Sistema de pruebas MMV IgG Plus
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1. Tabla 18 Sustancias interferentes paperas Muestra uno Muestra dos Muestra 3 Sustancia interferente Nivel cargado Paperas recuperaci n dela Dudoso recuperaci n de la Paperas recuperaci n de la Positivo se al positiva paperas se al positiva Negativo se al positiva Ninguna control N D 245 N D 89 N D 60 N D Bilirrubina Bajo 276 112 7 123 138 2 59 98 3 Bilirrubina Alta 253 103 3 94 105 6 60 100 0 Alb mina Bajo 261 106 5 97 109 0 61 101 7 Alb mina Alto 249 101 6 89 100 0 55 91 7 lgG Bajo 376 153 5 379 425 8 367 611 7 lgG Alto 415 169 4 388 436 0 437 728 3 Colesterol Bajo 264 107 8 97 109 0 63 105 0 Colesterol Alto 2268 109 4 103 115 7 68 113 3 Triglic ridos Bajo 253 103 3 102 114 6 58 96 7 Triglic ridos Alto 248 101 2 94 105 6 60 100 0 Hemoglobina Bajo 231 94 3 99 111 2 60 100 0 Hemoglobina Alto 229 93 5 95 106 7 52 86 7 Intral pidos Bajo 250 102 0 103 115 7 68 113 3 Intral pidos Alto 379 154 7 103 115 7 59 98 3 La muestra positiva mostr un rango de recuperaci n desde 169 4 con la alta adici n de IgG hasta un punto bajo de 93 5 con alta adici n de hemoglobina La adici n del IgG purificado tambi n provoc un aumento importante en la se al ya que es probable que el IgG humano purificado que se utiliza para a adir la muestra daba positivo para los anticuerpos IgG anti paperas En todos los casos el resultado cualitativo de la muestra positiva p2. Tabla 22 Muestras retrospectivas Resultados del sistema de pruebas ELISA VZV IgG de ZEUS Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 72 0 0 72 AtheNA Multi Lyte Negativo 5 12 2 19 MMV IgG Plus Dudoso 3 0 0 Sistema de pruebas No v lido 1 0 0 1 Total 81 12 2 95 de concordancia positiva 72 80 90 0 Intervalo de confianza del 95 83 4 a 96 6 de concordancia negativa 12 12 100 0 Intervalo de confianza del 95 73 5 a 100 0 Concordancia general 84 94 89 4 Intervalo de confianza del 95 81 3 a 94 8 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia b Se evalu un ensayo de precisi n en varios laboratorios como sigue se identificaron seis muestras para el estudio bas ndose en su actividad en el ensayo AtheNA Se seleccionaron dos muestras que eran claramente negativas dos que eran claramente positivas y dos que estaban cerca del corte o interrupci n del ensayo Este panel de seis muestras de suero se dividi en tres al cuotas cada uno y se prob en tres instalaciones cl nicas diferentes Cada d a de la prueba se diluy cada muestra dos veces y a continuaci n cada disoluci n se paso por el ensayo lo que result en ocho resultados por ensayo Esto se realiz durante tres d as en cada instalaci n hospitalaria El resumen
3. Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 80 0 0 80 AtheNA Multi Lyte Negativo 2 2 g E MMV IgG Plus Dudoso 5 0 0 5 Sistema de pruebas No v lido 0 o 0 0 Total 87 0 0 87 de concordancia positiva 80 82 95 3 Intervalo de confianza del 95 90 9 a 99 8 de concordancia negativo 0 0 N D Intervalo de confianza del 95 N D Concordancia general 80 87 92 0 Intervalo de confianza del 95 86 2 a 97 7 Tabla 2 Muestras prospectivas laboratorio dos Resultados de sistema de pruebas ZEUS ELISA Measles IgG Test Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 48 0 0 48 AtheNA Multi Lyte Negativo 1 4 23 MMV IgG Plus Dudoso 4 2 2 8 Sistema de pruebas No v lido 1 0 0 1 Total 65 19 6 90 de concordancia positiva 48 82 75 0 Intervalo de confianza de 95 64 4 a 85 6 de concordancia negativa 17 19 89 5 Intervalo de confianza del 95 75 7 a 103 3 Concordancia general 65 89 73 0 Intervalo de confianza del 95 63 8 a 82 3 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Tabla 3 Muestras prospectivas laboratorios Resultados de sistema de pruebas ZEUS ELISA Measles IgG Test combinados Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 128 0 0 128 AtheNA Multi Lyte Negativo 14 17 4 35 MMV IgG Plus Dudoso 9 2 13 Sistema de pruebas No v lido 1
4. Intervalo de confianza del 95 59 8 a 100 2 Concordancia general 72 76 94 7 Intervalo de confianza del 95 89 7 a 99 8 Las muestras AtheNA e IFA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Tabla 14 Todas las muestras combinadas Resultados prueba de referencia Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 200 1 0 201 AtheNA Multi Lyte Negativo 15 21 0 36 MMV IgG Plus Dudoso 12 2 1 15 Sistema de pruebas No v lido 0 1 0 1 Total 227 25 1 253 de concordancia positiva 200 227 88 1 Intervalo de confianza del 95 83 9 a 92 3 de concordancia negativa 21 24 87 5 Intervalo de confianza del 95 74 3 a 100 7 Concordancia general 221 252 87 7 Intervalo de confianza del 95 83 8 a 91 8 Las muestras AtheNA ELISA e IFA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Se llev a cabo un estudio de precisi n en varios laboratorios como se explica a continuaci n Se identificaron seis muestras para su uso en el estudio bas ndose en su actividad en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus Se seleccionaron dos muestras que eran claramente negativas dos que eran claramente positivas y dos que estaban cerca del corte o interrupci n del ensayo Este panel de seis muestras de suero se dividi en tres al
5. ZEUS Athe NA Sistema de pruebas MMV IgG Plus ZEUS Multi Lyte A93111G CE USO PREVISTO El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS est dise ado para la detecci n presunta cualitativa de anticuerpos de tipo IgG en sarampi n rubeola paperas y virus de la varicela z ster VZ en suero humano utilizando el sistema AtheNA Multi Lyte La prueba est dise ada para determinar una infecci n previa de sarampi n paperas virus de VZ y determinar el estado serol gico de los individuos incluidas las mujeres en edad f rtil Las caracter sticas de la ejecuci n del ensayo a n no se han establecido para pacientes inmunocomprometidos o inmunosuprimidos sangre de cord n umbilical muestras neonatos ni os de corta edad o ni os Esta prueba est concebida exclusivamente para uso diagn stico in vitro IMPORTANCIA Y ASPECTOS GENERALES El sarampi n es una enfermedad viral altamente contagiosa resultante de una infecci n por paramixovirus g nero Morbillivirus De ocho a 12 d as despu s de la infecci n se inicia la fase con un cuadro prodr mico del sarampi n marcado por fiebre tos coriza y posiblemente conjuntivitis En muchos casos el inicio de los s ntomas prodr micos va seguido en dos o tres d as por la aparici n de un enantema espec fico manchas de Koplik y una erupci n maculopapular generalizada entre tres y cuatro d as despu s del inicio 1 En el sarampi n sin complicaciones la aparici n del salp
6. Edad m nima 15 14 14 Edad m xima 73 52 73 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 5 Fecha Rev 9 17 2015 Abajo aparece un histograma de la frecuencia de edad de las 171 muestras de las cuales hab a datos 1 Analito sarampi n Se llev a cabo un estudio comparativo en el que se probaron 253 muestras De las 253 muestras probadas 177 eran muestras prospectivas y 76 eran muestras retrospectivas Las muestras prospectivas se probaron en un laboratorio hospitalario centralizado del sudeste de los Estados Unidos y en un laboratorio de referencia en el Medio Oeste Las 76 muestras retrospectivas inclu an a 76 mujeres embarazadas con edades comprendidas entre los 18 y los 41 a os De las 76 mujeres embarazadas 16 76 estaban en su primer trimestre de embarazo 30 76 estaban en su segundo trimestre y 30 76 estaban en su tercer trimestre de embarazo Las muestras se probaron usando el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y el sistema de pruebas ELISA Measles IgG de ZEUS Los resultados de este estudio comparativo se ilustran en las Tablas 1 5 siguientes a Frecuencia 15 20 25 30 35 40 45 50 Edad 55 60 65 70 75 CARACTER STICAS DE COMPORTAMIENTO Tabla 1 Muestras prospectivas laboratorio uno Resultados de sistema de pruebas ZEUS ELISA Measles IgG Test
7. Los s ntomas de Herpes zoster son zonas eritematosas y maculopapulares que aparecen en una superficie cut nea inervada por el mismo nervio aferente A continuaci n aparecen ves culas individuales o arracimadas generalmente acompa adas por dolor que en algunos casos puede ser extremo 17 Seg n los datos epidemiol gicos de la diseminaci n del VZV a trav s de los n cleos de got culas o got culas de aire y posiblemente por la descamaci n cut nea se cree que la puerta de entrada del virus reside en las v as respiratorias 18 Despu s de la diseminaci n del VZV desde la sangre se difunde r pidamente hacia la piel y es detectable en el epitelio y despu s afecta a las c lulas de la epidermis con acumulaci n de l quidos entre la capa de c lulas espinosas y la epidermis externa Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 1 Fecha Rev 9 17 2015 formando una ves cula 19 La ves cula se convierte en el centro de una actividad inmunol gica intensa con un infiltrado inicial de leucocitos polimorfonucleares que son la c lula inflamatoria predominante que se observa en el Herpes zoster 20 M s adelante las c lulas mononucleadas migran hacia la ves cula FUNDAMENTO DE LA PRUEBA El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS est dise ado para detectar los anticuerpos de clase IgG en suero humano ante sarampi n rubeola paperas y VZV El procedimiento de la prueba comprende dos pasos de incub
8. 19 ni os con edades comprendidas entre los uno y los 12 a os y 76 mujeres embarazadas con edades comprendidas entre los 18 a los 41 a os De las 76 mujeres embarazadas 16 76 estaban en su primer trimestre de embarazo 30 76 estaban en su segundo trimestre y 30 76 estaban en su tercer trimestre de embarazo Las muestras se probaron usando el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y el sistema de pruebas ELISA VZV IgG de ZEUS Los resultados de este estudio comparativo se ilustran en las Tablas 19 22 siguientes Tabla 19 Muestras prospectivas laboratorio uno Resultados del sistema de pruebas ELISA VZV IgG de ZEUS Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 83 0 0 83 AtheNA Multi Lyte Negativo 1 0 0 1 MMV IgG Plus Dudoso 3 0 0 3 Sistema de pruebas No v lido 0 0 0 0 Total 87 0 0 87 de concordancia positiva 83 87 95 4 Intervalo de confianza del 95 88 6 a 98 7 de concordancia negativo 0 0 N D Intervalo de confianza del 95 N D Concordancia general 83 87 95 4 Intervalo de confianza del 95 88 6 a 98 7 Las muestras AtheNA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 10 Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 20 Muestras prospectivas laboratorio dos Resultados del sistema de pruebas ELISA VZV IgG de ZEUS Positivo Negativo
9. 6 9 5 6 10 2 5 7 34 5 13 9 7 8 27 7 vi 183 4 151 6 138 0 143 8 163 3 150 6 1834 1796 184 1 157 7 152 5 182 4 164 2 5 DE 8 6 9 5 8 3 15 9 8 6 14 8 8 6 7 9 5 1 21 2 15 3 7 3 20 3 CV 4 7 6 2 6 1 11 0 5 3 9 8 4 7 4 4 2 7 13 4 10 0 4 0 12 3 vi 128 5 94 3 88 1 1169 1171 923 1285 1256 138 3 103 6 108 8 130 8 114 4 6 DE 5 9 8 0 15 9 6 5 3 9 8 5 5 9 13 3 9 9 20 9 13 5 11 2 19 5 CV 4 6 8 5 18 0 5 6 3 3 9 2 4 6 10 6 7 2 20 1 12 4 8 5 17 1 Se llev a cabo un estudio de reactividad cruzada en el que se seleccionaron 10 muestras de suero que resultaron negativas en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y que se probaron posteriormente con pruebas ELISA comercializadas para determinar la actividad de los anticuerpos IgG con respecto a VHS 1 VHS 2 CMV ant geno nuclear EBV ant geno c psido viral EBV y toxoplasma Nueve de las diez muestras resultaron positivas para uno o m s de los marcadores virales probados Los resultados de este estudio se ilustran en la Tabla 16 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 16 Reactividad cruzada paperas Resultados AtheNA Resultado de ELISA Muestra Multi Lyte CMV VHS 1 VHS 2 ANEB EBV EA IgG VEB CN 18 27 0 10 5 46 1 22 6 44 0 18 5 89 CN 35 70 7 96 6 96 4 69 8 75 0 50 4 79 CN 70 77 0 28 7 45 2 42 8 25 0 25 4 78 CN 77 37 2 82 5 26 2 94 1 95 0 24 3 82 CN 122 54 1 30 0 25 0 13 0 00 0 7
10. Dudoso Total Positivo 61 0 2 63 AtheNA Multi Lyte Negativo 5 16 3 24 MMV IgG Plus Dudoso 2 0 0 Sistema de pruebas No v lido 0 1 0 1 Total 68 17 5 90 de concordancia positiva 61 71 85 9 Intervalo de confianza del 95 75 6 a 93 0 de concordancia negativa 16 18 88 9 Intervalo de confianza del 95 65 3 a 98 6 Concordancia general 77 89 86 5 Intervalo de confianza del 95 77 6 a 92 8 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Tabla 21 Muestras prospectivas laboratorios Resultados del sistema de pruebas ELISA VZV IgG de ZEUS combinados Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 144 0 2 146 AtheNA Multi Lyte Negativo 6 16 3 25 MMV IgG Plus Dudoso 5 0 0 5 Sistema de pruebas No v lido 0 1 0 1 Total 155 17 5 177 de concordancia positiva 140 158 91 9 Intervalo de confianza del 95 85 6 a 95 1 de concordancia negativa 16 18 88 9 Intervalo de confianza del 95 65 3 a 98 6 Concordancia general 160 176 90 9 Intervalo de confianza del 95 85 7 a 94 7 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia
11. JM Zaia JA Levin MJ N Engl J Med 302 450 1980 Tyzzer EE J Med Res 14 361 1960 Stevens DA Merigan TC J Infect Dis 509 1975 U S Department of Health and Human Services Public Health Service Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health U S Government Printing Office Washington D C 4 Ed 1999 U S Department of Labor Occupational Safety and Health Administration Occupational Exposure to Bloodborne Pathogens Final Rule Fed Register 56 64175 64182 1991 Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood Body Fluids and Tissues Approved Guideline NCCLS Document M29 Vol 17 12 1997 Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens NCCLS Document H18 A Vol 10 No 12 Approved Guideline 1990 Procedures for the collection and diagnostic blood specimens by venipuncture 2nd edition Approved Standard 1984 Published by National Committee for Clinical Laboratory Standards Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests Approved Guidelines 4 Edition 2010 CLSI Document GP44 A4 ISBN 1 56238 724 3 Clinical and Laboratory Standards Institute 950 West Valley Road Suite 2500 Wayne PA 19087 O ztus scientific mal Para consultas al Servicio de atenci n al cliente en EE UU contacte con su distribuidor local ZEUS Scientific Inc Para consultas al Soporte t cnic
12. Positivo Positivo Positivo 2 Negativo Positivo Positivo Positivo 3 Negativo Positivo Positivo Positivo 4 Negativo Positivo Negativo Negativo 5 Negativo Positivo Positivo Positivo 6 Negativo Positivo Positivo Positivo 7 Negativo Positivo Positivo Positivo 8 Negativo Positivo Negativo Positivo 9 Negativo Positivo Positivo Positivo 10 Negativo Positivo Positivo Positivo 11 Negativo Negativo Negativo Negativo 12 Negativo Negativo Negativo Positivo 13 Negativo Positivo Negativo Negativo 14 Negativo Negativo Negativo Positivo 15 Negativo Negativo Negativo Negativo Tabla 25 Estudio de reactividad cruzada VZV dos Resultados AtheNA Resultado de ELISA Muestra Multi Lyte ANEB VEB VCA CMV VHS 1 VHS 2 Hepatitis Ab 1 Negativo Sin probar Positivo Positivo Positivo Negativo Negativo 2 Negativo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo Positivo 3 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo 4 Negativo Sin probar Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo 5 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Dudoso Negativo 6 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo 7 Negativo Negativo Dudoso Positivo Positivo Positivo Negativo 8 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Dudoso Negativo 9 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo 10 Negativo Positivo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo 11 Negativo Sin probar Positivo Positivo Dudoso Negativo Negativo 12 Negativo Sin probar Positivo Positivo Du
13. de controles y muestras que se desean probar Es necesario incluir el Control Negativo y el Control Positivo con cada tanda de pruebas El Control Negativo se debe probar en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 Cada Control y muestra necesita un micropocillo para su procesamiento a Para optimizar los tiempos de lectura la suspensi n de microesferas debe estar bien mezclada antes de su empleo La manera m s efectiva de volver a suspender las microesferas es en primer lugar utilizar el v rtex durante aproximadamente 30 segundos y despu s sonicar durante aproximadamente 30 segundos en un sonicador de ba o peque o b Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el contenido del ensayo se mezcle detenidamente Entre los medios adecuados de mezcla se incluye mezclar la placa en un agitador de placa durante aproximadamente 30 segundos a 800 RPM aproximadamente o ajustar una pipeta en aproximadamente del volumen en la placa y aspirar y expulsar repetidamente bomba arriba y bomba abajo el contenido del pocillo durante un m nimo de 5 ciclos EJEMPLO DE CONFIGURACI N DE LA PLACA 1 2 A Control negativo etc B Control positivo C Paciente 1 D Paciente 2 E Paciente 3 F Paciente 4 G Paciente 5 H Paciente 6 3 Prepare una diluci n 1 21 por ejemplo 10 ul de suero 200 ul de diluyente SAVe Diluent del control negativo del calibrador del control positivo y de cada suero de paciente NOTA El diluyente SAVe
14. de las paperas o el VZV comunicados como no reactivos para anticuerpos de tipo IgG ii Un resultado de gt 120 AU mL con el AtheNA Multi Lyte es presuntamente positivo en anticuerpos IgG ante sarampi n paperas o VZV Un resultado de prueba positivo presume una infecci n en curso o una infecci n pasada o una inmunizaci n anterior al virus del sarampi n de las paperas o al VZV debe comunicarse como presuntamente positivo en anticuerpos IgG iii Vuelva a analizar por duplicado las muestras con resultados AtheNA Multi Lyte comprendidos en el intervalo dudoso 100 120 AU mL Repita la prueba de las muestras dudosas utilizando un procedimiento serol gico alternativo como el procedimiento de prueba ELISA de ZEUS Adem s vuelva a evaluar las muestras dudosas repetidas obteniendo otra muestra de una a tres semanas m s tarde iv En caso de que exista demasiada actividad en la microesfera NSC control no espec fico Intra Well Calibration Technology anular esa muestra en particular v El valor num rico del resultado final por encima del corte no es indicativo de la cantidad de anticuerpos anti IgG presentes Puede que no se determinen incrementos de anticuerpos significantes entre las muestras agudas y convalecientes vi Un resultado de prueba negativo no es un obst culo para la inmunidad a la infecci n por virus de sarampi n paperas o VZV En algunos pacientes los niveles de anticuerpos IgG pueden caer por debajo de los l mites de de
15. del estudio de precisi n aparece en la Tabla 23 Tabla 23 Precisi n VZV Intraensayo Laboratorio uno Laboratorio dos Laboratorio tres Interensayos snte laborato Muestra D al D a2 D a3 D al D a2 D a3 D al D a2 D a3 ole q als rios VI 318 311 334 318 311 334 321 1 DE 15 48 16 69 24 48 17 20 16 53 13 29 16 81 23 42 10 94 27 75 20 22 17 57 23 96 CV 4 9 4 8 8 3 5 5 5 6 4 3 5 0 7 1 3 3 8 7 6 5 5 3 7 5 VI 264 262 290 264 262 290 272 2 DE 15 59 8 87 9 65 14 66 21 63 22 41 19 04 26 10 15 33 14 38 1959 21 06 22 29 CV 5 9 3 2 3 8 5 5 8 3 8 7 6 5 8 8 5 5 5 4 7 5 7 3 8 2 VI 25 25 35 25 25 35 28 3 DE 1 64 2 07 2 98 3 11 2 56 2 43 1 41 2 07 1 93 3 14 3 06 1 85 5 53 CV 6 5 7 5 13 5 11 4 11 0 9 5 4 0 6 0 5 4 12 7 12 0 5 3 19 4 VI 13 11 21 13 11 21 15 4 DE 1 77 2 53 0 99 2 23 1 55 1 07 1 69 1 28 0 74 2 46 2 65 1 37 4 74 CV 14 3 17 0 9 1 15 8 17 0 9 7 7 8 6 3 3 6 19 3 23 2 6 6 31 6 VI 105 102 101 105 102 101 103 5 DE 5 36 2 88 12 98 4 29 4 53 4 61 2 83 8 27 8 55 10 41 7 95 6 93 8 60 CV 5 3 2 5 12 9 4 7 4 5 4 8 2 8 8 3 8 3 9 9 7 8 6 8 8 4 VI 88 89 128 88 89 128 102 6 DE 3 81 4 33 7 86 15 63 4 54 19 40 6 63 6 10 7 03 9 20 14 22 6 37 21 36 CV 4 3 4 5 10 00 17 3 5 3 21 5 5 2 4 7 5 6 10 5 16 0 5 0 21 0 c Se llevaron a cabo dos estudios separados de reactividad cruza
16. infecciosas Edici n actual 23 2 Ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a completa de que las muestras de sangre humana no transmitir n infecciones Por lo tanto todos los derivados de la sangre deben considerarse potencialmente infecciosos 3 Con este ensayo solamente deben utilizarse sueros reci n extra dos y debidamente refrigerados que se hayan obtenido mediante procedimientos homologados de venopunci n as ptica No los utilice si se han agregado anticoagulantes o conservantes Evite utilizar sueros hemolizados lip micos o contaminados con bacterias 4 Almacene la muestra a temperatura ambiente durante un lapso no superior a las 8 horas Si la prueba no se realiza dentro de las 8 horas el suero puede almacenarse a entre 2 8 C durante un lapso no superior a las 48 horas Si tiene previsto retrasar la realizaci n de la prueba conserve los sueros de la prueba a 20 C o a temperaturas inferiores Evite m ltiples ciclos de congelaci n descongelaci n que puedan ocasionar la p rdida de actividad de los anticuerpos y dar lugar a resultados err neos Es responsabilidad del propio laboratorio utilizar todas las referencias disponibles y o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad de su laboratorio 26 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA 1 Retire los componentes individuales del kit del lugar de almacenamiento y permita que alcancen la temperatura ambiente 20 25 C 2 Determine el n mero total
17. no contiene organismos viables No obstante las tirillas deben considerarse como materiales biol gicos potencialmente peligrosos y deben manipularse como tal Los controles son material con potencial riesgo biol gico Los materiales a partir de los cuales se obtuvieron estos productos resultaron negativos para el ant geno del VIH 1 el HBsAg y para anticuerpos contra el VHC y el VIH por m todos de prueba homologados Sin embargo dado que ning n m todo de prueba puede ofrecer una garant a total de que no hay agentes infecciosos estos productos deber n manipularse con un Nivel de bioseguridad 2 tal como se recomienda para cualquier muestra de sangre o suero humano potencialmente infeccioso en el manual de Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories Bioseguridad en laboratorios microbiol gicos y biom dicos de los Centros para el Control de Enfermedades Institutos Nacionales de la Salud ltima edici n y en la Norma de la OSHA sobre Pat genos que se transmiten en la sangre 21 22 Para lograr resultados precisos es esencial cumplir estrictamente los tiempos y temperaturas de incubaci n especificados Se debe dejar que todos los reactivos alcancen la temperatura ambiente 20 25 C antes de empezar el ensayo Devuelva los reactivos no utilizados a una temperatura refrigerada inmediatamente despu s de su uso Un lavado inadecuado podr a ocasionar resultados de falsos positivos o falsos negativos Debe reducirse al m nimo l
18. 0 0 1 Total 152 19 6 177 de concordancia positiva 128 155 82 6 Intervalo de confianza del 95 76 6 a 88 6 de concordancia negativa 17 19 89 5 Intervalo de confianza del 95 75 7 a 103 3 Concordancia general 145 176 82 4 Intervalo de confianza del 95 76 8 a 88 0 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 4 Muestras retrospectivas Resultados de sistema de pruebas ZEUS ELISA Measles IgG Test Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 71 0 0 71 AtheNA Multi Lyte Negativo 1 0 5 MMV IgG Plus Dudoso 0 0 0 Sistema de pruebas No v lido 0 0 0 Total 75 1 0 76 de concordancia positiva 71 75 94 7 Intervalo de confianza del 95 89 6 a 99 8 de concordancia negativa 1 1 100 0 Intervalo de confianza del 95 75 7 a 103 3 Concordancia general 72 76 94 7 Intervalo de confianza del 95 89 7 a 99 8 Tabla 5 Todas las muestras combinadas Resultados de sistema de pruebas ZEUS ELISA Measles IgG Test Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 199 0 0 199 AtheNA Multi Lyte Negativo 18 18 4 40 MMV Ig
19. 2 0 70 CN 140 27 1 88 1 06 0 16 3 14 0 20 0 82 CN 141 93 2 41 3 08 0 62 5 46 0 24 2 97 CN 144 35 1 75 0 87 0 14 2 00 0 21 0 92 CN 146 31 1 92 1 31 0 36 3 83 0 84 1 42 CN 149 77 1 52 0 38 0 22 6 58 0 39 1 33 Se realiz un estudio de sustancias interferentes para determinar los efectos potenciales de sustancias interferentes que se pueden encontrar en muestras de suero Las siguientes substancias potencialmente interferentes se a adieron a las muestras de suero en los niveles indicados Tabla 17 Niveles de sustancias interferentes paperas Substancia Adici n baja Adici n alta Bilirrubina 1 9mg dL 3 8mg dL Albumina humana 5 5g dL 11g dL IgG humano 1 8g dL 3 6g dL Colesterol 200mg dL 400mg dL Triglic ridos 150mg dL 300mg dL Hemoglobina 180g dL 360g dL Intral pidos 3 5mg dL 7 0mg dL Es necesario indicar que los niveles de adici n bajos y altos se sumaban al nivel de l nea base de estos materiales que podr an haber estado presentes en los sueros originales No se detectaron los niveles en los sueros originales Para este estudio se evaluaron tres sueros en presencia de cada una de las substancias que se mencionan arriba Una muestra result claramente positiva para el IgG de las paperas una era fronteriza y una era claramente negativa para el IgG de las paperas Los resultados de las muestras de control y el suero con adici n alta y baja se presentan en la Tabla 18
20. 6 2 6 5 11 4 8 8 28 0 13 4 8 8 25 5 CV 4 6 36 9 7 8 7 3 6 9 12 0 3 8 6 7 5 1 21 6 9 5 5 1 17 3 c Se llev a cabo una prueba de reactividad cruzada en la que se utilizaron siete muestras de suero que resultaron negativas en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y que se probaron posteriormente con pruebas ELISA comercializadas para determinar la actividad respecto a VHS 1 VHS 2 Toxo CMV ant geno nuclear EBV EBV EA IgG y ant geno c psido viral EBV Cinco de las siete muestras resultaron positivas para uno o m s de los marcadores virales probados Los resultados de este estudio se ilustran en la Tabla 7 Tabla 7 Reactividad cruzada sarampi n Resultados AtheNA Resultado de ELISA Muestra Multi Lyte CMV VHS 1 VHS 2 Toxoplasma ANEB EBV EA IgG VEB CN 18 45 0 10 5 46 1 22 0 01 6 44 0 18 5 89 CN 126 96 1 83 0 38 0 21 0 03 0 08 0 63 2 15 CN 140 50 1 88 1 06 0 16 0 00 3 14 0 20 0 82 CN 141 81 2 41 3 08 0 62 0 05 5 46 0 24 2 97 CN 144 70 1 75 0 87 0 14 0 02 2 00 0 21 0 92 CN 146 42 1 92 1 31 0 36 0 05 3 83 0 84 1 42 CN 149 25 1 52 0 38 0 22 0 04 6 58 0 39 1 33 d Se realiz un estudio de sustancias interferentes para determinar los efectos potenciales de sustancias interferentes que se pueden encontrar en muestras de suero Las siguientes sustancias potencialmente interferentes se a adieron en las muestras de suero en los niveles indicados en la tabla 8 Sistema de prueba
21. 979 Norrby E Measles Virus In Manual of Clinical Microbiology Lennette EH Balows A Hausler WJ and Shadomy HJ eds 4th Edition American Society for Microbiology Washington DC 769 773 1985 Norrby E Mumps Virus in Manual of Clinical Microbiology 4 ed Lennette E H A Balows WJ Hausler Jr HJ Shadomy eds American Society for Microbiology Washington D C Pp 774 778 1985 Kleiman MB Mumps Virus Infections in Laboratort Diagnosis of Viral Infections Lennette EH ed Marcel Dekker Inc New York NY Pp 369 383 1985 Hopp HE and Parkman PD Mumps Virus in Diagnostic Procedure for Viral Rickettsial and chlamydial Infections 5 Ed Lennette EH and Schmidt NH eds American Public Health Associaton Washington D C Pp 633 653 1979 Weller TH Witton HM Bell EJ Exp Med 108 843 1958 Weller TH Coons AH Proc Soc Exp Biol Med 86 789 1954 Weller TH Viral Infections of Human Epidemiology and Control 2nd ed NY Pelnum 569 95 1982 Kimura A et al Arch virusforsch 36 1 1972 Esiri M Tomlinson AH J Neurol Sci 15 25 1972 Oakes JE Iltis JP Hyman RW et al Virology 82 353 1977 Richards JC Human RW Rapp F J Virol 32 812 1979 Fleisher G Henry W McSorley M Arbeter A Plotkin S Am J Dis Child 135 869 9 1981 Preblud SR Pediatrics 68 14 7 1981 Ojeda VJ et al ASCP 529 532 Vol 81 No 4 April 1984 The Harvard Medical School Health Center Vol IX No 8 Shingles June 1984 Leclair
22. Diluent sufrir un cambio de color lo cual confirma que la muestra se ha combinado con el diluyente Para obtener un rendimiento adecuado es importante que las disoluciones de la muestra se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba 4 Despu s de determinar el n mero total de pocillos a procesar utilice una pipeta multicanal o repetidora para dispensar 50 uL de suspensi n de microesferas dentro de cada uno de los pocillos de la placa de filtraci n Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 3 Fecha Rev 9 17 2015 10 11 12 Transfiera 10 uL de cada muestra diluida 1 21 y el control de la placa de disoluci n a la placa de filtraci n Para obtener un rendimiento adecuado es importante que la disoluci n de muestra y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Despu s de la incubaci n enjuague las microesferas mediante filtrado al vac o usando el tamp n de lavado que se suministra diluido en la concentraci n 1x a Coloque la placa de filtraci n sobre el colector de vac o y extraiga la soluci n dejando las microesferas detr s b Apague el vac o y a ada 200 uL de tamp n de lavado c Aplique el vac o y extraiga la soluci n d Repita los pasos 7b y 7c para un total de tres enjuagues A continuaci n del lavado final secar suavemente el fondo de la placa y permitir q
23. G Plus Dudoso 9 2 13 Sistema de pruebas No v lido 1 0 1 Total 227 20 6 253 de concordancia positiva 199 227 87 7 Intervalo de confianza del 95 83 4 a 91 9 de concordancia negativa 18 20 90 0 Intervalo de confianza del 95 76 9 a 103 1 Concordancia general 217 252 86 1 Intervalo de confianza del 95 81 8 a 90 4 Las muestras AtheNA y ELISA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia b Se evalu la precisi n y la reproducibilidad del ensayo en varios laboratorios como se explica a continuaci n se identificaron seis muestras para usarlas en el estudio bas ndose en su actividad en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus Se seleccionaron dos muestras que eran claramente negativas dos que eran claramente positivas y dos que estaban cerca del corte o interrupci n del ensayo Este panel de seis muestras de suero se dividi en tres al cuotas cada uno y se prob en tres instalaciones cl nicas diferentes Cada d a de la prueba se diluy cada muestra dos veces y a continuaci n cada disoluci n se paso por el ensayo lo que result en ocho resultados por ensayo Esto se realiz durante tres d as en cada instalaci n hospitalaria El resumen del estudio de
24. Paso Procedimiento de prueba abreviado 1 Diluya las muestras al 1 21 en diluyente SAVe Diluent Mezcle bien 2 Combine 50 uL de suspensi n de microesferas y 10 uL de muestra diluida en un pocillo vac o Mezcle bien 3 Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos 4 Enjuague las microesferas 3 veces con 200 uL de Tamp n de Lavado 1x 5 Seque suavemente el fondo de la placa y secar con aire durante 3 5 minutos 6 Agregue 150 uL de conjugado en cada pocillo Mezcle bien 7 Transfi ralo a una placa de reacci n opcional 8 Incube a temperatura ambiente durante 30 10 minutos 9 Agite la placa opcional 10 Lea los resultados en un periodo de 60 minutos CONTROL DE CALIDAD Cada vez que se realiza el ensayo es necesario incluir el Control Negativo en el pocillo A1 y el Control Positivo en el pocillo B1 La validez de la tirada se determina mediante la realizaci n de los controles positivos y negativos Estos criterios se analizan autom ticamente con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology a El Control negativo y el Control positivo deben ser todos negativos en la microesfera no espec fica o de ant geno de control b El control negativo debe ser negativo para todos y cada uno de los analitos incluidos en la suspensi n de microesferas c El Control Positivo debe ser positivo para los tres analitos que se incluyen en la suspensi n de microesferas Estos rangos dependen de lote y est n codificados dentro del CD de Ca
25. a y los anticuerpos con reactividad cruzada frente a otros paramixovirus pueden representar un problema 4 5 Las pruebas IFA y ELISA ofrecen la ventaja de ser sensibles y permitir la identificaci n por separado de los anticuerpos virales de tipo IgG e IgM tanto para la determinaci n del estado inmune como para el diagn stico de la infecci n aguda 4 5 El virus de la varicela z ster VZV es un pat geno com n en los humanos La evoluci n cl nica del VZV en humanos se suele clasificar como varicela y Herpes zoster culebrilla El adelanto m s importante en la comprensi n de la naturaleza de estos agentes fue la contribuci n original de Weller y sus compa eros de trabajo quienes demostraron el m todo de aislamiento y propagaci n en serie del virus 7 8 y m s recientemente la epidemiolog a y control del virus 9 Se demostr que los aislamientos de virus obtenidos de pacientes con varicela y z ster eran id nticos seg n el efecto citop tico 26 la antigenicidad 8 y la morfolog a 10 11 M s recientemente se ha demostrado que estos virus tienen un peso molecular del ADN 12 y patrones de endonucleasa de restricci n 13 id nticos Los s ntomas cl nicos de la varicela primaria incluyen un periodo prodr mico de dolores de cabeza malestar y fiebre antes de la aparici n del exantema o las erupciones caracter sticas que pueden ser el primer s ntoma El sarpullido es pleomorfo y evoluciona de macular a papular antes de
26. a cantidad de soluci n de lavado residual p ej mediante secado o aspiraci n antes de a adir el conjugado No permita que los pocillos se sequen entre una incubaci n y la siguiente El diluyente SAVe Diluent la suspensi n de microesferas los controles y el conjugado contienen azida s dica en una concentraci n de lt 0 1 p v Se ha informado que la azida s dica forma azidas de plomo o cobre en las ca er as del laboratorio lo que puede ocasionar explosiones al golpear con un martillo Para evitarlo enjuague bien el lavabo con agua despu s de eliminar las soluciones que contengan azida de sodio La soluci n concentrada del tamp n de lavado es IRRITANTE Irritante para los ojos el sistema respiratorio y la piel La diluci n o adulteraci n de estos reactivos puede generar resultados err neos No utilice reactivos de otro origen o fabricante Nunca pipetee con la boca Evite el contacto de los reactivos y las muestras de pacientes con la piel y las membranas mucosas Evite la contaminaci n microbiana de los reactivos Esto puede ocasionar resultados incorrectos La contaminaci n cruzada de reactivos y o muestras podr a ocasionar resultados err neos Evite salpicar o generar aerosoles No exponga los reactivos a la luz intensa durante el almacenamiento o la incubaci n La suspensi n de microesferas y el conjugado son reactivos sensibles a la luz Ambos se han embalado en envases que protegen de la luz Las exposiciones normal
27. aci n 1 Los sueros de prueba diluidos correctamente se incuban en una mezcla multiplexada de la suspensi n de microesferas La suspensi n de microesferas contiene una mezcla de conjuntos distinguibles de microesferas de poliestireno En este caso hay tres conjuntos de microesferas primarios el sarampi n las paperasy el VZV Si est presente en los sueros del paciente determinados anticuerpos se unir n con el ant geno inmovilizado en uno o m s conjuntos de microesferas Las microesferas se enjuagan para extraer las prote nas s ricas no reactivas Se agrega anti IgG humana de cabra conjugada con ficoeritrina al recipiente y se incuba la placa El conjugado reaccionar con el anticuerpo de tipo IgG inmovilizado en la fase s lida del paso 1 La suspensi n de microesferas se analiza despu s con el instrumento AtheNA Multi Lyte El conjunto o conjunto de microesferas se clasifican identifican y la cantidad de mol cula informante conjugado PE se determina para cada conjunto de microesferas Con la Intra Well Calibration Technology tecnolog a de calibraci n dentro del pocillo se utilizan conjuntos de microesferas de calibraci n para convertir fluorescencia sin procesar en resultado unidades COMPONENTES DEL SISTEMA DE PRUEBAS Materiales suministrados Cada sistema de pruebas contiene los siguientes componentes en cantidad suficiente para realizar el n mero de pruebas indicado en la etiqueta del envase NOTA los siguientes
28. componentes contienen como conservante azida de sodio a una concentraci n de lt 0 1 p v suspensi n de microesferas controles conjugado y SAVe Diluent2 SOLN BEAD 1 Suspensi n de microesferas contiene microesferas de poliestireno de 5 6 micras separadas y distinguibles que se conjugan con el ant geno del virus del sarampi n cepa purificada parcialmente procedente de las c lulas vero el ant geno de las paperas cepa ROD purificada parcialmente procedente de las c lulas vero y el ant geno del VZV cepa ROD purificada parcialmente procedente de las c lulas vero La suspensi n de microesferas tambi n contiene un conjunto de microesferas dise adas para detectar anticuerpos no espec ficos en la muestra del paciente si est presente y cuatro conjuntos de microesferas separadas que se utilizan para la calibraci n del ensayo Una botella mbar que contiene 5 5 ml Listo para usar CONJ 2 Conjugado anti IgG humana espec fica de la cadena y de cabra conjugada con ficoeritrina Una botella mbar que contiene 15 ml Listo para usar CONTROL 3 Control positivo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n rojo CONTROL 4 Control negativo suero humano Un vial de 0 2 ml con tap n verde DIL SPE 5 Diluyente SAVe Diluent Una botella de 50 ml con tap n verde de soluci n salina tamponada con fosfato Listo para usar NOTA El diluyente SAVe Diluent9 cambiar de color cuando se co
29. cuotas cada uno y se prob en tres instalaciones cl nicas diferentes Cada d a de la prueba se diluy cada muestra dos veces y a continuaci n cada disoluci n se paso por el ensayo lo que result en ocho resultados por ensayo Esto se realiz durante tres d as en cada instalaci n hospitalaria El resumen del estudio de precisi n aparece en la Tabla 15 Tabla 15 Precisi n paperas Intraensayo i Interensayos Entre Laboratorio uno Laboratorio dos Laboratorio tres laborato Muestra Dial D a2 D a3 D al D a2 D a3 D al D a2 D a3 e ld laboratorio os VI 287 4 233 1 253 6 258 4 280 5 259 5 287 4 277 8 282 1 258 0 266 1 282 4 268 9 1 DE 14 3 12 0 12 9 15 0 19 5 14 1 14 3 20 8 13 6 26 1 18 8 16 3 22 9 CV 5 0 5 1 5 1 5 8 7 0 5 4 5 0 7 5 4 8 10 1 7 1 5 8 8 5 vi 361 4 314 8 3159 351 6 336 0 305 1 361 4 373 1 357 5 330 7 330 9 364 0 341 9 2 DE 11 7 16 1 23 8 11 1 18 1 21 6 11 7 22 9 10 8 28 0 25 9 16 8 38 5 CV 3 2 5 1 7 5 3 2 5 4 71 3 2 6 1 3 0 8 5 7 8 4 6 8 3 vi 55 9 33 8 34 3 39 5 41 3 32 4 55 9 53 0 57 3 41 3 37 7 55 4 44 8 3 DE 5 1 2 3 2 8 3 0 4 8 7 9 5 1 3 4 3 5 11 1 6 6 4 3 10 9 CV 9 1 6 9 8 1 7 7 11 6 24 4 9 1 6 4 6 1 26 8 17 6 7 8 24 4 vi 64 9 30 9 40 4 40 8 46 0 35 1 64 9 60 0 63 4 45 4 40 6 62 8 49 6 4 DE 3 6 6 6 6 7 3 0 4 7 2 4 3 6 6 1 3 6 15 6 5 6 4 9 13 7 CV 5 6 21 2 16 6 7 4 10 3
30. da para evaluar la posible reactividad cruzada con otros virus En el primer estudio se seleccionaron 15 muestras de suero que resultaron negativas en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y se probaron posteriormente con el sistema de pruebas comercializado ELISAS para determinar su actividad ante las paperas el sarampi n y la rubeola De las 15 muestras dos resultaron negativas en las tres pruebas ELISA pero 13 15 resultaron lgG positivas para uno o m s de los tres virus En el segundo estudio se seleccionaron 16 muestras de suero que resultaron negativas al anticuerpo IgG VZV tanto de acuerdo con una prueba ELISA disponible comercialmente como por AtheNA Estas muestras se probaron a continuaci n mediante pruebas ELISA disponibles comercialmente para determinar la presencia de anticuerpos IgG del VHS 1 CMV Hepatitis B ant geno nuclear EBV y ant geno c psido viral EBV Las 16 muestras resultaron positivas para uno o m s de los marcadores virales probados Los resultados de estos dos estudios se ilustran en las tablas 24 y 25 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 11 Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 24 Estudio de reactividad cruzada VZV uno Resultados AtheNA Multi Lyte r Ps RESUItadO dE ELISA Muestra IgG antisarampi n IgG antipaperas IgG antirubeola T Negativo
31. doso Negativo Negativo 13 Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo Negativo Negativo 14 Negativo Positivo Positivo Positivo Positivo Negativo Positivo 15 Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo Negativo Negativo 16 Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo d Se realiz un estudio de sustancias interferentes para determinar los efectos potenciales de sustancias interferentes que se pueden encontrar en muestras de suero La tabla 26 resume los niveles de sustancias potencialmente interferentes que se a adieron a las muestras de suero Es necesario indicar que los niveles de adici n bajos y altos se sumaban al nivel de l nea base de estos materiales que podr an haber estado presentes en los sueros originales No se detectaron los niveles en los sueros originales Tabla 26 Niveles de sustancias interferentes VZV Substancia Adici n baja Adici n baja Bilirrubina 1 9mg dL 3 8mg dL Albumina humana 5 5g dL 11g dL IgG humano 1 8g dL 3 6g dL Colesterol 200mg dL 400mg dL Triglic ridos 150mg dL 300mg dL Hemoglobina 180g dL 360g dL Intral pidos 3 5mg dL 7 0mg dL Para este estudio se evaluaron tres sueros en presencia de cada una de las substancias que se mencionan arriba Una muestra result claramente positiva para IgG VZV sarampi n una era fronterizo y una era claramente negativa para IgG VZV Los resultados de las muestras de control y el suero con adici n alta y baja se pres
32. el IgG humano purificado que se utiliza para a adir la muestra daba positivo para los anticuerpos IgG antiVZV En todos los casos el resultado cualitativo de la muestra positiva permaneci sin cambios La muestra negativa mostr un rango de recuperaci n desde 1808 con la alta adici n de IgG hasta un punto bajo de 176 con alta adici n de hemoglobina Con la excepci n de la adici n de IgG humano purificado el resultado cualitativo de la muestra no result afectado por estas substancias Finalmente la muestra fronteriza mostr un rango de recuperaci n desde 274 5 con la alta adici n de IgG humano purificado hasta un punto bajo de 83 3 con alta adici n de bilirrubina Se puede concluir que todas las substancias probadas mostraron alg n nivel de interferencia con la detecci n de anticuerpos antiVZV en el ensayo AtheNA Plus dependiendo de la identidad del interferente y del nivel probado consultar arriba Las muestras que son hemol ticos ict ricos lip micos o que contienen niveles elevados de IgG no se deben probar con el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus REFERENCIAS Norrby E and Oxman MN Measles Virus In Virology Fields BN and Knope DM eds 2nd Edition Raven Press Ltd New York 1013 1044 1990 Gershon AA and Krugman S Measles Virus In diagnostic Procedures for Viral rickettsial and Chlamydial Infections Lennette EH and Schmidt NJ eds 5th Edition American Public Health Association Inc 655 693 1
33. entan en la Tabla 27 Tabla 27 Sustancias interferentes VZV Muestra uno Muestra dos Muestra 3 REDA y IgG antiVZV recuperaci n de IgG antiVZV recuperaci n de IgG antiVZV recuperaci n de Sustancia interferente Nivel cargado a pa i En a gt E ni Positivo la se al positiva Dudoso la se al positiva Negativo la se al positiva Ninguna control N D 177 N D 114 N D 25 N D Bilirrubina Bajo 155 87 6 117 102 6 50 200 0 Bilirrubina Alta 127 71 8 95 83 3 48 192 0 Alb mina Bajo 163 92 1 111 97 4 55 220 0 Alb mina Alto 126 71 2 1117 102 6 62 248 0 IgG Bajo 300 169 5 295 258 8 344 1376 0 IgG Alto 446 252 0 313 274 6 452 1808 0 Colesterol Bajo 147 83 1 113 99 1 58 232 0 Colesterol Alto 164 92 7 115 100 9 57 228 0 Triglic ridos Bajo 137 77 4 99 86 8 52 208 0 Triglic ridos Alto 142 80 2 88 77 2 46 184 0 Hemoglobina Bajo 129 78 0 101 88 6 51 204 0 Hemoglobina Alto 129 72 9 113 99 1 44 176 0 Intral pidos Bajo 139 78 5 101 88 6 56 224 0 Intral pidos Alto 163 92 1 99 86 8 51 244 0 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 12 Fecha Rev 9 17 2015 D 22 23 24 25 26 La muestra positiva mostr un rango de recuperaci n desde 252 con la alta adici n de IgG hasta un punto bajo de 71 2 con alta adici n de albumina La adici n del IgG purificado tambi n provoc un aumento importante en la se al ya que es probable que
34. ermaneci sin cambios La muestra negativa mostr un rango de recuperaci n desde 728 3 con la alta adici n de IgG hasta un punto bajo de 91 7 con alta adici n de albumina Con la excepci n de la adici n de IgG humano purificado el resultado cualitativo de la muestra no result afectado por estas substancias Finalmente la muestra fronteriza mostr un rango de recuperaci n desde 436 con la alta adici n de IgG humano purificado hasta un punto bajo de 100 con alta adici n de albumina Se puede concluir que todas las substancias probadas mostraron alg n nivel de interferencia con la detecci n de anticuerpos anti paperas en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus dependiendo de la identidad del interferente y del nivel probado consultar arriba Las muestras que son hemol ticos ict ricos lip micos o que contienen niveles elevados de IgG no se deben probar con el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus 3 Analito VZV a Se llev a cabo un estudio comparativo en el que se probaron un total de 272 muestras De las 272 muestras probadas 177 eran muestras prospectivas y 95 eran muestras retrospectivas Las muestras prospectivas se probaron en un laboratorio hospitalario centralizado del sudeste de los Estados Unidos y en un laboratorio de referencia en el Medio Oeste Consultar la secci n Resultados esperados para obtener la distribuci n demogr fica de estas muestras Las 95 muestras retrospectivas inclu an a
35. es que se experimentan durante el curso de la ejecuci n del ensayo no afectar n en rendimiento del ensayo No exponga estos reactivos a fuentes potentes de luz visible de manera innecesaria Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 2 Fecha Rev 9 17 2015 16 Recoja la soluci n de lavado en un lavabo de eliminaci n Trate la soluci n de desecho con desinfectante es decir lej a de uso dom stico al 10 hipoclorito de sodio al 0 5 Evite la exposici n de los reactivos a los vapores de la lej a 17 Precauci n neutralice cualquier desecho l quido con pH cido antes de agregarlo a la soluci n de lej a 18 No permita que el conjugado entre en contacto con recipientes o instrumentos que hayan podido contener previamente una soluci n que utilice azida de sodio como conservante Los residuos de azida de sodio pueden destruir la actividad enzim tica del conjugado 19 No exponga ninguno de los reactivos a soluciones que contengan lej a o a ning n olor fuerte de soluciones que contengan lej a Los restos de lej a hipoclorito de sodio incluso a nivel de trazas pueden destruir la actividad biol gica de muchos de los reactivos incluidos en este sistema de pruebas MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS 1 Pipetas capaces de dispensar con exactitud entre 10 y 200 pl 2 Pipeta multicanal capaz de dispensar con exactitud 10 200 pl 3 Dep si
36. gG ELISA de ZEUS o el sistema de pruebas Bion Mumps IgG IFA Los resultados de este estudio comparativo se ilustran en las Tablas 10 14 siguientes Tabla 10 Muestras prospectivas laboratorio uno Resultados sistema de pruebas Mumps lgG ELISA de ZEUS Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 84 0 0 84 AtheNA Multi Lyte Negativo 0 0 0 0 MMV IgG Plus Dudoso 3 0 0 3 Sistema de pruebas No v lido 0 0 0 Total 87 0 0 87 de concordancia positiva 84 87 96 6 Intervalo de confianza del 95 92 7 a 100 4 de concordancia negativo 0 0 N D Intervalo de confianza del 95 N D Concordancia general 84 87 96 6 Intervalo de confianza del 95 92 7 a 100 4 Las muestras AtheNA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Tabla 11 Muestras prospectivas laboratorio dos Resultados Bion Mumps IgG IFA Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 58 0 0 58 AtheNA Multi Lyte Negativo 15 9 0 24 MMV IgG Plus Dudoso 9 0 0 9 Sistema de pruebas No v lido 0 1 0 1 Total 82 10 0 92 de concordancia positiva 58 82 70 7 Intervalo de confianza del 95 60 9 a 80 6 de concordancia negativa 9 9 100 0 Intervalo de confianza del 95 100 0 a 100 0 Concordancia general 67 91 73 6 Intervalo de confianza del 95 64 6 a 82 7 Las muestras AtheNA con resultados dudosos se consideraron como muest
37. ito sarampi n AtheNA Multi Lyte Plus analito paperas AtheNA Multi Lyte Plus analito VZV N Edad Sexo Positivo Negativo Dudoso No v lido Positivo Negativo Dudoso No v lido Positivo Negativo Dudoso Dl 1 9 Masculino 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 A Femenino 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Masculino 5 0 0 0 6 1 0 0 2 4 0 0 10 19 Femenino 5 1 1 0 4 0 1 0 3 3 0 0 a Masculino 17 2 2 0 15 0 3 1 18 0 1 1 Femenino 36 13 6 al 45 10 3 0 45 11 2 0 30 39 Masculino 1 1 2 0 3 0 1 0 4 0 0 0 Femenino 22 10 3 0 23 12 1 0 31 4 1 0 Masculino 1 3 0 0 1 0 1 0 4 0 0 0 40 49 Femenino 18 0 2 0 21 2 0 0 20 0 0 0 Masculino 4 0 0 0 2 0 0 0 3 1 0 0 50 59 Femenino 4 2 0 0 7 0 1 0 5 1 0 0 Masculino 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 60 69 Femenino 6 0 0 0 6 0 0 0 4 1 1 0 70 Masculino 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Femenino 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 me Masculino 28 6 4 0 27 1 5 1 31 5 1 1 ota Femenino 94 26 12 1 107 24 6 0 109 20 4 0 Total 171 32 16 1 134 25 11 1 140 25 5 1 Con la excepci n con las edades que faltan en cuatro de las 177 muestras y los sexos que faltan en dos de las 177 todas las muestras prospectivas n 171 se suministraron con la edad y sexo del individuo del cual se obtuvo la muestra En la tabla de abajo aparece un resumen de la informaci n demogr fica Estad stica Mujeres Hombres Poblaci n total Tama o de la muestra 133 38 171 Edad media 33 4 29 3 32 5 Edad mediana 30 26 5 28
38. l CD de calibraci n del lote b L mite de referencia analitos Cada analito del sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS tiene un l mite de referencia asignado ZEUS determina los l mites de referencia para cada lote de sistema de pruebas y est n codificados en el CD de calibraci n del lote c Con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology todos los c lculos se realizan autom ticamente cuando se utiliza el sistema AtheNA Multi Lyte La tecnolog a Intra Well Calibration Technology ejecuta un an lisis de regresi n de las normativas internas y a continuaci n ajusta los valores de unidad calculados bas ndose en una normativa adicional y en las caracter sticas de la muestra de suero Interpretaciones a Determinaci n de corte El corte de este ensayo se configur originalmente en contraposici n con un panel de muestras negativas Cada lote de kits se han probado mediante un panel de muestras caracterizadas y los valores indicados est n normalizados utilizando el CD de calibraci n espec fico de cada lote b Interpretaci n de los analitos del sarampi n de las paperas y del VZV Los valores unitarios de las muestras de los analitos se interpretan de la siguiente manera Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 4 Fecha Rev 9 17 2015 10 11 12 i Un resultado de lt 100 AU mL con el AtheNA Multi Lyte indica que no hay anticuerpos de tipo IgG detectables ante el virus del sarampi n
39. libraci n Los rangos del PC se pueden ver haciendo clic sobre el bot n Gr fico de Control del software AtheNA Multi Lyte y despu s haciendo clic sobre L mites superiores inferiores de control d Si no se cumple ninguno de los criterios anteriores toda la tirada se considerar como no v lida y se tendr que repetir En este caso no comunique los resultados del paciente La validez de la muestra se basa en las caracter sticas de las microesferas y sus interacciones con los sueros de los pacientes Hay varios par metros que se supervisan autom ticamente con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology Si se determina que cualquiera de los criterios no cumple las especificaciones los resultados del paciente se considerar n como no v lidos y deber n repetirse En caso de que esto se produzca el informe de datos indicar la muestra en particular que se invalid y el c digo de soluci n de problemas Si una muestra tiene resultados no v lidos en repetidas ocasiones esta se debe probar utilizando una metodolog a alternativa ya que es incompatible con el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte Plus Es posible analizar controles adicionales siguiendo las directrices o los requisitos de las normativas locales regionales o nacionales o de las organizaciones acreditadas Los controles externos deben ser representativos del suero humano normal debido a que el sistema de calibraci n AtheNA Multi Lyte se basa parcialmente en las caracte
40. lo de la erupci n Es posible que aparezca una respuesta transitoria mediante anticuerpos de tipo IgM entre tres y seis semanas en primer lugar o de forma conjunta con IgG Los anticuerpos de tipo IgG alcanzan un pico entre dos y seis semanas disminuyen gradualmente durante seis meses y permanecen relativamente estables a partir de ese momento Despu s de la administraci n de la vacuna del sarampi n de virus vivos atenuados se puede detectar el anticuerpo 11 14 d as despu s de su inoculaci n 1 Se pueden producir reinfecciones subcl nicas en personas que tienen una inmunidad inducida por vacuna o natural que da lugar a un refuerzo del t tulo de IgG espec fico del sarampi n 1 Aunque el programa de vacunas est muy extendido hay muchos individuos que contin an siendo susceptibles al sarampi n a causa de un fallo en la vacuna primaria o por falta de inmunizaci n La serolog a es una herramienta til para verificar el estado de inmunidad en individuos que han recibido la vacuna anteriormente as como para verificar la seroconversi n en individuos que han recibido la vacuna recientemente Adem s la serolog a del sarampi n puede ser una herramienta til para el diagn stico de la SSPE que puede aparecer a os despu s de la infecci n de sarampi n original 3 Las paperas son una enfermedad aguda generalmente autolimitada y contagiosa con fiebre moderada de corta duraci n La caracter stica cl nica m s com n es una parotidi
41. mbine con suero WASHBUF 10X 6 Tamp n de lavado concentrado 10X diluir 1 parte del concentrado 9 partes de agua desionizada o destilada Una botella de 50 ml con tap n transparente de soluci n salina tamponada con fosfato concentrada 10x NOTAS 10 11 12 13 14 15 1 Los siguientes componentes no dependen del n mero de lote del sistema de pruebas y se pueden usar indistintamente con cualquier sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte de ZEUS Tamp n de lavado y diluyente SAVe Diluent 2 El sistema de pruebas tambi n contiene a Una etiqueta de componentes que contiene informaci n espec fica de lote dentro de la caja del sistema de pruebas b CD de calibraci n que incluye los valores de calibraci n del kit espec ficos de los lotes y necesarios para el an lisis de la muestra y el control de calidad del ensayo as como el prospecto c Una placa de disoluci n de 96 pocillos d Una placa de filtro de 96 pocillos PRECAUCIONES Para uso diagn stico in vitro Se deben seguir las precauciones normales que se utilizan para manipular reactivos de laboratorio En caso de contacto con los ojos enjuague inmediatamente con abundante agua y busque asistencia m dica Utilice ropa de protecci n adecuada guantes y protecci n para la cara ojos No respire los vapores Respete todas las leyes locales regionales y nacionales para la eliminaci n de residuos La suspensi n de microesferas AtheNA Multi Lyte
42. o contacte con ZEUS 200 Evans Way Branchburg New Jersey 08876 EE UU Scientific llame de forma gratuita o escriba a Llamada gratuita EE UU 1 800 286 2111 opci n 2 supportGzeusscientific com Internacional 1 908 526 3744 Para consultas al Servicio de atenci n al cliente y al Soporte EMERGO EUROPE Fax 1 908 526 2058 t cnico desde fuera de EE UU contacte con su distribuidor Molenstraat 15 P gina Web www zeusscientific com local EC 2513 BH The Hague AtheNA Multi Lyte y SAVe Diluent son marcas registradas de ZEUS Scientific Inc The Netherlands 2015 ZEUS Scientific Inc Todos los derechos reservados Tel 31 0 70 345 8570 Fax 31 0 70 346 7299 Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 13 Fecha Rev 9 17 2015
43. on la alta adici n de IgG humano purificado hasta un punto bajo de 93 1 con alta adici n de hemoglobina Se puede concluir que todas las substancias probadas mostraron alg n nivel de interferencia con la detecci n de anticuerpos antisarampi n en el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus dependiendo de la identidad del interferente y del nivel probado consultar arriba Las muestras que son hemol ticos ict ricos lip micos o que contienen niveles elevados de IgG no se deben probar con el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus 2 Analito paperas a Se llev a cabo un estudio comparativo en el que se probaron 253 muestras De las 253 muestras probadas 177 eran muestras prospectivas y 76 eran muestras retrospectivas Las muestras prospectivas se probaron en un laboratorio hospitalario centralizado del sudeste de los Estados Unidos y en un laboratorio de referencia en el Medio Oeste Consultar la secci n Resultados esperados para obtener la distribuci n demogr fica de estas muestras Las muestras retrospectivas inclu an a 76 mujeres embarazadas con edades comprendidas entre los 18 y los 41 a os De las 76 mujeres embarazadas 16 76 estaban en su primer trimestre de embarazo 30 76 estaban en su segundo trimestre y 30 76 estaban en su tercer trimestre de embarazo Las muestras se probaron con el sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus y con un sistema de pruebas Mumps IgG de referencia el sistema de pruebas Mumps I
44. pasar a la fase vesicular El sarpullido desarrolla t picamente series sucesivas de nuevas lesiones en un per odo de 3 a 5 d as Normalmente la varicela afecta ni os que se encuentran en educaci n general b sica Los adultos adolescentes y reci n nacidos son susceptibles a la infecci n La enfermedad aparece t picamente en invierno o primavera y puede alcanzar niveles epid micos en poblaciones susceptibles Se determin que las infecciones de varicela durante el inicio del embarazo raramente causan anomal as cong nitas Las infecciones de varicela que se producen en mujeres embarazadas susceptibles en el momento del parto pueden comportar una infecci n en el reci n nacido que puede amenazar su vida as como a los pacientes en toda una variedad de patolog as 14 15 y 16 No es rara la propagaci n potencial de una enfermedad nosocomial El Herpes zoster culebrilla es una enfermedad que aparece principalmente en adultos en la mayor a de los casos se produce en individuos mayores de 50 a os A diferencia de la naturaleza epid mica y temporal de la infecci n por varicela el Herpes zoster muestra un patr n aleatorio Se cree que el Herpes zoster es la reactivaci n de un virus de varicela ya existente que ha estado en estado latente desde la infecci n primaria por varicela Las personas afectadas por infecciones por Herpes zoster se comportan as incluso en presencia de anticuerpos previamente existentes contra el virus de la varicela
45. precisi n aparece en la Tabla 6 Tabla 6 Precisi n sarampi n Intraensayo s z Interensayos Entre Laboratorio uno Laboratorio dos Laboratorio tres laboratori ea D az D a2 D a3 D az D a2 D a3 Da1 D a2 D a3 ororio Laboratorio Laboratorio os vi 324 5 3195 3115 343 8 356 8 32333 359 3 351 1 3520 318 5 341 3 354 1 338 1 DE 29 7 12 0 16 4 19 8 20 5 19 1 14 8 23 0 16 4 20 6 23 6 18 0 25 4 CV 9 2 3 7 5 3 5 8 5 8 5 9 4 1 6 5 4 7 6 5 6 9 5 1 7 5 vi 153 1 152 5 1440 167 8 1544 141 9 186 1 1854 177 0 149 9 154 7 182 8 162 5 2 DE 5 6 14 7 10 7 8 5 4 8 9 9 15 9 15 5 9 8 11 3 13 2 14 1 19 4 CV 3 6 9 7 7 5 5 1 3 1 7 0 8 6 8 4 5 6 7 6 8 6 7 7 11 9 vI 479 1 472 5 464 0 481 0 492 3 468 4 538 5 541 4 530 3 471 9 48 5 536 7 496 4 3 DE 26 0 23 7 25 2 92 2 29 6 17 2 44 3 54 8 33 2 24 7 55 2 43 2 51 3 CV 5 4 5 0 5 4 19 2 6 0 3 7 8 2 10 1 6 3 5 2 11 5 8 1 10 3 vI 59 0 51 3 47 9 53 9 61 1 41 3 77 3 77 8 76 1 52 7 52 1 77 0 60 6 4 DE 6 4 4 5 4 7 6 0 3 9 7 0 4 2 6 0 3 8 6 9 10 1 4 6 13 9 CV 10 8 8 7 9 8 11 1 6 5 17 1 5 4 7 7 5 0 13 1 19 3 6 0 22 9 vI 29 6 20 4 22 8 29 6 38 0 20 1 57 8 48 3 50 4 24 3 29 3 52 1 35 2 5 DE 7 5 4 5 6 4 7 5 6 6 6 4 19 1 5 0 4 3 7 2 9 9 11 9 15 6 CV 25 4 22 3 28 1 25 3 17 3 32 0 33 0 10 4 8 5 29 7 33 9 22 8 44 4 vI 141 8 126 9 121 0 138 8 149 4 135 8 172 1 169 8 172 6 129 9 141 3 171 5 147 6 6 DE 6 5 46 8 9 5 10 2 10 3 1
46. r sticas de la muestra de suero Si la formulaci n de la muestra es artificial no es suero humano se pueden producir resultados err neos Las buenas pr cticas de laboratorio recomiendan el uso de controles positivos y negativos para asegurar la funcionalidad de los reactivos y la ejecuci n adecuada del procedimiento del ensayo Los requisitos de control de calidad se deben realizar en total cumplimiento con las normativas locales auton micas o estatales o con los requisitos de acreditaci n y los procedimientos de control de Calidad normativos del laboratorio del usuario Se recomienda que el usuario consulte CLSI EP12 A y 42 CFR 493 1256 para obtener informaci n de ayuda sobre las pr cticas de CC adecuadas INTERPRETACI N DE LOS RESULTADOS C lculos a Calibraci n del ensayo El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS utiliza la Intra Well Calibration Technology La tecnolog a Intra Well Calibration Technology incluye una curva est ndar con m ltiples puntos dentro de la suspensi n de microesferas Con la tecnolog a Intra Well Calibration Technology cada pocillo del ensayo se calibra de manera interna sin que intervenga ning n usuario La curva est ndar est dise ada para que se ajuste autom ticamente bas ndose en las caracter sticas nicas del paciente o suero de control Los valores del calibrador se asignan de acuerdo con los est ndares internos de ZEUS que son espec ficos del lote y est n codificados en e
47. ras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 8 Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 12 Muestras prospectivas laboratorios Resultados prueba de referencia combinados Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 140 0 0 140 AtheNA Multi Lyte Negativo 15 9 0 24 MMV IgG Plus Dudoso 12 0 0 12 Sistema de pruebas No v lido 0 1 0 1 Total 167 10 0 177 de concordancia positiva 140 167 83 8 Intervalo de confianza del 95 78 2 a 89 4 de concordancia negativa 9 9 100 0 Intervalo de confianza del 95 100 0 a 100 0 Concordancia general 149 176 84 7 Intervalo de confianza del 95 79 3 a 90 0 Las muestras AtheNA con resultados dudosos se consideraron como muestras sin concordancia Las muestras con resultados no v lidos se excluyeron de los c lculos para la concordancia Tabla 13 Muestras retrospectivas Resultados Bion Mumps IgG IFA Positivo Negativo Dudoso Total Positivo 60 1 0 71 AtheNA Multi Lyte Negativo 0 12 0 5 MMV IgG Plus Dudoso 0 2 1 0 Sistema de pruebas No v lido 0 0 0 0 Total 60 15 0 76 de concordancia positiva 60 76 78 9 Intervalo de confianza del 95 69 8 a 88 1 de concordancia negativa 12 15 80 0
48. rminar si el ensayo detectar una respuesta inmune a una vacuna Un resultado positivo individual s lo indica una exposici n inmunol gica anterior el nivel de respuesta del anticuerpo o la clase de respuesta del anticuerpo no se puede utilizar para determinar la infecci n activa o la etapa de la enfermedad Las muestras obtenidas demasiado pronto en la evoluci n de una infecci n pueden no tener niveles detectables de IgG En dichos casos se puede obtener una segunda muestra despu s de dos a siete semanas y probarla concurrentemente con la muestra original para buscar la seroconversi n Los resultados positivos de los pacientes que han recibido hemoderivados durante los seis meses anteriores pueden deberse a niveles de anticuerpos transitorios adquiridos durante la transfusi n No se ha establecido el uso de sangre del cord n umbilical la poblaci n neonata y los pacientes pretransplantados RESULTADOS ESPERADOS El estudio cl nico de estos analitos incluy un total de 177 muestras recogidas prospectivamente Estas muestras se probaron en un laboratorio hospitalario centralizado del sudeste de los Estados Unidos y en un laboratorio de referencia en el Medio Oeste De las 177 muestras probadas 171 inclu an la edad y el sexo del paciente Los resultados de AtheNA Multi Lyte para estas 171 muestras por grupo de edad y sexo se resumen en la siguiente tabla AtheNA Multi Lyte Plus anal
49. rubina Alta 415 108 6 109 106 9 22 91 7 Alb mina Bajo 453 118 6 100 98 0 26 108 3 Alb mina Alto 440 115 2 103 101 0 24 100 0 IgG Bajo 477 124 9 297 291 2 328 1366 7 IgG Alto 545 142 7 359 352 0 365 1520 8 Colesterol Bajo 424 111 0 107 104 9 22 91 7 Colesterol Alto 414 108 4 115 112 7 27 112 5 Triglic ridos Bajo 403 105 5 112 109 8 23 95 8 Triglic ridos Alto 388 101 6 110 107 8 28 116 7 Hemoglobina Bajo 388 101 6 102 100 0 27 112 5 Hemoglobina Alto 372 97 4 95 93 1 16 66 7 Intral pidos Bajo 389 101 8 121 118 6 29 120 8 Intral pidos Alto 616 161 3 106 103 9 25 104 2 La muestra positiva mostr un rango de recuperaci n desde 161 3 con la alta adici n de intral pido hasta un punto bajo de 97 4 con alta adici n de hemoglobina La adici n del IgG purificado tambi n provoc un aumento importante en la se al ya que es probable que el IgG humano purificado que se utiliza para a adir la muestra daba positivo para los anticuerpos IgG antisarampi n En todos los casos el resultado cualitativo de la muestra positiva permaneci sin cambios La muestra negativa mostr un rango de recuperaci n desde 1520 8 con la alta adici n de IgG hasta un punto bajo de 66 7 con alta adici n de hemoglobina Con la excepci n de la adici n de IgG humano purificado el resultado cualitativo de la muestra no result afectado por estas substancias Finalmente la muestra fronteriza mostr un rango de recuperaci n desde 352 c
50. s AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS 7 Fecha Rev 9 17 2015 Tabla 8 Niveles de sustancias interferentes sarampi n Substancia Adici n baja Adici n alta Bilirrubina 1 9mg dL 3 8m8 dL Albumina humana 5 58 dL 118 dL lgG humano 1 88 dL 3 68 dL Colesterol 200mg dL 400mg dL Triglic ridos 150mg dL 300mg dL Hemoglobina 1808 dL 3608 dL Intral pidos 3 5mg dL 7 0mg dL Es necesario indicar que los niveles de adici n bajos y altos se sumaban al nivel de l nea base de estos materiales que podr an haber estado presentes en los sueros originales No se detectaron los niveles en los sueros originales Para este estudio se evaluaron tres sueros en presencia de cada una de las substancias que se mencionan arriba Una muestra result claramente positiva para IgG sarampi n una era fronteriza y una era claramente negativa para IgG Los resultados de las muestras de control y el suero con adici n alta y baja se presentan en la Tabla 9 Tabla 9 Resultados sustancias interferentes sarampi n Muestra uno Muestra dos Muestra 3 ej 3 Sarampi n recuperaci n de la Dudoso recuperaci n dela Sarampi n w recuperaci n de l Sustancia interferente Nivel cargado wa 3 E E pa o se de Positivo se al positiva sarampi n se al positiva Negativo se al positiva Ninguna control N D 382 N D 102 N D 24 N D Bilirrubina Bajo 426 111 5 130 127 5 25 104 2 Bilir
51. tecci n de este ensayo LIMITACIONES DE LA PRUEBA El sistema de pruebas AtheNA Multi Lyte MMV IgG Plus de ZEUS es una herramienta para el diagn stico pero no es en s una prueba diagn stica Los resultados de la prueba se deben interpretar junto con la evaluaci n cl nica y los resultados de otros procedimientos diagn sticos No se han establecido las caracter sticas de funcionamiento de este dispositivo con enfermedades asociadas a la s filis No realice las pruebas como procedimiento de selecci n de individuos infectados entre la poblaci n general El valor predictivo de un resultado positivo o negativo depende de la prevalencia del analito en una poblaci n de pacientes dada Las muestras hemol ticas ict ricas o lip micas pueden interferir en el resultado de este ensayo Adem s las muestras con concentraciones de anticuerpo IgG y RF anormales pueden interferir en el resultado de este ensayo Evite el uso de estos tipos de muestras Los resultados de la prueba para pacientes inmunosuprimidos pueden ser dif ciles de interpretar No se han establecido las caracter sticas de funcionamiento de este dispositivo para otras matrices distintas del suero Las caracter sticas de funcionamiento de este dispositivo no se han establecido con muestras que contiene anticuerpos heter filos que se sabe que causan resultados falsos positivos en diversos inmunoensayos No se han establecido caracter sticas de rendimiento con receptores de vacunas para dete
52. tis bilateral o unilateral De forma secundaria tambi n pueden resultar afectados los test culos los ovarios el sistema nervioso central y con menor probabilidad el p ncreas los nervios perif ricos los ojos el o do interno y otros rganos 4 El periodo de incubaci n del virus de las paperas es de 18 a 21 d as Las infecciones se propagan a trav s de gotitas por la v a respiratoria superior Entre el 25 y el 50 por ciento de todas las infecciones son silentes Tras la infecci n la inmunidad parece ser vitalicia no obstante pueden producirse reinfecciones silentes aunque no es frecuente que esto suceda Existe una vacuna de virus vivo atenuado que induce unos niveles de anticuerpos medibles inferiores a la infecci n natural 4 5 Tan s lo se conoce un tipo antig nico diferenciado de virus de las paperas En algunas pruebas serol gicas se ha detectado reactividad cruzada antig nica y respuestas a anticuerpos anamn sicos con otros paramixovirus como el de la parainfluenza tipo 1 4 5 y 6 Se han descrito muchas pruebas para la determinaci n de anticuerpos contra el virus de las paperas Los ensayos tradicionales por neutralizaci n viral inhibici n de la hemaglutinaci n IH o fijaci n del complemento FC tienen el inconveniente de ser demasiado laboriosos para tareas serol gicas rutinarias y adem s no cuentan con la sensibilidad y la fiabilidad deseables Tanto la FC como la IH presentan una sensibilidad relativamente baj
53. tos de reactivos para pipetas multicanal 4 Pipetas serol gicas 5 Puntas de pipetas descartables 6 Toallas de papel 7 Cron metro de laboratorio para controlar los pasos de incubaci n 8 Recipiente para desechos y desinfectante es decir lej a de uso dom stico al 10 hipoclorito de sodio al 0 5 9 Sistema AtheNA Multi Lyte instrumento Luminex con fluido envolvente n mero de producto 40 50000 10 Agua destilada o desionizada 11 V rtex 12 Sonicador de ba o peque o 13 Agitador de placas capaz de agitar a una velocidad de 800 RPM opcional para el mezclado 14 Aspirador de vac o y colector de vac o para lavar las microesferas CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Suspensi n de microesferas Extraiga solo la cantidad necesaria para analizar las muestras a las que se les va a realizar la prueba y devuelva A la porci n no utilizada a su almacenamiento N i c Conjugado NO CONGELAR Sistema de pruebas control positivo control negativo y diluyente SAVe Diluent 25 C Tamp n de lavado 1X hasta 7 d as entre 20 y 25 C o durante 30 d as entre 2 y 8 C A i Tamp n de lavado 10X 2 25 C RECOGIDA DE LAS MUESTRAS 1 ZEUS Scientific recomienda que el usuario realice la recogida de muestras conforme al documento M29 del Instituto de Est ndares Cl nicos y de Laboratorio CLSI Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Protecci n de los trabajadores de laboratorio frente a las enfermedades
54. ue la placa se seque al aire durante 3 5 minutos antes de continuar con el siguiente paso Agregue 150 pl de conjugado a cada micropocillo en el mismo orden en que se agregaron las muestras Para obtener un rendimiento adecuado es importante que el conjugado y la suspensi n de microesferas se mezclen detenidamente conforme al punto 2b de arriba Mientras mezcla el conjugado tiene la opci n de transferir la mezcla a pocillos vac os de una placa de reacci n de poliestireno Incube la placa a temperatura ambiente 20 25 C durante 30 10 minutos Instale el instrumento AtheNA Multi Lyte para analizar las reacciones Para ello seleccione la plantilla MMV lgG Plus Consulte el manual del operador para obtener detalles relacionados con el funcionamiento del instrumento AtheNA Multi Lyte Los resultados se pueden leer en la placa del filtro o en una placa de reacci n NOTA Para obtener un an lisis adecuado de la muestra es importante que el instrumento se instale calibre y mantenga de acuerdo con las instrucciones del fabricante Consulte el manual del instrumento para obtener informaci n sobre la preparaci n del instrumento antes de leer los resultados del ensayo Tras finalizar la incubaci n del conjugado tiene 60 minutos para leer la placa Tiene la opci n de agitar la placa durante unos 15 segundos antes de la lectura Este paso opcional puede reducir la cantidad de tiempo necesario para leer la placa
55. ullido viene seguido por un pico en temperatura uno o dos d as despu s y una r pida efervescencia en el tercer o cuarto d a del salpullido En circunstancias normales la aparici n de los s ntomas prodr micos particularmente las manchas de Koplik que son muy espec ficas y patognom nicas es suficiente para un diagn stico cl nico Sin embargo la incidencia del sarampi n ha disminuido de forma espectacular desde la introducci n de la vacuna correspondiente en 1963 2 En consecuencia los profesionales m dicos tienen ahora menos experiencia en el diagn stico cl nico de la enfermedad y pueden requerir la ayuda del laboratorio para su confirmaci n El diagn stico del sarampi n se puede complicar a n m s por la aparici n de una forma at pica en personas que estaban inmunizadas con una vacuna de sarampi n desactivado entre 1963 y 1967 y fueron subsecuentemente reinfectados por un tipo salvaje de este virus 3 La forma at pica de sarampi n puede ser grave y se puede confundir cl nicamente por la fiebre maculosa de las Monta as Rocosas Adem s el sarampi n agudo puede verse complicado por infecciones bacterianas secundarias del tracto respiratorio y del o do intermedio Entre las complicaciones adicionales se incluye una encefalitis posinfecciosa y una enfermedad rara pero con frecuencia fatal panencefalitis esclerosante subaguda SSPE 1 Los anticuerpos contra el virus del sarampi n comienzan a aparecer con el desarrol
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