Reagena PUUMALA IgG EIA Mode d`emploi REF 114301 Version
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1. Diluer 1 10 avec de l eau d sionis e juste avant utilisation A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Diluer 1 10 avec le tampon de dilution juste avant utilisation A l abri de la lumi re et entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Pr t l emploi Pr t l emploi Kallio Kokko H Vapalahti O Lundkvist Vaheri A Evaluation of Puumala virus IgG and IgM enzyme immunoassays based on recombinant baculovirus expressed nucleocapsid protein for early nephropatiaepidemica diagnosis Clin Diagn Virol 1998 May 1 10 1 83 90 Rev 2011 05 152. Takojantie 18 70900 Toivala FINLANDE www reagena fi info reagena fi i Fabricant Reagena PUUMALA IgG EIA Mode d emploi D REAGENA Reagena International Oy Ltd Reagena PUUMALA IgG EIA e Toute infection bact rienne ou fongique des tampons ou r actifs pourra entra ner des r sultats erron s Jeter tout r actif qui aurait l air trouble lorsque vous l inspectez la lumi re Reagena PUUMALA IgG EIA est une preuve immunoenzymatique de d tection des anticorps IgG du virus Puumala dans le s rum humain Reagena PUUMALA I1gG EIA est exclusivement destin l usage AVERTISSEMENT professionnel e Les contr les comprennent du s rum humain test et trouv n gatif en VIH HTLV h patite B et C Le virus Puumala qui appartient la famille des hantavirus se trouve dans la plupart des pays Veuillez manipuler les contr les comme des substances potentiellement infectantes europ ens Ce virus est un agent responsable de la n phropathie pid mique NE et se transmet aux e Jetez les contr les chantillons et mat riels conform ment aux r glementations locales et f d rales humains par inhalation ou contact direct avec les excr ments du campagnol La NE n est que rarement vous concernant fatale chez les individus en bonne sant mais elle peut entra ner une hospitalisation de longue dur e Le taux de mortalit de la NE est de 0 1 0 3 parmi les patients infect s Une infection cr er une immunit vie contre la NE
3. agitateur orbital 450 rpm Voir le tableau page 2 pour les informations concernant la conservation et la stabilit du kit 9 Diluer le conjugu HRP 1 10 avec le tampon de dilution pour un b tonnet diagnostique 100 ul CHANTILLONS de conjugu HRP 900 ul de tampon de dilution et bien m langer Il est conseill d utiliser des chantillons frais plut t que congel s Les chantillons congel s peuvent 10 Laver quatre fois les cupules avec le tampon de lavage 250 Hl microcupule et les s cher avec entra ner des faux positifs lorsque les r sultats sont agr g s Si l chantillon est agr g ou de mauvaise du papier mouchoir qualit veuillez centrifuger les chantillons pendant 5 minutes 3000 x g avant de les utiliser 11 Transf rer le conjugu de RP dilu avec la pipette sur la plaque 100 ul microcupule LIMITATIONS ET INTERF RENCES 12 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un agitateur orbital 450 rpm 13 Laver cinq fois les microcupules avec le tampon de lavage 250 ul microcupule et les s cher avec du papier mouchoir 14 Ajouter le substrat de TMB rose la plaque 100 ul cupule e Ne pas m langer de composants issus de lots diff rents e Ne pas utiliser de b tonnets diagnostiques si l emballage en aluminium qui les contient est endommag e Ne pas m langer les chantillons tester puisque diff rentes matrices pourraient entra ner une 15 Incuber pendant 30 m
4. e La solution d arr t Reagena EIA contient lt 1 m V d acide sulfurique La concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit e Le substrat TMB Reagena EIA contient du 3 3 5 5 t tram thylbenzidine lt 0 05 w w La PRINCIPE DU TEST concentration est si basse qu elle n affecte pas la classification du produit Avec le Reagena PUUMALA IgG EIA la prot ine recombinante de la nucl ocapside du virus Puumala PROC DURE DE TEST est immobilis e sur une plaque de microtitration L antig ne capture les anticorps sp cifiques aux virus Puumala pr sents dans l chantillon Les anticorps IgG captur s sont d tect s par enzyme RP et le d veloppement de la coloration est assur par un substrat de TMB Le temps d incubation total est de 2 heures et demie et le kit permet d effectuer 40 analyses en double Lire attentivement le mode d emploi avant de commencer les tests Contacter le fabricant ou votre fournisseur en cas de questions suppl mentaires concernant le produit Effectuer le test entre 15 et 25 C Conserver le kit au r frig rateur entre 4 et 8 C pendant les p riodes d incubation CONTENU DU KIT 1 Ouvrir le kit et v rifier qu il contienne tous les composants figurant sur l tiquette du couvercle j a 2 Diluer les chantillons 1 201 avec le tampon de dilution c d 5 ul d chantillon 1000 ul de 1 cadre EIA Contr le positif tampon de dilution 3x4 b tonnets diagnostiques 8 barrettes de mic
5. inutes temp rature ambiante et l abri de la lumi re mauvaise reproductibilit 16 Ajouter la solution d arr t 100 ul microcupule et bien m langer jusqu ce que la couleur change 1 2 compl tement 15 secondes 600 800 rpm soit avec un agitateur orbital soit avec le lecteur EIA 17 Mesurer les r sultats dans les 10 minutes avec le lecteur EIA 450 nm CALCUL DES R SULTATS Calculer les r sultats comme suit R chantillon A Contr le positif a x K R r sultat Echantillon 4 Absorbance m diane de l chantillon Contr le positif Absorbance du contr le positif K valeur fonction du lot qui figure dans la fiche de donn es de contr le comprise dans le kit Utilisez cette valeur pour calculer les r sultats finaux Le r sultat final est obtenu comme suit N GATIF R lt 0 8 ZONE GRISE 08 lt R lt 1 2 POSITIF R gt 1 2 INTERPR TATION DES R SULTATS Un r sultat n gatif signifie que l chantillon ne contient pas d anticorps IgG au virus Puumala Le patient n a par cons quent pas r cemment contract l infection au virus Puumala et ne poss de pas non plus d immunit contre celui ci Dans l ventualit o une infection aigu serait soup onn e il est conseill de tester les anticorps IgM du virus Puumala Lorsqu un chantillon s av re positif il indique que l chantillon du patient contient les anticorps IgG au virus Puumala Le patient est par cons quent soit infect par
6. le virus Puumala soit prot g contre celui ci Un facteur de r sistance ou d autres infections n entra nent pas un r sultat positif de cette preuve Les r sultats situ s en Zone grise signifient que le r sultat ne s av re ni positif ni n gatif Dans ce cas suivre les consignes de votre organisation Il faudra g n ralement effectuer un nouveau test sur un nouvel chantillon quelques jours plus tard CONTR LE DE QUALIT V rifier que l absorbance m diane du contr le n gatif et positif r ponde aux crit res figurant sur la fiche de donn es de contr le Veuillez noter que les valeurs des contr les positifs et n gatifs peuvent varier de lot lot La variation d absorbance de chaque paire d chantillon et de contr le doit tre inf rieure 10 Si le contr le positif est utilis dans diff rentes positions sur la plaque la variation d absorbance doit tre inf rieure 20 CARACT RISTIQUES DE PERFORMANCE Sensibilit et sp cificit La sensibilit de 96 et la sp cificit de 97 ont t obtenues lorsque REAGENA PUUMALA IgG EIA a t compar la m thode de r f rence IFA et ELISA Institut de microbiologie et d immunologie de Liubjana Slov nie en utilisant les chantillons s riques positifs de 110 patients et n gatifs de 95 patients Impr cision 2 2 INFORMATIONS CONCERNANT LES COMPOSANTS DU KIT Composant Code Information Consignes d utilisation Conservation am
7. p stabilit Plaque de microtitration munie d un rev tement B tonnets ai diagnostiques 114301t de prot ines de la nucl ocapside du virus Puumala Tampon pour Tampon tris Pr color dilution ROIS rose 65 ml S rum lyophilis Test n gatif en 114301v1 Hiv HTLV h patite B et C S rum lyophilis Test n gatif en 114x01v7 HIV HTLV h patite B et C Contr le positif Contr le n gatif Tampon de lavage Tampon tris 114x01v6 concentr Lions ul Anticorps anti IgG Conjugu HRP 11430192 MuMaines conjugu la peroxydase de raifort 1 5 ml Substrat TMB 114x01v3 benzidine Pr color rose 12 ml 114x01v4 0 1 M d acide sulfurique 12 ml 3 3 5 5 T tram thyl Solution d arr t LITT RATURE Non ouvert dans l emballage Lavez les b tonnets Le en aluminium entre 4 et 8 avec le tampon de oC lavage juste avant tilisation jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Pr t l emploi Dissoudre le contr le dans 1 3 ml de tampon de dilution avant utilisation Dissous 20 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Dissoudre le contr le dans 1 3 ml de tampon de dilution avant utilisation Dissous 20 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette Entre 4 et 8 C jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette
8. rotitration Conjugu HRP c E E E Tampon de concentr de lavage x 2 Substrat TMB 3 P D Sn re LE En l eau d sionis e c d 50 ml de tampon Tampon pour dilution Solution d arr t Jea ger l Contr le n gatif Mode d emploi 4 Dissoudre le contr le positif et le contr le n gatif avec 1 3 ml de tampon de dilution et bien z 7 m langer MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON INCLUS DANS LE KIT F l RE 5 Prendre le nombre requis de b tonnets diagnostiques EIA de leur emballage en aluminium et les Pipettes de pr cision et embouts de pipette 5 100 pl Ruban d tanch it EIA placer sur le cadre EIA Si tous les b tonnets ne sont pas utilis s refermer imm diatement Pipette ou dispositif de lavage de la plaque 250 pl Lecteur de microplaque EIA l emballage en aluminium et conserver les b tonnets restants entre 4 et 8 C microcupule longueur d onde de 450 nm Tubes d chantillonnage 1 5 mi Agitateur de plaque microcupules 6 Laver les microcupules EIA une fois avec le tampon de lavage 250 ul microcupule Vider les microcupules et les humidifier avec du papier mouchoir Une fiole de 0 5 ou 1 L j k Ea o 7 Transf rer en double les dilutions d chantillons de contr les positifs et n gatifs sur la plaque CONSERVATION 100 ul microcupule Conserver le kit entre 4 et 8 C Le kit reste stable jusqu la date d expiration figurant sur l tiquette 8 Incuber pendant 60 minutes temp rature ambiante dans un
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