SeroFIA - Savyon Diagnostics
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1. Nota Se recomienda incluir un pocillo de control positivo de IgA y un pocillo de control negativo de IgA en cada uno de los ensayos Control positivo puede utilizarse como un control del punto de corte si se utiliza a la diluci n 1 128 MB580 01S 05 11 08 1 Antes de comenzar con la t cnica los reactivos y sueros de los pacientes a testar deben alcanzar la temperatura ambiente 2 Diluir la Soluci n de Lavado Concentrada 1 20 a adiendo 50 ml de esta soluci n a 950 ml de agua doblemente desionizada o destilada La soluci n diluida puede almacenarse de 2 8C hasta 2 semanas 3 Pipetear 10ul de los controles o de las muestras de suero diluidas en los pocillos adecuados 4 Incubar los portas en un ba o o en una c mara h meda a 37C durante 30 minutos 5 Sacar los portas de la c mara h meda y enjuagar con cuidado con un chorro de soluci n de lavado diluida utilizando un frasco lavador Lavar los portas sumergi ndolos en una jarra de tinci n que contenga soluci n de lavado diluida Mantener los portas inmersos durante 10 minutos Sumergir los portas lavados en agua doblemente destilada Extraer y secar al aire Pipetear 10ul del conjugado FITC a cada pocillo Incubar a 37C durante 30 minutos Repetir el paso de aclarado y lavado de los portas como en el paso 5 9 Colocar tres gotas de medio de montaje en el centro del porta Montar con el cubre Eliminar las burbujas de aire presionando suavemente sobre el2. Leinonen L Tenkanen E Linnanmaki M R Ekman V Manninen M Manttari M H Frick J K Huttunen 1992 Chronic Chlamydiae pneumoniae Infection as a Risk Factor for Coronary Heart Disease in the Helsinki Heart Study Ann of Int Med 116 273 278 14 Leinonen M H Sryjala P Kujala and P Saikku 1991 Serological diagnosis of Chlamydiae pneumoniae Cpn pneumoniae in adults In Abstracts of 31st ICAAC Chicago Illinois Sept 29 Oct 2 1991 Washington D C Aner Soc Microbiol p 209 C 0483 European Authorized Representative Obelis s a Boulevard G n ral Wahis 53 1030 Brussels BELGIUM Tel 32 2 732 59 54 Fax 32 2 732 60 03 E Mail mail obelis net MB580 01S 05 11 08
3. Suero humano negativo para anticuerpos IgG IgA e IgM frente a C pneumoniae C trachomatis y C psittaci Contiene azida s dica lt 0 1 Listo para usar 1 vial 0 5ml Control Positivo Para IgG Suero humano positivo para anticuerpos IgG frente a C trachomatis Contiene azida s dica lt 0 1 Listo para usar 1 vial 0 2ml Control Positivo Para IgA Suero humano positivo para anticuerpos IgA frente a C trachomatis Contiene azida s dica lt 0 1 Listo para usar 1 vial 0 2ml Control Positivo PARA IgM Suero humano positivo para anticuerpos IgM frente a C trachomatis Contiene azida s dica lt 0 1 Listo para usar 1 vial 0 2ml Conjugado IgG FITC Anticuerpo de conejo anti IgG humana marcado con fluoresce na espec fico de cadena y Listo para usar 1 vial 3 3 ml Conjugado IgA FITC Anticuerpo de conejo anti IgA humana marcado con fluoresceina especifico de cadena a Listo para usar 1 vial 3 3ml Conjugado IgM FITC Anticuerpo de conejo anti IgM humana marcado con fluoresce na espec fico de cadena u Listo para usar 1 vial 3 3ml Reactivo de Inactivaci n de IgG Anti IgG humana que contiene azida s dica lt 0 1 para IgM nicamente 1 vial 4ml Medio de Montaje Contiene azida s dica lt 0 1 1 frasco gotero 1 5ml Cubres 1 unidad Manual de Instrucciones 1 MB580 01S 05 11 08 Materiales requeridos que no se proporcionan 1 on Ol o a 10 Cron metro 12 Micropl
4. Trabajadores contra Riesgos relacionados con la Exposici n a Agentes Biol gicos en el Trabajo El material antig nico procedente de Chlamydia que recubre los portas ha sido inactivado y no contiene organismos vivos detectables Sin embargo ya que no se conoce ning n m todo capaz de garantizar completamente que los productos derivados de organismos pat genos no transmiten infecci n los portas deber n manipularse y desecharse como si tuviesen alg n componente biopeligroso y de forma id ntica o similar a las recomendaciones publicadas en el manual CDC NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1988 normativa espa ola R D 664 1997 sobre Protecci n de los Trabajadores contra Riesgos relacionados con la Exposici n a Agentes Biol gicos en el Trabajo Se ha descrito que la azida s dica forma complejos de azida con el plomo y con el cobre de las ca er as del laboratorio que son explosivos Para evitar la acumulaci n de estos componentes dejar correr abundante agua por el fregadero y las ca er as tras la eliminaci n de los componentes que contengan azida No pipetear con la boca Evitar el contacto con la piel de cualquiera de los componentes del kit 6 Utilizar guantes desechables mientras se manejan los sueros y se realiza el ensayo Lavar las manos vigorosamente despu s de quitarse los guantes 7 Cualquier equipamiento l quidos u otras substancias que entren en contacto con el su
5. dica al 0 1 Si se ha previsto un periodo de almacenamiento superior alicuotar y almacenar las muestras a 20C o temperatura inferior Evitar ciclos repetidos de congelaci n y descongelaci n Validaci n del Test Para validar el ensayo se deber n cumplir las siguientes condiciones Si no se cumplen las condiciones que se indican a continuaci n el ensayo no deber a considerarse como v lido y deber a repetirse Controles Positivos Los EB de GC trachomatis muestran una tinci n fluorescente verde manzana de intenso a moderado No muestran reactividad tinci n con C trachomatis Controles Negativos MB580 01S 05 11 08 Preparacion de las muestras Para realizar un sondeo inicial realizar una diluci n de los sueros 1 64 en Diluyente de Suero a adiendo 10ul de suero a 630ul de Diluyente de Suero Para determinar el t tulo del punto de corte realizar diluciones en serie en Diluyente de Suero comenzando por 1 64 Nota Se recomienda incluir un pocillo de control positivo de IgG y un pocillo de control negativo de IgG en cada uno de los ensayos Control positivo puede utilizarse como un control del punto de corte si se utiliza a la diluci n 1 64 1 Antes de comenzar con la t cnica los reactivos y sueros de los pacientes a testar deben alcanzar la temperatura ambiente 2 Diluir la Soluci n de Lavado Concentrada 1 20 a adiendo 50ml de esta soluci n a 950ml de agua doblemente desi
6. en el kit No utilizar los reactivos despu s de la fecha de caducidad La exposici n de los componentes del kit a temperatura ambiente durante unas pocas horas no produce ning n da o No exponer los reactivos a fuentes luminosas potentes No congelar los reactivos I Los cuerpos elementales muestran una fluorescencia definida pero d bil deber a considerarse como el t tulo correspondiente al punto de corte del suero El t tulo correspondiente al punto de corte de un suero determinado se define como la ltima diluci n que todav a proporciona una tinci n perceptible La siguiente diluci n mostrar a un aspecto id ntico al del control negativo Sin fluorescencia o con una d bil fluorescencia de fondo sin una morfolog a clara de Chlamydia Procedimiento del Ensayo Para la IgG Extracci n y Preparaci n de las Muestras Extracci n del suero Preparar los sueros a partir de las muestras extra das as pticamente utilizando las t cnicas est ndar No deber an utilizarse sueros inactivados por calor No se recomienda ensayar sueros turbios hemolizados o lip micos La presencia de part culas o precipitados en el suero puede causar resultados err neos Estas muestras deber an aclararse por centrifugaci n o filtraci n antes del ensayo Almacenamiento Las muestras deber an almacenarse a 2 8C y testarse antes de los siguientes 7 d as est altamente recomendado la adici n de azida s
7. la c mara h meda y enjuagar con cuidado con un chorro de soluci n de lavado diluida utilizando un frasco lavador Lavar los portas sumergi ndolos en una jarra de tinci n que contenga soluci n de lavado diluida Mantener los portas inmersos durante 10 minutos Sumergir los portas lavados en agua doblemente destilada Extraer y secar al aire Pipetear 10ul del conjugado FITC a cada pocillo Incubar a 37C durante 30 minutos Repetir el paso de aclarado y lavado de los portas como en el paso 5 9 Colocar tres gotas de medio de montaje en el centro del porta Montar con el cubre Eliminar las burbujas de aire presionando suavemente sobre el cubre 10 Leer los resultados en un microscopio de fluorescencia con aumentos de 400X y 1000X Para optimizar los resultados leer los portas en el mismo d a en el que se realiza el ensayo Si esto no fuera posible los portas montados pueden almacenarse de 2 8C en oscuridad hasta 3 d as DAD MB580 01S 05 11 08 Intensidad de Interpretaci n de los resultados la fluorescencia a la diluci n 1 20 Presencia de anticuerpos IgM espec ficos frente a C trachomatis T tulos gt 1 20 se considera como una presunta evidencia de infecci n Indicativo de una posible exposici n a C trachomatis Se requiere repetir el ensayo con una segunda muestra transcurridas de 2 4 semanas I Negativo No se detectan anticuerpos IgM frente a C trachomatis 1 E
8. utiliza como ant geno cuerpos elementales purificados de C trachomatis L2 Resumen y Explicaci n Principio del Ensayo La Chlamydia una bacteria gram negativa altamente especializada se compone de cuatro especies C trachomatis C pneumoniae TWAR C psittaci y C pecorum La C trachomatis incluye 15 serotipos que comparten epitopos inmunog nicos de varios grados La C trachomatis es uno de los agentes causales m s comunes de las enfermedades de transmisi n sexual y se asocia con la uretritis no gonoc cica NGU y epididimitis en el hombre cervicitis uretritis y enfermedad inflamatoria p lvica en la mujer s ndrome de Reiter en individuos con haplotipo HLA B27 conjuntivitis neonatal y neumon a en el reci n nacido 2 6 La C pneumoniae es un importante pat geno respiratorio en humanos y es el causante de hasta el 10 de los casos de neumon a adquirida por la comunidad Se ha asociado a enfermedades respiratorias agudas neumon a asma bronquitis faringitis s ndrome respiratorio agudo de la drepanocitosis enfermedad coronaria y el s ndrome de Guillain Barre 7 9 C psittaci infecta a un amplio rango de especies desde los moluscos a p jaros y mam feros y origina tambi n neumon a severa MB580 01S 05 11 08 e Los cuerpos elementales Ebs purificados de C trachomatis se fijan en el interior de los pocillos del kit SeroFlA e Los sueros diluidos de los pacientes se dispone
9. 8 Concordancia entre Ambos m todos 93 100 X 100 93 Resultados obtenidos para la C trachomatis con el kit en comparaci n con el m todo de SeroFIA IgA referencia por MIF MIF Positivo Negativo Total SeroFIA Positivo 11 6 17 Negativo 2 52 54 Total 13 58 71 Sensibilidad 11 13 X 100 84 6 Especificidad 52 58 X 100 89 7 Concordancia entre Ambos m todos 63 71X 100 88 7 MB580 01S 05 11 08 1 Piura B Sarov l Sarov B Kleinman D Chaim W and Insler V 1985 Serum IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia trachomatis in salpingitis patients as determined by the immunoperoxidase assay Eur J Epidemiol 1 110 116 Tsunekawa T and Kumamoto Y 1989 A study of IgA and IgG titers of C trachomatis in serum and prostatic secretion in chronic prostatitis J J A Inf Dis 63 2 130 137 Kaneti J et al 1988 IgG and IgA antibodies specific for Chlamydia _trachomatis in acute epididymits Europ Urol 14 323 327 Kletter Y Caspi D Yarom M Sarov B Sarov l and Tanay A 1988 Serum IgA and IgG Antibodies Specific to Chlamydia in Patients with Rieter s Syndrome RS In Proceedings of The European Society for Chlamydia Research Societa Editrice Esculapio Bologna p 170 Stutman H R Rettig P J and Reyes S 1984 Chlamydia trachomatis as a cause of Pneumonitis and pleural effusion J Pediat 104 588 591 Paran H Heimer D and Sa
10. acas o tubos limpios para la diluci n de los sueros de los pacientes Centrifuga Micropipetas ajustables rango en ul 5 50 50 200 200 1000 y puntas desechables Probeta 1 litro Vortex Ba o con tapa a 37C o c mara de incubaci n h meda a 370 Bandejas de pl stico para la incubaci n de los portas Agua destilada o doblemente desionizada para la diluci n de la soluci n de lavado concentrada Frasco lavador de pl stico Soporte de portas y jarra de tinci n Microscopio de fluorescencia con filtros apropiados para lectura de fluorescencia con FITC y con aumentos de 400x y 1000x Precauciones Para Utilizaci n en el Diagn stico n Vitro Medidas de Seguridad 1 a gt Este kit contiene suero humano que ha sido analizado por t cnicas aprobadas por la FDA CE y se ha encontrado que es negativo para el antigeno de superficie de la hepatitis B y para anticuerpos frente a VHC y VIH Sin embargo ya que no se conoce ningun m todo capaz de ofrecer una garantia absoluta de que el producto derivado de sangre humana no transmite infecci n todos los componentes de sangre humana que se proporcionan en el kit deben manipularse como muestras de suero o sangre potencialmente infecciosas de forma id ntica o similar a aquellas recomendaciones publicadas en el manual CDC NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 1988 normativa espa ola R D 664 1997 sobre Protecci n de los
11. ce SeroFIA C trachomatis Ensayo por inmunofluorescencia para la detecci n de anticuerpos IgG IgA e IgM especificos frente a C trachomatis en suero humano Manual de Instrucciones Kit para 105 315 determinaciones Ref N A580 01 B580 01 Para uso en el Diagn stico In Vitro Exclusivamente para uso professional Almacenar de 2 8C No congelar Savyon Diagnostics Ltd 3 Habosem St Ashdod 77610 ISRAEL Tel 972 8 8562920 Fax 972 8 8523176 E mail support savyondiagnostics com Aplicaciones SeroFlA C trachomatis es un ensayo semicuantitativo por inmunofluorescencia para la determinaci n diferencial de anticuerpos IgG IgA e lgM especificos frente a C trachomatis en muestras aisladas de suero humano Para uso en el diagnostico n Vitro Los ensayos serol gicos son utilizados en la rutina para el diagn stico de las infecciones por chlamydia Los ensayos serol gicos sirven como una herramienta no invasiva en la identificaci n de infecciones por chlamydia cr nicas y pasadas 10 11 donde los m todos por detecci n directa son raramente eficaces Adem s la presencia de ciertos tipos de anticuerpos puede tambi n indicar el estado de la enfermedad Una infecci n primaria de Chlamydia se caracteriza por una respuesta de IgM predominante dentro de las primeras 2 4 semanas y una respuesta posterior de IgG e IgA dentro de las siguientes 6 8 semanas Tras una infecci n aguda por C pnemoniae los anticu
12. cubre 10 Leer los resultados en un microscopio de fluorescencia con aumentos de 400X y 1000X Para optimizar los resultados leer los portas en el mismo d a en el que se realiza el ensayo Si esto no fuera posible los portas montados pueden almacenarse de 2 8C en oscuridad hasta 3 d as DN gt Intensidad de la fluorescencia a la diluci n 1 32 Interpretaci n de los resultados Presencia de anticuerpos IgA espec ficos frente a C trachomatis Un t tulo gt de 1 32 se considera como una presunta evidencia de infecci n Indicativo de una posible exposici n a C trachomatis Se requiere repetir el ensayo con una segunda muestra transcurridas de 2 4 semanas I Negativo No se detectan anticuerpos IgA frente a trachomatis 1 Cuando se realice un ensayo con una segunda muestra deber an ensayarse simult neamente tanto la primera como la segunda muestra Aquellos pacientes con una infecci n actual por a C trachomatis exhibir n un incremento en el t tulo del anticuerpo Si se repite el resultado para el punto de corte la muestra deber a considerarse negativa Nota En casos puntuales puede observarse para uno o m s ant genos una tinci n clara y densa de part culas muy peque as inferiores que los EB Esto podr a resultar como consecuencia de la reactividad frente a los LPS Deber a realizarse un ensayo para detecci n de anticuerpos IgG e IgM o ensayar una segunda mu
13. ero humano deber n considerarse como potencialmente contaminados Deber n esterilizarse o inactivarse tras su uso y antes de su eliminaci n o limpieza La inactivaci n puede realizarse con un ciclo de autoclave a 121C durante al menos 1 hora o por tratamiento con una soluci n de hipoclorito s dico lej a dom stica a una concentraci n final del 5 durante al menos 30 minutos 8 El conjugado FITC contiene Azul de Evans el cual es carcin geno Evitar el contacto con la piel y con los ojos 9 El medio de montaje contiene componentes corrosivos Evitar el contacto con la piel y no inhalar En caso de contacto con la piel y los ojos enjuagar inmediatamente con abundante agua Si los controles no muestran estas caracter sticas el ensayo deber a considerarse como no v lido Interpretaci n y Significado de Los Resultados Se recomienda comenzar leyendo los pocillos correspondientes a los controles para asegurar una correcta interpretaci n de los resultados Realizar una lectura de la fluorescencia e intensidad de las muestras cl nicas como se indica a continuaci n Los cuerpos elementales aparecen con una fluorescencia moderada a intensa definida o difusa de color verde manzana Conservaci n y Vida Media de Los Reactivos Todos los materiales que se proporcionan deben almacenarse de 2 8C Si se mantienen a esta temperatura los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada
14. erpos IgM desaparecen en la mayor a de los casos transcurridos 2 6 meses 12 el t tulo de IgG aumenta y en general disminuye lentamente mientras que los anticuerpos IgA tienden a desaparecer r pidamente 13 Infecciones secundarias por Chlamydia se caracterizan por una ausencia de respuesta de IgM y una respuesta r pida de IgG e IgA 9 Los anticuerpos IgA han mostrado ser un marcador inmunol gico de utilidad en infecciones primarias cr nicas y recurrentes Estos anticuerpos en general disminuyen r pidamente a niveles basales tras el tratamiento y la erradicaci n de la infecci n por Chlamydia 1 6 10 11 La persistencia de un t tulo elevado del anticuerpo IgA en general se considera como un signo de infecci n cr nica 13 En un estudio realizado en pacientes de edad avanzada con infecciones respiratorias se estim que una quinta parte de los casos de infecci n por C pnemoniae se perder an sin la determinaci n de IgA 14 Los anticuerpos IgG persisten durante largos periodos de tiempo y disminuyen muy lentamente As la presencia de anticuerpos IgG es principalmente indicativa de una infecci n por Chlamydia desde un tiempo sin determinar Sin embargo un incremento de 4 veces en el nivel de la IgG o un valor de la IgG muy elevado pueden indicar una infecci n cr nica o sist mica en curso El test de Savyon SeroFlA C trachomatis es un ensayo de micro IF basado en los principios de la MIF SeroFIA a trachomatis
15. estra de suero extra da despu s de 2 3 semanas Si la IgM y la IgG resultan negativas y se repiten los resultados de la IgA la muestra deber a considerarse negativa Procedimiento del Ensayo Para la IgM Preparaci n de las muestras 1 A adir 5ul del suero de cada uno de los pacientes a 45ul del reactivo para la inactivaci n de la IgG Mezclar con cuidado con vortex 2 A adir a cada uno de los 50ul de suero tratado otros 50ul de Diluyente de Suero La diluci n final del suero que se obtiene en este paso es 1 20 Para determinar el t tulo del punto de corte realizar diluciones en serie con el Diluyente de Suero comenzando por 1 20 Nota Se recomienda incluir un pocillo de control positivo para la IgM y un pocillo de control negativo para la IgM en cada uno de los ensayos Control positivo puede utilizarse como un control del punto de corte si se utiliza a la diluci n 1 64 1 Antes de comenzar con la t cnica los reactivos y sueros de los pacientes a testar deben alcanzar la temperatura ambiente 2 Diluir la Soluci n de Lavado Concentrada 1 20 a adiendo 50ml de esta soluci n a 950 ml de agua doblemente desionizada o destilada La soluci n diluida puede almacenarse de 2 8C hasta 2 semanas 3 Pipetear 10ul de los controles o de las muestras de suero diluidas en los pocillos adecuados 4 Incubar los portas en un ba o o en una c mara h meda a 37C durante 90 minutos 5 Sacar los portas de
16. n casos de resultados dudosos para el punto de corte deber a extraerse una segunda muestra de suero transcurridas 2 4 semanas m s tarde y ensayarse junto con la primera muestra Si se repite el resultado dudoso para ese punto de corte la muestra deber a considerarse negativa Significado del t tulo del punto de corte para la IgM Si se desea obtener unos resultados semi cuantitativos deber a realizarse una titulaci n del punto de corte Con objeto de obtener un perfil m s comprensible para los anticuerpos deber a tambi n realizarse un ensayo para la IgM y la IgA Interpretaci n de los resultados basada en la combinaci n de os anticuerpos IgG IgA e IgM Niveles de anticuerpos frente a C trachomatis Interpretaci n de los resultados IgM IgG IgA Negativo Negativo Negativo Sin indicaci n de infecci n por C trachomatis Positivo Negativo o Negativo o Indicativo de Positivo Positivo infecci n actual o cr nica Negativo Positivo Negativo Indicativo de infecci n pasada o infecci n actual Negativo Positivo o Positivo Indicativo de Negativo infecci n actual o infecci n cr nica Limitaciones del Ensayo 1 No debe utilizarse nicamente un ensayo serol gico para realizar un diagn stico final Deben tenerse en cuenta todos los datos cl nicos y de laboratorio 2 Las muestras extra das al inicio de una infecci n primaria pueden no con
17. n sobre el ant geno y se incuban durante 30 minutos a 37C e Tras la incubaci n los portas se lavan y se eliminan los componentes del suero que no se han unido e En un segundo paso se a ade anticuerpo anti IgG anti IgA o anti IgM humana conjugado con fluoresce na y se incuban durante 30 minutos a 370 e Tras la incubaci n los portas se lavan y se eliminan los componentes del suero que no se han unido e Los portas se secan y se montan a adiendo 3 gotas de medio de montaje e Se examinan utilizando un microscopio de fluorescencia Las reacciones positivas aparecen como Ebs brillantes de color verde manzana fluorescente sobre un fondo oscuro Para determinaciones cualitativas es suficiente una nica diluci n de suero Para resultados semicuantitativos deber a realizarse una titulaci n para definir el punto de corte Componentes del kit 1 10 11 12 13 14 Portas Substrato de la Reacci n 3X7 pocillos unidad Los portas est n recubiertos con ant genos de C trachomatis Cada porta se empaqueta en una bolsa de aluminio que contiene un paquete con gel de s lice 5 15 unidades Soluci n de Lavado Concentrada 20x Soluci n de PBS Tween pH 7 4 7 6 que contiene CINa Na2HPO4 KH2PO y tween 20 1 botella 100ml Diluyente del Suero Tamp n PBS que contiene gelatina alb mina s rica bovina Cl Mg y azida s dica por debajo del 0 1 1 botella 80ml Control Negativo
18. onizada o destilada La soluci n diluida puede almacenarse de 2 8C hasta 2 semanas 3 Pipetear 10ul de los controles o de las muestras de suero diluidas en los pocillos adecuados 4 Incubar los portas en un ba o o en una c mara h meda a 37C durante 30 minutos 5 Sacar los portas de la c mara h meda y enjuagar con cuidado con un chorro de soluci n de lavado diluida utilizando un frasco lavador Lavar los portas sumergi ndolos en una jarra de tinci n que contenga soluci n de lavado diluida Mantener los portas inmersos durante 10 minutos Sumergir los portas lavados en agua doblemente destilada Extraer y secar al aire 6 Pipetear 10ul del conjugado FITC a cada pocillo 7 Incubar a 37C durante 30 minutos 8 Repetir el paso de aclarado y lavado de los portas como en el paso 5 9 Colocar tres gotas de medio de montaje en el centro del porta Montar con el cubre Eliminar las burbujas de aire presionando suavemente sobre el cubre 10 Leer los resultados en un microscopio de fluorescencia con aumentos de 400X y 1000X Para optimizar los resultados leer los portas en el mismo d a en el que se realiza el ensayo Si esto no fuera posible los portas montados pueden almacenarse de 2 8C en oscuridad hasta 3 d as Intensidad de la fluorescencia a la diluci n 1 64 Interpretaci n de los resultados Presencia de anticuerpos IgG espec ficos frente a C trachomatis Se requiere titulaci n para establece
19. r el punto de corte y definir infecci n actual reciente o pasada Indicativo de una posible exposici n a C trachomatis Se requiere repetir el ensayo con una segunda muestra transcurridas de 2 4 semanas Negativo No se detectan anticuerpos IgG frente a C trachomatis I 1 T tulos con valores gt 1 64 evidencian una infecci n actual o reciente por C trachomatis 2 Cuando se realice un ensayo con una segunda muestra deber an ensayarse simult neamente tanto la primera como la segunda muestra Si se repite el resultado para el punto de corte la muestra deber a considerarse negativa Nota En casos puntuales puede observarse una tinci n clara y densa de part culas muy peque as inferiores que los EB del ant geno Esto podr a resultar como consecuencia de la reactividad frente a los LPS Deber a realizarse un ensayo para detecci n de anticuerpos IgG e IgM o ensayar una segunda muestra de suero extra da despu s de 2 3 semanas Si la IgM y la IgG resultan negativas y se repiten los resultados de la IgA la muestra deber a considerarse negativa Procedimiento del Ensayo Para la IgA Preparaci n de las muestras Para realizar un sondeo inicial realizar una diluci n de los sueros 1 32 en Diluyente de Suero a adiendo 10ul de suero a 310ul de Diluyente de Suero Para determinar el t tulo del punto de corte realizar diluciones en serie en Diluyente de Suero comenzando por 1 32
20. rov l 1986 Serological clinical and radiological findings in adults with broncho pulmonary infections caused by Chlamydia trachomatis Isr J Med Sci 22 823 827 Grayston J T Campbell L A Kuo C C Mordhorst C H Saikku P Thom D H and Wang S P 1990 A new respiratory tract pathogen Chlamydia pneumoniae strain TWAR J Infect Dis 161 618 625 Hahn D L Dodge R W and Golubjatnikow R 1991 Association of Chlamydia pneumoniae strain TWAR infection with wheezing asthmatic bronchitis and adult onset asthma JAMA 266 225 230 Saikku P Mattila K Nieminen M S Huttunen J K Leinonen M Ekman M R Makela P H and Valtonen V 1988 Serological evidence of an association of a novel Chlamydia TWAR with chronic coronary heart disease and acute myocardial infection Lancet Il 983 986 10 Sarov l Kleinman D Cevenini R Holcberg G Potashnik G Sarov B and Insler V 1986 Specific IgG and IgA antibodies to Chlamydia trachomatis in infertile women Int J Fertil 31 3 193 197 11 Puolakkainen M Saikku P Leinonen M Nurminen M Vaananen P and Makela P H 1984 Chlamydia pneumonitis and its serodiagnosis in infants J Infect Dis 149 598 604 12 Grayston J T L A Campbell C H Mordhorst P Saikku D Thom and S P Wang 1989 A New Respiratory Pathogen Chlamydia pneumoniae Strain TWAR J Inf Dis 161 618 25 13 Saikku P M
21. tener cantidades detectables de anticuerpos Si se sospecha de una infecci n por Chlamydia deber obtenerse una segunda muestra transcurridas 2 3 semanas y ensayarse en paralelo con la muestra original 3 La reactividad del suero con m ltiples especies de Chlamydia puede deberse a la exposici n a m s de una especie de chlamydia o a reacciones cruzadas de los anticuerpos 4 El microscopio ptico y las condiciones de la fuente de luz y el tipo pueden afectar a la intensidad total de fluorescencia y a la determinaci n del t tulo correspondiente al punto de corte Resultados obtenidos para la C trachomatis con el kit SeroFIA IgM en comparaci n con el m todo de referencia por MIF MIF Positivo Negativo Total SeroFIA Positivo 4 0 4 Negativo 1 26 27 Total 5 26 31 Sensibilidad 4 5 X 100 80 Especificidad 26 26 X 100 100 Concordancia entre Ambos m todos 30 31 X 100 96 8 Referencias Caracter sticas del Ensayo El estudio se realiz en un centro m dico independiente con sueros de pacientes con sospecha de infecci n por C trachomatis Resultados obtenidos para la C trachomatis con el kit SeroFlA IgG en comparaci n con el m todo de referencia por MIF MIF Positivo Negativo Total SeroFIA Positivo 47 2 49 Negativo 5 46 51 Total 52 48 100 Sensibilidad 47 52 X 100 90 3 Especificidad 46 48 X 100 95
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