(Dako Autostainer/Autostainer Plus) Code IS652
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1. 9 FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Nucleophosmin Clone 376 Ready to Use CE Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS652 ENGLISH Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied 117051 003 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Nucleophosmin Clone 376 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments This antibody is useful for the identification of both wild type nucleophosmin NPM and the mutated counterpart NPMc Nucleophosmin is localized in the nuclei of normal cells in multiple tissues but is aberrantly accumulated in the cytoplasm of leukemic blasts in a large subgroup of acute myeloid leukemia cases with a normal karyotype 1 3 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist B23 NO38 NPM numatrin 1 Nucleophosmin NPM is a phosphoprotein belonging to the protein family of nucleoplasmins 1 NPM is predominantly localized in the nucleus of2. bei einer gro en Untergruppe akuter myeloischer Leuk mien mit normalem Karyotyp im Zytoplasma leuk mischer Blasten in abnormer H ufung auf 1 3 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Untersuchung mit geeigneten Kontrollen erg nzt und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte des Patienten und anderer diagnostischer Tests vorgenommen werden B23 NO38 NPM Numatrin 1 Nucleophosmin NPM ist ein Phosphoprotein aus der Proteinfamilie der Nucleoplasmine 1 In einer Reihe von Geweben findet sich NPM haupts chlich im Zellkern 4 NPM kann jedoch zwischen Zellkern und Zytoplasma pendeln und diese F higkeit zusammen mit seiner korrekten subzellul ren Lokalisierung k nnte f r die zellul re Hom ostase von entscheidender Bedeutung sein 1 Das NPM Gen NPMT wird bei einer Vielzahl von menschlichen Malignomen h ufig berexprimiert und ist mutiert deletiert oder rearrangiert Je nach Expressionsniveau und Gendosis scheint NPM entweder als Onkogen oder als Tumorsuppressor zu fungieren Bei komplettem funktionalen Ausfall von NPM kommt es zu Aneuploidie und Aktivierung von Zell berwachungsmechanismen Proliferations Checkpoints 1 Mutationen in Exon 12 des NPMT Gens sind Ursache f r die Entstehung einer mutierten Form von NPM NPMc die in abnormer H ufung im Zytoplasma leuk mischer Blasten bei einer gro en Untergruppe prim rer akuter myeloischer
3. Autostainer Plus Cet anticorps est utile l identification de la nucl amp ophosmine de type sauvage NPM et la contrepartie mut e NPMc La nucl ophosmine est situ e dans le noyau des cellules normales dans de multiples tissus mais s accumule de mani re aberrante dans le cytoplasme des blastocytes leuc miques dans un grand sous groupe de cas de leuc mie my lo de aigu avec caryotype normal 1 3 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi B23 NO38 NPM numatrine 1 La nucl ophosmine NPM est une phosphoprot ine appartenant la famille prot ique des nucl oplasmines 1 La NPM est surtout situ e sur le noyau des cellules de nombreux tissus 4 Cependant la NPM a la capacit de passer du noyau au cytoplasme et cette activit et sa localisation infracellulaire normale peuvent tre cruciales pour l hom ostase cellulaire 1 Le gene NPM NPMT est souvent surexprim mut supprim ou r arrang dans de nombreuses tumeurs malignes humaines et en fonction de son niveau d expression et du dosage du g ne la NPM semble fonctionner soit comme un oncog ne soit comme un suppresseur tumoral La perte fonctionnelle compl te de la NPM conduit une aneuplo die et une activatio
4. Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Die Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 ist erforderlich Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 erzielt werden IS652 EFG MNI 2009 12 04 p 3 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale Paraffineingebettete Schnitte Die Vorbehandlung der formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitte mit dem 3 in 1 Probenvorbereitungsverfahren f r Dako PT Link wird empfohlen Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8010 K8004 durchf hren Hinweis Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und mit permanentem Einbettmedium auf den Objekttr ger aufgebracht werden Entparaffinierte Schnitte Eine Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte mit Dako PT Link nach demselben Verfahren wie
5. Leuk mien AML mit normalem Karyotyp auftritt 1 4 NPMc zeigt eine multilineare Verteilung in AML Proben aller Untertypen au er M3 akute promyeloische Leuk mie M4eo akute myelomonozytische Leuk mie mit Eosinophilie und M7 akute megakaryozytische Leuk mie 2 4 Wahrscheinlich sind die Mutation und die zytoplasmische H ufung von NPMc die als NPMc bezeichnet wird prim re leuk mogenische Ereignisse da sie die normale NPM Funktion beeintr chtigen k nnen NPMc wird nicht beobachtet in prim ren AML F llen mit einer spezifischen genetischen Anomalie in sekund ren AML F llen und in h matopoetischen oder extrah matopoetischen Neoplasmen die nicht AML sind 2 4 NPMc wird nur bei prim rer AML mit normalem Karyotyp beobachtet 2 4 5 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder der Gebrauchsanweisung f r das jeweilige IHC Detektionsverfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Proben 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper gel st in einem Puffer der Stabilisierungsprotein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Klon 376 Isotyp IgG1 Lambda Rekombinantes NPM Protein in voller L nge Beim Western Blotting von U937 Zelllysaten AML Zelllys
6. Milz Thymus und Mandeln Nukle re Markierung zeigt sich in allen Zellen des Zerebellums gro e Neuronen weisen zus tzlich Zytoplasmaf rbung auf Die Hepatozyten der Leber zeigen eine m ige bis starke nukle re F rbereaktion die vereinzelten mitotischen und post mitotischen Zellen zeigen dagegen eine schwache bis m ige F rbereaktion im Kern und Zytoplasma Pathologisches Gewebe Der Antik rper markierte sowohl Wildtyp NPM als auch mutiertes NPMc Protein 2 3 und bewirkte eine nukle re und zytoplasmatische Markierung von leuk mischen Blastenzellen in 208 von 591 35 prim ren AML Proben und in 142 von 230 61 prim ren AML Proben mit normalem Karyotyp Dagegen wurde eine nukle re und zytoplasmische Markierung von leuk mischen Blastzellen lediglich in 24 von 263 9 der AML F lle mit abnormalem Karyotyp beobachtet und keiner dieser F lle wies spezifische genetische Anomalien auf wie sie h ufig bei prim rer AML beobachtet werden Ausschlie lich nukle re Markierung wurde in 135 von 135 100 der sekund ren AML Proben und in 980 von 980 h matopoetischen oder extrah matopoetischen Neoplasmen beobachtet die nicht AML waren 2 References References Literatur 1 Grisendi S Mecucci C Falini B Pandolfi PP Nucleophosmin and cancer Nature Rev Cancer 2006 6 493 505 2 Falini B Mecucci C Tiacci E Alcaly M Rosatin R Pasqualucci L et al Cytoplasmic nucleophosmin in acute myologenous leukemia with a normal
7. Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Clone 376 Isotype IgG1 lambda Prot ine recombinante NPM de longueur totale Dans les analyses par Western blot des lysats de cellules U937 des lysats de lign e cellulaire AML 2 et des cellules lys es OCI AML3 3 l anticorps marque une bande de 37 kDa correspondant la NPM 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaN produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosifs Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un v tement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationales Conserver entre 2 et 8 C Ne pas utiliser apr s la
8. a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics IS652 EFG MNI 2009 12 04 p 1 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Staining interpretation Performance characteristics FRANCAIS Utilisation prevue Synonymes de l antig ne R sum et explication R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 117051 003 Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include liver and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Code 1S750 Cells labeled by the antib
9. date de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il ny a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus inclus en paraffine et fix s au formol L epaisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Un pr traitement avec d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire avec le Dako PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Coupes incluses en paraffine le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide de la proc dure de pr paration d chantillon 3 en un pour le Dako PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice de la EnVision FLEX Target Retriev
10. karyotype New Engl J Med 2005 352 254 66 3 Falini B Bolli N Shan J Martelli PM Liso A Pucciarini A et al Both carboxy terminus NES motif and mutated tryptophan s are crucial for aberrant nuclear export of nucleophosmin leukemic mutants in NPMc AML Blood 2006 107 4514 23 2006 108 1999 2005 Falini B Martelli PM Bolli N Bonasso R Ghia E Pallotta MT et al Immunohistochemistry predicts nucleophosmin NPM mutations in acute myeloid leukemia Blood Pasqualucci L Liso A Martelli MP Bolli N Pacini R Tabarrinni A et al Mutated nucleophosmin detects clonal multilineage involvement in acute myeloid leukemia Impact on WHO classification Blood 2006 108 4146 55 Explanation of symbols Explication des symboles Erl uterung der Symbole 117051 003 Catalogue number Reference catalogue Bestellnummer In vitro diagnostic medical device Dispositif medical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum Consult instructions for use Voir les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Temperature limitation Use by Limites de temp rature Utiliser avant Zul ssiger Temperaturbereich Verwendbar bis Manufacturer Fabricant Hersteller Contains sufficient for lt n gt tests Contenu suffisant pour lt n gt tests Inhalt ausreichend f r lt n gt Tests Batch code Numero de lot Chargenbezeichnung IS652 EFG MNI 2009 12 04 p 4 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denm
11. al Solution High pH 50x R f K8010 K8004 Remarque apr s coloration les coupes doivent tre d shydrat es lav es et mont es l aide d un milieu de montage permanent Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires d paraffin es fix es au formol et incluses en paraffine est recommand l aide du Dako PT Link en suivant la m me proc dure que pour les coupes incluses en paraffine Apr s coloration un montage aqueux ou permanent des lames est recommand Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 IS652 EFG MNI 2009 12 04 p 2 4 Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance DEUTSCH Verwendungszweck Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117051 003 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision FLEX High pH Dako Autostaine
12. ark Tel 45 44 85 95 00 Fax 45 44 85 9595 CVR No 33 21 13 17
13. aten 2 und lysierten OCI AML3 Zellen 3 markiert der Antik rper eine Bande mit einem Molekulargewicht von 37 kDa die NPM entspricht 1 Nur f r Fachpersonal bestimmt 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaN eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Natriumazid kann auch in als ungef hrlich eingestuften Konzentrationen mit Blei und Kupferrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Metallazidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Geeignete Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden Falls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen
14. bedded sections After staining the slides should be mounted using aqueous or permanent mounting medium The tissue sections should not dry out during the treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended The recommended visualization system is EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8010 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTUS3 300 uL dispense volume Autoprogram NPM without counterstaining or NPMH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory Ifthe evaluating pathologist should desire a different staining intensity
15. cells in many tissues 4 However NPM has the ability to shuttle between the nucleus and cytoplasm and this shuttling activity and its proper subcellular localization might be crucial for cellular homeostasis 1 TheNPM gene NPMT is frequently overexpressed mutated deleted or rearranged in many human malignancies and depending on its expression level and gene dosage NPM seems to function as either an oncogene or a tumor suppressor Complete functional loss of NPM leads to aneuploidy and activation of cell proliferation checkpoints 1 Mutations in exon 12 of the NPMT gene is causal for generation of a mutant NPM counterpart NPMc which is aberrantly localized in the cytoplasm of leukaemic blasts cell in a large subgroup of primary acute myeloid leukemia AML cases with a normal karyotype 1 4 NPMc display a multilineage distribution in AML specimens of all subtypes except M3 acute promyelocytic leukemia M4eo acute myelomonocytic leukemia with eosinophilia and M7 acute megakaryocytic leukemia 2 4 It is likely that mutation and cytoplasmic accumulation of NPMc called NPMc is a primary leukemogenic event as it may interfere with the normal NPM function NPMc is not observed in any primary AML cases with a specific genetic abnormality in secondary AML specimens or hematopoietic or extrahematopoietic neoplasms other than AML 2 4 NPMc is only observed in primary AML with a normal karyotype 2 4 5 Refer to Dako s General Instr
16. cified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Paraffin embedded sections Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using the 3 in 1 specimen preparation procedure for Dako PT Link Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8010 K8004 Note After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium Deparaffinized sections Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link and following the same procedure as described for paraffin em
17. en k nnen sich je nach Probe und Pr parationsverfahren unterscheiden und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Fixiermittel Positiv und Negativkontrollen sollten parallel zu den Patientenproben und nach demselben Protokoll angef rbt werden Das positive Kontrolle sollte Lebergewebe verwendet werden und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die unter Leistungsmerkmale f r dieses Gewebe beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativ Kontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 Code Nr IS750 Mit diesem Antik rper markierte Zellen weisen entweder ein nukle res oder ein zytoplasmatisches und nukle res F rbemuster auf Gesundes Gewebe Der Antik rper markiert Wildtyp NPM in Zellkernen aus Dickdarm D nndarm Niere Leber Lunge Lymphknoten Pankreas Prostata
18. f r die paraffineingebetteten Schnitte beschrieben wird empfohlen Die Objekttr ger nach dem F rben mit einem w ssrigen oder permanenten Einbettmedium bedecken Die Gewebeschnitte d rfen w hrend der Behandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens nicht austrocknen Zur besseren Haftung der Gewebeschnitte an den Glasobjekttr gern wird die Verwendung von FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Als Visualisierungssystem wird EnVision FLEX High pH Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8010 empfohlen F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 ul Anwendungsvolumen oder FLEXRTU3 300 ul Anwendungsvolumen Autoprogramm NPM ohne Gegenf rbung oder NPMH mit Gegenf rbung Bei F rbedurchl ufen mit h chstens 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern den Zusatz Schritt auf Keine einstellen Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte bei Raumtemperatur durchf hren N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den Technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Die optimalen Bedingung
19. fiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d hematoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre le foie et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Le contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Code 1S750 Les cellules marqu es par l anticorps pr sentent soit une coloration nucl aire soit une coloration cytoplasmique et nucl aire Tissus sains l anticorps marque la NPM de type sauvage dans les noyaux des cellules du tube digestif des intestins du rein du foie du poumon des ganglions Iymphatiques du pancr as de la prostate de la rate du thymus et de l amygdale Le marquage nucl aire est observ dans toutes les cellules du cervelet mais de grands neurones pr sentent une coloration suppl mentaire du cytoplasme Les h patocytes du foie pr sentent une coloration nucl ai
20. n des points de contr le de la prolif ration cellulaire 1 Les mutations dans l exon 12 du gene NPM1 entra nent la g n ration d une contrepartie NPM mutante NPMc qui se situe de mani re aberrante dans le cytoplasme des blastocytes leuc miques dans un grand sous groupe de cas de leuc mie my lo de aigu AML avec caryotype normal 1 4 Le NPMc pr sente une distribution sur plusieurs lign es dans les chantillons AML de tous les sous types l exception de M3 leuc mie promy locytaire aigu M4eo leuc mie my lomonocytaire aigu avec osinophilie et M7 leuc mie m gacaryocytaire aigu 2 4 II est probable que la mutation et l accumulation cytoplasmique du NPMc appel e NPMc constituent un v nement leuc mog ne primaire car elle peut interf rer avec la fonction normale de la NPM Le NPMc n est observ dans aucun cas AML primaire avec une anomalie g n tique sp cifique dans les chantillons AML secondaires ni les n oplasmes h matopo tiques ou extrah matopo tiques autres que l AML 2 4 Le NPMc est seulement observ dans AML primaire avec caryotype normal 2 4 5 Se r f rer aux nstructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de d tection relatives aux proc dures IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5
21. ody display either nuclear or cytoplasmic and nuclear staining Normal tissues The antibody labels wild type NPM in nuclei of gut intestine kidney liver lung lymph node pancreas prostate spleen thymus and tonsil Nuclear labeling is observed in all cells in cerebellum but large neurons display additional staining in the cytoplasm The hepatocytes in the liver show a moderate to strong nuclear staining reaction whereas the scattered mitotic and post mitotic cells show a weak to moderate cytoplasmic and nuclear staining reaction Abnormal tissues The antibody labeled both the wild type NPM and mutant NPMc proteins 2 3 and resulted in both nuclear and cytoplasmic labeling of leukemic blast cells in 208 591 35 primary AML specimens and in 142 230 61 of primary AML specimens with a normal karyotype In contrast nuclear and cytoplasmic labeling of leukemic blast cells was only observed in 24 263 9 AML cases with an abnormal karyotype and none of these cases represented specific genetic abnormalities commonly observed in primary AML Nuclear labeling alone was observed in 135 135 100 secondary AML specimens and in 980 980 hematopoietic or extrahematopoietic neoplasms other than AML 2 Pour utilisation lors d un diagnostic in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Nucleophosmin Clone 376 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin une utilisation en immunohistochimie avec les instruments Dako Autostainer
22. r Autostainer Plus Code K8010 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont preprogrammes dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique NPM sans contre coloration ou NPMH avec contre coloration L tape Auxiliary doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de gt 10 lames l tape Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela confirme des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l valuation d sire une intensit de coloration diff rente un sp cialiste d application specialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la re programmation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v ri
23. re mod r e forte alors que les cellules diss min es mitotiques et post mitotiques pr sentent une coloration nucl aire et cytoplasmique faible mod r e Tissus tumoraux l anticorps a marqu la fois les prot ines de type sauvage NPM et mutante NPMc 2 3 et ont entra n un marquage du noyau et du cytoplasme des blastocytes leuc miques dans 208 chantillons d AML primaire sur 591 environ 35 et dans 142 chantillons d AML primaire avec caryotype normal sur 230 environ 61 Par contre le marquage nucl aire et cytoplasmique des blastocytes leuc miques n a t observ que dans 24 cas d AML avec caryotype anormal sur 263 environ 9 et aucun de ces cas n a pr sent les anomalies g n tiques sp cifiques commun ment observ es dans l AML primaire Le marquage nucl aire seul a t observ dans 135 chantillons d AML secondaire sur 135 100 et dans 980 cas sur 980 de n oplasmes h matopo tiques et extra h matopo tiques autres que AML 2 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Nucleophosmin Clone 376 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Dieser Antik rper erm glicht die Identifizierung von Wildtyp Nucleophosmin NPM sowie seiner mutierten Form NPMc Nucleophosmin findet sich in den Kernen von normalen Zellen mehrerer Gewebearten tritt jedoch
24. uctions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Clone 376 Isotype IgG1 lambda Recombinant full length NPM protein In Western blotting of U937 cell lysates AML cell line lysates 2 and lysed OCI AMLS3 cells 3 the antibody labels a band of 37 kDa corresponding to NPM 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used 4 Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date sta mped on vial If reagents are stored under any conditions other than those spe
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