PATHOZYME ELISA SURE
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1. o local A Solu o de Parada do Pathozyme ElisaSure cido Sulf rico dilu do e portanto corrosivo Manipule com cuidado Em caso de contato lave cuidadosamente com gua Os reagentes do Pathozyme ElisaSure cont m 1 Proclin 300 como um conservante que pode ser t xico se ingerido Em caso de contato lave cuidadosamente com gua corrente e procure recomenda o m dica Proclin 300 uma marca comercial da ROHM amp HAAS LTDA ARMAZENAMENTO Os reagentes devem ser armazenados a temperatura de 2 C a 8 C A data de validade o ltimo dia do m s no r tulo do frasco e do kit O kit ter seu desempenho dentro das especifica es at a data de validade indicada no kit e componentes N o use regentes ap s a data a data de validade A exposi o do reagente temperaturas excessivas deve ser evitada N o expor diretamente luz solar N O CONGELAR NENHUM DOS REAGENTES pois isso causar danos irrevers veis PREPARA O DO REAGENTE Todos os reagentes devem estar temperatura ambiente 20 C a 25 C e misturados gentilmente antes de usar N o produzir espuma Tamp o de Lavagem Dilua o Tamp o de Lavagem concentrado usando 1 parte do Tamp o de Lavagem concentrado com 19 partes de gua destilada Para cada fileira de 8 po os quebr veis prepare 25ml de Tamp o de Lavagem dilu do adicionando 1 25ml do Tamp o de Lavagem concentrado em 23 75ml de gua destilada Prepare um novo Tamp o de Lavage2. desempenho atual e antiga e atrav s da incorpora o dentro da programa o de manuten o de laborat rios fornece confian a no desempenho do equipamento USO PREVISTO Pathozyme ElisaSure fornece os recursos para verificar a linearidade e precis o das Leitoras de Microplacas a efici ncia e reprodutibilidade das Lavadoras de Microplacas e a precis o de Pipetas manuais e autom ticas PRINC PO DO TESTE Linearidade da Leitora de Microplaca Dilui es do reagente de cor dilu do s o lidas no comprimento de onda adequado 405 450 ou 492 nm A linearidade e faixa das leitoras est o estabelecidas Precis o da Leitora de Microplaca e Teste da Lavadora de Microplaca Uma solu o contendo HRP adicionada nos micropo os e lida a 405 450 ou 492 nm Os micropo os s o lavados Na adi o da Solu o de Substrato TMB uma colora o ser desenvolvida somente naqueles po os em que o HRP estiver presente A rea o parada pela adi o do cido Sulf rico dilu do e a absorb ncia ent o medida a 405 450 ou 492 nm O n vel de HRP restante diretamente proporcional intensidade da cor desenvolvida e efici ncia da Lavadora de Placa de Microtitula o Teste do Dipositivo de Pipetagem Dilui es duplicadas de corante s o preparadas e transferidas para os po os da Placa de Microtitula o e lidas no comprimento de onda adequado 405 450 ou 492 nm O grau de diferen a nos n veis de DO M dia e CV s o
3. dessecante utilizando a selagem zip lock antes de ser recolocadas a 2 C to 8 C Com refer ncia Tabela abaixo 5 Adicione 100 de gua Purificada no Po o A e nos Po os de C aH 6 Adicione 100 de solu o de Corante 1 10 no Po o B e Po o C 7 Retire 100ul do Po o C e transfira para o Po o D e assim sucessivamente at o Po o H realizando dessa forma uma dilui o seriada 8 Misture bem entre cada transfer ncia 9 Descarte o volume de 100ul restante na pipeta ap s o Po o H 10 Zere a leitora de microplaca usando o Po o A 11 Fa a a medi o da Densidade ptica DO em 405 450 ou 492 nm como apropriado Po o Dilui o do Corante Repeti o 1 Repeti o 2 Coluna 1 Coluna 2 A Branco Sem Branco Sem Corante Corante B 1 10 1 10 c 1 20 1 20 D 1 40 1 40 E 1 80 1 80 F 1 160 1 160 G 1 320 1 320 H 1 640 1 640 C LCULO DOS RESULTADOS E VALORES ESPERADOS Plote a DO versus dilui o no papel milimetrado Lin Log As Leitoras devem ser Lineares DO 1 0 consulte o Manual de Instru es dos Fabricantes Os dados obtidos devem ser relacionados contra os anteriores para monitorar a fun o do Equipamento A reprodutibilidade entre as fileiras em duplicata confirma a precis o da pipeta e m todo Consulte a Figura 1 no verso PRECIS O DA LEITORA DE MICROPLACA E TESTE DA LAVADORA DE MICROPLACA PROCEDIMENTO DO TESTE recomendado que seja re
4. indicadores da reprodutibilidade do volume dispensado N o existem padr es Internacionais para esse teste CONTE DO Rei OD061 Placa de Microtitula d 12 x8po osx1 Po os quebr veis Corante Conc 1ml Corante concentrado com prote nas estabilizadoras Vermelho Conj 15 ml Conjugado IgG Anti humano IgG Anti humano conjugado a Peroxidase de R bano Pronto para uso Roxo Tamp o Lav 20X 50 ml Tamp o de Lavagem concentrado Tamp o a base de Tris contendo detergentes Incolor Subs TMB 15 ml Solu o de Substrato 3 3 5 5 Tetrametil Benzidina em um tamp o citrato Pronta para uso Incolor Soln Sol Parada H2s04 0 2M 15ml Solu o de Parada cido Sulf rico dilu do em gua purificada Pronta para uso Incolor Folheto de Instru o e papel milimetrado Lin Log 1 1 MATERIAL NECESS RIO N O FORNECIDO Tubos de Teste Leitora de Microplaca Lavadora de Microplaca Dispositivo de Pipetagem Objetos de vidro do laborat rio perfeitamente limpos gua Purificada PRECAU ES Os reagentes do Pathozyme ElisaSure n o cont m subst ncias perigosas definidas pelos atuais regulamentos de Produtos Qu micos do Reino Unido Informa o de Subst ncias Perigosas e Embalagem para Fornecimento Todos os reagentes devem no entanto serem tratados como potenciais riscos biol gicos no uso e descarte O descarte final deve ser de acordo com a legisla
5. E Investiga o necess ria OMEGA DIAGNOSTICS LTD Omega House Hillfoots Business Village Alva FK12 5DQ Esc cia Reino Unido odi Domegadiagnostics co uk Wwww omegadiagnostics com EMPRESA CERTIFICADA ISO 9001 2000 E ISO 13485 2003
6. Fabricado por Omega Diagnostics LTD Importado e Distribu do por Kovalent do Brasil LTDA Rua Cristov o Sardinha 110 Jd Bom Retiro S o Gon alo RJ CEP 24722 414 CNPJ 04842199 0001 56 MS n 80115310148 SAC 21 3907 2534 sac Dbiosys com br www biosys com br PATHOZIME ElisaSure Artigo OD707 O omega Para testes de desempenho das lavadoras de microplacas leitoras de microplacas pipetas manuais e autom ticas em teste ELISA Armazenar de 2 C a 8 C NAO CONGELAR Somente para uso em diagn stico in vitro INTRODU O Instrumentos e Equipamentos s o partes essenciais dos procedimentos de testes baseados em Microplacas Seus desempenhos devem ser reproduz veis dentro de par metros conhecidos entre per odos de manuten o e ap s reparo ou resultados irregulares atrav s de m todos f ceis e convenientes O kit Pathozyme ElisaSure fornece a habilidade para testar todas as Lavadoras de Placas de Microtitula o Leitoras de Microplacas e dispositivos de pipetagem manual e autom tica O uso regular do kit de teste Pathozyme ElisaSure produzir registros documentados evidenciando o desempenho do equipamento e auxiliar na detec o precoce de defici ncias e auxiliar na solu o de problemas incorporando quatro verifica es de equipamentos separadas O monitoramento regular ir no caso de encontrar resultados inesperados durante o teste da amostra fornecer modos de compara o entre o
7. alizado toda semana no caso de encontrar resultados inesperados durante o teste da amostra ou ap s reparo ou manuten o 1 Traga todos os componentes do kit temperatura ambiente 20 C to 25 C antes de iniciar o teste 2 Coloque duas fileiras de po os no suporte 3 As fileiras n o usadas devem ser guardadas na embalagem de folha met lica contendo dessecante utilizando a selagem zip lock antes de ser recolocadas a 2 C to 8 C Com refer ncia Tabela abaixo 4 Adicione 100 de Conjugado em cada po o 5 Zere a leitora de microplaca contra o ar 6 Fa a a medi o da DO em 405 450 ou 492 nm como apropriado Essas leituras s o usadas para calcular a precis o da leitora de microplaca la Lave a placa quatro vezes com o tamp o de lavagem dando batidas de leve para fora Reduzindo o n mero de lavagens aumentar a sensibilidade do teste aumentando o n mero de lavagens diminuir a sensibilidade do teste 8 Adicione 100ul de Solu o de Substrato TMB em cada po o 9 Incube no escuro em temperatura ambiente 20 C a 30 C por 10 minutos 10 Adicione 100 de Solu o de Parada em cada po o 11 Zere a leitora de microplaca contra o ar 12 Fa a a medi o da DO de cada po o em 450nm IMEDIATAMENTE Essas leituras s o usadas para calcular a efici ncia da lavadora de microplaca 13 Se um filtro de refer ncia entre 600 e 650 nm utilizado as leituras aparecer o
8. artificialmente mais baixas Fileira Coluna 1 Coluna 2 A B C D E F G H C LCULO DOS RESULTADOS E VALORES ESPERADOS PRECIS O DA LEITORA DE MICROPLACA ds Calcule a DO M dia a partir das leituras obtidas a partir do ponto 6 acima 2 O valor esperado est entre 0 25 e 0 5 3 O valor M dio para os testes seguintes n o podem divergir gt 10 4 Calcule o Desvio Padr o divida pela M dia e multiplique o resultado por 100 O dado resultante o Coeficiente de Varia o CV 5 CV s gt 5 deve ser adicionalmente investigado Consulte a Figura 2 TESTE DA LAVADORA DE MICROPLACA 1 Use as leituras de Absorb ncia obtidas a partir do ponto 12 acima 2 Leituras individuais gt 0 10 indicam lavagem ineficiente 3 Se as leituras estiverem acima desse limite o teste deve ser repetido e deve se seguir os procedimentos de solu es de problemas do fabricante do equipamento Consulte a Figura 3 TESTE DO DISPOSITIVO DE PIPETAGEM PROCEDIMENTO DO TESTE recomendado que seja realizado a cada duas semanas no caso de encontrar resultados inesperados durante o teste da amostra ou ap s reparo ou manuten o Pipetagem Manual Traga todos os componentes do kit temperatura ambiente 20 C a 25 C antes de iniciar o teste 2 Prepare uma solu o de Corante 1 10 adicionando 10ul de Corante Concentrado em 90ul de gua Purificada e misture bem 3 Coloque um m nimo de 8 po os no suporte 4 As fileiras n
9. m dilu do antes de executar cada an lise O Tamp o de Lavagem fornecido em quantidades suficientes para ativar o in cio das m quinas de lavagem autom ticas LIMITA ES DE USO Os n veis determinados s o fornecidos somente como um guia Para n veis espec ficos de uma parte individual do equipamento ou configura o por favor consulte o Manual de Instru es do Fabricante Esse produto n o uma substitui o para a Calibra o do Equipamento N o h nenhum protocolo de reutiliza o para esse produto FORMA DE TESTE RECOMENDADA TESTE a E EF a lt 6 n x sa lt fil RE m z u gt a s q E 5 as a Uma vez Uma vez a Uma vez pol PER ODO b por cada 2 m s semana semanas 2 fileiras MATERIAIS 1 fileira 2 fileiras TOTAL 2 fileiras I 8 fileiras 2 fileiras I m s m s m s LINEARIDADE DA LEITORA DE MICROPLACA PROCEDIMENTO DO TESTE recomendado que seja realizado todo m s no caso de encontrar resultados inesperados durante o teste da amostra ou ap s reparo ou manuten o 1 Traga todos os componentes do kit temperatura ambiente 20 C a 25 C antes de iniciar o teste 2 Prepare uma solu o de Corante 1 10 adicionando 100ul de Corante Concentrado em 900ul de gua Purificada e misture bem 3 Coloque uma fileira de po os no suporte 4 As fileiras n o usadas devem ser guardadas na embalagem de folha met lica contendo
10. mmunoassay Handbook Editora Stockton Nova York 8150 ISSUE 2 Revisada em Abril 2009 O Omega Diagnostics Ltd 2009 Figura 1 EXEMPLO Linearidade da Leitora de Microplaca Leitora A Leitora B Linearidade da Leitora de Microplaca 1 640 1 320 1 160 1 80 Dilui o Resultados Leitora A Linear a DO 1 0 Leitora B N o Linear a DO 1 0 Figura 2 Precis o da Leitora de Microplaca exemplo de resultados DO Fileira Leitora A Leitora B A 0 431 0 417 B 0 435 0 427 C 0 425 0 420 i D 0 418 0 421 D E 0 429 0 418 0 419 0 416 F 0 415 0 422 0 422 0 429 G 0 414 0 430 0 418 0 412 H 0 425 0 433 0 427 0 417 Exemplo de interpreta o de resultados Leitora A Aceit vel M dia 0 423 DP 0 00639 CV 1 51 Leitora B N o Aceit vel M dia 0 470 DP 0 0851 CV 18 11 Maior do que 5 Observe as leituras Altas nas Fileiras B e C Investiga o necess ria Figura 3 Teste da Lavadora de Microplaca exemplo de resultados DO Fileira Lavadora A Lavadora B A 0 045 0 042 0 043 39 B 0 042 0 040 1 0 04 c 0 047 0 040 0 041 0 045 D 0 045 0 043 0 145 0 139 E 0 044 0 045 140 0 142 E 0 042 0 041 0 0 G 0 044 0 047 0 039 0 040 H 0 047 0 044 0 044 0 043 Exemplo de interpreta o de resultado Lavadora A Aceit vel Lavadora B N o Aceit vel Observe as leituras Altas nas Fileiras D e
11. o usadas devem ser guardadas na embalagem de folha met lica contendo dessecante utilizando a selagem zip lock antes de ser recolocadas a 2 C to 8 C 5 Adicione 90ul de gua Purificada em cada po o 6 Adicione 10 de solu o de Corante 1 10 em cada po o 7 Zere a leitora de microplaca contra o ar 8 Fa a a medi o da absorb ncia em 405 450 ou 492 nm como apropriado Pipetagem Autom tica 1 Traga todos os componentes do kit temperatura ambiente 20 C a 25 C antes de iniciar o teste 2 Submeta oito frascos cada um contendo uma amostra de solu o de Corante Concentrada pura 3 Coloque um m nimo de oito po os no suporte 4 Instrua a pipeta autom tica para preparar dilui es 1 100 usando gua Purificada 5 Zere a leitora de microplaca contra o ar 6 Fa a a medi o da absorb ncia em 405 450 ou 492 nm como apropriado C LCULO DOS RESULTADOS 1 Calcule as DO M dias para os pontos 8 e 6 acima Z Para ambas as s ries de dados calcule o Desvio Padr o divida pela M dia e multiplique o resultado por 100 a Os dados resultantes s o os Coeficientes de Varia o CV b Ambos os resultados devem ser menores que 5 G A diferen a entre os dois resultados deve estar dentro de 5 3 Os dados obtidos devem ser comparados com os anteriores para monitorar a varia o por todo o tempo SOLU O DE PROBLEMAS Para uso de operadores com pelo menos um m nimo de treinamento b sico em labo
12. rat rio N o use componentes danificados ou contaminados do kit Use uma ponteira descart vel separada para cada amostra para prevenir contamina o cruzada Recoloque as tampas em todos os reagentes imediatamente ap s o uso Evite pipetagem repetida do estoque de reagentes pois isso prov vel que cause contamina o N o deixe o reagente escorrer pelos lados do po o Antes de iniciar o teste os reagentes deve o estar temperatura ambiente 20 C a 25 C Misture gentilmente todos os reagentes por invers o ou rota o Uma vez que o teste tenha sido iniciado os po os n o podem se tornar secos durante o teste N o contamine a Solu o de Substrato TMB pois isso far com que todo o kit seja inoper vel As fileiras n o usadas devem ser guardadas na embalagem de folha met lica contendo dessecante utilizando a selagem zip lock antes de ser recolocadas a 2 C to 8 C Para recomenda es t cnicas sobre configura es solu es de problemas calibra o ou reparo relacionado a uma parte individual do equipamento por favor consulte o Manual de Instru es do Fabricante GERENCIAMENTO DE RESIDUOS Seguir as disposi es da resolu o sobre o regulamento t cnico para gerenciamento de res duos de servi os de sa de bem como outras pr ticas de biosseguran a equivalentes revis o em vigor N de lote data de fabrica o e validade vide r tulos dos frascos e do estojo REFER NCIAS 1 Wild D 1994 The I
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