L`interaction de la protéine Nef-VIH avec la protéine - iPubli
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1. 1 Subbramanian RA Cohen E Molecular biology of the human immunodeficiency virus accessory proteins J Virol 1994 68 6831 5 2 Cullen BR The role of Nef in the replication cycle of the human immunodeficiency viruses Vi rology 1994 205 1 6 3 Kestler HW Ringler DJ Mori K Panicali DL Sehgal PK Daniel MD Desrosiers RC Importan ce of the nef gene for maintenance of high virus loads and for development of AIDS Cell 1991 65 651 62 4 Daniel MD Kirchoff F Czajak SC Sehgal PK Desrosiers RC Protective effect of a live attenua ted SIV vaccine with a deletion in the nef gene Science 1992 258 1938 41 BEE BR VES EBE rent sont des cellules d j engag es dans un lignage en combinant tine stimulation par les cytokines et un traitement antim tabolique on pourrait provoquer la mort de ces cellules d j engag es et de ce fait s lectionner celles qui r sistent l action prolif rative des cytokines 5 Les cellules mononucl es de la moelle tri es ou non pour leur caract re CD34 ont t trait es par le ligand Kit et l interleukine 3 cytokines ayant des r cepteurs sur les cellules primitives en m me temps que par le 5 fluoro uracile pendant au moins sept jours Une cellule sur 10 cellules mononu cl es de la moelle est ainsi s lec tionn e Ces cellules s lectionn es pr sentent les caract res ph noty piques des cellules souches elles sont petites et denses on n y re2. trouve pas les antig nes sp cifiques de cellules plus diff renci es seuls sont pr sents CD34 et c Kit Elles 5 Schwartz O Dautry Varsat A Goud B Mar chal V Subtil A Heard JM Danos O HIVI induces ac cumulation of CD4 in early endosomes J Virol 1995 69 528 33 6 Aiken C Konner J Landau NR Lenburg ME Trono D Nef induces CD4 endocytosis require ment for a critical dileucine motif in the mem a bra e proximal CD4 cytoplasmic domain Cell 1994 76 853 64 7 Miller MD Warmerdam MT Page KA Fein berg MB Green WC Expression of the human immunodeficiency virus type 1 HIV 1 nef gene during HIV 1 production increases progeny par ticle infectivity independently of gp160 or viral entry J Virol 1995 69 579 84 8 Plessis A Camonis JH Le syst me double hy ps bride mode d emploi m decine sciences 1994 10 I IX 9 Benichou S Bomsel M Bod us M Durand H Doute M Letourneur F Camonis J Benarous R Physical interaction of the HIV 1 Nef protein with B COP a component of non clatrin coated ve sicles essential for membrane traffic Biol Chem 1994 269 30073 6 10 Rothman JE Mechanism of intracellular transport Nature 1994 372 55 63 11 Gruenberg J M canismes de la r gulation du trafic membranaire m decine sciences 1993 9 141 7 12 Pauloin A Br feldine A prot ines G et trans ports membranaires golgiens m decine sciences 1993 9 917 25 s
3. r infections multiples de cellules infect es par un virus contribuant peut tre ainsi l optimi sation ult rieure de la production de virus par ces cellules 2 Nef aug mente la production et l infectivit des particules virales par des lympho cytes primaires p riph riques in vitro Cette influence positive de Nef sur la r plication virale pourrait s expliquer par un effet sur l assemblage la ma turation ou le transport et la lib ra tion des virions 2 7 Ces activit s impliquent que Nef in teragisse avec des facteurs cellulaires dans les cellules infect es Identifier ces facteurs permettrait outre la compr hension des m canismes d action de Nef la mise en vidence de nouvelles cibles pour le d velop pement de mol cules antivirales Dans ce but nous avons entrepris d identifier les prot ines cellulaires capables d interagir avec Nef gr ce la mise en uvre du syst me double hybride dans la levure S cerevisiae 8 Parmi les ADNc ainsi isol s l un codait pour la prot ine f COP indi quant que Nef interagit sp cifique ment avec B COP dans les cellules in fect es 9 Cette interaction d tect e dans le syst me double hybri de a t retrouv e in vitro par expres sion de Nef et de B COP dans E coli et in vivo dans des cellules infect es en effet Nef et B COP co pr cipitent sous l effet des anticorps anti Nef Ces observations d montrent que les deux prot ines so
4. DS ours m decine sciences 1995 11 478 9 L interaction de la prot ine Nef VIH avec la prot ine cellulaire p COP un d tournement de la machinerie du trafic intracellulaire et d exocytose Le virus de l immunod ficience hu maine VIH l agent causal du SIDA fait partie de la famille des lentivirus Ces virus se distinguent des autres r trovirus par le fait que outre les g nes classiques gag pol env on trou ve dans les lentivirus des g nes co dant pour six prot ines r gulatrices Tat Rev Nef Vif Vpr Vpu Tat et Rev sont des prot ines dites auxi liaires qui sont indispensables res pectivement pour l activation trans criptionnelle du promoteur viral situ dans les LTR et pour le trans port des transcrits viraux non g no mique ou partiellement piss s Nef une prot ine accessoire bien im portante Nef Vif Vpr Vpu sont des prot ines dites accessoires car elles ne sont pas strictement indispensables pour la r plication du virus in vitro dans des cellules en culture Cependant ces prot ines semblent jouer in vivo un r le important 1 2 Cela a t par ticuli rement bien d montr pour Nef par l quipe de Ronald Desro siers Cambridge MA USA dans le mod le d infection de macaques par le virus de l immunod ficience si mienne SIV 3 C est ainsi qu il est aujourd hui tabli que 1 Nef est essentielle pour une bonne produc tion virale in vivo Des
5. nt en troite asso ciation dans les cellules infect es Nef B COP le sens d une interaction Quels sont le sens et la fonction d une telle association Le r le phy siologique de B COP dans les cellules eucaryotes d une part 10 et les ob servations rapport es ci dessus sur les effets de Nef d autre part permet tent d s maintenant de supposer que Nef pourrait interf rer avec la machi nerie de transport intracellulaire des prot ines membranaires et d exocy tose En effet B COP est un consti tuant majeur du manteau coatomer des COP v sicules v sicules sans cla m s n 3 vol 11 mars 95 thrine impliqu es dans le transport v siculaire entre le r ticulum endo plasmique et le Golgi entre les diff rents compartiments golgiens entre le Golgi et la membrane plasmique 11 12 Le r le de B COP est sur tout bien document au niveau de l exocytose mais l implication ven tuelle des coatomers dans certains pro cessus d endocytose ind pendants de la clathrine n est pas exclure L interaction de Nef avec GB COP pourrait donc expliquer au moins partiellement soit la perturbation du trafic intracellulaire de CD4 vers la membrane plasmique d une part soit et l accroissement du transport intracellulaire et de la lib ration des virions d autre part Si ces hypo th ses se confirment nous pourrions imaginer que le g ne Nef qui est conserv dans tous les lentivirus de primate et don
6. ont quiescentes et n cessitent du stroma m dullaire pour leur cultu re r pondant la d finition des LTC IC long term culture initiating cell Une cellule unique peut se dif f rencier dans une culture long terme en lign e lymphoide et en li gn e my loide Il resterait encore d montrer la capacit de repopula tion dans une transplantation in vivo La technique semble cepen dant ment isolement de cellules aptes cette repopulation efficace pour l enrichisse 1 Coulombel L Vainchenker W m decine sciences 1995 11 13 6 2 Chabannon C Mannoni P m de cine sciences 1995 11 17 27 3 Gluckman E Carosella E m de cine sciences 1995 11 28 34 4 Hatzfeld J et al m decine sciences 1993 9 1110 2 5 Berardi AC et al Science 1995 267 104 8 7 Vers
7. t ARN messager constitue de loin la majorit des ARN pr coces du VIH 2 a t s lection n au cours de l volution par ces vi rus pour utiliser leur profit la ma EEH Vers un isolement de la cellu le souche h matopo tique La cel lule souche h matopo tique est d finie par son potentiel d auto renouvellement et sa capacit de se diff rencier in vivo dans toutes les lign es h matopo tiques Son iso lement qui serait tr s utile l tu de des processus de l engagement des cellules en lignages est en outre n cessaire pour am liorer les strat gies cliniques de greffe de moelle ou de th rapie g nique 1 3 il est particuli rement difficile car la caract risation de ces cellules est fonctionnelle et non ph noty pique et toutes les m thodes utili s es n ont Jamais s lectionn qu une population cellulaire qui reste h t rog ne 4 Un travail r cent a abord le probl me d une mani re tr s l gante puisque les cellules souches ne r pondent pas aux stimulations prolif ratives des cytokines les cellules qui prolif m s n 3 vol 11 mars 95 chinerie de trafic intracellulaire et d exocytose Il est certain que si cette observation d une interaction phy sique entre Nef et B COP tait confir m e galement par des tudes fonc tionnelles les perspectives ouvertes seraient passionnantes Nous de vrions tre fix s dans les prochains mois R B S B
8. virus SIV d fectueux pour Nef ne se r pliquent pratiquement pas in vivo alors qu ils se r pliquent tr s bien in vitro Par ailleurs une infection par ces virus d ficients en Nef prot ge contre une infection ult rieure par des virus sau sm vages 4 2 Une pression de s lec au profit du VIH tion s exerce in vivo en faveur de l ex pression d un g ne nef fonctionnel Si les singes sont infect s par un virus contenant un g ne nef non fonction nel du fait de la pr sence d une mu tation ponctuelle introduisant un co don stop pr matur la r plication virale est aussi efficace que pour un virus sauvage mais les virus qui se r pliquent ont en fait perdu le codon stop pr matur et sont revenus au type sauvage Pour les virus ayant une d l tion du g ne nef une telle r ver sion n est pas possible et ces virus ne se r pliquent pas 3 Les fonctions exerc es par la prot i ne Nef au b n fice du VIH ne sont pas encore lucid es ce jour mais un certain nombre d observations importantes sont acquises en parti culier 1 Nef diminue l expression de CD4 la surface des cellules in fect es Ce ph nom ne en majeure partie li un accroissement de len docytose de CD4 est retrouv quand Nef est exprim e isol ment en ab sence de tout contexte viral 5 6 Cette diminution de l expression en surface du r cepteur du virus joue probablement un r le majeur pour emp cher les
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