent comment remplacer le filtre du r servoir de transfert tape Action 1 Ouvrir le couvercle du r servoir de transfert Le filtre se trouve au bas du r servoir de transfert 2 Percer le filtre en son milieu l aide de pinces Remarque Ne pas retirer le filtre en le saisissant par les bords car cela peut endommager le joint d tanch it du filtre
12. f rence 7 3 Formulaire de d claration de sant et de s curit 1 5 Formulaire de d claration de sant et de s curit R paration sur site Un rapport On Site Service Health amp Safety Declaration Form comme indiqu dans 224 l exemple ci dessous doit tre utilis pour enregistrer les d tails de la d contamination avant un entretien sur site D claration de s curit de maintenance sur site Ticket de maintenance Ch re Cliente Cher Client Pour assurer la protection et la s curit du personnel de maintenance de GE et de nos clients tous les quipements et les aires de travail doivent tre propres et exempts de tout contaminant dangereux avant qu un ing nieur de maintenance ne commence une r paration Pour viter tout retard dans l entretien de votre mat riel veuillez compl ter cette liste et la pr senter l ing nieur de maintenance d s son arriv e L quipement et les zones de travail qui ne sont pas suffisamment nettoy s accessibles et s curis s peuvent entra ner des retards dans l entretien du mat riel ce qui pourrait faire l objet de frais suppl mentaires Veuillez passer en revue les actions ci dessous et r pondez Oui ou Non Fournissez des explications pour les r ponses Non dans la case ci dessous L instrument a t nettoy des substances dangereuses Veuillez rincer les tubes ou tuyaux essuyer les surfaces du scanner ou assurer l enl ve
13. logiciel Remarque Ne jamais ouvrir le couvercle apr s que les chantillons aient t charg s Remarque Tous les puits doivent tre charg s avec un chantillon du tampon de chargement dilu avec un volume gal d eau ultra pure ou marqueurs des masse mol culaire Il est recomman d de charger du tampon de chargement dans les puits 1 et 16 et du marqueurs des masse mol culaire dans les puits 2 et 15 Unit Quand tous les chan tillons ont t charg s ap puyer sur le bouton jecter R sultat Le chargeur est in s r dans l unit Elpho amp scan 138 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 2 Ex cuter une lectrophor se 5 6 2 Ex cuter une lectrophor se Introduction Cette section d crit comment d marrer et surveiller une lectrophor se D marrer et surveiller une lectrophor se et le balayage du gel tape Illustration de l tape Actions de l op rateur e Au cours de l tape ELECTROPHORESIS amp GEL SCANNING du flux de travail utiliser les pa ram tres par d faut pour l lectrophor se et le ba Gel Cards layage des plaques de Gel card Position A Position B gel comme indiqu sur m la capture d cran Note e En option S lectionner Electrophoresis Protocol Pause for sample well Voltage limit 600 250 600
14. quipements lectriques et lectro niques WEEE R glementation CE Enregistrement valuation Autorisation et limitation n 1907 2006 de Produits chimiques REACH Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 3 Informations r glementaires R glementation ACPEIP Administration du contr le de la pollution caus e par les composants lectroniques Limitation de l utilisation des substances dangereuses LdSD pour la Chine Conformit r glementaire des quipements connect s Tout appareil connect au Amersham WB analyzer doit r pondre aux exigences de s curit IEC EN UL CSA 61010 1 IEC EN UL CSA 60950 1 ou autres r glementations et normes nationales pertinentes L appareil doit tre install et utilis conform ment aux instructions du fabricant Dans l UE l appareil connect doit porter le marquage CE Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 13 1 Introduction 1 4 Amersham WB Documentation du system 1 4 Amersham WB Documentation du system Introduction Cette section d crit le manuel d utilisation et la documentation associ e au Amersham WB system Mode d emploi Le tableau ci dessous r capitule le manuel d utilisation fourni avec le Amersham WB system Document Amersham WB analyzer Instructions relatives au d ballage Contenu principal Ces instructions d crivent comment d baller le Amersham WB analyzer Disponibilit
15. 1040 10 Produits laser Conformit FCC Cet quipement est conforme la partie 15 des Normes FCC Le fonctionnement est soumis aux deux conditions suivantes 1 Cet quipement ne doit pas causer d interf rences nocives et 2 doit accepter toutes les interf rences re ues y compris les interf rences pouvant provoquer un fonctionnement non souhait Remarque L utilisateur est mis en garde que toute modification non express ment approuv e par GE pourrait annuler l autorit de l utilisateur de faire fonctionner l quipement Cet quipement a t test et s est av r conforme aux limites d un appareil num rique de classe A conform ment la partie 15 des Normes FCC Ces limites sont con ues pour offrir une protection raisonnable contre le brouillage nuisible lorsque l quipement fonctionne dans un environnement commercial Cet quipement engendre utilise et peut mettre une nergie en radiofr quence et s il n est pas install et utilis selon le manuel d instruction il peut brouiller de mani re nuisible les communications radio Le fonctionnement de cet quipement dans une zone r sidentielle peut galement provoquer un brouillage nuisible auquel cas l utilisateur devra corriger le brouillage ses propres frais Conformit environnementale 12 R glementation 2011 65 EU Directive Limitation de l utilisation des substances dan gereuses LdSD 2012 19 UE Directive D chets d
16. 2 Anticorps secondaires sondage 3 7 Anticorps secondaires sondage Introduction Les prot ines cibles sont identifi es par sondage de la membrane avec des anticorps primaires et des anticorps secondaires CyDye conjugu s sp cifiques d une esp ce En utilisant des anticorps primaires de deux esp ces diff rentes souris et lapin un anticorps secondaire Cy3 conjugu et un anticorps secondaire Cy5 conjugu une analyse multi plex e d tectant deux prot ines simultan ment sur la m me membrane peut tre r a lis e Les variantes suivantes des anticorps secondaires CyDye conjugu s sont disponibles e Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy3 de ch vre anti souris e Amersham WB goot anti rabbit Cy3 Cy3 de ch vre anti lapin e Amersham WB goat anti mouse Cy5 Cy5 de ch vre anti souris e Amersham WB goot anti rabbit Cy5 Cy5 de ch vre anti lapin CyDye conjugu aux anticorps secondaires Le CyDye conjugu aux anticorps secondaires poss dent leurs propres longueurs d onde d excitation et d mission sp cifiques dans le spectre visible et sont diff renci s les uns des autres du point de vue spectral ce qui se traduit par une excitation crois e minimum voir le tableau ci dessous Longueur d onde d excita Longueur d onde d mission tion Apr s excitation les signaux fluorescent mis sont captur s l aide d un scanner fluorescence multicanaux dans l unit Elpho amp scan Le CyDye pos
17. 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 3 Proc dures ult rieures l lectrophor se et balayage de la plaque de gel Nettoyer l unit Elpho amp scan tape Action 1 Unit Retirer les supports des bandelettes de tampon du chargeur et jeter les bandelettes de tampon 2 Essuyer toute trace de liquide sur le plateau des plaques l aide d un tissu non pelucheux imbib si n cessaire d thanol 50 3 Essuyer toute trace de liquide et de salissure de la vitre de protection l aide d un tissu non pelucheux imbib si n cessaire d thanol 50 Remarque Il est important de maintenir la vitre de protection en bon tat de propret afin d obtenir un bon r sultat lors du balayage des plaques de gel et dePVDF 4 Fermer le couvercle d tanch it et appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ins r 5 Nettoyer le support des bandelettes de tampon avec de l eau du robinet pour liminer les sels et le tampon Laisser le support des bandelettes de tampon s cher l air l envers Passer au transfert Ex cuter l une des actions suivantes e Siles solutions de transfert ont t pr par es et connect es l unit Western suivre les instructions de Section 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert en page 147 sinon e Suivre les instructions de Section 5 7 1 Pr parer et connect
18. 40 de m thanol I est recommand d utiliser uniquement 20 d thanol dans les tampons de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 19 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit Protection individuelle AVERTISSEMENT Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protec tion pendant la manipulation des plaques de gel des plaques PVDF et des autres consommables fournis avec le Amersham WB system AVERTISSEMENT En cas de pr marquage d chantillons de prot ines e Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protection e Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS avant de pro c der au pr marquage des chantillons AVERTISSEMENT Le Amersham WB analyzer est un produit de classe A Dans un environnement domestique il peut produire des perturbations ra dio lectriques dans ce cas l utilisateur devra prendre les mesures appropri es MISE EN GARDE Substances dangereuses Lors de l utilisation de substances chi miques ou d agents biologiques dangereux prendre toutes les mesures de protection appropri es telles que le port de lunettes de s curit et de gants r sistant aux substances utilis es Suivre les r glementations locales et ou nationales pour une utilisation une maintenance et un d classement s rs de l appareil MISE EN GARDE Quand le pr marquage des prot ines dans les chantillons
19. 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel Actions de l op rateur Create New Experiment All Western experiments include necessary SDS PAGE steps D Easy Western Western with total protein normalization D Western with endogenous protein normalization 7 Easy SDS PAGE Create S lectionner le type d ana lyse et cliquer sur Create Dans cet exemple analyse de type Western with total protein normalization R sultat l cran principal du logiciel s ouvre affichant l tape du flux de travail EX PERIMENT amp SAMPLES Pour des informations sur la pr sentation de l cran prin cipal voir Section 3 9 Pr sen tation du logiciel en page 87 WU EXPERIMENT amp SAMPLES Gel card 14 13 5 Gel card 14 8 18 e Choisir le nombre de plaques de gel pour l analyse e S lectionner le type dela plaque de gel Voir R so lution de la s paration des prot ines en page 69 pour plus d informations propos des intervalles de s paration des pro t ines R sultat Le tableau Gel card A et les options de la zone Antibodies for Membrane A sont activ s Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 123 5 R aliser une exp rience 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Saisir les informations sur Si l chantillon et les commen Te Srei BD Aerunrms LA inrait pen ri fr a taires dans le tab
20. 50 mA GelB 50 mA PSICE Pendant l lectrophor se du Current mA t tdi ibl 60 aaa emps est disponible pour pr parer les tampons et les sa solutions pour les tapes du 20 transfert de type Western DL S Voir Section 5 7 1 Pr parer et 0 02 04 06 08 1 connecter les solutions de Time Minutes transfert en page 145 et Sec tion 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps en page 169 pour plus d informa tions 140 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 2 Ex cuter une lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Si l option Pause for sample well cleanup after 5 minutes a t s lectionn e suivre les 1 Open the elpho amp scan loader instructions ci dessous 2 Apply the Paper comb in the sample wells for 5 seconds 3 Close the elpho amp scan loader 1 Ouvrir le chargeur Press the button below to continue the electrophoresis run Pause for sample well clean up 2 Placer le peigne dans les puits d chantillons et l y laisser pendant environ 5 secondes Continue run 3 Fermerle chargeur et continuer l analyse Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 141 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 3 Proc dures ult rieures l lectrophor se et balayage de la plaque d
21. AE 87 3 Description du syst me 3 9 Pr sentation du logiciel Illustration de l cran principal du logiciel L illustration montre l cran principal du logiciel pendant une analyse de type Western Uned espenment Anveretean Wi soute 36 Amersham WE software Bosy Wester Gel cord 14 13 5 Number of gel cards al Ta JE Gel cand Gel card 14 135 Gel card Gel card B 1 File sz Control s Remate w Help w El g Hi argi Type sample D Amiant so Dommens Son PERTE El Cet up made L o tii g l ciiis 1 Blank b a aaas 5 y Ani D E taip af 2 Amenham WE MAN Markem El Sal 5 et An 5al intbio probing i 3 Sample 57 TA 4 Sample ei Print the apariment and samples informaiion E print the experiment A sampi s intonmaticen 5 Sample b piini b 5ample koa THILHERER 7 Sample Lei 5 Sampe Settwars cuersigs U oeriment c onmaion L 9 Simple we 10 Same mr LL Sampie sr 12 Ssmge La 13 Sample koa MEMBRANE z SCAHTEITEG 14 Sample me a Amernham WE MW Markere sf Elani La ENPLAN Antibodies for Membrone A Frimary antibody Por aniic Labeled secondary ab 88 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 9 Pr sentation du logiciel Aire Description 1 Barre de menu La barre de menu est constitu e de quatre menus e File Cr er ouvrir et sauvegarder des analyses Imprimer des informa
22. Computer l aide du c ble USB fourni Western unit Comparer Remarque Il est recommand de d sactiver le mode Veille de l ordinateur ou de le r gler sur 3 heures quand il est connect au Amersham WB analyzer Quand il passe en mode Veille la connexion avec l acc s distance de l instrument va tre interrompue ce qui signifie que l tat de l analyse ne sera pas mis jour jusqu ce que l ordinateur soit nouveau actif 2 Connecter l unit Elpho amp scan contact Western unit l unit Western contact Elpho and scan unit l aide du c ble Ethernet fourni Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 101 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 3 Brancher les cordons d alimentation aux connecteurs d alimentation lec trique des unit s V P ff 4 Brancher les cordons d alimentation une prise murale mise la terre Voir Section 7 1 Sp cifications du syst me en page 217 pour plus d informa tions sur la tension et la fr quence Remarque Ne pas activer l interrupteur d alimentation secteur avant que toutes les connexions ne soient faites Assembler les tours de tubulure de l unit Western Les tours de tubulure pour la tubulure de l unit Western ne sont pas pr assembl es dans le conditionnement de livraison et doivent tre assembl es par l utilisateur tape Action 1 Ouvrir la poche en plastique contenant les tours et la tubulur
23. Ins rer l lectrode de transfert de gauche l extr me gauche du r servoir de transfert et appuyer 3 Ins rer l lectrode de transfert de droite l extr me droite du r servoir de transfert et appuyer 4 Fermer le couvercle du r servoir de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 99 4 Installation 4 2 Installation du mat riel Connecter les unit s de l instrument et l ordinateur et brancher les cordons d alimentation AVERTISSEMENT Mise la terre de s curit et cordon d alimentation Le Amersham WB analyzer doit toujours tre raccord une prise lectrique mise la terre Utiliser uniquement un cordon d alimentation 3 fils fourni ou ho mologu par GE ou conforme aux exigences de la r glementation lectrique locale en vigueur AVERTISSEMENT Tension d alimentation S assurer que la tension d alimentation au niveau de la prise murale correspond au marquage de l instru ment avant de connecter le cordon d alimentation AVIS Tout ordinateur utilis avec l instrument doit tre conforme la norme IEC EN UL CSA 60950 1 ou autres r glementations en ma ti re de s curit Il doit tre install et utilis conform ment aux instructions du fabricant O 100 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 1 Connecter l ordinateur l unit Elpho amp scan contact
24. Le cas ch ant les images sont num ris es Red marrage apr s arr t d urgence ou coupure de l alimentation lectrique de l instrument Quand l alimentation lectrique revient la normale aucune des analyses qui taient en cours au moment de l arr t d urgence n est poursuivie Proc der comme suit tape Action 1 Si les cordons d alimentation secteur ont t d branch s les rebrancher sur les panneaux arri re des unit s de l instrument S assurer que les interrupteurs secteur qui se trouvent sur les les panneaux arri re des unit s de l instrument sont On I R sultat Les unit s de l instrument d marrent 2 D marrer l ordinateur et le logiciel Voir D marrer le logiciel en page 122 Quand les unit s de l instrument sont connect es les v nements du journal sont conserv s dans le journal des analyses 3 Si vous souhaitez terminer une analyse qui a t interrompue ouvrir le fichier de l analyse Ouvrir ensuite la bofte de dialogue Experiment Information et s lectionner l onglet Experiment log Dans l onglet Experiment log cocher l tape laquelle l analyse a t interrompue Supprimer les parties de l tape qui taient termin es quand l analyse a t interrompue et red marrer l tape 34 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 4 Informations sur le recyclage 2 4 Informations sur le recyclage Introduction Cette section contie
25. a t r alis une forte odeur peut provenir des traces de sulfure de di m thyle DMS et de dim thylsulfoxyde DMSO Une ventilation lo cale par aspiration peut tre n cessaire Respecter les r glementa tions locales et les instructions pour une utilisation en toute s curit 20 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit MISE EN GARDE Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protec tion lors de l utilisation et l entretien du Amersham WB analyzer MISE EN GARDE quipement de protection individuelle EPI En cas d emballage d ballage transport ou d placement du syst me porter e des chaussures de s curit de pr f rence avec une doublure en acier e des gants de travail prot geant contre les ar tes tranchantes e Lunettes de protection Installation et d placement AVERTISSEMENT Placer le Amersham WB analyzer dans une pi ce disposant d une ventilation par aspiration si du m thanol ou d autres produits chi miques n cessitant une ventilation sont utilis s AVERTISSEMENT Tension d alimentation S assurer que la tension d alimentation au niveau de la prise murale correspond au marquage de l instru ment avant de connecter le cordon d alimentation AVERTISSEMENT S assurer que le syst me est plac sur un banc uniforme et stable avec un espace appropri pour la ve
26. bandelette de tampon 72 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 3 Amersham WB buffer strip et Amersham WB buffer strip holder Illustration des supports des bandelettes de tampon L illustration ci dessous montre un support de bandelette de tampon Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 73 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 4 Amersham WB paper comb 3 6 4 Amersham WB paper comb Introduction Le peigne en papier est utilis pour nettoyer les puits d chantillonnage quand les pro t ines ont migr dans le gel pendant quelques minutes Le nettoyage du puits d chan tillonnage est recommand pour enlever l exc dent de colorant en cas d utilisation d chantillons pr marqu s Cette op ration permet de r duire le bruit de fond am liorant ainsi la d tection et la quantification des prot ines peu abondantes lt 1 ng bandel et des prot ines faible poids mol culaire M lt 40 000 Le nettoyage du puits d chantillonnage am liorera galement la r solution de la bande pour les chantillons non marqu s concentration importante de prot ines ou des vo lumes importants d chantillons Pour plus d informations sur l utilisation du peigne en papier voir D marrer et surveiller une lectrophor se et le balayage du gel en page 139 Illustration du p
27. de membrane dont les plaques PVDF Plateau des plaques Pour refroidir les plaques de gel et les maintenir plat pendant le balayage Vitre de protection Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 43 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 Unit Western Introduction Unit est utilis e pour Western e transf rer les prot ines s par es dans le gel vers la membrane e sonder les prot ines sur la membrane avec les anticorps primaires puis les anticorps secondaires conjugu s un CyDye e s cher les plaques PVDF avant balayage dans l unit Elpho amp scan Cette section comporte une pr sentation de l unit Western Dans cette section 44 Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 3 3 1 Vue d ensemble 45 3 3 2 Compartiments de l unit Western 49 3 3 3 Circuits des liquides 54 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 1 Vue d ensemble 3 3 1 Vue d ensemble Introduction Cette section comporte une pr sentation des panneaux avant et arri re de l unit Western Illustration de l unit Western L illustration ci dessous montre les principales parties de l unit Western 6 Description il Couvercle du compartiment des anticorps 2 Appuyer sur cette zone pour ouvrir le couvercle du compartiment des an ticorps 3 Panneau de l instrument pour les voyan
28. de solution m re Support de colonne int gr plateau de collection de d chets et porte tube Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 65 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se Introduction Les accessoires et consommables suivants sont indispensables l lectrophor se des prot ines Amersham WB buffer strip Amersham WB buffer strip holder Amersham WB molecular weight markers Amersham WB gel card Amersham WB paper comb si le puits de l chantillon doit tre nettoy Amersham WB loading buffer voir Section 3 5 Consommable pr marquage en page 64 pour des informations propos du tampon de chargement Dans cette section Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 67 3 6 2 Amersham WB gel card 69 3 6 3 Amersham WB buffer strip et Amersham WB buffer strip holder 72 3 6 4 Amersham WB paper comb 74 66 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Introduction Amersham WB Les molecular weight markers sont des m langes de neuf prot ines na tives et recombinantes M de 10 000 225 000 marqu es avec Cy3 et Cy5 pour la d terminatio
29. de marquage Le tableau ci dessous r pertorie les contenus des consommables de pr marquage Consommable de pr marquage Contenu Quantit Amersham WB Cy5 0 25 mg ml environ 5 flacons bouchons bleus 250 pmol ull de Cy5 dans du 35 de solution color e Cy5 par DMSO fiole suffisante pour deux plaques de gel Amersham WB labeling buffer Tampon base de Tris 5 flacons bouchons noirs tampon de marquage contenant du SDS pH 8 7 0 7 ml de solution tampon de 25 C marquage par fiole suffisante pour deux plaques de gel 64 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 5 Consommable pr marquage Consommable de pr marquage Contenu Quantit Amersham WB loading buffer Tris Cl 50 mM Orange G 5 flacons bouchons orange tampon de marquage 0 25 p v SDS 4 Lysine 0 7 ml de solution de tampon par 0 5 mM fiole suffisante pour deux plaques de gel Consommable pour pr paration d chantillon Le tableau ci dessous d crit le Amersham WB MiniTrap kit Consommable pour pr paration Fonction Quantit d chantillon Amersham WB MiniTrap kit Ce kit est pr vu pour le net 30 colonnes jetables pr gar toyage pratique et rapide nies PD MiniTrap G 25 conte des chantillons de prot ines nant du milieu Sephadex G gt 5 000 M contenant des 25 substances d interf rence par ex l imidazole 1 flacon de 10x Amersham WB labeling buffer 14 ml
30. doit toujours tre facilement accessible Le cordon d alimentation dot d une prise doit toujours tre facile d brancher MISE EN GARDE quipement de protection individuelle EPI En cas d emballage d ballage transport ou d placement du syst me porter e des chaussures de s curit de pr f rence avec une doublure en acier e des gants de travail prot geant contre les ar tes tranchantes e Lunettes de protection MISE EN GARDE Objet lourd Deux personnes sont n cessaires pour soulever l ins trument en toute s curit Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 95 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 1 96 Soulever les unit s de l instrument la main en utilisant l espace laiss libre entre les unit s S assurer que les unit s reposent sur une paillasse stable horizontale Soulever la premi re unit de l instrument Prendre une prise au dessous et sur le c t de l instrument dans les cavit s de la mousse La placer sur la paillasse Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 4 Pour permettre une bonne ventilation l unit Elpho amp scan doit tre plac e sur la gauche et l unit Western doit tre droite Laisser au moins un espace de 10 cm derri re les unit s de l instrument pour la ventilation Ne pas bloquer l acc s l interrupteur et a
31. l lectrophor se et balayage de la plaque de gel Dans cette section Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 5 6 1 Avant l lectrophor se 132 5 6 2 Ex cuter une lectrophor se 139 5 6 3 Proc dures ult rieures l lectrophor se et balayage de la 142 plaque de gel Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 131 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se 5 6 1 Avant l lectrophor se Introduction Ce chapitre d crit la modalit de chargement des bandes tampon des plaques de gel de la pr paration Amersham WB molecular weight markers et des chantillons pour les analyses par lectrophor se Pr parations avant le d marrage de l lectrophor se AVERTISSEMENT Explosion de la vitre Ne pas faire fonctionner le syst me si la vitre du couvercle d tanch it de l appareil Elpho amp scan est ray e o cass e Mettre l instrument hors tension d brancher le cordon d alimentation et contacter un technicien de maintenance agr MISE EN GARDE Parties mobiles Veiller lors de l ouverture de la fermeture du chargeur ce que vos doigts ou vos v tements ne soient pas coinc s quand le chargeur se d place Ne jamais placer de bouteilles ou de flacons devant l appareil Elpho amp scan Ils sont susceptibles de tomber quand le chargeur est ou vert 132 Amersham WB sy
32. le comparti ment des anticorps Remarque Toujours ins rer quatre nouveaux tubes vides 3 Essuyer la tubulure de sondage P Block P Wash et P Final Wash l aide d un tissu humide et d placer la tubulure vers le flacon d eau ultra pure contenant la tubulure P Water Dans la bo te de dialogue du logiciel v rifier la quantit d eau ultra pure n cessaire pour le nettoyage s assurer que le flacon contient au moins cette quantit d eau 4 Cliquer sur Start clean dans la bo te de dialogue Probing completed clean probing system Le nettoyage d marre et dure environ 13 minutes Remarque Le s chage des membranes peut d marrer pendant le nettoyage du circuit de sondage z Quand le nettoyage est termin jeter la solution dans le flacon contenant de l eau et jeter l eau dans les tubes de solution d anticorps Placer la tubulure dans un flacon vide Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 181 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 4 Ex cuter le s chage 5 8 4 Ex cuter le s chage Introduction Cette section d crit comment r aliser le s chage des plaques PDVF Le s chage de la plaque PVDF va g n rer un bruit de fond faible et r gulier ainsi que des signaux plus forts Ex cuter le s chage tape Illustration de l tape Actions de l op rateur S assurer que les supports de s chage avec lalles plaquel s PVDF ont t plac s dans les positions corr
33. le s chage Introduction Cette section d crit comment proc der au sondage et au s chage Dans cette section Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps 169 5 8 2 Ex cuter le sondage 173 5 8 3 Proc dures apr s le sondage 178 5 8 4 Ex cuter le s chage 182 168 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d an ticorps Introduction Cette section d crit la fa on de pr parer et de connecter les tampons et les solutions pour l ex cution du sondage Les solutions de sondage et les solutions d anticorps peuvent tre pr par es pendant l ex cution du transfert et doivent tre connect es avant le d marrage de l ex cution du sondage Formules pour solutions de sondage et solutions d anticorps Solution Formules Quanti t analyse Solution de blocage Le syst me est compatible avec la plupart des solu tions de blocage par exemple l agent ECL PRIME 2 dans le PBS T TweenT M 20 0 1 dans 1xPBS ou l albumine s rique bovine 5 dans le PBS Utiliser des solutions de blocage ayant une faible auto fluorescence voir des recommandations dans le ma nuel Western Blotting Principles and Methods Tam
34. offre une pr sentation des deux principaux types d analyses qui peuvent tre r alis s l aide du Amersham WB system I d crit aussi le flux de travail d une analyse de type Western with total protein normalization Pr cautions d emploi MISE EN GARDE Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protec tion lors de l utilisation et l entretien du Amersham WB analyzer Dans ce chapitre Ce chapitre contient les sections suivantes Section Voir page 5 1 Vue d ensemble 116 5 2 D marrer le Amersham WB analyzer 120 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel 122 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons 126 5 5 Pr parer le Amersham WB molecular weight markers 130 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 131 5 7 R aliser le transfert 144 5 8 R aliser le sondage et le s chage 168 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats 184 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 115 5 R aliser une exp rience 5 1 Vue d ensemble 51 Vue d ensemble Introduction Cette section donne une pr sentation des deux principaux types d analyses qui peuvent tre r alis s e analyses par lectrophor se e analyses de type Western comportant une lectrophor se des prot ines Cette section d crit galement le flux de travail d une analyse typique d crite dans les sections suivantes illustr par une analyse de type Western with total protein norma lization
35. orifices de guidage aident au placement correct de la plaque dans le support de transfert la chambre de sondage et le chargeur Elpho amp scan Surface permettant l criture de vos propres annotations Remarque Toujours utiliser un crayon lors de l criture d une annotation L annotation peut tre galement saisie dans le logiciel Poign es de la plaque Surface d absorption PDVF emballage unique de la plaque PDVF plaque avec papiers de protection tiquette contenant le code produit le num ro de lot le num ro d identifi cation et la balise matricielle de donn es int grant le code produit le nu m ro de lot et le num ro d identification Amersham WB transfer paper Les papiers de transfert sont utilis s lors de la pr paration du sandwich de transfert L illustration ci dessous montre un papier de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 79 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert Amersham WB sponge Deux ponges sont utilis es lors de la pr paration du sandwich de transfert Les ponges doivent tre remplac es apr s chaque analyse L illustration ci dessous montre une ponge 80 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7
36. quand l instrument n a pas t utilis pendant quelques jours Intervalle Annuellement Nettoyage de maintenance du circuit de transfert Voir Section 6 2 1 Nettoyage hebdoma daire des circuits de transfert et de son dage en page 199 Nettoyage de maintenance du circuit de sondage Voir Section 6 2 1 Nettoyage hebdoma daire des circuits de transfert et de son dage en page 199 Inspecter et remplacer en cas de dom mages les e pompes e tubulure e filtre air e filtres d entr e Inspecter et serrer les connecteurs de la tubulure Action de maintenance Voir Section 6 2 2 Proc dures de rempla cement en page 203 pour plus d informa tions sur comment remplacer les t tes de pompes le filtre air et le filtre d entr e Contacter le d partement Entretien si vous devez remplacer la tubulure Instructions 196 Remplacer le filtre air du module du dispositif de s chage Le filtre air peut devoir tre remplac plus souvent si l environnement externe est plus difficile qu un environnement de laboratoire normal en ce qui concerne la pr sence de poussi re dans l air Voir Remplacer le filtre air en page 204 Remplacer la t te de la pompe de transfert Voir Remplacer la t te de la pompe de sondage ou de transfert en page 207 Remplacer la t te de la pompe de son dage Voir Remplacer la t te de la pompe de sondage ou de transfert en page 2
37. que l quipement ne subisse des dommages d brancher toujours les c bles avant de d placer un instrument Instructions relatives au levage tape Action 1 D brancher tous les cordons et les c bles des unit s de l instrument et retirer tous les flacons pr sents sur les unit s 2 La pr sence de deux personnes est n cessaire Pour soulever une unit la saisir deux mains de chaque c t et soulever Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 215 7 Informations de r f rence 7 Informations de r f rence propos de ce chapitre Ce chapitre r capitule les sp cifications techniques du Amersham WB analyzer Ce chapitre comporte galement un guide de r sistance chimique et un rapport de d con tamination qui doit tre utilis pour enregistrer les d tails de la d contamination avant un entretien Dans ce chapitre Ce chapitre comporte les sections suivantes Section Voir page 7 1 Sp cifications du syst me 217 7 2 Guide de r sistance chimique 222 7 3 Formulaire de d claration de sant et de s curit 224 7 4 Traductions des accessoires et des consommables 226 216 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 7 1 Sp cifications du syst me Introduction 7 Informations de r f rence 7 1 Sp cifications du syst me Cette section r pertorie les donn es de sp cification du syst me Amersham WB analyzer Plages environnementales Param tre Plag
38. r sultats Exp riences de type Western Western avec normalisation totale des prot ines Pr parer et connecter les solutions de transfert Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 1 Vue d ensemble Le tableau ci dessous r capitule les sections dans lesquelles les tapes sont d crites D marrer l instrument Section 5 2 D marrer le Amersham WB analyzer en page 120 Configurer une analyse dans le logiciel Section 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel en page 122 R aliser le pr marquage Section 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons en page 126 Ex cuter une lectropho r se et un balayage Section 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines en page 131 Pr parer et connecter les solutions de transfert Section 5 7 1 Pr parer et connecter les solutions de trans fert en page 145 e Pr parer le sand wich de transfert e Ex cuter le transfert Section 5 7 R aliser le transfert en page 144 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps Section 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps en page 169 R aliser le sondage etle s chage Section 5 8 R aliser le sondage et le s chage en page 168 Balayer la membrane et voir les r sultats Section 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats
39. tampon de transfert et l eau ultra pure utilis e pour le nettoyage du r servoir de transfert comme suit tape Action 1 Depuis la tour de tubulure de gauche placer la tubulure marqu e T Buffer dans un flacon de 1 000 ml de tampon de transfert 2 Placer la tubulure marqu e T Water dans un flacon de 1 000 ml d eau ultra pure 146 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Mat riels requis Les consommables et accessoires suivants sont n cessaires lors de la pr paration d un sandwich de transfert 1 support de transfert 1 plaque de gel qui a t analys e 1 plaque PVDF 2 ponges 2 papiers de transfert 1 r cipient avec du tampon de transfert pour mouiller les papiers de transfert 1 r cipient avec au moins 96 d thanol pour pr alablement mouiller la plaque PVDF 1 r cipient avec du tampon de transfert pour quilibrer la plaque PVDF Remarque Certains thanols ont des propri t s auto fluorescentes qui conduisant un bruit de fond lev de la membrane S assurer que l thanol utilis pendant le transfert n est pas auto fluorescent Pr cautions d emploi AVERTISSEMENT Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protec tion pendant la manipulation des plaques de gel des plaques PVDF et des autres consommables fourn
40. transfert dans le r servoir S assurer que la fl che blanche pointe vers la fl che de l instrument vers vous Fermer le couvercle du r servoir de transfert 162 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 3 Ex cuter le transfert D marrer et surveiller le transfert MISE EN GARDE Risque de choc lectrique Toujours arr ter le transfert en cours avant d essuyer le liquide sur l instrument ou la paillasse tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Dans l cran principal du logiciel cliquer sur Ga l tape du flux de travail TRANSFER TRANSFER Gel Cords amp Membrones Utiliser les param tres par d faut pour le Transfer Protocol comme indiqu dans la Membrane Position A J Position B uedi m_m mMm ID Enter ID LM Enter ID capture a ecran anM Note Write note Write note Gel card ID Note J nd Transfer Protocol Duration 30 15 180 minutes Voltage limit 100 10 100V Default Solutions amp Volumes Transfer buffer Cleaning Description Tris Glycine 20 Ethanol Water Total volume 1000 ml 1000 mi Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 163 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 3 Ex cuter le transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Cliquer sur Start dans la zone Transfer Transfer
41. vue Le Amersham WB system est un syst me d lectrophor se des prot ines et de transfert de type Western qui comporte le balayage des plaques de gel et de PVDF Les prot ines peuvent tre pr marqu es avec du Cy5 et peuvent tre directement d tect es dans le gel apr s lectrophor se Lors des transferts de type Western les prot ines non marqu es ou pr marqu es avec du Cy5 sont transf r es vers les membranes et les prot ines cibles peuvent tre d tect es l aide d anticorps secondaires conjugu s Cy3 et ou Cy5 La d tection bas e sur la fluorescence conf re une sensibilit lev e une gamme dynamique tendue et permet une analyse multiplex e de la m me membrane de transfert Western Amersham WB system est destin des fins de recherche uniquement et ne doit pas tre utilis dans le cadre de proc dures cliniques ou des fins diagnostiques Conditions pr alables Afin d utiliser le syst me de la fa on pr vue les conditions pr alables suivantes doivent tre remplies e Vous devez disposer d une compr hension g n rale du fonctionnement d un PC et de Microsoft Windows e Vous devez conna tre les concepts de l lectrophor se et du transfert de type Western 8 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 2 Informations importantes pour l utilisateur e L instrument et le logiciel doivent tre install s conform ment aux instructions d Chapitre 4 Installation en pag
42. 07 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 1 Programme de maintenance Intervalle Action de maintenance Instructions Lorsque cela est n cessaire Nettoyer le compartiment de s chage Nettoyer le compartiment de s chage de toute poussi re o particule l aide d un tissu non pelucheux imbib d eau ultra pure Laisser le compartiment s cher avant utilisation Remplacer les lectrodes de transfert Voir Remplacer les lectrodes de trans fert en page 210 Remplacer les supports des bandelettes de tampon Voir Amersham WB system User Manual pour des informations relatives la commande Remplacer le fusible secteur Voir Remplacer le fusible secteur en page 213 Remplacer le cordon d alimentation endommag Voir Pr cautions au d but de ce cha pitre Remplacer le filtre dans le r servoir de transfert Inspecter le filtre et s il est sale ou en dommadg le remplacer Voir Remplacer le filtre du r servoir de transfert en page 212 Remplacer les filtres d entr e Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Voir Remplacer les filtres d entr e en page 213 197 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance Introduction Cette section d crit la maintenance qui doit tre r alis e sur le Amersham WB analyzer Dans cette section Cette section comporte les sou
43. 2 Amersham WB gel card Illustration de la face avant d une plaque de gal L illustration ci dessous montre la plaque de gel avec la face avant orient e vers le haut mo Jus ji N p AL 11 y 4 Lot z00250t 7 6 Description Surface permettant l criture de vos propres annotations Remarque Toujours utiliser un crayon lors de l criture d une annotation L annotation peut tre galement saisie dans le logiciel tiquette portant le type de la plaque de gel 3 Couvercle du puits de l chantillon qui doit tre retir quand le couvercle d tanch it de l unit Elpho amp scan a t ferm avant l application des chantillons 4 Poign es de la plaque de gel permettant de faciliter la manipulation du gel quand il a t retir de son support pour un transfert de type Western 70 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 2 Amersham WB gel card Description Orifices de guidage pour le placement correct des plaques de gel dans le chargeur Elpho amp scan et le support de transfert tiquette portant la balise matricielle Donn es le Num ro de lot et l ID Illustration de la face arri re d un plaque de gel L illustration ci dessous montre la plaque de gel avec la face arri re orient e vers le haut Description Films de protection qui sont retir s avant l
44. 29 0214 77 AE 107 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 3 Placer les guides du dispositif de s chage de la membrane dans les deux fentes 108 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 4 Conserver les supports de s chage dans le compartiment de s chage Installer un lecteur de balises matricielles en option tape Action 1 Connecter le c ble USB au lecteur de balises matricielles 2 Connecter le c ble USB l ordinateur 3 Programmer et v rifier le fonctionnement du lecteur de balises matricielles comme indiqu dans son manuel d utilisation Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 109 4 Installation 4 3 Installation du logiciel 4 3 Installation du logiciel Installer le Amersham WB software 110 Pour installer le logiciel sur un ordinateur sous Windows 7 Professional Remarque Il est recommand d installer toutes les mises jour de Windows en at tente avant d installer le logiciel et de bien respecter les instructions Il est recommand de proc der la totalit de la proc dure d installation sans interruptions apr s avoir cliqu sur Install tape Action 1 Ins rer le DVD du logiciel dans l ordinateur Quand la premi re bo te de dialogue de l assistant s affiche cliquer sur Install pour installer les pr requis du logiciel Amersham WB software Instal
45. 3 3 2 Compartiments de l unit Western Introduction Cette section d crits les diff rents compartiments de l unit Western avec les couvercles ouverts Illustration du r servoir de transfert Unit L illustration ci dessous montre le r servoir de transfert de l unit Western Pi ce Description 1 Chemins de guidage du sandwich 2 Voyant de position A et de position B Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 49 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 2 Compartiments de l unit Western Description lectrode de transfert droite Filtre du r servoir de transfert lectrode de transfert gauche Illustration du compartiment de sondage Unit L illustration ci dessous montre le compartiment de sondage de l unit Western 1 2 3 4 5 Pi ce Description 1 Chambre de sondage 50 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 2 Compartiments de l unit Western Description Couvercle de la chambre de sondage Voyant de position A et de position B Goubpilles de guidage pour la plaque PVDF rep r es par des cercles orange Couvercle du compartiment de sondage Trappe du couvercle de la chambre de sondage Illustration du compartiment de s chage Unit L illustration ci dessous montre le compartiment de s chage de l unit Western 2 mb A B a DRYING Pi ce Description
46. 5 1327 US 2010 14 General Electric Company Tous droits r serv s Premi re dition Avril2010 DOC1149542 28 9800 26 AC 05 2014 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 7 Informations de r f rence 7 3 Formulaire de d claration de sant et de s curit Retour du produit ou entretien Un rapport Health amp Safety Declaration Form for Product Return or Servicing comme indiqu dans l exemple ci dessous doit tre utilis pour enregistrer les d tails de la d contamination avant un retour ou un entretien du produit D claration de sant et s curit pour le retour ou l entretien d un produit Num ro d autorisation et ou de retour Billet Demande de service Afin de nous assurer de la protection et de la s curit mutuelles du personnel de GE de nos clients du personnel de transport et de notre environnement tous les quipements doivent tre propres et exempts de tout contaminant dangereux avant d tre exp di s GE Pour viter tout retard dans le traitement de votre quipement veuillez remplir la liste de v rification suivante et l inclure votre retour 1 Veuillez noter que les articles NE seront PAS accept s aux fins d entretien ou titre de retour sans ce formulaire 2 Tout quipement n tant pas suffisamment nettoy avant son retour risque d entra ner des retards dans l entretien ce qui pourrait faire l objet de frais suppl mentaires 3 Une contamination visi
47. 9 Pr parer et connecter les solutions 145 Principe du base du proces sus de transfert 56 Remplacer la t te de la pompe de transfert 207 Remplacer le filtre du r ser voir de transfert 212 Remplacer les lectrodes de transfert 210 V V rifier les connexions de l ins trument 114 Voir les r sultats 187 Voyants 39 W Western Compartiment d entre tien 53 Compartiment des anti corps 52 Compartiment de s chage 51 Compartiment de son dage 50 Pr sentation 117 R servoir de transfert 49 Western Description Analyse 116 WesternL unit 44 WesternProtocole de pr mar quage 129 231 Page intentionnellement laiss e en blanc Page intentionnellement laiss e en blanc Pour les coordonn es des bureaux locaux consulter www gelifesciences com contact GE Healthcare UK Limited Amersham Place Little Chalfont Buckinghamshire HP7 9NA Royaume Uni www gelifesciences com Les monogrammes GE et GE sont des marques de commerce de General Electric Company Amersham Cy CyDye MiniTrap et Sephadex sont des marques de commerce de GE Healthcare ou de l une de ses filiales Microsoft et Windows sont des marques commerciales d pos es de Microsoft Corporation Tween est une marque de commerce de Unigema Americas LLC CyDye ce produit est fabriqu sous licence exclusive de Carnegie Mellon Univer sity et il est prot g par le brevets des tats Unis n 5 569 587 et 5 627 027 L a
48. 9 0214 77 AE Index A Adaptateur de membrane Description 84 Nettoyer 188 194 Placer sur le plateau des plaques 185 Analyse Analyses par lectropho r se 116 Saisir les informations sur l anticorps 125 Saisir les informations sur l chantillon 124 Analyse par lectrophor se Description 116 Pr sentation 117 Analyses de type WesternLors des analyses de type 116 Anticorps secondaire Conservation des anticorps lyophilis s 63 Conservation des anticorps reconstitu s 63 Description 81 Anticorps secondaires CyDyes conjugu 81 AVIS de s curit 9 B Balayage Plaque PVDF 184 Pr parations avant 184 Proc dures apr s 188 Bandelette de tampon Description 72 Placer dans le support de la bandelette de tampon 133 C CE conformit 10 Charger les chantillons 138 Circuit Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Index du liquide de sondage 57 du liquide de transfert 55 Commander des consommables 61 Compartiment d entretien Description 53 Remplacer le filtre air 204 Remplacer les t tes des pompes 207 Compartiment des anticorps Connecter les solutions d anticorps 171 Description 52 Compartiment de s chage Description 51 Nettoyer 197 Compartiment de sondage Description 50 Conformit FCC 12 Connecter les unit s de l instru ment 101 Conservation des consommables 61 Conventions typographiques 7 Cr er une analyse 123 Cy
49. Amersham WB system Mode d emploi Traduit de l anglais Page intentionnellement laiss e en blanc Table des mati res Table des mati res 1 DOGU TOT ee a es oo immo 5 1 1 propos de ce mode d emploi rie l 1 2 Informations importantes pour l utilisateur sssssssssssssssssssssssssssssssrssrssrrrsrrisrrerrrrrrerrssessesssssss 8 L3 IniommatonsregdiementaireS sesser a e 10 1 4 Amersham WB Documentation du system ssssssssiesereiierrirrrisrrrrrssssssrssssssssssssssssssssssssssss 14 Consignes de securite in ae med na ann 17 2 1 Consignes de s curit e mune 18 A 27 23 Proceduro OC ea EETA 33 24 Intormoti ns surle COR seot reei Aaa aai anis 35 Description du Systeme Li assistent eatesteiaren anse 36 2 Lu Pr SSR EG HON de SR ES ET 37 UM ES OS SCO E 40 CON E E EEO AE 44 3 3 1 vue d enS ENIO E a E EAER AEAEE 45 3 3 2 Compartiments de l unit Western 49 3 3 3 CCS A 54 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables eerrsrrssrrssrsrsssssssssssssssss 59 35 Consommable Dr MOrAUQQ ee tn 64 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se s esesssesssrsssssssssssssssssssssssssssssss 66 36 1 Amersham WB molecular weight markers u 67 3 6 2 Amer nOn WB CO R S 69 3 6 3 Amersham WB buffer strip et Amersham WB buffer strip holder ssss 1111221200 72 3 6 4 Amersham WB paper COMO saienisi ianen ai N REE EEEN 74 3 7 Accessoires et consommab
50. Analyses par lectrophor se Lors des analyses par lectrophor se les chantillons sont pr marqu s l aide du colo rant fluorescent Cy5 avant l lectrophor se Ceci permet une d tection directe des pro t ines pr marqu es dans l chantillon ce qui limine ainsi la n cessit d une coloration post rieure du gel Au cours de l tape valuation qui suit le balayage du gel une analyse automatique des bandes prot iques est r alis e dont les r sultats sont pr sent s dans le logiciel Analyses de type Western 116 Analyse de type les prot ines non marqu es ou pr marqu es par le Cy5 sont s par es sur le gel pendant l lectrophor seWestern puis transf r es du gel vers une membrane La membrane est sond e avec des anticorps primaires et des anticorps secondaires conjugu s aux colorants Cy3 ou Cy5 pour la d tection des prot ines cibles Pour la d tection des prot ines totales l chantillon est pr marqu par le Cy5 Apr s le sondage la membrane est s ch e puis balay e Au cours de l tape valuation une analyse auto matique des bandes prot iques est r alis e dont les r sultats sont pr sent s dans le logiciel Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 1 Vue d ensemble Pr sentation du flux de travail g n ral Analyse de type L illustration ci dessous montre les principales tapes d une analyse par lectrophor se et d une analyse de type Wes
51. B system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 5 Faire tourner la t te de la pompe en sens inverse des aiguilles d une montre 6 Soulever la t te de la pompe hors du compartiment d entretien Remarque Lors du retrait de la t te prendre soin de ne pas endommager ou tordre au cune des tubulures de l unit Western Si une tubulure est endommag e ou tordue elle devra tre remplac e par une neuve Si vous avez besoin d aide contacter le d partement Entretien T D baller une nouvelle t te de pompe Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 209 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 8 Placer la nouvelle t te de pompe dans la position correcte et la faire tourner dans le sens des aiguilles d une montre Remarque S assurer que la roue correspondante de la t te de pompe est dans la position correcte pour s adapter l arbre de commande du moteur de la pompe 9 Verrouiller le loquet pour maintenir la t te de pompe en position correcte 10 Connecter la tubulure de la pompe sur la droite au connecteur droit de la t te de la pompe 11 Connecter la tubulure de la pompe sur la gauche au connecteur gauche de la t te de la pompe 12 Fermer le couvercle du compartiment d entretien Remplacer les lectrodes de transfert 210
52. Dye Longueur d onde d mis sion 81 Longueur d onde d excita tion 81 D D contamination 35 D marrer et surveiller une lectrophor se 139 Documentation Fichiers de donn es et notes d application 16 Manuel d utilisation 14 Manuel des m thodes 15 E lectrodes de transfert 221 Index 228 Remplacer les lectrodes de transfert 210 lectrophor se Charger les chantil lons 138 Placer les bandelettes de tampon dans leurs sup ports 133 Placer les supports de ban delettes de tampon Unit El pho amp scan 134 Pr parer 133 Retirer la plaque de gel 142 limination instructions g n rales 35 limination des composants lectriques 35 Elpho amp scan 42 Fermer 138 Nettoyer 143 Ouvrir 133 Elpho amp scan Unit 40 ponge Description 80 Placer dans le support de transfert 153 Exigences relatives l es pace 93 Exigences relatives l ordina teur 94 Exigences relatives la salle 92 F Filtre air Remplacer le filtre air 204 Filtre d entr e Attacher les filtres d entr e la tubulure 105 Remplacer le filtre d en tr e 213 Support de filtre d entr e 85 Filtre du r servoir de transfert Remplacer le filtre du r ser voir de transfert 212 Formulaire de d claration rela tif la sant et la s curi t 224 205 Formules Solution de sondage 169 Solutions d anticorps 169 Solutions de transfert 145 Fusible secteur Remplacer
53. Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 tats Unis 2010 14 General Electric Company Tous droits r serv s Premi re dition avril 2010 DOC1149544 28 9800 27 AC 05 2014 ou le service la client le Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 225 7 Informations de r f rence 7 4 Traductions des accessoires et des consommables 4 226 Nom du produit en Anglais Amersham WB labeling buffer Traductions des accessoires et des consommables Traduction tampon de marquage Amersham WB loading buffer tampon de chargement Amersham WB molecular weight markers marqueurs des masse mol culaire Amersham WB gel card 14 8 18 plaque de gel Amersham WB gel card 14 13 5 Amersham WB buffer strip plaque de gel bandelette de tampon Amersham WB PVDF card plaque PVDF Amersham WB transfer paper papier de transfert Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 Cy3 Cy5 de ch vre anti lapin Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 Cy3 Cy5 de ch vre anti souris Amersham WB paper comb peigne en papier Amersham WB buffer strip holder support de bandelette de tampon Amersham WB transfer holder support de transfert Amersham WB sponge ponge Amersham WB membrane adapter adaptateur de membrane Amersham WB drying holder support de s chage Amersham WB system Mode d emploi 2
54. Ne pas toucher la surface de transfert marqu e par un carr rouge avec vos doigts Maintenir la plaque PVDF avec les poign es Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 151 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Action 5 En option Saisir les informations de la plaque PVDF dans le logiciel e S lectionner l tape du flux de travail TRANSFER dans le logiciel e Dans la zone Gel Cards amp Membranes placer le curseur dans le champ ID appropri e Saisir manuellement le num ro d identification ou balayer la balise ma tricielle sur l tiquette de l emballage unique de la plaque PVDF Amersham WB PVDF card 1 piece i 29022566 Lotno 00115381 identi FBTEMNE CN Oscaria que CUVE CODETS DETTE LSE e Pour saisir une remarque propos de la membrane placer le curseur dans le champ Note et saisir la remarque Astuce Saisir le num ro du lot II n est pas inclus dans la matrice de donn es mais il est disponible sur l tiquette de la bo te des plaques PVDF Gel Cards amp Membranes Membrane Position A Position B ID Note 6 Attraper la poign e de la plaque PVDF et mouiller pr alablement la plaque d thanol en la laissant dans le r cipient plein d thanol pendant environ 20 secondes 7 Transf rer la plaque PVDF dans le r cipient du tampon de transfert de la plaque PVDF et la laisser s quilibrer pendant au moins 5 minutes
55. SE EN GARDE Quand le pr marquage des prot ines dans les chantillons a t r alis une forte odeur peut provenir des traces de sulfure de di m thyle DMS et de dim thylsulfoxyde DMSO Une ventilation lo cale par aspiration peut tre n cessaire Respecter les r glementa tions locales et les instructions pour une utilisation en toute s curit Remarque Pour obtenir des efficacit s comparables en mati re de marquage des param tres importants comme le pH le volume de r action la temp rature et les sels des tampons ne doivent pas varier 126 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons Les efficacit s en mati re de marquage vont galement varier d une prot ine une autre Pr requis pour le pr marquage des chantillons l aide du protocole de pr marquage Western Tampons de lyse compatibles Les tampons de lyse courants base de Tris pH de 7 9 avec divers d tergents et sels sont compatibles avec le pr marquage des chantillons de cellules tissus par exemple e Tampon d extraction des prot ines de mammif res GE e ampon RIPA pH de l chantillon Le pH de l chantillon doit tre compris entre 7 et 9 Un pH optimal n est pas crucial pour les lysats cellulaires et les extraits tissulaires car une sensibilit lev e pour le signal des prot ines totales n est pas n cessaire Le sign
56. SSEMENT D contaminer l appareil avant l entretien pour s assurer que tous les r sidus dangereux ont t limin s D classement AVERTISSEMENT D contaminer l appareil avant le d classement pour s assurer que tous les r sidus dangereux ont t limin s 26 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes 2 2 tiquettes Introduction Cette section d crit les tiquettes relatives la s curit et aux substances dangereuses appos es sur le Amersham WB analyzer Pour plus d informations sur le marquage de l quipement informatique se r f rer aux instructions du fabricant Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 27 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes Emplacement des tiquettes sur le Amersham WB analyzer L illustration ci dessous montre l emplacement des tiquettes sur l unit Elpho amp scan et l unit Western 28 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes Description Computer Western unit tiquette du produit Amersham WB elpho amp scan unit tiquette de s curit concernant la lumi re laser tiquette du produit Amersham WB western unit Elpho amp scan unit Only for service Elpho amp scan tiquette de l unit L illustration ci dessous montre un exemple d tiquette de pro
57. V cleanup after 5 minutes Current limit 50 20 50 mA si le peigne en papier Pause for sample well cleanup after 5 minutes doit tre utilis Voir le Stop electrophoresis on front detection Section 3 6 Accessoires et Estimated time 42 minutes consommables pour D Stop electrophoresis on time Default l lectrophor se en page 66 pour plus d infor mations La dur e de la mise en pause est calcu l e partir des para m tres de tension et d intensit lectrique La valeur par d faut est de 5 minutes Gel Scanning Protocol M Scan gel automatically after electrophoresis Scanning sensitivity Automatic sensitivity O Manual sensitivity e En option Saisir une re marque propos des plaques de gel dans les champs Note Default Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 139 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 2 Ex cuter une lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Cliquer sur Start dans la Electrophoresis ___ zone Electrophoresis Start Ready for Electrophoresis R sultat L ex cution de l lectrophor se d marre La progression de l analyse est affich e sous forme de Electrophoresis courbes indiquant l intensit la tension et l effet de la Elapsed time Electrophoresis in progress 37 a e analyse coul est gale ment affich Voltage Power Temp Gel A
58. a livraison e Amersham WB software Dans ce chapitre 36 Ce chapitre comporte les sections suivantes Section Voir page 3 1 Pr sentation de l instrument ri 3 2 Unit Elpho amp scan 40 3 3 Unit Western 44 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables 59 3 5 Consommable pr marquage 64 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 66 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de 15 type Western 3 8 Autres accessoires 85 3 9 Pr sentation du logiciel 87 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 1 Pr sentation de l instrument 3 1 Pr sentation de l instrument Introduction Cette section comporte une pr sentation du Amersham WB analyzer Le Amersham WB analyzer est constitu de deux unit s e Amersham WB Unit elpho amp scan e Amersham WB Unit western Les unit s de l instrument sont contr l es par le PC l aide de Amersham WB software Remarque Les unit s de l instrument doivent toujours tre connect es les unes aux autres pendant une analyse Les deux unit s doivent tre sous tension quand une analyse est ex cut e dans l unit Western Interrupteurs de s curit Pr sence de la haute tension et de deux lasers l int rieur de l unit Elpho amp scan L unit dispose d interrupteurs de s curit doubles qui coupent l alimentation du convertisseur haute tension et des lasers quand le chargeur est ouvert P
59. a m me membrane de transfert Western L analyse multiplex e des prot ines totales pr marqu es avec le Cy5 et de la cible d tect e avec les anticorps secondaires conjugu s marqu s par le Cy3 permet la norma lisation des signaux cibles en utilisant les prot ines totales de chaque canal Le logiciel Amersham WB software int gr au syst me facile utiliser permet le contr le des diff rentes tapes du flux de travail ainsi que l valuation automatique ou manuelle de vos r sultats La liste traduite de noms des accessoires et des consommables se trouve Section 7 4 Traductions des accessoires et des consommables en page 226 Dans ce chapitre Ce chapitre contient les sections suivantes Section Voir page 1 1 propos de ce mode d emploi 7 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 1 Introduction Section Voir page 1 2 Informations importantes pour l utilisateur 8 1 3 Informations r glementaires 10 1 4 Amersham WB Documentation du system 14 6 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 1 propos de ce mode d emploi 1 1 propos de ce mode d emploi Objectif de ce manuel Le Mode d emploi vous fournit les instructions n cessaires l installation au fonctionne ment et l entretien du Amersham WB system en toute s curit Port e de ce manuel Le Mode d emploi comporte les informations suivantes des informations en mati re de r glementation e
60. al des prot ines totales dans une analyse de type Western avec normalisation des prot ines totales refl te la proportionnalit avec la quantit de prot ines il ne d pend pas d une sensibilit lev e Solutions et mat riels n cessaires Les solutions et les mat riels suivants sont n cessaires pour le pr marquage des pro t ines e Consommables pour le pr marquage r actif color Cy5 tampon de marquage tampon de chargement e solution m re 1 M de DTT dithiothr itol DTT et eau ultra pure si la r duction de SDS PAGE doit tre r alis e e Eau ultra pure pour diluer le r actif color Cy5 e Tampon de lyse d origine pour ajuster le volume de r action analyses de type Western uniquement e tubes pour microcentrifugation de 0 5 ml e Bloc de chauffage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 127 5 R aliser une exp rience 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons e Vortex e Centrifugeuse Pr parations ant rieures au d marrage du pr marquage tape Action 1 e Sortir du cong lateur un de chacun des flacons suivants en quantit suffisante pour analyses deux plaques de gel 1flacon de Amersham WB Cy5 1flacon de Amersham WB loading buffer e D congeler compl tement les composants de pr marquage e quilibrer le flacon de Cy5 temp rature ambiante avant de l ouvrir pour viter la condensation de l humidit 2 Centrifuger bri vement le liquide r a
61. alyse dans l unit Western 6 Maintenance 6 1 Programme de maintenance Instructions Nettoyer le circuit de transfert Si le circuit de transfert n a pas t net toy apr s la r alisation du transfert d marrer la proc dure d analyse en appuyant Control Clean Transfer flow path sur la barre de menu Nettoyer le circuit de sondage Si le circuit de sondage n a pas t net toy apr s la r alisation du sondage lancer la proc dure de nettoyage en appuyant Control Clean Probing flow path sur la barre de menu Nettoyer le support de transfert Voir Nettoyer le support de transfert en page 167 Nettoyer les supports de s chage Nettoyer les supports de s chage l aide d un chiffon non pelucheux et les placer dans le compartiment de s chage Retirer toutes les particules pr sentes dans le r servoir de transfert Inspecter le r servoir et retirer tous le restes de gel ou de fibres de papier l aide de pinces V rifier le filtre du r servoir de transfert et le remplacer s il est sale voir Rempla cer le filtre du r servoir de transfert en page 212 Nettoyer la partie sup rieure du r ser voir de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Essuyer la partie sup rieure du r servoir de transfert avec un tissu humide 195 6 Maintenance 6 1 Programme de maintenance Intervalle Action de maintenance Instructions Une fois par semaine ou
62. ambiante D bordement du r servoir de transfert Principe du base du processus de transfert Pendant le transfert un transfert lectrophor tique des prot ines s par es dans le gel vers la membrane est r alis Le principe de base du processus de transfert est d crit ci dessous Stade Description 1 Quand le Amersham WB transfer holder s support de transfert a t charg dans le r servoir de transfert ce dernier est rempli par le tampon de transfert le tube marqu T Buffer 2 Pendant l tape de transfert le tampon de transfert est pomp dans le r servoir de transfert l unit de refroidissement du transfert la pompe de transfert et le bloc de la vanne de transfert circulant ainsi pendant l analyse L unit de refroidissement du transfert garantit que le tampon de transfert est maintenu temp rature ambiante pendant l analyse 3 Apr s une analyse et apr s le retrait des supports de transfert de l eau ultra pure est utilis e pour nettoyer le circuit du liquide le tube marqu T Water est utilis pour le nettoyage 56 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 3 Circuits des liquides Illustration du circuit du liquide de sondage L illustration ci dessous montre un sch ma d taill du processus de sondage Le sch ma montre les interconnexions entre les composants de l instrument Les tiquettes blanches font r f rence a
63. ant 30 minutes Ajouter 20 ul de tampon de chargement Chauffer les chantillons 95 C pendant 3 minutes Centrifuger les chantillons Le volume total de l chantillon est de 40 ul par r action le volume de chargement recommand est de 20 ul Proc der au chargement des chantillons comme d crit dans Pr parations avant le d marrage de l lectrophor se en page 132 Si l analyse par lectrophor se doit tre r alis e un stade ult rieur conserver les chantillons pr marqu s 20 C Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 129 5 R aliser une exp rience 5 5 Pr parer le Amersham WB molecular weight markers 5 5 Pr parer le Amersham WB molecular weight markers Introduction Prendre un flacon de Amersham WB molecular weight markers en quantit suffisante pour analyser deux plaques de gel du cong lateur et le d congeler compl tement Analyses de type Western Pour les analyses de type Western le Amersham WB molecular weight markers doit tre dilu 1 20 dans du tampon de chargement avant de le charger sur la plaque de gel Avant l utilisation le tampon de chargement fourni doit tre dilu avec de l eau ultra pure et une solution DTT ajout e tape Action 1 Ajouter 29 ul de solution m re DTT 1 M au volume de 0 7 ml de tampon de chargement une fiole Centrifuger pour m langer 2 Diluer la solution DTT contenant le tampon de chargement avec un volume gal d eau ult
64. antillon 127 229 Index 230 Pr parations 128 Solutions et mat riels n ces saires 127 Tampons de lyse compa tibles 127 WesternProtocole de pr marquage 129 Pr parer le sandwich de transfert 147 Pr sentation du logiciel 87 Pr sentation de l ensemble sandwich de transfert 148 Pr sentation du flux de travail G n ral 117 Pr sentation du flux de travail d une analyse de type Western avec normalisation des prot ines totales 118 Proc dure Peigne en papier 141 Proc dures d urgence Arr t d urgence 33 Coupure de l alimentation lectrique 33 Proc dures post rieures l lectrophor se 142 Proc dures post rieures l lectrophor se 142 PVDF D marrer et surveiller le ba layage 186 Placer dans la chambre de sondage 176 Pr parer 149 PVDF plaque D placer vers le comparti ment de s chage 178 Description 78 R Recyclage des substances dangereuses 35 Remarques et conseils 9 R servoir de transfert Charger le sandwich de transfert 162 Description 49 Nettoyer 195 Retirer le syst me de s curit pen dant le transport 98 Retirer la couverture du puits de l chantillon 137 S Sandwich de transfert Charger dans le r servoir de transfert 162 Mat riels 147 S chage D marrer et surveiller 182 Solutions Anticorps 169 Blocage 169 Connecter les solutions d anticorps 171 Connecter les solutions de sondage 170 Connecter les solutions de transf
65. ase b muscle de lapin Albumine s rum bovin Prot ine recombinante Prot ine recombinante Prot ine recombinante Inhibiteur de la trypsine soja Alpha lactalbumine lait bovin Prot ine recombinante Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 2 Amersham WB gel card 3 6 2 Amersham WB gel card Introduction Cette section d crit en d tail les plaques de gel Types de plaques de gel Il existe deux types de plaques de gel e Plaque de gel homog nes Amersham WB gel card 14 13 5 e Plaque de gel en gradient Amersham WB gel card 14 8 18 Composition du gel Les gels sont pr moul s dans la casette pour plaque de gel Les gels sont de type poly acrylamide bisacrylamide et contiennent un tampon tris ac tate R solution de la s paration des prot ines Le tableau ci dessous r pertorie les r solutions de la s paration des prot ines selon les types de plaques de gel Type plaques de gel R solution de la s paration M x10 Amersham WB gel card 14 13 5 10 225 Homog ne Amersham WB gel card 14 8 18 6 225 prot ines pr marqu es En gradient e 3 5 225 analyses de type Western d tection d anticorps Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 69 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6
66. atmosph re doit tre r duite au minimum Les limites des plages de temp rature et d humidit sont sp cifi es dans le tableau ci dessous Param tre Temp rature ambiante fonctionnement Temp rature ambiante stockage et transport Plage autoris e aC OSG Pour les meilleures performances 16 C 28 C 25 60 C Humidit relative fonctionnement 20 80 sans condensation Pour les meilleures performances 20 70 sans condensation Altitude 2 000 m maximum Environnement 92 usage int rieur uniquement Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 1 Pr paration du site Espace requis AVERTISSEMENT Ne pas bloquer l acc s l interrupteur et au cordon d alimentation L interrupteur lectrique doit toujours tre facilement accessible Le cordon d alimentation dot d une prise doit toujours tre facile d brancher Les unit s de l instrument doivent tre plac es sur une paillasse de laboratoire La pail lasse doit tre propre plate de niveau stable et capable de supporter le poids du Amersham WB system unit s de l instrument 45 kg le poids de l ordinateur portable et des liquides introduits dans l unit Western Pour les exigences relatives l espace voir ci dessous Laisser un espace d au moins 10 cm derri re les unit s de l instrument pour la ventilation L espace n cessaire pour les deux un
67. ble sera consid r e comme dangereuse et des frais suppl mentaires de nettoyage et de d contamination seront appliqu s Non Veuillez sp cifier si l quipement a t en contact avec l un des l ments de la liste suivante Radioactivit veuillez pr ciser Substances biologiques infectieuses ou dangereuses veuillez pr ciser Autres substances chimiques dangereuses veuillez pr ciser L quipement doit tre d contamin avant l entretien ou le retour Veuillez fournir un num ro de t l phone par lequel GE peut vous joindre pour obtenir des renseignements suppl mentaires propos du syst me ou de l quipement No de t l phone Description du liquide et ou du gaz contenu dans l quipement Eau thanol Sans objet l quipement est vide Argon h lium azote Azote liquide Autre veuillez pr ciser Type d quipement No de produit No de s rie Je confirme par la pr sente que l quipement indiqu ci dessus a t nettoy de mani re enlever toutes les substances dangereuses et que la zone a t s curis e et est accessible Date DD MM AAAA Poste ou titre de l emploi Signature Pour recevoir un num ro d autorisation de retour ou un GE et le monogramme de GE sont des marques de commerce de General Electric Company num ro d entretien veuillez appeler le soutien technique local GE
68. bles pendant environ 3 mois 5 Nettoyer les adaptateurs de membrane l aide d un tissu non pelucheux et remettre les adaptateurs dans l espace de stockage du compartiment des anticorps 6 Nettoyer les supports de s chage l aide d un chiffon propre et non pelu cheux puis remettre les supports dans le compartiment de s chage T Essuyer le plateau des plaques l aide d un tissu non pelucheux impr gn si n cessaire d thanol 50 8 Essuyer la vitre de protection l aide d un tissu non pelucheux impr gn si n cessaire d thanol 50 Remarque Il est important de garder la vitre de protection propre en vue d obtenir un bon r sultat lors du balayage des plaques de gel et des plaquesPVDF Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats tape Action 9 Fermer le couvercle d tanch it et appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ins r Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 189 6 Maintenance 6 Maintenance propos de ce chapitre Cette section r pertorie les activit s de maintenance p riodique qui doivent tre r alis es par l utilisateur du Amersham WB analyzer ainsi que les activit s de maintenance qui doivent tre r alis es si n cessaire Pr cautions d emploi AVERTISSEMENT Ne pas utiliser le Amersham WB analyzer s il ne fon
69. can et Western 5 Rep rer le tiroir fusibles dans le panneau des connecteurs de l unit appro pri e Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 213 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 4 Ins rez un petit tournevis dans l encoche pr s du tiroir du fusible 5 Tourner le tournevis pour ouvrir le tiroir fusibles 6 Remplacer les fusibles Les donn es des fusibles se trouvent sur les tiquettes sur les panneaux arri re des unit s de l instrument 7 Ins rez le tiroir du fusible dans la fiche du panneau du connecteur 214 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 3 D placement des unit s de l instrument 6 2 3 D placement des unit s de l instrument Pr cautions d emploi MISE EN GARDE quipement de protection individuelle EPI En cas d emballage d ballage transport ou d placement du syst me porter e des chaussures de s curit de pr f rence avec une doublure en acier e des gants de travail prot geant contre les ar tes tranchantes e Lunettes de protection MISE EN GARDE Objet lourd Deux personnes sont n cessaires pour soulever l ins trument en toute s curit MISE EN GARDE Ne jamais d placer le Western avec les flacons pos s sur l instru ment AVIS D brancher les c bles Pour viter
70. cations du syst me Sp cifications syst me de l unit Western Param tre Donn es Dimensions Lx P x H 43 x 53 x 39 cm Poids 20 kg Alimentation lectrique Tension 100 240 V Fr quence 50 60 Hz Consommation lectrique Puissance max 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V Tubulure de transfert et connecteurs Mat riau des tubulures FEP ID 1 8 Ferrule bleue Connecteur de la tubulure crou 5 16 24UNF 2 A Tubulure de sondage et connecteurs Mat riau des tubulures FEP ID 0 063 Ferrule jaune Connecteur de la tubulure crou 1 4 28UNF 2 B Sp cifications du transfert Param tre Description 1 Puissance maximum de 40 W Intensit maximum de 400 mA Sp cifications du sondage Param tre Description Volumes anticorps de sondage 5 12 ml 220 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 7 Informations de r f rence 7 1 Sp cifications du syst me Sp cifications du s chage Param tre Description Temp rature 45 C maximum Temps de s chage 10 minutes Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 221 7 Informations de r f rence 7 2 Guide de r sistance chimique 7 2 Guide de r sistance chimique Introduction Cette section indique la r sistance chimique du Amersham WB analyzer certains des produits chimiques les plus couramment utilis s en lectrophor se et transfert de type Western Hypoth ses Les caract ristiques nominales s
71. ce Fonction Partie basse couvercle noir 1 Fermoirs Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 77 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert Pi ce Fonction 2 Goubpilles de guidage pour la plaque de gel et la plaque PVDF 3 Chemins de roulement pour les goupilles du rouleau Partie haute couvercle blanc Goupilles du rouleau s adaptent dans les chemins de roulement pour as sembler les couvercles Rouleau Poign e Orifices pour les fermoirs Amersham WB PVDF card Au cours de l tape de transfert les prot ines sont transf r es depuis le gel vers la surface d absorption qui fait partie de la plaque PVDF La plaque PVDF est une membrane PVDF faiblement fluorescente L illustration ci dessous pr sente les diff rentes parties de la plaque PVDF et l emballage unique de la plaque PDVF Amersham W 4 PUDF card ies ak torrt Lotne GONE Identity ne 000 EURE Cie Rs OT at ssl Le tableau suivant d crit les diff rentes parties de la plaque PVDF et l emballage unique de la plaque PDVF 78 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert Description Orifices de guidage Remarque Les
72. chat des produits CyDye comporte une licence d utilisation limit e des produits CyDvye pour des raisons de recherches et de d veloppements en interne mais en aucun cas dans un but commercial Une licence d utilisation des produits CyDye dans un but commercial fait l objet d un accord de licence distinct avec GE Healthcare Toutes les autres marques de commerce sont la propri t de leurs propri taires respectifs 2014 2015 General Electric Company Tous droits r serv s Premi re publication Mars 2014 Tous les produits et services sont vendus conform ment aux conditions g n rales de vente de la soci t au sein de GE Healthcare qui les fournit Une copie de ces conditions g n rales est disponible sur demande Contacter un repr sentant GE Healthcare local pour obtenir les informations les plus r centes GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 751 84 Uppsala Sweden GE Healthcare Europe GmbH Munzinger Strasse 5 D 79111 Freiburg Germany GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 08855 1327 USA GE Healthcare Japan Corporation Sanken Bldg 3 25 1 Hyakunincho Shinjuku ku Tokyo 169 0073 Japan 29 0214 77 AE 03 2015 a24
73. crit bri vement les pi ces de la plaque de gel qui sont d mont es Stade Description 1 Film de protection Ce film est le premier tre retir 2 Cadre du gel Les bords du cadre du gel sont d solidaris s pr alablement du support du cadre 3 dans l illustration puis retir s avec pr cautions 3 Le support du cadre reste sur la paillasse 154 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert D solidariser le cadre du gel de son support et le placer dans le support de transfert Remarque Ne pas toucher la zone du gel marqu e d une croix rouge lors de la d solidarisation du cadre du gel tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Tenir le cadre du gel de fa on stable Retirer le film de protection en prenant l extr mit indiqu e par une fl che orange et en la ti rant en diagonale dans la direc tion de la fl che Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 155 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Placer la plaque de gel sur la pail lasse le gel expos orient vers le haut comme illustr dans l image Saisir les coins du cadre du gel in f rieur et d solidariser le cadre du gel entre les coins inf rieurs aussi loin que l indiq
74. ctif color Cy5 l aide d une centrifu geuse 3 R gler la temp rature du bloc de chauffage sur 95 C 4 Pour r duire SDS PAGE ajouter un agent r ducteur au tampon de charge ment e Ajouter 29 ul de solution m re 1 M de DTT 0 7 ml un flacon de tampon de chargement et passer au vortex pour m langer 128 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons R aliser le pr marquage de l chantillon protocole de pr marquage Western Astuce tape Le protocole ci dessous peut tre augment Action 1 R aliser la r action de marquage dans un tube pour microcentrifugation de 0 5 ml e Ajouter 2 19 ul d chantillon de lysat cellulaire ou d extrait tissulaire 40 ug au maximum de prot ines totales et compl ter jusqu un volume de 19 ul l aide du tampon de lyse de l chantillon d origine e Ajouter 1 ul de r actif color Cy5 dilu au 01 10 dans de l eau ultra pure Remarque Le colorant dilu doit tre fraichement pr par et utilis dans les 30 mi nutes Il ne peut pas tre congel et r utilis e Passer bri vement au vortex pour m langer soigneusement Incuber temp rature ambiante pendant 30 minutes Remarque Veiller ce que la dur e de marquage soit gale au volume pour tous les chantillons Pour les chantillons sensibles la temp rature incuber sur de la glace pen d
75. ctionne pas correctement ou s il est endommag Par exemple e e cordon lectrique ou la prise est endommag l e __ l appareil est tomb et s est endommag e les dommages touchant d autres parties qui peuvent affecter le fonctionnement AVERTISSEMENT Risque de choc lectrique Toutes les r parations doivent tre r alis es par un personnel agr par GE Ne pas ouvrir de capots ou remplacer des pi ces sauf mention sp cifique dans le manuel d utilisation AVERTISSEMENT D brancher l alimentation Toujours d brancher l alimentation de l instrument avant de remplacer un de ses composants sauf mention contraire dans le manuel d utilisation 190 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance AVERTISSEMENT Lors de l utilisation de substances chimiques dangereuses viter tout d versement et porter des lunettes de s curit et d autres quipements de protection individuelle appropri s Par exemple la solution NaOH est corrosive et par cons quent dangereuse pour la sant AVERTISSEMENT Seuls les pi ces de rechange et accessoires approuv s ou fournis par GE peuvent tre utilis s pour la maintenance ou les r parations du syst me AVERTISSEMENT En cas de remplacement d un cordon d alimentation endommag utiliser un cordon du m me type de m me dimension conforme toutes les exigences en vigueur du code lectrique local et ap prouv
76. dans le compartiment de sondage mettre le gel au rebut en toute s curit Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS de la plaque de gel dans laquelle figurent les instructions concernant le gel et sa mise au rebut MISE EN GARDE Risque de pincement Ne pas toucher la chambre de sondage mobile pendant une analyse Avant le sondage S assurer que les tampons l eau ultra pure les solutions d anticorps les solutions de blocage et de lavage sont connect s avant de d marrer le sondage Remarque L eau ultra pure doit toujours tre connect e car elle est utilis e pour le rin age entre les tapes de sondage La solution de lavage est utilis e pour le rin age entre les anticorps principaux en place A et B Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 173 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 2 Ex cuter le sondage Pr remplir la chambre de sondage et charger les plaques PVDF tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Pr remplir la chambre de son dage Y Cliquer sur l tape du flux de PROBING travail PROBING amp DRYING amp DRYING dans le logiciel e Cliquer sur Pre Fill dans la zone Probing Probing R sultat La chambre de son Pre Fill Ready for Probing pre fill dage est remplie de quelques EE millilitres de la premi re solu tion du tableau s quentiel de sondage par d faut la solu tion de blocage
77. de de l cran actif Astuce Pour voir le manuel d utilisation contenant les informations d taill es propos du syst me s lectionner Help View user manual dans la barre de menu ou appuyer sur Ctrl F1 90 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation propos de ce chapitre Ce chapitre d crit l installation du Amersham WB system 4 Installatio n Dans ce chapitre Ce chapitre comporte les sections suivantes Section Voir page 4 1 Pr paration du site 92 4 2 Installation du mat riel 95 4 3 Installation du logiciel 110 91 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 1 Pr paration du site 4 1 Pr paration du site quoi sert la pr paration du site Le site du laboratoire doit tre pr vu et pr par avant l installation du Amersham WB system Les sp cifications de performance du syst me ne peuvent tre remplies que si l environnement du laboratoire respecte les exigences tablies dans cette section Tou jours respecter les r glementations locales en mati re de s curit Caract ristiques de la salle AVERTISSEMENT Placer le Amersham WB analyzer dans une pi ce disposant d une ventilation par aspiration si du m thanol ou d autres produits chi miques n cessitant une ventilation sont utilis s Les unit s de l instrument ne doivent pas tre expos es la lumi re directe du soleil La pr sence de poussi re dans l
78. de l utilisation de substances chimiques dangereuses viter tout d versement et porter des lunettes de s curit et d autres quipements de protection individuelle appropri s Par exemple la solution NaOH est corrosive et par cons quent dangereuse pour la sant AVERTISSEMENT Seuls les pi ces de rechange et accessoires approuv s ou fournis par GE peuvent tre utilis s pour la maintenance ou les r parations du syst me AVERTISSEMENT En cas de remplacement d un cordon d alimentation endommag utiliser un cordon du m me type de m me dimension conforme toutes les exigences en vigueur du code lectrique local et ap prouv es par GE AVERTISSEMENT Toujours d brancher l alimentation secteur avant de remplacer le fusible du secteur Pour une protection continue contre le risque d incendie ne remplacer un fusible que par un fusible du m me type comme indiqu sur le tiquettes de l instrument Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 25 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit MISE EN GARDE Lors de l utilisation de substances chimiques dangereuses prendre toutes les mesures de protection appropri es port de lunettes de s curit et de gants r sistants aux substances chimiques utilis es Suivre les r glementations et instructions locales pour une utilisa tion et une maintenance du syst me en toute s curit Entretien AVERTI
79. die Ne pas utiliser de solutions tampon de transfert comportant plus de 40 d thanol ou plus de 40 de m thanol I est recommand d utiliser uniquement 20 d thanol dans les tampons de transfert Solution Formules Quantit ana lyse Tampon de transfert Tris 25 mM glycine 192 mM thanol 20 1000 ml pH 8 3 Il est possible d utiliser du m thanol plut t que de l thanol dans le tampon de transfert Remarque Certains thanols ont des propri t s auto fluorescentes qui conduisant un bruit de fond lev de la membrane S assurer que l thanol utilis pendant le transfert n est pas auto fluorescent Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 145 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 1 Pr parer et connecter les solutions de transfert Solution Formules Quantit ana lyse Eau ultra pure Eau ultra pure 1000 ml utilis e pour le net toyage Connecter la tubulure au tampon de transfert et l eau ultra pure sur le porte flacons MISE EN GARDE Pour viter les claboussures de liquides dangereux utiliser des filtres d entr e lourds reli s aux tubulures des flacons Voir Section 3 8 Autres accessoires en page 85 pour la description des filtres d admission et des porte tubes Voir Attacher les supports de tubulure en page 104 pour des indications sur la fixation des accessoires Avant de d marrer le transfert connecter la tubulure au
80. dre du gel avec les goubpilles de guidage et en roulant vers le bas le gel sur le papier de transfert 158 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Placer la plaque PVDF et terminer la construction du sandwich de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Attraper les deux poign es de la plaque PVDF avec vos doigts ou l aide d une pince plate Retirer la plaque du plateau de tampon de transfert Remarque Ne pas toucher la zone d absorp tion de la plaque PVDF marqu e par un carr rouge dans l image Placer la plaque PVDF sur la plaque de gel en faisant corres pondre les orifices de guidage de la plaque PVDF avec les goupilles de guidage et en roulant la plaque PVDF vers le bas sur le gel Remarque Ne pas ajuster la position de la plaque PVDF une fois qu elle est plac e sur la plaque de gel Mouiller pr alablement un papier de transfert dans le tampon de transfert et le placer sur la plaque PVDF la poign e du papier de transfert doit tre positionn e entre les goubpilles de guidage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 159 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Retirer toutes les bulles d air comme suit e Pre
81. duit appos e sur l unit Elpho amp scan L tiquette se trouve sur le panneau arri re de l instrument 29032030 Amersham WB elpho amp scan unit Code no 29009368 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 300 VA Fuse 2x T4AH 250 V ST cN IPY us AECE m 4001767 TULUI GE Healthcare Bio Sciences AB Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSIUL Std 61010 1 Cert to CAN ICSA Std C22 2 No 61010 1 A Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 29 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes Western tiquette de l unit L illustration ci dessous montre un exemple d tiquette de produit appos e sur l unit Western L tiquette se trouve sur le panneau arri re de l instrument N 29032030 Amersham WB western unit Code no 28993466 Voltage 100 240 V Serial no 1111111 Frequency 50 60 Hz Mfg Year 2013 Max Power 400 VA Fuse 2x T4AH 250 V T c us ANEGCER mea 4001767 DRE LEE GE Healthcare Bio Sciences AB G Made in Sweden 751 84 Uppsala Sweden Conforms to ANSI UL Std 61010 1 Cert to CAN CSA Std C22 2 No 61010 1 E A Symboles de s curit utilis s sur les tiquettes de l instrument Les symboles de s curit suivants sont utilis s sur les tiquettes tiquette Description Avertissement Lire le manuel d utilisation avant d utiliser le sys t me Ne pas ouvrir les capots et ne pas remplacer d
82. e 102 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 2 Appuyer vers le bas sur chacune des tours et les faire tourner dans le sens des aiguilles d une montre jusqu ce qu elles s enclenchent en position La tubulure doit tre install es comme suit Position de la tour Tubulure vue depuis l avant de l instru ment Gauche T buffer et T water Milieu P water P block et P wash Droite P Final wash et P Custom Remarque Veiller ne retirer aucune des tiquettes des tubulures pendant le montage des tours Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 103 4 Installation 4 2 Installation du mat riel Attacher les supports de tubulure 104 Pour compenser les tensions pr sentes quand la tubulure est plac e dans les flacons et viter que ces derniers ne se renversent quand le niveau du liquide diminue un support de tubulure doit tre fix toutes les tubulures Remarque Des supports de tubulure doivent tre fix s toutes les tubulures avant que les filtres d entr e ne soient attach s tape Action 1 Ins rer une tubulure l int rieur de l orifice du support de tubulure 2 Continuer ins rer l extr mit ouverte de la tubulure dans la fente du support de tubulure Remarque S assurer que les tiquettes de la tubulure sont encore attach es celle ci Il n est pas n cessaire que l tique
83. e d entr e le support de filtre d entr e lui m me constitue un poids qui maintient la tubulure en place au fond des flacons L illustration ci dessous montre un support de filtre d entr e avec un filtre d entr e mont et fix la tubulure Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 85 3 Description du syst me 3 8 Autres accessoires Porte tubes Pour compenser les tensions pr sentes quand la tubulure est plac e dans les flacons et viter que ces derniers ne se renversent quand le niveau du liquide diminue un support de tubulure doit tre fix la tubulure Voir l illustration ci dessous Accessoires suppl mentaires pouvant tre install s par l utilisateur Les lectrodes de transfert et les guides du dispositif de s chage de membrane doivent tre install s par l utilisateur Voir Installer les lectrodes de transfert en page 98 et Installer les guides du dispositif de s chage de la membrane dans le compartiment de s chage en page 106 pour plus d in formations Accessoires de maintenance par l utilisateur Pour une description des accessoires de maintenance par l utilisateur voir Accessoires de maintenance en page 203 86 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 9 Pr sentation du logiciel 3 9 Pr sentation du logiciel Introduction Cette section offre une pr sentation du Amersham WB software Illustration de l cran de d marrage du lo
84. e 91 Astuce Pour en savoir plus sur les principes et les m thodes de transfert de type Western et pour des directives sur la mani re de r aliser avec succ s des transferts de type Western t l chargez ou commandez le manuel Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 www gelifesciences com Consignes de s curit Ce manuel d utilisation contient des avis de s curit AVERTISSEMENT MISE EN GARDE et AVIS sur l utilisation en toute s curit du produit Voir les d finitions ci dessous AVERTISSEMENT AVERTISSEMENT indique une situation dangereuse qui si elle n est pas vit e pourrait entra ner le d c s ou de graves blessures Il est important de ne pas continuer avant que toutes les conditions tablies ne soient r unies et clairement comprises MISE EN GARDE MISE EN GARDE indique une situation dangereuse qui si elle n est pas vit e pourrait entra ner des blessures l g res ou peu graves Il est important de ne pas continuer avant que toutes les conditions tablies ne soient r unies et clairement comprises AVIS AVIS indique des instructions devant tre suivies afin de ne pas endommager le produit ou d autres quipements Remarques et astuces Remarque Astuce Une remarque est utilis e pour indiquer une information importante pour une utilisation optimale et sans probl me du produit Une astuce contient des informations pratiques pouva
85. e analyse Si vous choisissez de ne pas effectuer le nettoyage du circuit de transfert appuyer sur Cancel et passer au Passer au sondage en page 167 Cependant il faudra nettoyer le circuit de transfert un stade ult rieur de l analyse Le nettoyage peut tre r alis en s lectionnant Control Clean Transfer flow path partir de la barre de menu Si le nettoyage n a pas t effectu le circuit de transfert doit tre vid ma nuellement en s lectionnant Empty Transfer tank partir du Control menu g D placer la tubulure T Buffer vers le flacon d eau contenant 1000 ml d eau ultra pure avec la tubulure T Water 3 Cliquer sur Start clean dans la bo te de dialogue Transfer Completed Clean Transfer Flow Path Le nettoyage d marre et dure environ 9 minutes Remarque Le sondage peut d marrer pendant le nettoyage du circuit de transfert voir Passer au sondage en page 167 4 Jeter la solution dans le flacon d eau et placer la tubulure dans un flacon vide 5 Essuyer la partie sup rieure de l int rieur du r servoir de transfert avec un tissu non pelucheux 6 Retirer toutes les particules visibles restantes les fibres et les morceaux de gel avec des pinces 166 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 4 Proc dures apr s le transfert Nettoyer le support de transfert AVERTISSEMENT Apr s l lectrophor se ou apr s le transfe
86. e avec les goupilles de guidage Remarque Veiller ne pas toucher la zone d absorption de la plaque PVDF Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 185 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Fermer l adaptateur de membrane Fermer le couvercle d tanch it 8 A Appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ferm D marrer et surveiller le balayage de la membrane tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Plaque Dans le logiciel cliquer sur l tape du flux de travail MEMBRANE SCANNING 186 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats Illustration de l tape Actions de l op rateur Membranes o tiliser les param tres par d faut pour le Membrane Position A Position B balayage de la membrane comme indiqu T dans la capture d cran Note Scanning Sensitivity Automatic sensitivity O Manual sensitivity Default Cliquer sur Scan dans la zone Membrane Membrane Scanning 2 Scanning o FE on Membrane screens R sultat Le balayage de la membrane d marre Membrane Scanning La progression des balayages est affich e Remaining time dans la zone Membrane Scanni
87. e basent sur les hypoth ses suivantes e Les effets synergiques des m langes chimiques n ont pas t pris en compte e Le syst me est utilis temp rature ambiante et la surpression est limit e Remarque Les influences chimiques d pendent du temps et de la pression Sauf indication contraire toutes les concentrations sont 100 Liste des produits chimiques Pour une liste des produits chimiques dans les plaques de gel et les bandelettes de tampon voir la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS Utilisation Substance chimique Concentration N CAS et n EC G n ralit Tampons aqueux pH 4 10 par ex 0 0 2 M S O Tris Glycine Phosphate Transfert thanol 64 17 5 200 578 6 M thanol 40 67 56 1 200 659 6 Transfert amp Sondage Chlorure de sodium 0 2 M 7647 14 5 231 598 3 Chlorure de potassium 50 mM 7447 40 7 231 211 8 Tween 1 9005 64 5 500 018 3 Nettoyage des cir Hydroxyde de sodium 0 5 M 1310 73 2 215 185 5 SL Hypochlorite de sodium 5 7681 52 9 231 668 3 Nettoyage du pla thanol 50 64 17 5 200 578 6 teau des plaques 222 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 7 Informations de r f rence 7 2 Guide de r sistance chimique Utilisation Substance chimique Concentration N CAS et n EC Nettoyage des sur thanol 64 17 5 200 578 6 faces D tergents doux Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 223 7 Informations de r
88. e conserv es plus d une semaine Amersham WB gel card 4 C 8 C Conserver au r frig rateur ou dans une pi ce froide Amersham WB buffer strips 4 C 8 C Conserver au r frig rateur ou dans une pi ce froide Amersham WB PVDF card Temp rature ambiante Conserver la plaque PVDF dans son emballage unique l int rieur de la boite de livraison Conserver la boite dans un en droit propre et sec l abri de la lumi re Amersham WB transfer paper Temp rature ambiante Conserver les papiers de transfert dans un lieu sec dans la bofte dans laquelle ils ont t livr s Tenir l abri de la poussi re Amersham WB paper comb Temp rature ambiante Conserver les peignes en pa pier dans un lieu sec dans la bo te dans laquelle ils ont t livr s Tenir l abri de la poussi re 62 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Consommable Amersham WB sponge Amersham WB goat anti mouse Cy3 Cy5 ou Amersham WB anti rabbit Cy3 Cy5 lyophi lis Temp rature de stockage Temp rature ambiante 2 C 8 C 3 Description du syst me 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables Environnement Tenir l abri de la poussi re et de la lumi re directe du soleil Tenir les anticorps secondaires l abri de la lumi re Anticorps secondaires recons titu s reconstitu s dans de l eau ultra une concentration de 1 ug Ul Conserver les aliquotes e
89. e dans les analyses de type Western 3 Zone de travail La zone de travail affiche des informations textuelles des param tres et des contr les pour l tape du flux de travail actuellement affich e Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 89 3 Description du syst me 3 9 Pr sentation du logiciel Description Panneau d tat de l instrument Le panneau d tat de l instrument affiche l tat de la connexion de l instrument Quand l instrument est connect l tat de chaque module mat riel compartiment d lectrophor se et de balayage r servoir de transfert compartiment de sondage et compartiment de s chage ainsi que la progression de toute analyse dans les modules sont affich s Plusieurs analyses peuvent tre ouvertes simultan ment Chaque analyse exige l ouverture d une nouvelle instance du logiciel Le panneau d tat de l instrument affiche l tat de l instrument pour toutes les analyses ouvertes Un module mat riel mat riel peut tre uti lis par une seule analyse la fois Ceci signifie que quatre tapes de flux de travail diff rentes provenant de quatre analyses diff rentes peuvent tre ex cut es en parall le Panneau d aide Le panneau d aide affiche les instructions d aide pour l cran actuellement affich dans la zone de travail Lors de la s lection d une nouvelle tape dans le flux de travail les instruc tions d aide sont automatiquement mises jour pour afficher l ai
90. e de temp rature pour le stockage et le transport Donn es 25 60 C Environnement chimique Plage de fonctionnement Param tre Plage de temp rature de fonctionnement Humidit relative Voir Section 7 2 Guide de r sistance chi mique en page 222 Limites 15C 032C Pour des performances compl tes 16 C 28 C 20 80 sans condensation Pour des performances compl tes 20 70 sans condensation Altitude 2 000 m maximum Degr de pollution 2 Transitoire Surtension de cat gorie l Environnement Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE usage int rieur uniquement 217 7 Informations de r f rence 7 1 Sp cifications du syst me Sp cifications du syst me Amersham WB analyzer Param tre Configuration du syst me Donn es Syst me sur paillasse constitu d un ordi nateur externe et de deux unit s l unit Elpho amp scan et l unit Western L ordinateur n est pas inclus dans la livrai son Syst me d exploitation contr lant l ordi nateur PC sous Windows 7 Logiciel de commande Amersham WB software Connexion entre les unit s Elpho amp scan et Western C ble Ethernet Connexion entre le PC et l unit Elpho amp scan C ble USB Type A et Type B Degr de pollution 2 Niveau de son Sp cifications syst me de l unit Elpho amp scan 218 Param tre
91. e gel 5 6 3 Proc dures ult rieures l lectrophor se et balayage de la plaque de gel Introduction Cette section d crit comment retirer la plaque de gel et nettoyer l unit Elpho amp scan apr s l lectrophor se Retirer les plaques de gel AVERTISSEMENT Apr s l lectrophor se ou apr s le transfert quand le sandwich de transfert a t ouvert et que la plaque PVDF a t plac e dans le compartiment de sondage mettre le gel au rebut en toute s curit Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS de la plaque de gel dans laquelle figurent les instructions concernant le gel et sa mise au rebut Remarque L ex cution du transfert doit tre d marr e dans l heure qui suit la fin tape de l lectrophor se Action l Quand l lectrophor se est pr te et que le voyant blanc Pr t est allum sur le panneau de l instrument appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ject Ouvrir le couvercle d tanch it l aide du fermoir Retirer la plaque de gel et la placer sur la paillasse l envers Proc der au nettoyage de l Nettoyer l unit Elbho amp scan en page 143 Remarque Il est recommand de nettoyer l unit Elpho amp scan apr s chaque analyse Cependant si peu de temps est imparti proc der au transfert et nettoyer l unit plus tard au cours de l analyse 142 Amersham WB system Mode d emploi
92. e pi ces moins que cela ne soit sp cifiquement indiqu dans le manuel d utilisation Le syst me est conforme aux directives europ ennes en vigueur Se reporter Normes internationales en page 11 Le syst me est conforme aux exigences en vigueur en Australie et en Nouvelle Z lande Ce symbole indique que le Amersham WB system a t certifi par un Laboratoire d essai reconnu au niveau national NRTL NRTL si gnifie que cet organisme est reconnu par l US Occupational Safety Intertek and Health Administration OSHA comme r pondant aux exigences l gales du Titre 29 du Code of Federal Regulations 29 CFR Part 1910 7 30 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes Symboles concernant les substances dangereuses utilis s sur les tiquettes de l instrument Les symboles suivants pr sents sur les tiquette concernent les substances dangereuses tiquette Description Ce symbole indique que les quipements lectriques et lectroniques usag s ne doivent pas tre limin s comme des d chets m nagers non tri s et doivent tre collect s s par ment Contacter un repr sentant agr du fabricant pour des informations sur le d classe ment des quipements Ce symbole indique que le produit contient des substances dange reuses en taux sup rieurs aux limites tablies par la norme chinoise SJ T11363 2006 Exigences pour les limites de concent
93. e sandwich de transfert ponge papier de transfert plaque de gel plaque PVDF papier de transfert et ponge pr par avant le d marrage du transfert Les prot ines s par es sont transf r es depuis le gel vers la membrane pendant le transfert Les goupilles de guidage du support de transfert garantissent que la plaque de gel et la plaque PVDF sont positionn es correctement lors de la pr paration du sandwich de transfert Gr ce l utilisation d un rouleau int gr lors du d placement du rouleau sur le chemin de roulement au dessus du sandwich les bulles d air sont limin es et une pression reproductible est appliqu e sur la plaque de gel et la plaque PVDF pour un processus de transfert r gulier Voir Commencer construire le sandwich de transfert en page 153 pour plus d information sur la fa on de pr parer le sandwich de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert Illustration du support de transfert quand il est ferm L image ci dessous montre le support de transfert quand il est ferm Illustration du support de transfert quand il est d mont L image ci dessous montre le support de transfert quand il est d mont 3 4 5 7 Le tableau ci dessous d crit les diff rentes pi ces du support de transfert Pi
94. e w Control w Remote w Help w Create New Experiment Easy Western All Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection D Western with endogenous protein normalization Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Western with total protein normalization Easy SDS PAGE Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment AS E Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more NE r manual Open New from existing Maintenance clean Transfer ennL Web resource Maintenance clean Probing Astuce Pour afficher le panneau d aide avec les instructions d aide de l cran actif cliquer sur le bouton du panneau d aide ou appuyer sur F1 Pour ouvrir le manuel d utilisation s lectionner Help View user manual ou appuyer sur Ctrl F1 122 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Cr er et configurer une analyse tape Illustration de l tape 5 R aliser une exp rience
95. ectes dans le compartiment c est dire la plaque PVDF en position de sondage A vers la position de s chage A Au cours de l tape du flux de travail Xf PROBING amp DRYING du logiciel cliquer sur Start dans la zone Drying PROBING amp DRYING Drying Remaining time Start Ready for Drying 10a m n 182 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE tape Illustration de l tape 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 4 Ex cuter le s chage Actions de l op rateur Quand le s chage est termin e Ouvrir le couvercle du compartiment de s chage e Retirer le s support s de s chage e La plaque PVDF est pr te pour le ba layage Proc der au Section 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats en page 184 Remarque Si les membranes ne sont pas compl tement s ches cliquer sur Start dans la zone Drying pour ex cuter nouveau le s chage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 183 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats Introduction Cette section d crit comment e placer la plaque PVDF dans l unit Elpho amp scan e d marrer et surveiller le balayage e voir les r sultats du balayage Placer la plaque PVDF dans le chargeur MISE EN GARDE Parties mobiles Veiller lors de l ouverture de la fermeture du charg
96. eigne en papier 74 L illustration ci dessous montre un peigne en papier Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western Introduction Cette section d crit les accessoires et les consommables utilis s pour le transfert des prot ines depuis le gel vers la membrane le sondage de la membrane avec les anticorps primaires et secondaires et le balayage des plaques PVDF Dans cette section Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert 76 3 7 2 Anticorps secondaires sondage 81 3 7 3 Support de s chage s chage de plaque PVDF 83 3 7 4 Adaptateur de membrane Balayage de la plaque PVDF 84 75 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 1 Accessoires et consommables pour le transfert Sfl Introduction Accessoires et consommables pour le transfert Cette section d crit e Amersham WB transfer holder accessoire e Amersham WB PVDF card consommable e Amersham WB transfer paper consommable e Amersham WB sponge consommable Amersham WB transfer holder 76 Le support de transfert est utilis pendant le transfert I contient l
97. el tape Action 6 e Pour revoir ou modifier les param tres d installation cliquer sur Back e Pour commencer l installation cliquer sur Install z r 72 va i SATA S 12 ns JU PT Sr AMErS T SOF are in s zarc ET Ad A A NV INTS Afrar D ner FN S Y INAN Ready to Install the Program The wizard is ready to begin installation Click Install to begin the installation If you want to review or change any of your installation settings dick Back Click Cancel to exit the wizard InstallShield The InstallShield Wizard has successfully installed Amersham WE software Click Finish to exit the wizard Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 113 4 Installation 4 3 Installation du logiciel V rifier les communications de l instrument tape Action 1 Mettre l ordinateur l unit Elpho amp scan et l unit Western sous tension 2 D marrer le Amersham WB software R sultat Le logiciel va afficher les communications tablies avec les unit s de l instru ment Si la communication n est pas tablie e Les connexions du c ble ou du cordon d alimentation peuvent tre in correctes V rifier toute l installation mat rielle e La routine du pilote USB peut tre incorrecte Changer de port USB sur l ordinateur 114 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 R aliser une exp rience propos de ce chapitre Ce chapitre
98. en page 184 Trouver plus d informations Pour obtenir des informations contextuelles et des d tails sur la proc dure de planification des analyses consulter le Amersham WB system User Manual Ce dernier est accessible en s lectionnant Help View user manual dans la barre de menu du logiciel Pour plus de d tails relatifs au logiciel se r f rer Amersham WB software help du logiciel disponible partir du volet droit du logiciel Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 119 5 R aliser une exp rience 5 2 D marrer le Amersham WB analyzer 5 2 D marrer le Amersham WB analyzer Introduction Cette section d crit comment d marrer les unit s Amersham WB analyzer Il est possible de configurer une analyse l avance depuis un ordinateur de bureau sans connexion avec l instrument Remarque Les unit s de l instrument doivent toujours tre sous tension pendant une analyse D marrer l unit Amersham WB elpho amp scan tape Action 1 Sur le panneau arri re de l unit Elpho amp scan mettre l interrupteur d alimen tation secteur sur I ON R sultat L unit Elpho amp scan d marre 2 Pendant le d marrage le panneau des voyants affiche ce qui suit ELPHO amp SCAN Quand l unit de l instrument est pr te tre utilis e un carr blanc s affiche ELPHO amp SCAN S 120 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 2 D marrer
99. ence 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 3 Proc dures apr s le sondage tape Action 5 Placer le s support s de s chage dans la position correcte dans le compar timent de s chage c est dire la plaque PVDF en position de sondage A vers la position de s chage Al Nettoyer le circuit de sondage 180 Remarque Avant de proc der au nettoyage d placer lalles plaquels PVDF vers le tape 1 compartiment de s chage voir instructions ci dessus Action Quand le sondage est termin la bo te de dialogue Probing Completed Clean Probing Flow Path s ouvre Remarque Il est recommand de nettoyer le circuit de sondage apr s une analyse Si vous choisissez de ne pas r aliser le nettoyage du circuit de sondage ap puyer sur Cancel et passer au Section 5 8 4 Ex cuter le s chage en page 182 Cependant il faudra nettoyer le circuit de sondage un stade ult rieur de l analyse Le nettoyage peut tre r alis en s lectionnant Control Clean Probing flow path partir de la barre de menu Si le nettoyage n a pas t effectu le circuit de sondage doit tre vid ma nuellement en s lectionnant Empty Probing chamber partir du Control menu Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 3 Proc dures apr s le sondage tape Action 2 Ins rer de nouveaux tubes de solutions d anticorps vides dans
100. er la plaque de gel sur le plateau des plaques en alignant les orifices du cadre de la plaque de gel sur les goubpilles de guidage marqu es de cercles orange Remarque Prendre soin de ne pas rayer le plateau des plaques avec un objet tranchant 136 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur e Fermer le couvercle d tanch it e Saisir l extr mit de la couverture du puits de l chantillon et la retirer avec pr caution Astuce Changer de prise pendant le retrait de la couverture du puits de l chantillon afin de pouvoir la tenir aussi pr s que possible des puits Remarque Si la couverture du puits de l chantillon se brise Laisser la plaque de gel dans le chargeur avec le couvercle d tanch it ferm Utiliser par exemple des pinces pour retirer le reste de la couver ture du puits Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 137 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Charger les chantillons le tampon de chargement et ou le marqueurs des masse mol culaire dans les puits en g n ral 20 Ul puits comme configur sur l cran EXPERIMENT amp SAMPLES du
101. er le transfert en cours avant d essuyer le liquide sur l instrument ou la paillasse Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 23 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit MISE EN GARDE Risque de pincement Ne pas toucher la chambre de sondage mobile pendant une analyse MISE EN GARDE Ne retirer aucun des capots de l appareil Elpho amp scan Un laser de classe 3B se trouve l int rieur de celui ci MISE EN GARDE Pour viter les claboussures de liquides dangereux utiliser des filtres d entr e lourds reli s aux tubulures des flacons O gt o AVIS Ne pas utiliser de produits chimiques autres que ceux qui figurent dans la notice R sistance chimique Maintenance AVERTISSEMENT Risque de choc lectrique Toutes les r parations doivent tre r alis es par un personnel agr par GE Ne pas ouvrir de capots ou remplacer des pi ces sauf mention sp cifique dans le manuel d utilisation AVERTISSEMENT D brancher l alimentation Toujours d brancher l alimentation de l instrument avant de remplacer un de ses composants sauf mention contraire dans le manuel d utilisation 24 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit AVERTISSEMENT Retirer tous les flacons du porte flacons avant d ouvrir le couvercle du compartiment d entretien AVERTISSEMENT Lors
102. er les solutions de transfert en page 145 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 143 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 R aliser le transfert Introduction Cette section d crit comment pr parer le sandwich de transfert comment d marrer et surveiller l ex cution du transfert ainsi que les proc dures r aliser apr s l ex cution du transfert Dans cette section Cette section comporte les sous sections suivantes Section Voir page 5 7 1 Pr parer et connecter les solutions de transfert 145 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert 147 5 7 3 Ex cuter le transfert 161 5 7 4 Proc dures apr s le transfert 165 144 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 1 Pr parer et connecter les solutions de transfert 5 7 1 Pr parer et connecter les solutions de transfert Introduction Cette section d crit la fa on de pr parer et de connecter les tampons et les solutions pour le transfert Les solutions de transfert peuvent tre pr par es pendant l ex cution du transfert et doivent tre connect es avant le d marrage du transfert Formules des solutions de transfert AVERTISSEMENT Placer le Amersham WB analyzer dans une pi ce disposant d une ventilation par aspiration si du m thanol ou d autres produits chi miques n cessitant une ventilation sont utilis s MISE EN GARDE Risque d incen
103. ercle et les bords de la chambre de sondage avec un tissu humide 3 Immerger la P Water tubulure dans un flacon contenant au minimum 1 000 ml d eau ultra pure 4 Immerger la tubulure P Custom dans un flacon contenant au moins 450 ml de NaOH 0 5 M 5 Placer les tubulures P Block P Wash et P Final Wash dans un flacon de d chets vide 6 Ins rer et connecter quatre tubes propres vides de 15 ml dans le comparti ment des anticorps T Cliquer sur Start clean dans la bo te de dialogue Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 201 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage tape Action 8 Quand le nettoyage est termin transf rer la tubulure dans un flacon vide Remarque Jeter toutes les solutions et les tubes d anticorps apr s le nettoyage 202 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement 6 2 2 Proc dures de remplacement Introduction Cette section d crit comment remplacer le filtre air les t tes des pompes de transfert et de sondage les lectrodes de transfert le filtre du r servoir de transfert filtres d entr e le fusible secteur Accessoires de maintenance Les accessoires suivants sont n cessaires pour la maintenance du Amersham WB analyzer t te des pompe pour la pompe de transfert ou la
104. ert 146 de sondage 169 Transfert 145 Sondage Connecter les solutions d anticorps 171 Connecter les solutions de sondage 170 D marrer et surveiller 177 Nettoyage de maintenance du circuit 200 Nettoyer le circuit 180 195 Pr parer les solutions de sondage et d anticorps 169 Pr remplir la chambre de sondage 174 Principe de base du proces sus de sondage 58 Remplacer la t te de la pompe de sondage 207 Support de bandelette de tam pon Description 72 Support de filtre d entr e Description 85 Support des bandelettes de tampon Nettoyer 143 194 Support de s chage 83 Nettoyage 188 195 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Support de transfert Description 76 Nettoyer 167 Retirer apr s l analyse 165 Support de tubulure Description 86 Supports de bandelettes de tampon Placer dans l unit Elpho amp scan 134 Supports de tubulure Attacher 104 7 Tampons de lyse compatibles 127 Tampons et solutions Eau ultra pure net toyage 146 169 Solution d anticorps son dage 169 Solution de blocage 169 Tampon de lavage son dage 169 Tampon de lavage final sondage 169 Tampon de transfert 145 T te de la pompe Remplacer la t te de la pompe de sondage ou de transfert 207 Tours de tubulure Assembler 102 Transfert Connecter les solutions 146 D marrer et surveiller 163 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Index Nettoyage de maintenance du circuit 19
105. es Gel Cards Gel card Position A Position B ID more Sinon entrer les cinq chiffres de l ID par ex 00123 134 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE tape Illustration de l tape 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se Actions de l op rateur e Tourner la plaque de gel de sorte que sa face ar ri re soit orient e vers le haut les poign es bleues du gel sans tiquettes sont orient es vers le haut e Saisir l extr mit du film de protection au bas de la plaque de gel et le reti rer avec pr caution e Saisir l extr mit du film de protection en haut de la plaque de gel et le reti rer avec pr caution En retirant les films de protec tion le contact entre le gel et le tampon est tabli lors du placement de la plaque de gel sur le plateau des plaques Veiller ne pas tou cher les surfaces de gel expo s es Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 135 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur e Tourner le gel de sorte que sa face avant soit orient e vers le haut par ex le couvercle du puits de l chantillon est orien t vers le haut Remarque S assurer que le plateau des plaques est compl te ment sec e Plac
106. es analyses de type Western Cette section comporte une pr sentation de l unit Elpho amp scan Illustration de l unit Elpho amp scan 40 L illustration ci dessous montre les principales parties de l unit Elpho amp scan t g 3 Description Panneau de l instrument avec voyants d tat 2 Chargeur Elpho amp scan Pour le chargement des plaques de gel o des plaques PVDF Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 2 Unit Elpho amp scan Description Bouton d jection Pour ouvrir fermer le chargeur du compartiment d lectrophor se et de balayage Remarque Le chargeur ne peut tre ouvert qu en l absence d une analyse d lectropho r se ou de balayage Toute analyse en cours doit tout d abord tre arr t e l aide de l instruction logicielle appropri e afin de pouvoir jecter le char geur Pied r glable 4 pieds un chaque coin Illustration du panneau arri re de l unit Elpho amp scan L illustration ci dessous montre les principales parties du panneau arri re de l unit Elpho amp scan S MN Eo A Fz E7 4 2 i Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 41 3 Description du syst me 3 2 Unit Elpho amp scan Description Connecteur du c ble USB USB de type B Pour connecter l unit Elpho amp scan un ordinateur Connexion de communication pour l uni
107. es par GE AVERTISSEMENT Toujours d brancher l alimentation secteur avant de remplacer le fusible du secteur Pour une protection continue contre le risque d incendie ne remplacer un fusible que par un fusible du m me type comme indiqu sur le tiquettes de l instrument MISE EN GARDE Lors de l utilisation de substances chimiques dangereuses prendre toutes les mesures de protection appropri es port de lunettes de s curit et de gants r sistants aux substances chimiques utilis es Suivre les r glementations et instructions locales pour une utilisa tion et une maintenance du syst me en toute s curit Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 191 6 Maintenance Dans ce chapitre Ce chapitre comporte les sections suivantes Section Voir page 6 1 Programme de maintenance 193 6 2 Instructions relatives la maintenance 198 192 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 1 Programme de maintenance 6 1 Programme de maintenance Introduction Cette section r capitule les activit s de maintenance qui doivent tre r alis es par l uti lisateur du Amersham WB analyzer La maintenance est divis e en e chaque analyse e Maintenance hebdomadaire e Maintenance mensuelle e Maintenance annuelle e Maintenance si n cessaire Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 193 6 Maintenance 6 1 Programme de maintenance Programme de maintena
108. et des consommables voir les sections suivantes Consommables n cessaires Accessoires Pour plus n cessaires de d tails voir Pr marquage des e Amersham WB Cy5 S O Section chantillons 3 5 e Amersham WB labeling buffer tampon de marquage e Amersham WB loading buffer tampon de marquage e Amersham WB MiniTrap kit en option Analyse par lec Amersham WB molecular weight mar Amersham WB buffer Section 7 A 1 trophor se kers marqueurs de masse mol culaire strip holder sup 5 6 port des bandelettes e Amersham WB gel card plaque de gel de tampon e Amersham WB buffer strip bandelette de tampon e Amersham WB loading buffer e Amersham WB paper comb en option peigne en papier Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 59 3 Description du syst me 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables Consommables n cessaires Accessoires Pour plus n cessaires de d tails voir Western tapes du transfert Transfert Amersham WB gel card provenant de Amersham WB trans Section l analyse par lectrophor se fer holder support fal de transfert Amersham WB PVDF card plaque PVDF Amersham WB transfer paper papier de transfert Amersham WB sponge ponge Solutions de transfert pr par es au labo ratoire pour les formules voir Formules des solutions de transfert en page 145 Sondage Solutions d anticorps primaire pr par e
109. eur ce que vos doigts ou vos v tements ne soient pas coinc s quand le chargeur se d place Ne jamais placer de bouteilles ou de flacons devant l appareil Elpho amp scan Ils sont susceptibles de tomber quand le chargeur est ou vert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan a R sultat Le chargeur est ject e Tourner le fermoir vers le haut et ouvrir le couvercle d tanch it e Essuyer toute trace de liquide et de salis sure de la vitre de protection du plateau des plaques l aide d un tissu non pelu cheux 184 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats tape Illustration de l tape Actions de l op rateur e Retirer un adaptateur de membrane du compartiment des anticorps de l unit Western Remarque S assurer que l adaptateur de membrane est propre et sec e Ouvrir l adaptateur de membrane et le placer sur le plateau des plaques en fai sant correspondreles orifices de guidage de l adaptateur de membrane et les goubpilles de guidage Remarque Prendre soin de ne pas rayer le plateau des plaques avec un objet tranchant Ouvrir le support de s chage Retirer la plaque PVDF du support de s chage et la placer dans l adaptateur de membrane en faisant correspondre les orifices de gui dag
110. g steps Dur min Repeat 1 Block 10 1 2 Wash 1 2 3 Primary antibody 60 1 4 Wash 1 4 2 Secondary antibody 30 1 6 Wash J 4 3 Final wash 1 6 Total time 431 h Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 177 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 3 Proc dures apr s le sondage 5 8 3 Proc dures apr s le sondage Introduction Cette section d crit comment e placer la plaque PVDF dans le support de s chage e placer le support de s chage dans le compartiment de s chage et lancer le s chage e nettoyer le circuit de sondage D placer lalles plaquels PVDF vers le compartiment de s chage tape Action 1 Retirer un Amersham WB drying holder support de s chage du comparti ment de s chage et l ouvrir 2 Maintenir les poign es de la plaque PVDF avec vos doigts ou l aide de pinces plates et soulever la plaque PVDF de la chambre de sondage 178 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 3 Proc dures apr s le sondage tape Action 3 Placer la plaque PVDF dans le support de s chage en faisant correspondre les orifices de la plaque PDVF avec les trois goubpilles de guidage 4 Fermer le support de s chage S assurer que le couvercle du support de s chage est verrouill par le fermoir Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 179 5 R aliser une exp ri
111. giciel Sur l cran de d marrage du logiciel il est possible de cr er de nouvelles analyses et d ouvrir des analyses pr c demment sauvegard es Pour plus d informations sur la cr ation et la configuration d une analyse voir Cr er et configurer une analyse en page 123 A Amersham WB software 36 Amersham WB software Fle wv Control Y Remote Wv 3 Create New Experiment Easy Western Al Western experiments include necessary SDS PAGE steps Western blot experiment for quick confirmation of protein identity and easy sample to sample comparison Easy Western One primary antibody against the specific target and a corresponding secondary antibody for the detection Optionally two primary antibodies of different species against two different targets and two corresponding secondary antibodies for detection of the two targets individually This allows for unambiguous analysis of two targets of similar size in one experiment Western with total protein normalization gt Western with endogenous protein normalization Easy SDS PAGE Create Samples should normally not be pre labeled for use in this experiment AS a E Create new experiment Maintenance clean Open experiment based on a previous run Learn more AE z r manual Open New from existing Maintenance clean Transfer User manual z z Web resource Maintenance clean Probing Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77
112. iltre par un neuf et attacher la partie sup rieure de la grille en plastique Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 205 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 6 Ins rer le nouveau filtre dans le support dans les guides du cadre 7 Remettre en place le couvercle du compartiment du filtre et serrer l crou en le faisant tourner dans le sens des aiguilles d une montre 8 Fermer le couvercle du compartiment d entretien 206 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement Remplacer la t te de la pompe de sondage ou de transfert Les instructions ci dessous d crivent comment remplacer une t te de pompe en prenant la pompe de sondage comme exemple Le remplacement de la t te de la pompe de transfert est similaire tape Action 1 Ouvrir le couvercle du compartiment d entretien pour acc der aux pompes de sondage et de transfert Remarque La pompe de sondage se trouve sur la gauche et la pompe de transfert sur la droite 2 D connecter la tubulure de la pompe sur la gauche Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 207 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 3 D connecter la tubulure de la pompe sur la droite TRANSFE 208 Amersham W
113. ions contenues dans Mode d emploi AVERTISSEMENT N utiliser aucun accessoire non fourni ou recommand par GE 18 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit AVERTISSEMENT Ne pas utiliser le Amersham WB analyzer s il ne fonctionne pas correctement ou s il est endommag Par exemple e e cordon lectrique ou la prise est endommadg l e e l appareil est tomb et s est endommag e les dommages touchant d autres parties qui peuvent affecter le fonctionnement Liquides inflammables MISE EN GARDE Risque d incendie __ Siunliquide a t d vers l ext rieur du bo tier du syst me Elpho amp scan ou Western d brancher l alimentation lectrique et essuyer le liquide e Siun liquide a t d vers sur les l ments de l instrument et p n tr dans le bo tier du syst me Elpho amp scan ou Western d brancher l alimentation lectrique des appareils et contacter le service d entretien MISE EN GARDE Risque d incendie Avant de lancer une analyse s assurer que la tubulure des d chets du syst me Western se dirige vers le flacon des d chets qui se trouve sous la paillasse et de l absence de fuites Un flacon des d chets vide d au moins 4 l est n cessaire MISE EN GARDE Risque d incendie Ne pas utiliser de solutions tampon de transfert comportant plus de 40 d thanol ou plus de
114. is avec le Amersham WB system Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 147 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Illustration de pr sentation de l ensemble sandwich de transfert 148 L illustration ci dessous montre une pr sentation de l ensemble sandwich de transfert Le tableau ci dessous d crit bri vement le processus de pr paration d un sandwich de transfert Stade Description 1 La plaque PVDF est pr alablement mouill e d thanol puis quilibr e dans le tampon de transfert 2 Une ponge est plac e sur la partie inf rieure du support de transfert cou vercle noir 3 Un papier de transfert est pr alablement mouill de tampon de transfert puis plac dans le support de transfert 4 Le cadre avec le gel et les prot ines s par es est retir de son support et plac dans le support de transfert 5 La plaque PVDF est plac e dans le support de transfert 6 Le deuxi me papier de transfert est mouill de tampon de transfert puis plac dans le support de transfert 7 Les bulles d air sont limin es l aide du rouleau int gr dans le support de transfert 8 Une deuxi me ponge est plac e sur le papier de transfert 9 Le support de transfert est ferm Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Pr parer la
115. it s est de 90 cm Cependant il est recommand de disposer d un espace de 140 cm sur la paillasse pour pouvoir proc der la pr paration des r actifs la manipu lation des plaques de gel etc Caract ristiques d alimentation Voir Section 7 1 Sp cifications du syst me en page 217 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 93 4 Installation 4 1 Pr paration du site Exigences informatiques Param tre Donn es Syst me d exploitation Windows 7 Professional 32 bit or 64 bit version fran aise Navigateur Internet Windows Internet Explorer 8 ou sup rieur R solution de l cran R solution de 1280 x 800 ou sup rieure Performance Minimum 2 Go de m moire physique Recommand 4 Go de m moire phy sique Remarque L ordinateur doit tre install plac et utilis conform ment aux instruc tions et sp cifications fournies par son fabricant 94 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel 4 2 Installation du mat riel D baller le Amersham WB analyzer Voir Amersham WB analyzer Instructions de d ballage Soulever les unit s de l instrument sur la paillasse AVERTISSEMENT S assurer que le syst me est plac sur un banc uniforme et stable avec un espace appropri pour la ventilation AVERTISSEMENT Ne pas bloquer l acc s l interrupteur et au cordon d alimentation L interrupteur lectrique
116. l alimentation lectrique Arr t d urgence D r h 4 En cas d urgence d brancher les cordons d alimentation secteur des panneaux arri re de l unit Elpho amp scan et de l unit Western Cela permet de couper le courant imm diatement m me si une alimentation lectrique ininterrompue UPS est utilis e Coupure de courant Le r sultat d une coupure de l alimentation lectrique est d crit ci dessous Coupure de courant entra ne sur Amersham WB analyzer e Toutes les analyses en cours seront interrompues Les analyses ne seront pas poursuivies quand l alimenta tion lectrique reviendra la normale Remarque Une UPS peut liminer la perte de donn es pendant et apr s une coupure de l alimentation lectrique il per met galement de disposer d un certain temps pour proc der un arr t contr l du Amersham WB analy zer e L heure de l arr t sera journalis e dans le logiciel des unit s de l instrument Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 33 2 Consignes de s curit 2 3 Proc dures d urgence Coupure de courant entra ne sur Ordinateur L ordinateur connect l unit Elpho amp scan s arr te Toutes les analyses en cours se poursuivent et se ter minent car l instrument dispose encore d une alimen tation lectrique Quand l ordinateur est red marr et qu un contact a t r tabli les r sultats des analyses sont sauvegar d s
117. lShield Wizard Amersham WB software requires the following items to be installed on your computer Click Install to begin installing these requirements Status Requirement Pending GE Healthcare Life Sciences Windows Driver Package Pending Microsoft Visual C 2005 SP 1 Redistributable Package x86 Pending Microsoft Visual C 2008 SP 1 Redistributable Package x86 Pending JRE_SE 1 7 0_02 x86 Pending Microsoft NET Framework 4 0 Full Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 3 Installation du logiciel tape Action 2 Quand la bo te de dialogue Windows Security s affiche cliquer sur le bouton Install Would you like to install this device software Name GE Healthcare Life Sciences Publisher GE Healthcare Bio Sciences AB Always trust software from GE Healthcare Don t Install Bio Sciences AB F You should only install driver software from publishers you trust How can I decide which device software is safe to install 3 Quand tous les pr requis ont t install s avec succ s commencer l instal lation du logiciel en cliquant sur Next dans la bo te de dialogue Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software RAS Welcome to the InstallShield Wizard for Amersham WB software The InstallShield R Wizard will install Amersham WB software on your computer To continue dick Next WARNING This program is protected by copyright law and i
118. le Amersham WB analyzer D marrer l unit Amersham WB western tape Action 1 D marrer l unit Sur le panneau arri re de l unit Western mettre l interrup teur d alimentation secteur sur I ON Remarque L unit Elpho amp scan doit tre mise sous tension avant qu il soit possible de faire fonctionner l unit Western R sultat L unit Western d marre 2 Pendant le d marrage le panneau des voyants affiche ce qui suit TRANSFER PROBING DRYING Quand les compartiments de l unit Western sont pr ts tre utilis s un carr blanc s affiche pour chacun des trois compartiments transfert sondage et s chage LUI PROBING E ENDEM Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 121 5 R aliser une exp rience 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel Introduction Cette section d crit bri vement comment d marrer le Amersham WB software et configurer une analyse Amersham WB dans le logiciel Pour des informations d taill es voir le Amersham WB software Help dans le volet droit du logiciel D marrer le logiciel tape Action 1 D marrer l ordinateur et ouvrir une session sur Microsoft Windows 2 Double cliquer sur l ic ne Amersham WB software sur le bureau Amersham WB Software R sultat L cran de d marrage du logiciel s affiche f Amersham WB software EE GN m 36 Amersham WB software Fil
119. le fusible sec teur 213 G Guides du dispositif de s chage de la membrane Installer les guides du dispo sitif de s chage de la mem brane 106 Informations r glemen taires 10 Conformit environnemen tale 12 Conformit r glementaire des appareils connect s 13 Normes et r glementations pour les lasers 12 Normes internationales 11 Informations relatives la commande Commander des consom mables 61 Informations sur la fabrica tion 10 Installation Assembler les tours de tubu lure 102 du logiciel 110 Exigences relatives l es pace 93 Exigences relatives l ordi nateur 94 Exigences relatives la salle 92 Installation du logiciel 110 Installer les lectrodes de transfert 98 Installer les guides du dispo sitif de s chage de la mem brane 106 Installer un lecteur de ba lises matricielles 109 Installer les lectrodes de trans fert 98 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Instrument Brancher les cordons d ali mentation 102 Connecter l ordina teur 101 Elpho amp scan loader 42 Elpho amp scan Unit 40 V rifier les connexions de l instrument 114 Voyants 39 Westernunit 44 Interrupteurs de s curit 37 L Lecteur de balises matricielles Description 85 Installer le lecteur de balises matricielles 109 Logiciel D marrer 122 M Maintenance Accessoires de 203 Nettoyage de maintenance du circuit de sondage 200 Nettoyage de mainte
120. leau Gel PR card A en option E Voir Section 3 6 1 Amersham WB molecular weight mar TL kers en page 67 pour plus d informations sur les mar 1 4 5 Cmgte D Sample Larig e E pem Tampi 10 Sarmghe D queurs MW et le calcul auto argile 12 1 longe matique de la courbe d ta Ii impie lonnage des masses mol cu laires lt helclelklehelei lt liel cel LS imernhin WE LA Mlarieit 16 ar Astuce Le tableau de l chantillon n est pas verrouill pendant l lectrophor se Par cons quent il est possible de rem plir le tableau pendant l tape d lectrophor se apr s avoir d marr l analyse si vous avez besoin de d marrer rapi dement une analyse 124 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel tape Illustration de l tape Actions de l op rateur SR SE Ml Saisir le nom la description O Primary ab against target Enter description 0000 du Primary ab against tar Labeled secondary ab Select Labeled secondary ab get en option et s lection Goat anti mouse Cy 3 ner Labeled secondary ab Goat anti rabbit Cy 3 appropri dans le tableau Gel card A Dans ce protocole le Cy5 a t utilis pour le pr mar quage Choisir un anticorps secondaire conjugu au Cy3 R p ter les tapes 3 4 pour la plaque de gel B si elle fait partie de l analyse A
121. lectrophor se pour permettre le contact entre le gel et les bandelettes de tampon Film de protection qui est retir lors de la pr paration du sandwich de transfert uniquement pertinent pour les analyses de type Western Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 71 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 3 Amersham WB buffer strip et Amersham WB buffer strip holder 3 6 3 Amersham WB buffer strip et Amersham WB buffer strip holder Introduction Les supports de bandelette de tampon maintiennent en place les bandelettes de tampon pendant une analyse pas lectrophor se Les supports de bandelette de tampon dispo sent d lectrodes int gr es qui assurent le contact entre l lectrode et la bandelette de tampon permettant le passage d un courant lectrique pendant l analyse Les bandelettes de tampon sont charg es dans les supports avant le d marrage de l analyse et sont jet es apr s celle ci La forme du support guide l utilisateur quand il place les bandelettes de tampon dans les supports et quand il place les supports dans l unit Elpho amp scan Voir Pr parations avant le d marrage de l lectrophor se en page 132 pour plus d infor mations Tampon utilis dans les bandelettes de tampon Le tampon utilis dans les bandelettes de tampon est le tampon Tris tricine Illustration des bandelettes de tampon L illustration ci dessous montre une
122. les pour les tapes du transfert de type Western 75 FA Accessoires et consommables pour le transfert ssssssssssiissssssssssssssseserrirsssssssssssssssnn 76 372 Anticorps secondaires sondage einen 81 37 5 Support de s chage s chage de plaque PVDF ee 83 3 7 4 Adaptateur de membrane Balayage de la plaque PVDF s sssssssssssssssirrsss1ssss0s 84 D AUTOS DICO SOS nee ne ee en 85 39 Pr sentation d logiciel sn ene EEEE E 87 oa aa E E ES 91 PS D OR E E E A 92 42 instalation du Materiel sessist EENE ee 95 As AS OO OO E 110 R aliser une exp rience sessesesseseserseseeseseesessesesseseeseseesesseseseesesseseesesseseseesesses 115 A eN NE 116 52 D marrer l Amersham WB GAIN Z T teniri eeann 120 5 3 Configurer une analyse dans le logiciel essesssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssssrsssresresrerrereen 122 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons s sssssssssssssssssssissriririerrirrrrrrsssrsssssssssssssssssssssssssss 126 5 5 Pr parer le Amersham WB molecular weight markers u 130 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Table des mati res 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines se 131 5 6 1 Avant l lectrophor se einen 132 5 6 2 Ex cuter une Cl DDASS one 139 5 6 3 Proc dures ult rieures l lectrophor se et balayage de la plaque de gel 142 57 Reaiserle wanter aerer a EE EE aE EEEO aE Eee 144 5 7 1 Pr parer et connecter les
123. lp contient des informations sur e les flux de travail des utilisateurs pour ex cuter des analyses par lectrophor se et par transfert de type Western des descriptions du logiciel des liens vers le Amersham WB system User Manual pour obtenir des informations d taill es sur la manipulation de l instrument de ses accessoires et consommables Manuel des m thodes Int gr au Amersham WB software dans le volet droit du logiciel Le manuel Western Blotting Principles and Methods donne des directives relatives la totalit du flux de travail d un transfert de type Western Il d crit les aspects th oriques et pratiques de la technique ainsi que des conseils et des astuces utiles L objet de ce manuel est de guider et d inspirer les d butants aussi bien que les experts vers de transferts r ussis de type Western T l charger ou commander le manuel Western Blotting Principles and Methods 28 9998 97 www gelifesciences com Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 15 1 Introduction 1 4 Amersham WB Documentation du system Fichiers de donn es et notes d application Les fichiers de donn es et les notes d application peuvent tre command s ou t l charg s www gelifesciences com 16 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 Consignes de s curit propos de ce chapitre Ce chapitre d crit les pr cautions de s curit ainsi que le
124. me int gr d analyse des prot ines de type SDS PAGE et transfert de type Western bas sur la d tection de la fluorescence Les tapes d lectrophor se balayage transfert et sondage automatique sont toutes r alis es par le m me syst me Des r actifs pour le pr marquage la d tection des anticorps ainsi que des consommables de type gel et membrane sont disponibles Le Amersham WB system comprend l instrument le Amersham WB analyzer Amersham WB software logiciel ainsi que les accessoires et les consommables Le Amersham WB analyzer est constitu de deux unit s l unit Amersham WB elpho amp scan et l unit Amersham WB western Le syst me prend en charge de nombreuses applications depuis un d pistage rapide de la composition prot ique ou abondance jusqu des analyses quantitatives avanc es de comparaisons des niveaux prot iques entre chantillons Les prot ines peuvent tre pr marqu es avec le r actif color Amersham WB Cy 5 puis tre par cons quent di rectement d tect es dans le gel apr s lectrophor se Au cours des transferts de type Western des chantillons prot iques non marqu s ou pr marqu s par le Cy5 sont transf r s vers des membranes et les prot ines cibles peuvent tre d tect es l aide de Cy3 et ou Cy5 d anticorps secondaires conjugu s La d tection bas e sur la fluores cence permet une sensibilit lev e et une vaste gamme dynamique ainsi qu une analyse multiplex e de l
125. ment de tous les r sidus dangereux Assurez vous que la zone autour de l instrument est propre Si la radioactivit a t utilis e veuillez effectuer une v rification de contamination et prendre les actions n cessaires la decontamination Suffisamment d espace et de d gagement est pr vu pour permettre un acc s en toute s curit pour la maintenance la r paration ou l installation Dans certains cas il peut tre n cessaire que le client d place l quipement de son emplacement normal de fonctionnement avant l arriv e de GE Les consommables tels que les colonnes ou les gels ont t enlev s ou isol s de l instrument et de toute zone pouvant entraver l acc s l instrument Tous les r cipients tampons d chets sont tiquet s Les conteneurs exc dentaires ont t retir s de la zone pour en permettre l acc s Fournissez des explications pour les r ponses Non ici N du produit Type d quipement N de s rie Je confirme que l quipement indiqu ci dessus a t nettoy pour enlever les substances dangereuses et que la zone a t s curis e et est accessible Nom Soci t ou institution Poste ou titre du poste Date ann e mois jour Signature GE et le monogramme GE sont des marques commerciales de General Electric Company GE Healthcare Bio Sciences Corp 800 Centennial Avenue PO Box 1327 Piscataway NJ 0885
126. n de la masse mol culaire des prot ines sur les plaques de gel et de PVDF balay es Le logiciel calcule les courbes d talonnage des masses mol culaires Quand deux courbes d talonnage des masses mol culaires sont utilis es les donn es interpol es partir des courbes sont utilis es pour cr er des courbes d talonnage sp cifiques de la piste de l chantillon Les masses mol culaires de toutes les bandes d tect es dans chaque piste sont alors calcul es Contenu Chaque conditionnement de Amersham WB molecular weight markers contient une quantit suffisante de solution pour analyser 10 plaques de gel o 2 pistes plaques de gel sont charg es avec Amersham WB molecular weight markers Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 67 3 Description du syst me 3 6 Accessoires et consommables pour l lectrophor se 3 6 1 Amersham WB molecular weight markers Illustration des marqueurs MW L illustration ci dessous montre les tailles des Amersham WB molecular weight markers s par es sur une plaque de gel en gradient image de gauche et une plaque de gel ho mog ne image de droite Mx10 225 is 97 66 s 50 35 25 20 14 a 10 sal 225 97 66 50 35 25 E 20 E 4 10 Prot ines des marqueurs MW Le tableau ci dessous montre les prot ines incluses 68 Prot ine Prot ine recombinante Masse mol culaire M x105 Phosphoryl
127. nance du circuit de transfert 199 Programme de mainte nance 190 Remplacer la t te de la pompe de sondage ou de transfert 207 Remplacer le filtre air 204 Remplacer le filtre d en tr e 213 Remplacer le filtre du r ser voir de transfert 212 Remplacer le fusible sec teur 213 Remplacer les lectrodes de transfert 210 Marquage CE 11 Marqueurs MW Illustration 68 Prot ines 68 N Nettoyage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Index Support de s chage 188 195 Nettoyer Adaptateur de mem brane 188 194 Circuit de sondage 180 Circuit de transfert 166 195 Compartiment de s chage 197 le support des bandelettes de tampon 143 Nettoyer le circuit de son dage 195 Nettoyer le circuit de trans fert 195 R servoir de transfert 195 Support des bandelettes de tampon 194 Support de transfert 167 Nettoyer l unit Elpho amp scan 143 Normes internationales 11 P Papier de transfert Description 79 Peigne en papier Description 74 Plaque de gel Composition 69 D solidariser le cadre du gel de son support 155 Placer sur le plateau des plaques 136 Pr sentation du d mon tage 154 R solution de la s paration des prot ines 69 Retirer les films de protec tion avant l lectropho r se 135 S lectionner le type 123 Types 69 Plaque PVDF Placer dans l unit Elpho amp scan 184 Pr cautions de s curit Introduction 18 Pr marquage 126 pH de l ch
128. nce p riodique La maintenance p riodique suivante qui doit tre r alis e par l utilisateur du Amersham WB analyzer Intervalle Action de maintenance Instructions Apr s chaque analyse dans l unit Elpho amp scan Essuyer tout liquide sur le plateau Utiliser un tissu non pelucheux ou un des plaques papier doux pour ne pas rayer la vitre E de protection ou le plateau des plaques Essuyer tout liquide ou salissure de la vitre de protection du couvercle d tanch it Utiliser un tissu non pelucheux impr gn d thanol 50 pour liminer les taches V rifier que la vitre du couvercle d tanch it ne porte pas de rayures ou de marques et qu elle est bien attach e au cadre Contacter le d partement Entretien si vous devez remplacer une partie du couvercle d tanch it Inspecter le fermoir du couvercle d tanch it quand le cadre est ferm et retirer toute salissure Nettoyer les supports des bandelettes Nettoyer les supports des bandelettes de tampon de tampon l aide d eau du robinet pour retirer les sels et le tampon Laisser les supports des bandelettes de tampon s cher l air l envers Nettoyer les adaptateurs de membrane Nettoyer les adaptateurs de membrane l aide d un tissu non pelucheux et les placer dans l espace de stockage du compartiment des anticorps 194 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Action de maintenance Apr s chaque an
129. ndre le couvercle blanc et l ins rer dans les deux cavit s image de gauche e Saisir les poign es du papier de transfert avec votre main gauche et faire glisser le rou leau dans les chemins de gui dage du support vers l autre c t du support de transfert l aide de votre main droite Placer la deuxi me ponge sur le papier de transfert Fermer le support de transfert en appuyant sur le couvercle jusqu ce que les fermoirs se verrouillent en place 160 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 3 Ex cuter le transfert 5 7 3 Ex cuter le transfert Introduction Cette section d crit e comment charger le support de transfert dans le r servoir de transfert e comment d marrer et surveiller le transfert e les proc dures a ex cuter apr s le transfert Avant le transfert S assurer que le tampon de transfert et l eau ultra pure pour l ex cution du transfert ont t connect s Voir Connecter la tubulure au tampon de transfert et l eau ultra pure sur le porte flacons en page 146 pour plus d informations Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 161 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 3 Ex cuter le transfert Charger les sandwiches de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Ouvrir le couvercle du r servoir de transfert Ins rer les supports de
130. ng Scanning Membranes 27 o Quand le balayage est termin les images Position A Cy5 Position B Cy M a de la membrane sont affich es dans la zone Membrane Scanning Position A Cy3 Position B Cy3 Afficher les r sultats tape Action 1 Cliquer sur l tape du flux de travail EVALUATION dans le logiciel R sultat Les images dans la zone Membrane Scanning sont valu es La progression de l valuation est affich e dans une barre de progression Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 187 5 R aliser une exp rience 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats tape Action 2 Quand l valuation des images a t r alis e les images sont affich es dans l cran Evaluation qui montre les valeurs normalis es pour l analyse dans l onglet Bar chart Pour plus d informations sur la m thode d analyse des r sultats voir le User Manual ou software help Proc dures apr s le balayage de la membrane 188 tape Action 1 Appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ject 2 Ouvrir le couvercle d tanch it 3 Retirer l adaptateur de membrane avec la plaque PVDF du plateau des plaques 4 Retirer la plaque PVDF de l adaptateur de membrane Astuce La plaque PVDF peut tre stock e l tat sec entre deux papiers filtres dans son emballage PVDF d origine Les signaux de la plaque PVDF s ch e restent sta
131. ns cet exemple Voyants d tat Description TRANSFER D marrage Le texte est allum quand l unit d marre et proc de ses tests internes TRANSFER Pr t Analyse ter Le voyant est allum quand min e KEEP e le compartiment l unit est pr t e pour une nouvelle analyse une tape par ex lectrophor se balayage transfert sondage ou s chage est termin e TRANSFER Le voyant est allum e quand le compartiment l unit fonctionne pendant le nettoyage des circuits de transfert ou de sondage Remarque Ne pas ouvrir le s couvercle s concer n s pendant l analyse Par exemple l ouverture du couvercle de transfert pendant le transfert va arr ter l ex cu tion du transfert et peut affecter le r sul tat TRANSFER Erreur ou Le voyant est allum quand une erreur avertissement s est produite Se r f rer Amersham WB software pour plus d informations propos de l erreur Des suggestions sur la fa on de corriger le probl me sont fournies par le logiciel Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 39 3 Description du syst me 3 2 Unit Elpho amp scan 3 2 Unit Elpho amp scan Introduction L unit Elpho amp scan est utilis e pour s parer le prot ines de l chantillon trait par SDS dans un gel de polyacrylamide Elle est aussi utilis e pour balayer les gels apr s lectro phor se ainsi que les plaques PVDF apr s sondage et s chage dans l
132. nt am liorer ou optimiser les proc dures Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 3 Informations r glementaires 1 3 Informations r glementaires Introduction Cette section d crit les directives et les normes auxquelles le Amersham WB system est conforme Informations sur la fabrication Le tableau ci dessous r sume les informations requises sur la fabrication Pour plus d informations voir le document D claration de conformit DoC UE Exigence Contenu Nom et adresse du fabricant GE Healthcare Bio Sciences AB Bj rkgatan 30 SE 751 84 Uppsala Sweden Conformit avec les directives UE Ce produit est conforme aux directives europ ennes cit es dans le tableau en r pondant aux normes harmonis es correspondantes Directive 2006 42 CE Directive Machines DM 2004 108 CE Directive Compatibilit lectromagn tique CEM 2006 95 CE Directive Basse tension DBT 10 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 3 Informations r glementaires Marquage CE Le marquage CE et la D claration de conformit UE correspondante sont valides pour l instrument lorsqu il est e Utilis comme unit ind pendante ou e Connect d autres produits recommand s ou d crits dans le manuel d utilisation et e Utilis dans le m me tat que celui dans lequel il a t livr par GE sauf en ce qui concerne les alt rations d crites dan
133. nt des informations sur le d classement du Amersham WB analyzer D pollution Le Amersham WB analyzer doit tre d contamin avant son d classement et toutes les r glementations locales doivent tre respect es en ce qui concerne le recyclage des appareils Mise au rebut instructions g n rales Lorsque le Amersham WB analyzer est mis hors service les diff rents mat riaux doivent tre s par s et recycl s conform ment aux r glementations environnementales natio nales et locales en vigueur Recyclage des substances dangereuses Le Amersham WB analyzer contient des substances dangereuses Des informations d taill es sont votre disposition aupr s de votre repr sentant GE Mise au rebut des composants lectriques Les d chets issus des quipements lectriques et lectroniques ne doivent pas tre li min s comme des d chets municipaux non tri s et doivent tre collect s s par ment Veuillez contacter un repr sentant autoris du fabricant pour obtenir des informations propos du d classement de l appareil Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 35 3 Description du syst me 2 Description du syst me propos de ce chapitre Ce chapitre d crit les diff rentes parties du Amersham WB system Le Amersham WB system est constitu de e Amersham WB analyzer deux unit s e des accessoires et consommables utilis s avec l instrument e d un ordinateur non inclus dans l
134. nternational treaties sek Cnt Con Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 111 4 Installation 4 3 Installation du logiciel tape Action 4 Lire le contrat de licence du logiciel Quand vous avez lu et accept le contrat de licence s lectionner l option I accept et cliquer sur Next Please read the following license agreement carefully GE Healthcare STANDARD SOFTWARE END USER LICENSE AGREEMENT FOR LIFE SCIENCES SOFTWARE PRODUCTS IMPORTANT PLEASE READ CAREFULLY THIS IS THE LICENSE AGREEMENT THAT END USER IS REQUIRED TO ACCEPT BEFORE INSTALLING AND USING GE HEALTHCARE SOFTWARE CAREFULLY READ ALL OF THE TERMS AND CONDITIONS OF THIS LICENSE AGREEMENT BEFORE PROCEEDING I accept the terms in the license agreement I do not accept the terms in the license agreement InstallShield lt Bak next gt e Pour modifier le r pertoire par d faut non recommand cliquer sur Change et naviguer vers le r pertoire souhait e Cliquer sur Next RE ee PTT Re j cs 15n1 CI w zarg F PRAJA AASA ES af SR CONN PEN EE Es Amersham WE software Destination Folder Click Next to install to this folder or dick Change to install to a different foh E7 Install Amersham WB software to C Program Files x86 GE Healthcare Amersham WE software Change Installshield 112 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 3 Installation du logici
135. ntilation Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 21 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit 22 AVERTISSEMENT Ne pas bloquer l acc s l interrupteur et au cordon d alimentation L interrupteur lectrique doit toujours tre facilement accessible Le cordon d alimentation dot d une prise doit toujours tre facile d brancher AVERTISSEMENT Mise la terre de s curit et cordon d alimentation Le Amersham WB analyzer doit toujours tre raccord une prise lectrique mise la terre Utiliser uniquement un cordon d alimentation 3 fils fourni ou ho mologu par GE ou conforme aux exigences de la r glementation lectrique locale en vigueur MISE EN GARDE Ne jamais d placer le Western avec les flacons pos s sur l instru ment MISE EN GARDE Objet lourd Deux personnes sont n cessaires pour soulever l ins trument en toute s curit AVIS Tout ordinateur utilis avec l instrument doit tre conforme la norme IEC EN UL CSA 60950 1 ou autres r glementations en ma ti re de s curit I doit tre install et utilis conform ment aux instructions du fabricant O ODD AVIS D brancher les c bles Pour viter que l quipement ne subisse des dommages d brancher toujours les c bles avant de d placer un instrument Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 1 C
136. ntre 15 C et 30 C Tenir les anticorps secondaires reconstitu s l abri de la lu mi re Les aliquotes ne doivent pas tre conserv es plus de 6 mois viter la r p tition des cycles cong lation d cong lation Anticorps primaires Voir les instructions du fabri cant Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE Voir les instructions du fabri cant 63 3 Description du syst me 3 5 Consommable pr marquage 3 5 Consommable pr marquage Introduction Les consommables de pr marquage sont utilis s pour le pr marquage des chantillons prot iques avec un colorant fluorescent Pr marquage fluorescent des chantillons e permet la d tection des prot ines totales lors du balayage de la plaque de gel e limine le besoin de proc der une post coloration du gel Quand utiliser le pr marquage des prot ines Le pr marquage des prot ines est toujours r alis avant l tape d lectrophor se lors de la r alisation e d analyses par lectrophor se e d analyses de type Western avec normalisation des prot ines totales Consommable pr marquage Les consommables de pr marquage sont emball s ind pendamment dans des sachets Chaque sachet de consommable contient des r actifs en solution en quantit suffisante pour analyser 10 plaques de gel o 14 pistes plaque de gel sont charg es avec des chantillons pr marqu s c est dire 140 r actions individuelles
137. onsignes de s curit Utilisation du syst me AVERTISSEMENT Explosion de la vitre Ne pas faire fonctionner le syst me si la vitre du couvercle d tanch it de l appareil Elpho amp scan est ray e o cass e Mettre l instrument hors tension d brancher le cordon d alimentation et contacter un technicien de maintenance agr AVERTISSEMENT Risque de choc lectrique apr s un d versement pendant une analyse S il existe un risque de voir se d verser du liquide dans le bo tier du Amersham WB analyzer mettre imm diatement l instru ment hors tension d brancher le cordon d alimentation et contacter un technicien de maintenance agr AVERTISSEMENT Apr s l lectrophor se ou apr s le transfert quand le sandwich de transfert a t ouvert et que la plaque PVDF a t plac e dans le compartiment de sondage mettre le gel au rebut en toute s curit Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS de la plaque de gel dans laquelle figurent les instructions concernant le gel et sa mise au rebut MISE EN GARDE Parties mobiles Veiller lors de l ouverture de la fermeture du chargeur ce que vos doigts ou vos v tements ne soient pas coinc s quand le chargeur se d place Ne jamais placer de bouteilles ou de flacons devant l appareil Elpho amp scan Ils sont susceptibles de tomber quand le chargeur est ou vert MISE EN GARDE Risque de choc lectrique Toujours arr t
138. plaque PVDF Plaque Les instructions ci dessous d crivent la pr paration d un sandwich de transfert tape Action 1 Retirer un emballage unique de plaque PVDF du carton PVDF Amershom WB PVDF cord sn ked 29022568 Lotne ONIM identity ne OO se ra sart eh sm INT TES M Remarque Conserver l emballage pour l identification de la plaque PVDF individuelle et pour la stocker ult rieurement 2 Retirer la plaque PVDF de l emballage et retirer le premier papier de protec tion de couleur bleue Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 149 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Action 3 En option e Avantde retirer le deuxi me papier de protection effectuer une annota tion l aide d un crayon sur la surface de la plaque PVDF Astuce La surface permettant l criture peut tre utilis e pour saisir la position A or B o la plaque PVDF est utilis e e S lectionner l tape du flux de travail TRANSFER dans le logiciel Placer le curseur dans le champ Note appropri et taper le texte Gel Cards amp Membranes Membrane J Position A M Position B ID l Note 150 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Action 4 Retirer le deuxi me papier de protection de couleur bleue Remarque
139. pompe de sondage filtre air le filtre du r servoir de transfert les lectrodes de transfert ensemble filtre d entr e fusible pour conna tre les fusibles corrects voir Section 7 1 Sp cifications du syst me en page 217 Pr cautions d emploi AVERTISSEMENT D brancher l alimentation Toujours d brancher l alimentation de l instrument avant de remplacer un de ses composants sauf mention contraire dans le manuel d utilisation Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 203 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement AVERTISSEMENT Retirer tous les flacons du porte flacons avant d ouvrir le couvercle du compartiment d entretien Remplacer le filtre air Les instructions ci dessous montrent comment remplacer le filtre air Etape Action 1 Ouvrir le couvercle du compartiment d entretien en 204 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 2 Proc dures de remplacement tape Action 2 Ouvrir le couvercle au dessus du compartiment o se trouve le filtre en fai sant tourner l crou en sens inverse des aiguilles d une montre et le retirer 3 Retirer le filtre du cadre en le tirant vers le haut par le support qui lui est fix 4 Retirer la partie sup rieure de la grille en plastique du support l o se trouve le filtre s Remplacer le f
140. pon de lavage PBS T Tween 20 0 1 dans du 1xPBS 560 ml Tampon de lavage final PBS pH 7 4 290 ml Solution d anticorps Anticorps dans du PBS T Tween 20 0 1 dans du 5 12ml 1xPBS Voir Amersham WB system User Manual pour savoir comment d terminer les concentrations optimales en anticorps Eau ultra pure utilis e pour Eau ultra pure les rin ages entre les tapes de sondage et le nettoyage du circuit de sondage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 169 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps Connecter la tubulure aux solutions de sondage sur le porte flacons MISE EN GARDE Pour viter les claboussures de liquides dangereux utiliser des filtres d entr e lourds reli s aux tubulures des flacons Voir Section 3 8 Autres accessoires en page 85 pour la description des filtres d admission et des porte tubes Voir Attacher les supports de tubulure en page 104 pour des indications sur la fixation des accessoires Avant de d marrer le sondage connecter la tubulure depuis les tours de tubulure du milieu et de droite vers les solutions utilis es pour l ex cution du sondage comme suit tape Action l Depuis la tour de tubulure du milieu placer la tubulure marqu e e P Water dans un flacon de 1000 ml d eau ultra pure e P Block dans un flacon de 100 ml de
141. ption du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 4 Adaptateur de membrane Balayage de la plaque PVDF 3 7 4 Adaptateur de membrane Balayage de la plaque PVDF Introduction Le Amersham WB membrane adapter adaptateur de membrane oriente et fixe la plaque PVDF dans la bonne position afin d obtenir le meilleur balayage et la meilleure d tection dans l unit du Elpho amp scan Illustration de l adaptateur de membrane Les illustrations ci dessous montrent l adaptateur de membrane quand il est ferm gauche et quand il est ouvert droite 84 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 8 Autres accessoires 3 8 Autres accessoires Lecteur de balises matricielles Le lecteur de balises matricielles est utilis pour saisir des informations sur la plaque de gel et PVDF code produit ID et num ro de lot dans le logiciel en lisant les balises matri cielles de donn es et l tiquette de l emballage unique de la plaque PVDF Il doit tre command s par ment voir Informations relatives la commande dans Amersham WB system User Manual L illustration ci dessous montre le lecteur de balises matricielles Support de filtre d entr e Les supports de filtre d entr e avec les filtres d entr e sont fix s aux tubes d entr e in s r s dans les flacons plac s sur le porte flacons Les particules sont filtr es par le filtr
142. r sence de la haute tension l int rieur du r servoir de transfert de l unit Western L unit dispose d interrupteurs de s curit qui coupe l alimentation quand le couvercle du r servoir de transfert est ouvert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 37 3 Description du syst me 3 1 Pr sentation de l instrument Illustration du Amersham WB analyzer L illustration ci dessous montre le Amersham WB analyzer avec l unit Elpho amp scan sur la gauche et l unit Western sur la droite Illustration des panneaux de l instrument La m me configuration des voyants lumineux est disponible sur les unit s de l instrument lectrophor se et balayage transfert sondage et s chage Quand les unit s de l instru ment sont sous tension les voyants indiquant les noms des compartiments sont allum s Les voyants se trouvent sur le panneau de l instrument de chaque unit L illustration ci dessous montre les panneaux de l instrument de deux unit s avec les noms des compartiments allum s ELPHO amp SCAN EB TRANSFER E PROBING LUE 38 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 1 Pr sentation de l instrument Voyants sur l instrument Le tableau ci dessous d crit les diff rents voyants Les voyants Pr t Analyse termin e Analyse et Erreur o Avertissement sont identiques pour les compartiments des unit s de l instrument Les voyants sont d crits TRANSFER da
143. ra pure Centrifuger pour m langer 3 Diluer les marqueurs de poids mol culaire 1 20 avec la pr paration de tampon de chargement Remarque Les marqueurs de poids mol culaire peuvent tre davantage dilu s dans la pr paration de tampon de marquage pour les chantillons signal faible Il est toutefois n cessaire de s lectionner l option Stop electro phoresis on time Analyses par lectrophor se R pliques 130 Lors des analyses par lectrophor se il n est en g n ral pas n cessaire de diluer le Amersham WB molecular weight markers Si n cessaire diluer les marqueurs de poids mol culaire avec le tampon de chargement contenant une solution DTT dilu avec un volume gal d eau ultra purel I est recommand d inclure deux pistes de marqueurs dans l analyse pour obtenir les meilleurs r sultats possibles dans l talonnage des prot ines d chantillonnage lors de l tape d valuation Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines Introduction Cette section d crit comment r aliser une lectrophor se des prot ines avec les pr parations avant de commencer l lectrophor se la r alisation d un nettoyage du puits de l chantillon le d marrage et la surveillance de l lectrophor se et le balayage de la plaque de gel les proc dures post rieures
144. ration pour certaines substances dangereuses dans les composants lectro niques Etiquette de s curit concernant la lumi re laser Les tiquettes suivantes concernent la lumi re laser La premi re tiquette est appos e sur le panneau arri re de l unit Elpho amp scan La seconde est appos e l int rieur du chargeurElpho amp scan tiquette Description Cet appareil est un Produit laser de classe 1 CEI 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Cet appareil r ponds aux exigences en mati re de s curit des rayonnements laser sp cifi es Complies with 21 CFR 1040 10 and 1040 11 except dans le Code of Federal Regulations TITRE 21 CFR for deviations pursuant to Laser Notice No 50 chapitre 1 sous chapitre J Partie 1040 10 Produits dated July 24 2007 IEC EN 60825 1 2007 laser Jan Feb Mar Apr Mau Junf r L tiquette indique galement le mois de fabrica Jul Aug Sep Oct Nov Dec ia Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 31 2 Consignes de s curit 2 2 tiquettes tiquette Description Le symbole est visible lorsque le chargeur Elpho amp scan est ouvert 32 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 2 Consignes de s curit 2 3 Proc dures d urgence 2 3 Proc dures d urgence Introduction Cette section d crit comment proc der un arr t d urgence du Amersham WB analyzer et le r sultat de celui ci en cas de coupure de
145. re les orifices de la plaque PVDF et les goubpilles de guidage marqu es de cercles orange et rouler la plaque PVDF vers le bas dans la chambre de sondage Remarque Veiller ne pas toucher la zone d absorption de la plaque PVDF Fermer le couvercle de la chambre de sondage et le couvercle du compartiment de sondage S assu rer que le couvercle de la chambre de sondage est verrouill par le fermoir 176 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 2 Ex cuter le sondage D marrer et surveiller le sondage tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Dans le logiciel cliquer sur l tape f du flux de travail PROBING amp DRYING PROBING amp DRYING rez Due nai Repas Utiliser les param tres par d faut pour les Probing steps dans la CE GA 10 1 Inetstep zone Probing comme indiqu Wash m o 2 Remove step dans la capture d cran Primary antibody Me 60 1 Wash Me 1 4 re Secondary antibody Me 30 1 Wash M 1 4 an Final wash w 1 6 E Total time 2 31 h 5 Cliquer sur Start Probin f B R sultat Le sondage d marre Start Ready for Probing L tape du sondage en cours est affich e dans la zone Probing n Probing Ready at Remaining time Start Probing in progress 16 36 227 n Probin
146. rt quand le sandwich de transfert a t ouvert et que la plaque PVDF a t plac e dans le compartiment de sondage mettre le gel au rebut en toute s curit Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS de la plaque de gel dans laquelle figurent les instructions concernant le gel et sa mise au rebut Remarque R aliser cette tape quand le sandwich de transfert a t ouvert et que la plaque PVDF a t plac e dans la chambre de sondage tape Action 1 Retirer le gel du support de transfert liminer le gel selon les instructions des fiches de donn es de s curit SDS MSDS et de la r glementation locale en mati re de gestion des d chets 2 Retirer et jeter les ponges et les papiers de transfert 3 Nettoyer les diff rentes parties du support de transfert l eau courante 4 Laisser le support de transfert s cher l air Passer au sondage Ex cuter l une des actions suivantes e Siles solutions de sondage et les solutions d anticorps ont t pr par es et connect es l unit Western proc der comme indiqu par les instructions de Sec tion 5 8 2 Ex cuter le sondage en page 173 sinon e Proc der comme indiqu par les instructions de Section 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps en page 169 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 167 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 R aliser le sondage et
147. s Tubes de nes Section au laboratoire d anticorps Se Anticorps secondaire Amersham WB goot anti mouse Cy3 Cy5 Cy3 Cy5 de ch vre anti souris ou Amersham WB goat anti rabbit Cy3 Cy5 Cy3 Cy5 de ch vre anti lapin Plaque PVDF provenant de l tape de transfert Solutions de sondage pr par es au la boratoire pour les formules voir For mules pour solutions de sondage et solu tions d anticorps en page 169 S chage Plaque PVDF provenant de l tape de son Amersham WB drying S O dage holder Support de s chage Balayage de la Plaque PVDF provenant de l tape de s Amersham WB mem Section plaque PVDF dans chage brane adaptert 3 7 4 l unit Elpho amp adaptateur de mem scan brane Autres 60 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables Consommables n cessaires Accessoires Pour plus n cessaires de d tails voir Balayage des ba Lecteur de balises Section lises matricielles matricielles com 3 8 de donn es sur mander s par ment les plaques de gel et les plaques uniques PVDF en option 1 Inclus lors de la livraison du Amersham WB analyzer Commander des consommables Selon l analyse r aliser diff rentes combinaisons de consommables sont n cessaires Un guide de s lection permettant de r unir un kit de consommables est disponible www gelifesciences com
148. s de une photostabilit importante Le signal sur la membrane sond e est stable pendant gt 3 mois si elle est conserv e l obscurit Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 81 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 2 Anticorps secondaires sondage Pr paration et conservation des anticorps secondaires reconstitu s Reconstituer les anticorps secondaires dans 150 ul d eau ultra pure par flacon une concentration de 1 ug ul Centrifuger les anticorps secondaires reconstitu s I est recommand de conserver les anticorps secondaires sous forme d aliquotes entre 15 C et 30 C et l abri de la lumi re Eviter la r p tition des cycles cong lation d con g lation 82 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 7 Accessoires et consommables pour les tapes du transfert de type Western 3 7 3 Support de s chage s chage de plaque PVDF 3 7 3 Support de s chage s chage de plaque PVDF Introduction Le Amersham WB drying holder support de s chage oriente et fixe la plaque PVDF dans la bonne position afin d obtenir le meilleur r sultat de s chage possible Illustration du support de s chage Les illustrations ci dessous pr sentent le support de s chage quand il est ferm ci dessus et quand il est ouvert ci dessous Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 83 3 Descri
149. s le manuel d utilisation Normes internationales Les exigences en mati re de normes auxquelles ce produit est conforme sont r capitul es dans le tableau ci dessous Description Remarques EN CEI 61010 1 UL Exigences de s curit pour les qui La norme EN est 61010 1 CAN CSA C22 2 pements lectriques destin s la harmonis e No 1010 1 mesure au contr le et l utilisation avec la directive en laboratoire europ enne 2006 95 CE EN CEI61326 1 Appareil lectrique pour la mesure La norme EN est le contr le et l utilisation en labora harmonis e toire Exigences EMC avec la directive europ enne 2004 108 CE mission d apr s CISPR 11 Groupe 1 classe A EN ISO 12100 S curit des machines Principes La norme EN g n raux de conception valuation ISO est harmoni et r duction des risques s e avec la direc tive europ enne 2006 42 CE EN CEI 60825 1 S curit des produits laser La norme EN est harmonis e avec la directive europ enne 2006 95 CE Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 11 1 Introduction 1 3 Informations r glementaires Normes et r glementations pour les lasers Cet appareil est un produit laser de classe 1 CEI 60825 1 2007 EN 60825 1 2007 Cet instrument se conforme aux caract ristiques de s curit du rayonnement laser sp cifi es par le Code of the Federal Regulations TITRE 21 CFR chapitre 1 sous chabpitre J Partie
150. s proc dures d arr t d urgence du Amersham WB system Les tiquettes sur les instruments ainsi que les informations concernant leur recyclage sont galement d crites Dans ce chapitre Ce chapitre comporte les sections suivantes Section Voir page 2 1 Consignes de s curit 18 2 2 tiquettes 27 2 3 Proc dures d urgence 33 2 4 Informations sur le recyclage 25 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 17 2 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit 2 1 Consignes de s curit Introduction Le Amersham WB analyzer est aliment par la tension secteur et utilise des liquides susceptibles d tre dangereux Avant d installer de faire fonctionner ou d entretenir les unit s de l instrument vous devez avoir pris connaissance des dangers d crits dans ce manuel Toujours respecter les r glementations locales et les instructions pendant le fonctionne ment la maintenance du syst me et la manipulation des produits chimiques en toute s curit Respecter les instructions fournies afin d viter les blessures corporelles et d endom mager l appareil Les consignes de s curit de cette section sont regroup es dans les cat gories suivantes Consignes g n rales Liquides inflammables Protection individuelle Installation et d placement Utilisation du syst me Maintenance D classement Consignes g n rales AVERTISSEMENT Utiliser Amersham WB analyzer uniquement selon les instruct
151. s sections suivantes Section Voir page 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage 199 6 2 2 Proc dures de remplacement 203 6 2 3 D placement des unit s de l instrument 215 198 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage Introduction Proc der au nettoyage de maintenance des circuits de transfert et de sondage de fa on hebdomadaire ou si l unit n a pas t utilis e depuis deux jours Nettoyage de maintenance du circuit de transfert La proc dure dure environ 25 minutes Le sondage et le s chage peuvent tre ex cut s en parall le Remarque S assurer de l absence de supports de transfert dans le r servoir AVERTISSEMENT Lors de l utilisation de substances chimiques dangereuses viter tout d versement et porter des lunettes de s curit et d autres quipements de protection individuelle appropri s Par exemple la solution NaOH est corrosive et par cons quent dangereuse pour la sant Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 199 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage tape Action 1 S lectionner dans le logiciel Control Maintenance clean Tran
152. sfer flow path ou cliquer sur le bouton Maintenance clean Transfer dans l cran de d mar rage du logiciel R sultat La bo te de dialogue Maintenance Clean Transfer Flow Path s ouvre Maintenance Clean Transfer Flow Path Maintenance cleaning of the transfer flow path Wipe both transfer tubing with a wet tissue Insert the transfer Water tubing in 2000 ml water Insert the transfer Buffer tubing in 1000 ml wash solution Make sure that no transfer holders are left in the tank Note Discard all solutions after cleaning The procedure will take about 25 minutes Start clean Cancel e Essuyer la partie sup rieure du r servoir de transfert et les deux tubulures de transfert avec un tissu humide V rifier que le filtre du r servoir de transfert est intact et propre Si n cessaire remplacer le filtre Immerger la T Water tubulure dans un flacon contenant 2 000 ml d eau ultra pure Immerger la tubulure T Buffer dans un flacon contenant 1000 ml de NaOH 0 5 M Cliquer sur le bouton Start clean dans la bo te de dialogue Quand le nettoyage est termin transf rer la tubulure dans un flacon vide Remarque Jeter toutes les solutions apr s le nettoyage Nettoyage de maintenance du circuit de sondage La proc dure dure environ 45 minutes Le transfert et le s chage peuvent tre ex cut s en parall le Remarque S assurer de l absence de plaques PVDF dans les chambres de
153. solution de blocage Depuis la tour de tubulure de droite placer la tubulure marqu e e P Wash dans un flacon de 1 000 ml de solution de lavage PBS T e P Final Wash dans un flacon de 500 ml de solution de lavage final PBS Avant de d marrer le sondage connecter les tubes de la solution d anticorps dans le compartiment des anticorps voir ci dessous pour plus d informa tions Connecter les tubes de la solution d anticorps Remarque Les solutions d anticorps doivent tre pr par es et connect es proxi 170 mit du d marrage du sondage Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps tape Action l Ouvrir le compartiment des anticorps de l unit Western en appuyant sur le symbole d jection du couvercle du compartiment des anticorps Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 171 5 R aliser une exp rience 5 8 R aliser le sondage et le s chage 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps tape Action 2 Ins rer chaque tube de solution d anticorps dans la position appropri e en pla ant la tubulure dans le tube et en pin ant le tube en position Le tableau ci dessous d crit quels anticorps doivent tre plac s dans quelles positions des tubes d anticorps dans le compartiment des anticorps Position Description
154. solutions de transfert sss ss isssssssssssssesesesirrssssssssssssesnn 145 5 72 Pr parer le sandwich de transfert inner 147 57a Ex cuter le transfert ie 161 5 7 4 Procedures opress de MONSIEUR atien a ENTERA 165 5 8 R aliser le sondage et le s chage ein 168 5 8 1 Pr parer et connecter les solutions de sondage et d anticorps s 169 5 8 2 Ex cuter le sondage nue ESEE E KE AAEE ENAERE 173 565 Procedures OH OS le Sondage srana rinnan nnr A AS 178 5 8 4 Ex cuter le s chage einen 182 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats ssessseieerrrrrrsrrrssessssssssssssssssssssssssssssssss 184 C PO ORO ae D co da mua a 190 6 1 Programme de Maintenance a ne 193 6 2 Instructions relatives la maintenance sssssssssrssessssssssssssssssssssssssssrssrsssrsssrersrrrrrrrrrrrrren 198 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage 199 6 2 2 Proc dures de remplacement een 203 6 2 3 D placement des unit s de l instrument ss 215 7 Informations de r f rence nes 216 LT Specifications CES VE t 217 1e Guide d r s LanCe CHRIS Eanna E aE eE E 222 7 3 Formulaire de d claration de sant et de s curit ssssssssssssisisesssssssssssssesrrrrrerrssssssssssren 224 7 4 Traductions des accessoires et des consommables s 226 RO 227 4 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 Introduction Le Amersham WB system Le Amersham WB system est un syst
155. sondage 200 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 6 Maintenance 6 2 Instructions relatives la maintenance 6 2 1 Nettoyage hebdomadaire des circuits de transfert et de sondage AVERTISSEMENT Lors de l utilisation de substances chimiques dangereuses viter tout d versement et porter des lunettes de s curit et d autres quipements de protection individuelle appropri s Par exemple la solution NaOH est corrosive et par cons quent dangereuse pour la sant tape Action 1 S lectionner dans le logiciel Control Maintenance clean Probing flow path ou cliquer sur le bouton Maintenance clean Probing dans l cran de d mar rage du logiciel R sultat La bo te de dialogue Maintenance Clean Probing Flow Path s ouvre r Maintenance Clean Probing Flow Path Maintenance cleaning of the probing flow path 1 Wipe all probing tubing with a wet tissue 2 Insert the probing Water tubing in at least 1000 ml water 3 Insert the Custom tubing in at least 450 ml cleaning solution 4 Insert the tubing for probing Block Wash and Final wash in an empty bottle 5 Make sure there are four empty tubes in the antibody solution compartment 6 Make sure there are no membranes left in the probing chambers Note Discard all solutions and the antibody tubes after the cleaning The procedure will take about 45 minutes Start clean Cancel 2 Essuyer la tubulure de sondage le couv
156. stem Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se Illustration de l tape Actions de l op rateur Placer les bandelettes de tampon dans leurs supports en sortant deux bandelettes de leur conditionnement et en les pla ant directement dans leurs supports Remarque Pour viter la contamination des bandelettes de tampon ne pas les toucher ou s assu rer d utiliser des gants propres Unit Appuyer sur le bouton d jection de l unit Elpho amp scan R sultat Le chargeur est ject Ouvrir le couvercle d tan ch it l aide du fermoir Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 133 5 R aliser une exp rience 5 6 R aliser une lectrophor se des prot ines 5 6 1 Avant l lectrophor se tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Placer les supports de bande lettes de tampon dans les cavit s du plateau des plaques dans le chargeur D e Sortir une plaque de gel de son conditionnement avec la face avant orient e vers le haut LLLLLLLII CSS e En option Placer le cur seur dans le champ ID dans le logiciel l tape ELECTROPHORESIS amp GEL SCANNING du flux de travail du logiciel et balayer la balise matri cielle de la plaque de gel indiqu e par un cercle orange l aide du lec teur de balises matri ciell
157. stuce Vous pouvez imprimer le protocole et l utiliser lors de la pr paration de l chantillon et du pr marquage Pour im primer le protocole cliquer sur l ic ne droite des onglets de la plaque de gel ou appuyer sur Ctrl P Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 125 5 R aliser une exp rience 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons 5 4 R aliser le pr marquage des chantillons Introduction Le pr marquage des chantillons est n cessaire pour la d tection lors de analyses par lectrophor se Il est galement n cessaire pour les analyses de type Western lors de la d tection des prot ines totales sur une membrane Cette section d crit e pr requis pour le pr marquage e mat riels requis pour le pr marquage e pr parations ant rieures au d marrage du pr marquage e marquage des chantillons protocole de pr marquage Dans cet exemple le pr marquage d chantillons cellulaires tissulaires lys s utiliser lors d une analyse de type Western with total protein normalization est r alis Pour plus d informations propos du pr marquage voir Amersham WB system User Manual Pr cautions d emploi AVERTISSEMENT En cas de pr marquage d chantillons de prot ines e Toujours porter des gants des v tements et des lunettes de protection e Lire la Fiche de donn es de s curit SDS MSDS avant de pro c der au pr marquage des chantillons MI
158. t Western utilise un c ble Ethernet Entr e d air Interrupteur de secteur ON I OFF O Tiroir des fusibles 5x20 mm Connecteur du cordon d alimentation 60320 C14 Sorties d air Chargeur Elpho amp scan Chargeur Le chargeur Elpho amp scan est utilis pour charger e les plaques de gel pour lectrophor se et balayage e les plaques PVDF pour balayage Lors du chargement de plaques PVDF pour balayage un Amersham WB membrane adapter doit tout d abord tre plac sur le plateau des plaques voir Section 5 9 Balayer la membrane et voir les r sultats en page 184 pour plus d informations Le chargeur est ject de l unit Elpho amp scan en appuyant sur le bouton d jection sur le panneau avant 42 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 2 Unit Elpho amp scan Illustration du Elpho amp scanchargeur L illustration ci dessous montre l unit Elpho amp scan avec le chargeur ject et les cou vercles d tanch it du plateau des plaques de gauche ouverts L 2 3 ne f 5 Description Verrou Pour ouvrir le couvercle d tanch it Couvercle d tanch it Voyant de position A et de position B Cavit s Pour les supports de bandelettes de tampon avec connecteurs lectriques pour les lectrodes du tampon Goupilles de guidage Pour le placement correct des plaques de gel ou des adaptateurs
159. t de s curit une description du syst me de ses accessoires et des consommables utilis s avec le syst me des informations en mati re d installation des informations en mati re d ex cution d un analyse en toute s curit des instructions en mati re de maintenance par l utilisateur des sp cifications et des informations de r f rence suppl mentaires Conventions typographiques Les l ments du logiciel sont identifi s dans le texte par des caract res italiques gras Deux points s parent les niveaux de menu ainsi File Open renvoie la commande Open dans le menu File Les l ments mat riels sont identifi s dans le texte par des caract res en gras par ex commutateur Power Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 1 Introduction 1 2 Informations importantes pour l utilisateur 1 2 Informations importantes pour l utilisateur Lire ceci avant de faire fonctionner le Amersham WB analyzer Tous les utilisateurs doivent lire l int gralit du Mode d emploi avant d installer d utiliser ou d entretenir l instrument Toujours garder le Mode d emploi port e de main quand vous faites fonctionner le Amersham WB analyzer Ne pas faire fonctionner le Amersham WB analyzer d une autre mani re que celle qui est d crite dans le manuel d utilisation Dans le cas contraire vous pouvez tre expos des dangers pouvant entra ner des blessures corporelles ou endommager l appareil Utilisation pr
160. tern Exp riences de type Exp riences de type lectrophor se Western D marrer l instrument Configurer l exp rience dans le logiciel R aliser le Pr parer les chantillons non pr marquage marqu s pour le chargement Ex cuter l lectrophor se et le Pr parer et connecter les balayage du gel solutions de transfert Pr parer le transfert de type sandwich Pr parer et connecter les Ex cuter le transfert solutions de sondage et d anticorps R aliser le sondage amp le s chage Evaluer les r sultats Balayer lalles membranel s Evaluer les r sultats Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 117 5 R aliser une exp rience 5 1 Vue d ensemble Flux de travail analyse de type Western avec normalisation des prot ines totales L illustration ci dessous montre les principales tapes d une analyse de type Western with total protein normalization Ce flux de travail est utilis pour montrer comment r aliser une analyse typique il est d crit plus en d tail dans les sections suivantes Pour d autres types d analyses voir le Amersham WB system User Manual 118 D marrer l instrument Configurer l exp rience dans le logiciel R aliser le pr marquage Ex cuter l lectrophor se et le balayage du gel Pr parer le transfert de type sandwich Ex cuter le transfert R aliser le sondage amp le s chage Balayer lalles membranel s amp voir les
161. tions et quitter le logiciel e Control interrompre une analyse vider la chambre de transfert et de sondage lancer le nettoyage des circuits de transfert et de sondage e Remote Connecter et d connecter l acc s distant l instrument Extraire les codes d acc s l instrument et g rer les utilisateurs distants Modifier la configuration de la connexion distante Remarque Uniquement visible quand un instrument est connect e Help G n rer des rapports syst me Ouvrir le volet Aide le manuel de l utilisateur et About Amersham WB la bo te de dialogue 2 Volet Flux de travail Le volet Flux de travail montre les diff rentes tapes dans le logiciel du flux de travail pour une analyse Il est possible d avancer et de reculer pour visualiser et modifier des informations et des param tres dans les diff rentes tapes du flux de travail avant de lancer une analyse c est dire lectrophor se transfert sondage s chage ou balayage de la membrane Il est toujours possible de revenir en arri re et de modifier le texte dans les champs d infor mation des diff rentes tapes du flux de travail pendant et apr s une analyse Par exemple le tableau des chantillons peut tre rempli apr s qu une lectrophor se a t lanc e Remarque Pour une analyse de type lectrophor se les tapes du flux de travail TRANSFER PROBING amp DRYING et MEMBRANE SCANNING sont estomp es Ces tapes ne sont incluses qu
162. ts d tat 4 Couvercle du r servoir de transfert Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 45 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 1 Vue d ensemble Description Porte flacons et couvercle du compartiment d entretien Remarque Ne retirer le porte flacons qu une fois que les pompes et les tubulures ont t inspect es ou quand des pi ces ont t remplac es comme d crit dans Chapitre 6 Maintenance en page 190 Porte tubes Couvercle du compartiment de sondage Couvercle du compartiment de s chage 46 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 1 Vue d ensemble Illustration du panneau arri re de l unit Western L illustration ci dessous montre les principales parties du panneau arri re de l unit Western Description Sorties des d chets et de la tubulure du trop plein Connexion de communication pour le Elpho amp scan utilise un c ble Ethernet Connecteur du cordon d alimentation 60320 C14 Tiroir des fusibles 5x20 mm Interrupteur d alimentation secteur ON I OFF 0 6 Sorties d air Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 47 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 1 Vue d ensemble Pi ce Description 48 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 2 Compartiments de l unit Western
163. tte se trouve l int rieur du support de tubu lure Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel Attacher les filtres d entr e la tubulure Ins rer la tubulure dans le support de filtre avec filtre d entr e et faire tourner le support de filtre pour attacher la tubulure lt a Positionner la tubulure des d chets et le d versoir MISE EN GARDE La tubulure des d chets et le d versoir doivent tre attach s de fa on appropri e pour viter qu ils ne tombent l ext rieur du r cipient des d chets Placer la tubulure des d chets et le d versoir de mani re ce que leurs sorties se trouvent au dessous du niveau de la paillasse sur laquelle est install le Amersham WB analyzer Couper la tubulure la longueur appropri e et l attacher pour viter qu elle ne risque de chuter hors du r cipient des d chets Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel Installer les guides du dispositif de s chage de la membrane dans le compartiment de s chage tape Action 1 Ouvrir la poche en plastique contenant les deux guides du dispositif de s chage de la membrane Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 2 Ouvrir le couvercle du compartiment de s chage Amersham WB system Mode d emploi
164. u cordon d alimentation 5 R gler les pieds de mani re ce que les unit s soient horizontales Ceci est particuli rement important pour l unit Western 6 Si cela n est pas d conseill par le fabricant et si l ordinateur est un ordinateur portable il est possible de le placer au dessus de l unit Elpho amp scan Voir les sp cifications environnementales de l ordinateur S il s agit d un ordinateur fixe le moniteur et le clavier peuvent tre plac s au dessus de l unit Elpho amp scan L unit informatique du syst me ne doit pas tre plac e au dessus Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 97 4 Installation 4 2 Installation du mat riel Retirer le syst me de s curit pendant le transport de l unit Elpho amp scan Pour prot ger les composants fragiles du scanner de l unit Elpho amp scan un syst me de s curit pendant le transport est utilis Retirer le syst me de s curit pendant le transport avec pr cautions avant la mise sous tension Installer les lectrodes de transfert AVERTISSEMENT D brancher l alimentation Toujours d brancher l alimentation de l instrument avant de remplacer un de ses composants sauf mention contraire dans le manuel d utilisation tape Action 1 Ouvrir le couvercle du r servoir de transfert 98 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 4 Installation 4 2 Installation du mat riel tape Action 2
165. u logiciel la solution de blocage est utilis e par d faut Le pr remplissage de la chambre de sondage est lanc par l utilisateur en s lectionnant l instruction logicielle appropri e 2 Les plaques PVDF sont ins r es dans les chambres de sondage et des incu bations s quentielles comportant des tapes de lavage de la membrane avec la solution de blocage des anticorps primaires et des anticorps secon daires sont r alis es 58 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 3 Description du syst me 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables 3 4 Pr sentation des accessoires et des consommables Introduction Cette section donne une pr sentation des accessoires et des consommables utilis s avec le Amersham WB analyzer Elle comporte aussi des informations sur la conservation des consommables et sur la fa on de les commander Accessoires et consommables Le tableau ci dessous r pertorie les accessoires et les consommables utilis s avec l instrument en relation avec la t che op rationnelle r aliser Les accessoires de l ins trument sont livr s avec le syst me les consommables doivent tre command s s pa r ment Les accessoires installer sont d crits dans Section 4 2 Installation du mat riel en page 95 et les accessoires destin s aux t ches de maintenance par l utilisateur sont d crits dans Accessoires de maintenance en page 203 Pour une description d taill e des accessoires
166. uent la ligne pointil l e et les fl ches Remarque En assoubplissant le gel continuer pousser la plaque de gel sur le banc l aide de vos doigts Saisir les coins du cadre du gel sup rieur et d solidariser le cadre du gel aussi loin que l indique la ligne pointill e S assurer que le cadre du gel est compl tement d solidaris du bouchon en caoutchouc blanc indiqu par la fl che orange sup rieure 156 Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert Illustration de l tape Actions de l op rateur Continuer d solidariser avec soin le cadre du gel des bords de la plaque de gel en direction de l extr mit inf rieure jusqu ce que le cadre du gel soit compl te ment d solidaris Remarque En assouplissant le gel continuer pousser la plaque de gel sur le banc l aide de vos doigts Remarque Veiller ne pas toucher le gel Saisir les poign es du cadre du gel et soulever le gel avec pr cautions depuis le support du cadre Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 157 5 R aliser une exp rience 5 7 R aliser le transfert 5 7 2 Pr parer le sandwich de transfert tape Illustration de l tape Actions de l op rateur Placer le cadre du gel sur le papier de transfert en faisant corres pondre les orifices de guidage du ca
167. ux tiquettes de la tubulure Les nombres bleus font r f rence aux composants de l instrument P WASTE P CUSTOM P WASTE P FINAL P WATER P WASH hs En WASH P BLOCK La Description 1 Compartiment des anticorps avec des tubes de solutions d anticorps pri maires et secondaires pour les positions A et B 2 Bloc de la vanne de sondage Utilis pour s lectionner la solution pomper dans le circuit 3 Pompe de sondage Pour pomper la solution par le circuit du liquide Amersham WB system Mode d emploi 29 0214 77 AE 57 3 Description du syst me 3 3 Unit Western 3 3 3 Circuits des liquides Description Capteur d air Pour d tecter la pr sence d air dans la tubulure Le d tecteur d air met l analyse en pause si un flacon de solution est vide Vanne du s lecteur de la chambre de sondage Pour s lectionner la direction de la solution vers les chambres de sondage ou depuis les chambres de sondage vers la sortie des d chets Chambres de sondage Principe de base du processus de sondage Au cours du sondage les anticorps primaires sont li s aux prot ines sur la membrane puis les anticorps secondaires conjugu s un CyDye sont li s aux anticorps primaires Le principe de base du processus de sondage est d crit ci dessous Stade Description 1 La chambre de sondage est pr remplie avec la premi re solution comme indiqu dans le protocole de sondage d

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