FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Progesterone Receptor Clone
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1. Site 1 Positive N gative Total x Positive 55 0 55 Site 2 N gative 4 46 50 Total 59 46 105 Pourcentage moyen de concordance positive 96 5 Pourcentage moyen de concordance n gative 95 8 Tableau 5 Reproductibilit inter laboratoire de l anticorps Anti PR Clone PgR 636 Site 2 vs Site 3 Site 1 Positive N gative Total Positive 59 1 60 Site 3 N gative 0 45 45 Total 59 46 105 Pourcentage moyen de concordance positive 99 2 Pourcentage moyen de concordance n gative 98 9 Tableau 6 Reproductibilit inter laboratoire de l anticorps Anti PR Clone PgR 636 Site 2 vs Site 3 Site 2 Positive N gative Total 4 Positive 55 5 60 Site 3 N gative 0 45 45 Total 55 50 105 Pourcentage moyen de concordance positive 95 7 Pourcentage moyen de concordance n gative 94 7 117233 003 307142EFG_003 p 8 4 Verwendungszweck Synonym fiir das Antigen Zusammenfassung und Erklarung Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifitat VorsichtsmaBnahmen Lagerung Gewebevorbereitung und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 117233 003 DEUTSCH Code Nr IS068 Zur In vitro Diagnostik FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Progesterone Receptor Clone PgR 636 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus ist f r die Verwendung in der Immunhistochemie zusammen mit dem Detektionssystem En2. 10 nukle r GroBhirn 3 1 3 Hirnhautzellen 100 nukle r Prostata 3 Zervix 3 3 3 Epithelzellen 50 90 nukle r f Speicheldr se 3 3 3 Stroma und Entz ndungszellen 30 50 nuklear 1 3 Lympoid Entz ndungszellen Milz 3 0 3 10 nuklear Speiser hre 3 1 3 Stromazellen 50 nukle r Magen 3 Niere 3 3 3 Interstitialzellen 1 5 nukle r Hoden 3 1 3 Interstitialzellen 20 nukle r 3 3 Interstitialzellen 5 80 nukle r Leber 3 0 3 Thymus 3 0 3 Lunge 3 2 3 Interstitialzellen 1 10 Schilddr se 3 0 3 nukle r 2 3 Entz ndungszellen 1 10 Mandeln 3 0 3 nukle r Mesothelzellen 2 0 2 Uterus 2 2 2 Dr senepithelzellen 100 nukle r 2 2 Myometriale Stromazellen 100 nukle r Herzmuskel 3 3 3 Myozyten 30 perinukle r Skelettmuskulatur 3 0 3 Methodenvergleich Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 wurde mit dem EnVision FLEX getestet und gem ASCO CAP Richtlinien 21 Grenzwert bewertet 11 Anti PR Klon 1294 wurde mit dem ER PR pharmDx Kit von Dako getestet und unter Verwendung der in der Packungsbeilage beschriebenen Richtlinie f r den Allred Score bewertet Die Daten des Methodenvergleichs sind in Tabelle 2 aufgef hrt Unter Verwendung dieser jeweiligen Bewertungsrichtlinien stimmte Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 mit der PR Antik rperkomponente des ER PR pharmDx Kit
3. 3 3 myocytes 30 coloration p rinucl aire 2 2 cellules stromales du myom tre 100 coloration nucl aire Muscle squelettique 3 0 3 Comparaison des m thodes Les analyses avec l anticorps Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 ont t effectu es avec EnVision FLEX et valu es selon les recommandations ASCO CAP seuil 1 Q 1 Les analyses avec l anticorps Anti PR Clone 1294 ont t effectu es avec le kit Dako ER PR pharmDx et valu es selon les recommandations d valuation Allred d crites dans la notice Les donn es de comparaison des m thodes sont pr sent es dans le Tableau 2 En utilisant ces recommandations d valuation respectives l anticorps Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 concordait avec le composant Anti PR du kit Dako ER PR pharmDx affichant des valeurs de concordance globale positive et n gative de 94 5 95 8 et 93 1 respectivement Le Tableau 3 pr sente la comparaison des deux tests avec les recommandations d valuation ASCO CAP Tableau 2 Concordance entre Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP et le composant Anti PR du kit ER PR pharmDx Allred Composant Anti PR du kit ER PR pharmDx Positive N gative Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 Positive 115 8 N gative 5 Total Pourcentage de concordance positive 95 8 IC 95 91 1 96 8 Pourcentage de concordance n gative 93
4. Method comparison Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 testing was performed with EnVision FLEX and scored according to ASCO CAP guidelines 21 cut off 11 Anti PR Clone 1294 testing was performed using Dako ER PR pharmDx Kit and scored using the Allred scoring guideline described in the package insert The method comparison data are presented in Table 2 Using these respective scoring guidelines Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 was concordant with the PR antibody component of Dako ER PR pharmDx Kit exhibiting values for overall positive and negative agreement of 94 5 95 8 and 93 1 respectively Table 3 shows the comparison of both assays when scored using the ASCO CAP guidelines Table 2 Agreement between Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP and Anti PR Component of ER PR pharmDx Kit Allred Anti PR Component of ER PR pharmDx Kit Positive Negative Monoclonal Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 Positive 115 8 Negative 5 Total Positive Percent Agreement 95 8 95 Cl 91 1 96 8 Negative Percent Agreement 93 1 95 Cl 90 5 96 7 Overall Percent Agreement 94 5 95 Cl 90 8 96 8 307142EFG_003 p 3 4 Table 3 Agreement between Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP and Anti PR Component of ER PR pharmDx Kit ASCO CAP Anti PR Component of ER PR pharmDx Kit Positive Negative Monoclonal Positive 115 8 Mouse Anti Human PR N ti C
5. in staining runs with lt 10 slides For staining runs with gt 10 slides the Auxiliary step should be set to none This ascertains comparable wash times All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Autostainer Autostainer Plus Code K8018 Non aqueous permanent mounting medium is recommended Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include columnar epithelial cells the basal squamous epithelial cells and the stromal cells and the cells structures should display reaction patterns as described for this tissue in Performance characteristics in all positive specimens The recommended negative control reagent is FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code IS750 Dako The cellular staining pattern is nuclear Cytoplasmic labeling if observed should be regarded as non specific A positive result is defined as nuclear staining in 21 of tumor cells at any stain intensity This is consistent with ASCO CAP s recommended cut off of 21 positive tumor cells for positive assessment 11 1 False negative results
6. s il est observ doit tre consid r comme non sp cifique Un r sultat positif est d fini comme une coloration dans 2 1 des cellules tumorales quelle que soit l intensit de la coloration Cette d finition suit les recommandations de l ASCO CAP Soci t am ricaine d oncologie clinique Coll ge des pathologistes am ricains avec un seuil 1 de cellules tumorales positives pour une valuation positive 11 1 Les faux n gatifs peuvent tre dus une d gradation de l antig ne dans les tissus au fil du temps Les chantillons doivent tre color s dans les 2 mois suivant le montage des tissus sur les lames lorsqu ils sont conserv s temp rature ambiante 12 2 Les lymphocytes et les cellules stromales peuvent pr senter une coloration positive avec l anticorps FLEX Monoclonal Mouse Anti Human PR clone PgR 636 et ne doivent pas tre interpr t s ou compt s comme des cellules tumorales PR color 3 Pour des r sultats optimaux et reproductibles la prot ine PR requiert une restauration des cibles lorsque les tissus sont fix s en routine formol neutre tamponn et inclus en paraffine 4 L utilisation de l anticorps Dako Anti PR Clone PgR 636 sur des tissus fix s par d autres produits que le formol n a pas t valid e Pr cision Des coupes en s rie provenant de chacun des 12 blocs diff rents de carcinome du sein fix s au formol et inclus en paraffine repr sentant une plage vari e d expression du PR o
7. diagnostiques par un pathologiste qualifi PR Le r le des r cepteurs d hormones st ro diennes dans le cancer du sein est bien connu 1 2 L absence de r cepteurs d strog nes ER et de progesterone PR pr dit une r cidive pr coce et un faible taux de survie chez les patientes atteintes d un cancer du sein 3 6 De m me la pr sence d ER et de PR dans les tumeurs indique l ventuel b n fice d un traitement au tamoxif ne ou d autres th rapies endocriniennes La mesure des ER et des PR peut tre d termin e semi quantitativement en utilisant une m thode IHC ou quantitativement l aide d une m thode charbon dextran dextran coated charcoal DCC ou immunoenzymatique EIA La corr lation entre les valuations semi quantitatives et quantitatives des PR se situe entre 73 et 91 en fonction du laboratoire et de l anticorps utilis 7 9 Consulter le document General Instructions for Immunohistochemical Staining Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou les instructions du kit de d tection pour les proc dures IHC 1 Principe de la proc dure 2 Mat riel requis mais non fourni 3 Conservation 4 Pr paration des chantillons 5 Proc dure de coloration 6 Contr le de qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Anticorps monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 01
8. eindeutigen Brustkrebsgewebeproben getestet und gemaB ASCO CAP Richtlinien 21 Grenzwert f r insgesamt 315 Auswertungen bewertet Die Tabellen 4 5 und 6 f hren die Reproduzierbarkeit des Assays zwischen den Pr fstellen einzeln auf Die Berechnungen der prozentualen durchschnittlichen Positiv und Negativ Ubereinstimmung sowie der Gesamt bereinstimmung st tzen die in hohem MaBe reproduzierbaren Ergebnisse des PR Assays PgR 636 wenn er im klinischen Rahmen zur Bestimmung des PR Status eingesetzt wird Tabelle 4 Pr fstelle 1 gegen ber Pr fstelle 2 Reproduzierbarkeit von Anti PR Clone PgR 636 zwischen Labors Pr fstelle 1 Positiv Negativ Gesamt J Positiv 55 0 55 Pr fstelle 2 Negativ 4 46 50 Gesamt 59 46 105 Durchschnittliche prozentuale Positiv bereinstimmung 96 5 Durchschnittliche prozentuale Negativ Ubereinstimmung 95 8 Tabelle 5 Pr fstelle 1 gegen ber Pr fstelle 3 Reproduzierbarkeit von Anti PR Clone PgR 636 zwischen Labors Pr fstelle 1 Positiv Negativ Gesamt p Positiv 59 1 60 Pr fstelle 3 Negativ 0 45 45 Gesamt 59 46 105 Durchschnittliche prozentuale Positiv bereinstimmung 99 2 Durchschnittliche prozentuale Negativ Ubereinstimmung 98 9 Tabelle 6 Pr fstelle 2 gegen ber Pr fstelle 3 Reproduzierbarkeit von Anti PR Clone PgR 636 zwischen Labors Pr fstelle 2 Positiv Negativ Gesamt B Positiv 55 5 60 P
9. paraffineingebetteten Mammakarzinombl cken die einen dynamischen PR Expressionsbereich repr sentieren erfasst Die Tests wurden wie folgt vorgenommen Pr zision innerhalb eines Testlaufs Gem Standardprotokoll f r das EnVision FLEX High pH wurden jeweils drei Gewebeblockschnitte von jedem Gewebeblock mit Anti PR Clone PgR 636 gef rbt Gleichzeitig wurde ein Schnitt von jedem Block mit einem Negativkontrollreagenz gef rbt Pr zision zwischen den Testl ufen Das vorstehende Verfahren wurde an f nf nicht aufeinander folgenden Tagen wiederholt wobei jeweils ein Gewebeblockschnitt gef rbt wurde Gleichzeitig wurde ein Schnitt von jedem Gewebeblock mit einem Negativkontrollreagenz gef rbt Pr zision zwischen den Ger ten Drei verschiedene Bediener f hrten das vorstehende Verfahren an drei verschiedenen Autostainer Ger ten durch wobei insgesamt drei Schnitte aus jedem Gewebeblock gef rbt wurden Gleichzeitig wurde ein Objekttr ger von jedem Gewebeblock mit einem Negativkontrollreagenz gef rbt Prazisionsexperimente mit Anti PR Clone PgR 636 lieferten bei den Tests innerhalb eines Laufs zwischen den Laufen und zwischen den Ger ten Ubereinstimmende Ergebnisse Wahrend der gesamten Studie herrschten gleichbleibende Testbedingungen und die Reagenzien wurden zwischen den Testlaufen bei 2 8 aufbewah rt Normalgewebe Tabelle 1 enthalt eine Ubersicht Uber die Immunreaktivitat von Anti PR Clone PgR 636 an der empfohlenen Ausw
10. to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations 307142EFG_003 p 1 4 Storage Specimen preparation including materials required but not supplied Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Product specific limitation Performance characteristics 117233 003 Store at 2 8 Do not use after expiration date s tamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support Paraffin sections The antibody can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment Pre treatment of formalin fixed paraffin embedded tissue sections is required Optimal results are obtained by pretreating tissues with HIER using dilut
11. 1 IC 95 90 5 96 7 Pourcentage de concordance globale 94 5 IC 95 90 8 96 8 117233 003 307142EFG_003 p 7 4 Tableau 3 Concordance entre Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP et le composant Anti PR du kit ER PR pharmDx ASCO CAP Composant Anti PR du kit ER PR pharmDx Positive N gative Monoclonal Positive 115 8 Mouse Anti Human PR _ Clone PgR 636 N gative 4 gt Total 116 Pourcentage de concordance positive 99 1 IC 95 93 0 98 0 Pourcentage de concordance n gative 93 3 IC 95 92 8 98 0 Pourcentage de concordance globale 96 2 IC 95 93 0 98 0 Reproductibilit inter laboratoire Les tests de reproductibilit de l anticorps Anti PR Clone PgR 636 ont t conduits dans trois laboratoires d analyse sur cinq jours non cons cutifs au total 21 chantillons de cancer du sein uniques ont t test s et valu s selon les recommandations ASCO CAP seuil 2 1 pour un total de 315 valuations Les tableaux 4 5 et 6 pr sentent les donn es de reproductibilit de l analyse site site Les pourcentages moyens de concordance positive n gative et globale montrent des r sultats hautement reproductibles pour les analyses avec l anticorps PR PgR 636 utilis es pour la d termination de l tat PR dans un contexte clinique Tableau 4 Reproductibilit inter laboratoire de l anticorps Anti PR Clone PgR 636 Site 1 vs Site 2
12. 17 Page DL Jensen RA Simpson JF Routinely available indicators of prognosis in breast cancer Breast Can Res Treat 1998 51 195 Allred DC Harvey JM Berardo M Clark GM Prognostic and predictive factors in breast cancer by immunohistochemical analysis Mod Pathol 1998 11 155 Fitzgibbons PL Page DL Weaver D Thor AD Allred DC Clark GM et al Prognostic factors in breast cancer College of American Pathologists consensus statement Arch Pathol Lab Med 2000 124 966 Press M Spaulding B Groshen S Kaminsky D Hagerty M Sherman L et al Comparison of different antibodies for detection of progesterone receptor in breast cancer Steroids 2002 67 799 Hammond MEH Hayes DF Dowsett M Allred C Hagerty KL Badve S et al American Society of Clinical Oncology College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer Arch Pathol Lab Med 2010 134 907 22 Clinical and Laboratory Standards Institute formerly NCCLS Quality assurance for immunocytochemistry Approved guideline CLSI document MM4 A 1 56238 396 5 CLSI 940 West Valley Road Suite 1400 Wayne PA 19087 1898 USA 1999 Catalogue number Temperature limitation R f rence du catalogue Limites de temp rature Bestellnummer Zulassiger Temperaturbereich In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro wal In vitro Diagnostikum Manufacturer Batch code s
13. 5 mol L de NaNs Clone PgR 636 10 Isotype IgG1 kappa Forme A pleine longueur recombinante fix e au formol du r cepteur humain de la progest rone 10 Il a galement t prouv par Western blot d extraits cellulaires totaux que l anticorps Anti PR PgR 636 r agit aux formes PR A et PR B et qu il r agit la fois au PR libre et au PR li l hormone 10 L pitope a t cartographi dans le domaine amino terminal partag par PR A et PR B 1 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique sous sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique des proc dures de manipulation appropri es doivent tre respect es 4 Porter un quipement de protection individuelle appropri pour viter tout contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales nationales et europ ennes Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date de p remption imprim e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditio
14. 50x Code Nr K8012 K8004 erzielt werden Entparaffinierung Rehydrierung und Epitopdemaskierung k nnen im Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 durchgef hrt werden Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch F r PT Link sind die folgenden Parameter zu verwenden Temperatur auf 65 vorw rmen Epitopdemaskierungs temperatur und zeit 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Die Objekttr gerhalter aus dem PT Link Tank nehmen und die Objekttr ger sofort in einen Beh lter Tank z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Raumtemperatur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 tauchen Die Objekttr ger 1 5 Minuten lang im Waschpuffer belassen 307142EFG_003 p 9 4 Farbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien Auswertung der Farbung Produktspezifische Beschrankung Leistungseigenschaften 117233 003 W hrend der Vorbehandlung oder w hrend des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens d rfen die Gewebeschnitte nicht austrocknen F r eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttr gern werden FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Nach dem F rben m ssen die Schnitte dehydriert gekl rt und unter Verwendung eines permanenten Eindeckmediums auf Objekttr gern eingedeckt werden Das empfohlene Visualisierungssystem ist EnVision FLEX Mouse High pH Code Nr K8012 Die F rbeschritte und Ink
15. Vision FLEX High pH mit Autostainer Autostainer Plus Geraten zum semi quantitativen Nachweis des humanen Progesteronrezeptors beim formalinfixierten paraffineingebetteten Mammakarzinomgewebe bestimmt Dieser Antik rper markiert Progesteronrezeptor positive Zellen und ist bei der Bewertung des Progesteronrezeptorstatus bei Mammakarzinomen einsetzbar Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden Farbung sollte durch morphologische Studien mit geeigneten Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer diagnostischer Tests des Patienten vorgenommen werden PR Die Funktion der Steroidhormonrezeptoren bei Brustkrebs ist bekannt 1 2 Das Fehlen von Ostrogen OR und Progesteronrezeptoren PR erlaubt die Prognose eines fr hen Rezidivs und eines geringen berlebens der Brustkrebspatienten 3 6 Dagegen erlaubt das Vorliegen von Ostrogen und Progesteron in Tumoren die Prognose des potenziellen Nutzens einer Behandlung mit Anti strogenen z B Tamoxifen oder anderen endokrin wirksamen Behandlungen OR und PR Bestimmungen k nnen semi quantitativ durch IHC oder quantitativ mit DCC oder EIA erfolgen Die Korrelation zwischen semi quantitativen und quantitativen PR Auswertungen lag je nach Labor und verwendetem Antik rper zwischen 73 und 91 7 9 Folgende Angaben bitte den General Instructions for Immunohistochemical Staining Allgemeine Richtlinien zur immunhis
16. a Intended use Synonym for antigen Summary and explanation Reagent provided Immunogen Specificity Precautions 117233 003 CE FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Progesterone Receptor Clone PgR 636 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus English Code 15068 For in vitro diagnostic use FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Progesterone Receptor Clone PgR 636 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with EnVision FLEX High pH visualization kit together with Autostainer Autostainer Plus instruments to semi quantitatively detect human progesterone receptor in formalin fixed paraffin embedded human breast carcinoma This antibody labels progesterone receptor positive cells and is useful in the assessment of progesterone receptor status in human breast carcinomas The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist PR The role of steroid hormone receptors in breast cancer is well known 1 2 The absence of estrogen receptor ER and progesterone receptor PR predicts early recurrence and poor survival of breast cancer patients 3 6 Also the presence of ER and PR in tumors predicts the potential for benefit from tamoxifen and other endo
17. ahl von Normalgeweben Alle Gewebe wurden formalinfixiert paraffineingebettet und mit Anti PR Clone PgR 636 gem den Anweisungen in der Packungsbeilage gef rbt Mit Anti PR Clone PgR 636 wurde eine Anf rbung des Zytoplasmas in einigen verschiedenen Gewebeelementen darunter Epithel Stroma Interstitialzellen und Entz ndungszellen beobachtet Obwohl eine Anfarbung des Zytoplasmas beobachtet wurde gilt diese gem Verwendungszweck dieses Antik rpers nicht als Diagnose 307142EFG_003 p 10 4 117233 003 Tabelle 1 Ubersicht ber die Reaktivitat von Anti PR Clone PgR 636 in Normalgewebe Gewebetyp Anz getestet Positive Gewebe Elemente Gewebetyp Anz getestet Positive Gewebe Elemente Nebenniere 3 1 3 Zellen in der Zona glomerulosa 50 nuklear Nerv peripher 3 0 3 1 3 Zellen in der Zona glomerulosa 50 nuklear Eierst cke 3 3 3 Stromazellen 50 70 nukle r Knochenmark 3 0 3 Pankreas 3 2 3 Langerhans Inseln 50 90 nukle r Brust 3 2 3 Dr senepithelzellen 50 90 nukle r Nebenschilddr se 3 3 3 Dr senepithelzellen 1 10 nuklear Kleinhirn 3 0 3 Hypophyse 3 3 3 Hypophysenzellen 1 40 nuklear 3 3 Stromazellen 30 80 nuklear 3 3 Dr senepithelzellen lt 1 60 nuklear 3 3 Stroma einschlieBlich Haut 3 0 3 Entz ndungszellen 50 nuklear Dickdarm 3 1 3 Lymphoid Entz ndungszellen D nndarm 3
18. andulaires 1 40 coloration nucl aire Cerveau 3 1 3 cellules m ning es 100 coloration nucl aire Prostate 3 3 3 cellules stromales 30 80 coloration nucl aire Col de l ut rus 3 3 3 cellules pith liales 50 90 coloration nucl aire Glande salivaire 3 3 3 cellules pith liales glandulaires lt 1 60 coloration nucl aire 3 3 cellules stromales comprenant des cellules inflammatoires 50 coloration nucl aire Peau 3 0 3 1 3 cellules lympho des inflammatoires 10 coloration nucl aire Intestin gr le 3 3 3 cellules stromales et inflammatoires 30 50 coloration nucl aire 1 3 cellules lympho des inflammatoires 10 coloration nucl aire Rate 3 0 3 sophage 3 1 3 cellules stromales 50 coloration nucl aire Estomac 3 1 3 cellules interstitielles 20 coloration nucl aire Rein 3 3 3 cellules interstitielles 1 5 coloration nucl aire Testicule 3 3 3 cellules interstitielles 5 80 coloration nucl aire Foie 3 0 3 Thymus 3 0 3 Poumon 3 2 3 cellules interstitielles 1 10 coloration nucl aire Thyro de 3 0 3 2 3 cellules inflammatoires 1 10 coloration nucl aire Amygdale 3 0 3 Cellules m soth liales 2 0 2 Ut rus 2 2 2 cellules pith liales glandulaires 100 coloration nucl aire Muscle cardiaque 3
19. could be caused by degradation of the antigen in the tissues over time Specimens should be stained within 2 months of mounting of tissues on slides when stored at room temperature 12 2 Lymphocytes and stromal cells can exhibit positive staining with the FLEX Monoclonal Mouse Anti Human PR clone PgR 636 antibody and should not be interpreted or counted as PR staining tumor cells 3 For optimal and reproducible results the PR protein requires target retrieval when tissues are routinely fixed neutral buffered formalin and paraffin embedded 4 Use of Dako Anti PR Clone PgR 636 on tissues with fixatives other than formalin has not been validated Precision Serial sections from each of 12 different formalin fixed paraffin embedded blocks of breast carcinoma representing a dynamic range of PR expression were collected for testing Testing was performed as follows Intra run precision Following the standard EnVision FLEX High pH protocol three sections from each tissue block were stained with Anti PR Clone PgR 636 Concurrently one section from each block was stained with a negative control reagent Inter run precision Staining one section from each tissue block the above procedure was repeated on five non consecutive days Concurrently one section from each tissue block was stained with a negative control reagent Inter instrument precision Staining a total of three sections from each tissue block the above procedure was perfo
20. crine related therapies Measurement of ER and PR can be determined semi quantitatively using IHC or quantitatively using DCC or EIA Correlation between the semi quantitative and quantitative evaluations of PR have ranged from 73 to 91 depending on the laboratory and antibody used 7 9 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 Staining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use monoclonal mouse antibody provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L Nas Clone PgR 636 10 Isotype IgG1 kappa Formalin fixed recombinant full length A form of human progesterone receptor 10 Anti PR PgR 636 has been demonstrated to react with the PR A and PR B forms by Western blot of whole cell extracts and reacts with both free and hormone bound PR 10 The epitope has been mapped to the amino terminal domain shared by PR A and PR B 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highly toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water
21. ecommand de tissus sains Tous les tissus ont t fix s au formol et inclus en paraffine puis color s a l anti PR Clone PgR 636 conform ment aux instructions de la notice Une coloration cytoplasmique a t observ e avec l anticorps Anti PR Clone PgR 636 dans diff rents l ments tissulaires notamment dans l pith lium le stroma les cellules interstitielles et les cellules inflammatoires Bien qu une coloration cytoplasmique ait t observ e elle n est pas prise en compte pour le diagnostic conform ment l utilisation pr vue de cet anticorps 307142EFG_003 p 6 4 Type de tissu nb test s El ments tissulaires positifs Type de tissu nb test s Tableau 1 R sum de la r activit a l anticorps Anti PR Clone PgR 636 dans les tissus sains l ments tissulaires positifs Surr nale 3 1 3 cellules dans la zone glom rul e 50 coloration nucl aire Nerf p riph rique 3 0 3 1 3 cellules dans la zone glom rul e 50 coloration nucl aire Ovaire 3 3 3 cellules stromales 50 70 coloration nucl aire Moelle osseuse 3 0 3 Pancr as 3 2 3 lots de Langerhans 50 90 coloration nucl aire Sein 3 2 3 cellules pith liales glandulaires 50 90 coloration nucl aire Parathyroide 3 3 3 cellules pith liales glandulaires 1 10 coloration nucl aire Cervelet 3 0 3 Hypophyse 3 3 3 cellules hypophysaires gl
22. ed EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Codes K8012 K8004 Deparaffinization rehydration and epitope retrieval can be performed in Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to PT Link User Guide The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove slide rack from PT tank and immediately dip slides in jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes The tissue sections should not dry out during the pre treatment or during the following immunohistochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended After staining the sections must be dehydrated cleared and mounted using permanent mounting medium The recommended visualization system is EnVision FLEX Mouse High pH Code K8012 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol FLEXRTU2 200 uL dispense volume or FLEXRTU3 300 uL dispense volume Autoprogram PR without counterstaining or Autoprogram PRH with counterstaining The Auxiliary step should be set to rinse buffer
23. ibility of Anti PR Clone PgR 636 Site 2 Positive Negative Total Positive 55 5 60 Site 3 Negative 0 45 45 Total 55 50 105 Average Positive Percent Agreement 95 7 Average Negative Percent Agreement 94 7 117233 003 307142EFG_003 p 4 4 Utilisation pr vue Synonyme de l antig ne R sum et explication R actif fourni Immunog ne Sp cificit Pr cautions d emploi Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 117233 003 Fran ais Ref 15068 Pour utilisation diagnostique in vitro FLEX Monoclonal Mouse Anti Human Progesterone Receptor Clone PgR 636 Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus est destin a une utilisation en immunohistochimie avec le kit de visualisation EnVision FLEX High pH sur l appareil Autostainer Autostainer Plus pour la d tection semi quantitative des r cepteurs de la progest rone humaine dans le carcinome du sein humain fix au formol et inclus en paraffine Cet anticorps marque les cellules r cepteurs de progest rone positifs et aide valuer l tat des r cepteurs de la progest rone dans les carcinomes du sein humains L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests
24. ischen Materialien gewonnenen Produkten m ssen die ordnungsgem en Handhabungsverfahren eingehalten werden 4 Entsprechende pers nliche Schutzausr stung PSA tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend den rtlichen staatlichen und EU rechtlichen Bestimmungen zu entsorgen Bei 2 8 lagern Nach Ablauf des auf dem Beh lter aufgedruckten Verfallsdatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer berpr ft werden Es gibt keine offensichtlichen Anhaltspunkte f r die m gliche Instabilit t dieses Produkts Es sollten daher die Positiv und Negativkontrollen gleichzeitig mit den Patientengewebeproben mitgef hrt werden Wenn eine unerwartete Anf rbung beobachtet wird welche durch nderungen in den Labormethoden nicht erkl rt werden kann und falls Verdacht auf ein Problem mit dem Antik rper besteht ist Kontakt mit dem technischen Kundendienst von Dako aufzunehmen Paraffinschnitte Der Antik rper eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Vorbehandlung Eine Vorbehandlung der formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitte ist erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch HIER Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH
25. l Fabricant Code du lot Hersteller Chargenbezeichnung Dako North America Inc Contains sufficient for lt N gt tests 6392 Via Real Contenu suffisant pour lt n gt tests Carpinteria California 93013 USA Inhalt ausreichend f r n Ans tze Use by Consult instructions for use T Utiliser jusque Consulter les instructions d utilisation Verwendbar bis Gebrauchsanweisung beachten PT0020 Rev C Edition dition Ausgabe 08 14 117233 003 Tel 805 566 6655 Fax 805 566 6688 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 Authorized representative in the European Community Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Autorisierter Repr sentant in der EU Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 4485 9500 Fax 45 4485 9595 www dako com 307142EFG_003 p 13 4
26. lone PgR 636 egative Total 116 1 112 Positive Percent Agreement 99 1 95 Cl 93 0 98 0 Negative Percent Agreement 93 3 95 Cl 92 8 98 0 Overall Percent Agreement 96 2 95 Cl 93 0 98 0 Inter Laboratory Reproducibility Anti PR Clone PgR 636 reproducibility testing was performed in three testing laboratories over five non consecutive days on 21 unique breast cancer specimens and scored according to ASCO CAP guidelines 21 cut off for a total of 315 evaluations Tables 4 5 and 6 detail the site to site reproducibility of the assay The average positive average negative and overall percent agreement calculations support the highly reproducible results of the PR PgR 636 assay when used for the determination of PR status in a Clinical setting Table 4 Site 1 vs Site 2 Inter Laboratory Reproducibility of Anti PR Clone PgR 636 Site 1 Positive Negative Total Positive 55 0 55 Site 2 Negative 4 46 50 Total 59 46 105 Average Positive Percent Agreement 96 5 Average Negative Percent Agreement 95 8 Table 5 Site 1 vs Site 3 Inter Laboratory Reproducibility of Anti PR Clone PgR 636 Site 1 Positive Negative Total Positi 1 60 Site 3 ositive 59 Negative 0 45 45 Total 59 46 105 Average Positive Percent Agreement 99 2 Average Negative Percent Agreement 98 9 Table 6 Site 2 vs Site 3 Inter Laboratory Reproduc
27. ngerhans 50 90 nuclear Breast 3 2 3 Glandular epithelial cells 50 90 nuclear Parathyroid 3 3 3 Glandular epithelial cells 1 10 nuclear Cerebellum 3 0 3 Pituitary 3 3 3 Pituitary glandular cells 1 40 nuclear Cerebrum 3 1 3 Meningial cells 100 nuclear Prostate 3 3 3 Stromal cells 80 80 nuclear Cervix 3 3 3 Epithelial cells 50 90 nuclear Salivary gland 3 3 3 Glandular epithelial cells lt 1 60 nuclear 3 3 Stroma including inflammatory cells 50 nuclear Skin 3 0 3 Colon 3 1 3 Lymphoid inflammatory cells 10 nuclear Small intestine 3 3 3 Stromal and inflammatory cells 30 50 nuclear 1 3 Lympoid inflammatory cells 10 nuclear Spleen 3 0 3 Esophagus 3 1 3 Stromal cells 50 nuclear Stomach 3 1 3 Interstitial cells 20 nuclear Kidney 3 3 3 Interstitial cells 1 5 nuclear Testis 3 3 3 Interstitial cells 5 80 nuclear Liver 3 0 3 Thymus 3 0 3 Lung 3 2 3 Interstitial cells 1 10 nuclear Thyroid 3 0 3 2 3 Inflammatory cells 1 10 nuclear Tonsil 3 0 3 Mesothelial cells 2 0 2 Uterus 2 2 2 Glandular epithelial cells 100 nuclear Muscle cardiac 3 3 3 Myocytes 30 peri nuclear 2 2 Myometrial stromal cells 100 nuclear Muscle skeletal 3 0 3
28. ns autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n existe pas de signe particulier pour indiquer l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patient Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par des diff rences dans les proc dures du laboratoire et qu un probl me li l anticorps est suspect contacter l assistance technique de Dako Coupes en paraffine L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes de tissus incluses en paraffine et fix es au formol L paisseur des coupes d chantillons tissulaires doit tre d environ 4 um Pr traitement Le pr traitement des coupes de tissus incluses en paraffine et fix es au formol est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus par la m thode HIER l aide de la solution dilu e EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x r f K8012 K8004 Le d paraffinage la r hydratation et la restauration de l pitope peuvent tre r alis s dans l appareil PT Link de Dako r f PT100 PT101 Pour plus de d tails se reporter au Guide d utilisation du PT Link Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link Temp rature de pr chauffage 65 temp r ature et dur e de restauration de l pitope 97 pendant 20 minutes 1 minute laisser refroidi
29. nt t recueillies pour l analyse L analyse a t r alis e comme suit Pr cision intra cycle En suivant le protocole standard de EnVision FLEX High pH trois coupes provenant de chaque bloc de tissu ont t color es avec l anticorps Anti PR Clone PgR 636 Simultan ment une coupe provenant de chaque bloc a t color e l aide d un r actif de contr le n gatif Pr cision inter cycle En colorant une coupe provenant de chaque bloc de tissu la proc dure a t r p t e sur cinq jours non cons cutifs Simultan ment une coupe provenant de chaque bloc de tissu a t color e l aide d un r actif de contr le n gatif Pr cision inter instrument En colorant trois coupes provenant de chaque bloc de tissu la proc dure ci dessus a t r alis e sur trois instruments Autostainer diff rents par trois op rateurs diff rents Simultan ment une lame provenant de chaque bloc de tissu a t color e l aide d un r actif de contr le n gatif Les exp riences de pr cision r alis es avec l anticorps Anti PR Clone PgR 636 ont produit des r sultats coh rents au cours des analyses intra cycle et inter cycle et inter instrument Les m mes conditions d analyse ont t conserv es tout au long de l tude et les r actifs ont t stock s entre 2 et 8 C entre les cycles de test Tissus sains Le Tableau 1 pr sente un r sum de l immunor activit l anticorps Anti PR Clone PgR 636 sur le panel r
30. r fstelle 3 Negativ 0 45 45 Gesamt 55 50 105 Durchschnittliche prozentuale Positiv bereinstimmung 95 7 Durchschnittliche prozentuale Negativ Ubereinstimmung 94 7 307142EFG_003 p 12 4 References Bibliographie Literaturnachweise 10 11 12 Henderson C Breast cancer In Harrison s principles of internal medicine 12th edition Wilson JD Braunwald E Isselbacher KJ Petersdorf RG Martin JB Fauci AS Root RK eds McGraw Hill Inc New York 1991 Fuqua SAW Estrogen and progesterone receptors and breast cancer Diseases of the Breast Harris et al eds Lippincott Raven 1996 p 261 McGuire WL Clark GM The prognostic role of progesterone receptors in human breast cancer Sem Oncol 1983 10 2 Clark GM McGuire WL Hubay CA Pearson OH Marshall JS Progesterone receptors as prognostic factor in stage Il breast cancer N Engl J Med 1983 39 1343 Ravdin PM Green S Dorr TM McGuire WL Fabian C Puch RP et al Prognostic significance of progesterone receptor levels in estrogen receptor positive patients with metastatic breast cancer treated with tamoxifen Results of a prospective southwest oncology group study JCO 1992 10 1284 Chevallier B Heintzmann F Mosseri V Dauce JP Bastit P Graic Y Brunelle P Basuyay JP Comoz M Asselain B Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer Results of a univariate and multivariate analysis Cancer 1988 62 25
31. r jusqu 65 Retirer le portoir lames de la cuve et plonger imm diatement les lames dans une jarre cuve par ex PT Link Rinse Station r f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x r f K8007 dilu et temp rature ambiante Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 a 5 minutes 307142EFG_003 p 5 4 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Limites sp cifiques au produit Performances 117233 003 Les coupes de tissus ne doivent pas s cher lors du pr traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique suivante Pour une meilleure adh rence des coupes de tissu sur les lames de verre il est recommand d utiliser les lames FLEX IHC Microscope Slides r f K8020 Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre d shydrat es claircies et mont es l aide d un milieu de montage permanent Le syst me de visualisation recommand est le EnVision FLEX Mouse High pH r f K8012 Les tapes de coloration et les temps d incubation sont pr programm s dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus l aide des protocoles suivants Protocole mod le FLEXRTU2 volume d application de 200 uL ou FLEXRTU3 volume d application de 300 uL Programme automatique PR sans contre coloration ou PRH avec contre coloration L tape Auxiliar
32. rmed on three different Autostainer instruments by three different operators Concurrently one slide from each tissue block was stained with a negative control reagent Precision experiments with Anti PR Clone PgR 636 yielded consistent results with intra run inter run and inter instrument testing Consistent test conditions were maintained throughout the study and reagents were stored at 2 8 C between test runs 307142EFG_003 p 2 4 117233 003 Normal tissues Table 1 contains a summary of Anti PR Clone PgR 636 immunoreactivity on the recommended panel of normal tissues All tissues were formalin fixed and paraffin embedded and stained with Anti PR Clone PgR 636 according to the instructions in the package insert Cytoplasmic staining was observed with Anti PR Clone PgR 636 in several different tissue elements including epithelium stroma interstitial cells and inflammatory cells While cytoplasmic staining was observed it is not considered diagnostic as per the intended use of this antibody Table 1 Summary of Anti PR Clone PgR 636 Normal Tissue Reactivity Tissue Type tested Positive Tissue Elements Tissue Type tested Positive Tissue Elements Adrenal 3 1 3 cells in glomerulosa region 50 nuclear Nerve peripheral 3 0 3 1 3 cells in glomerulosa region 50 nuclear Ovary 3 3 3 Stromal cells 50 70 nuclear Bone marrow 3 0 3 Pancreas 3 2 3 Islets of La
33. tionsmuster aufweisen Das empfohlene Negativkontrollreagenz ist FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr 1S750 Das zellulare F rbemuster ist nuklear Falls eine Markierung des Zytoplasmas beobachtet wird sollte sie als nicht spezifisch betrachtet werden Ein positives Ergebnis ist als Kernf rbung in 21 der Tumorzellen bei jeder Farbeintensitat definiert Dies steht mit dem ASCO CAP empfohlenen Grenzwert von 21 positiven Tumorzellen f r eine positive Bewertung in Einklang 11 1 Falsch negative Ergebnisse k nnen die Folge eines mit der Zeit stattfindenden Antigenabbaus in den Geweben sein Werden Proben bei Raumtemperatur aufbewahrt so sollten diese innerhalb von 2 Monaten nach dem Eindecken der Schnitte auf Objekttrager gefarbt werden 12 2 Lymphozyten und Stromazellen k nnen mit dem Antik rper FLEX Monoclonal Mouse Anti Human PR clone PgR 636 eine positive Farbung aufweisen und sollten nicht als PR farbende Tumorzellen interpretiert oder gez hlt werden 3 Zum Erzielen optimaler und reproduzierbarer Ergebnisse f r PR Protein ist dieses einer Demaskierung zu unterziehen wenn die Gewebe routinem ig in neutralem gepuffertem Formalin fixiert und paraffineingebettet werden 4 Die Verwendung von Dako Anti PR Clone PgR 636 bei Geweben mit anderen Fixiermitteln als Formalin wurde nicht validiert Pr zision F r die Tests wurden Serienschnitte aus jeweils 12 verschiedenen formalinfixierten
34. tochemischen F rbung von Dako bzw den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzipien 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Lagerung 4 Gewebevorbereitung 5 F rbeverfahren 6 Qualit tskontrolle 7 Fehlerbehandlung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger monoklonaler Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L NaN enth lt Klon PgR 636 10 Isotyp IgG1 kappa Formalinfixierte rekombinante A Form vollst ndig des humanen Progesteronrezeptors 10 Anti PR PgR 636 hat im Western Blotting an Ganzzell Extrakten nachweislich mit den A und B Formen des Progesteronrezeptors reagiert Es reagiert ebenfalls mit freien und hormongebundenen Progesteronrezeptoren 10 Das Epitop wurde am Amino Ende in derselben Molek lregion kartiert in der auch PR A und PR B liegen 1 Fur geschultes Fachpersonal 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaNs eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Bei den in diesem Produkt verwendeten Konzentrationen kann Natriumazid obwohl nicht als gef hrlich klassifiziert mit in Wasserleitungen vorhandenem Blei oder Kupfer reagieren und zur Bildung von hochexplosiven Metallazid Anreicherungen f hren Nach der Entsorgung muss mit reichlich Wasser nachgesp lt werden um Metallazid Anreicherungen in den Leitungen zu vermeiden 3 Wie bei allen aus biolog
35. ubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll FLEXRTU2 200 uL Abgabevolumen oder FLEXRTU3 300 uL Abgabevolumen Autoprogram PR ohne Gegenfarbung oder Autoprogram PRH mit Gegenfarbung Bei F rbedurchl ufen mit lt 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Puffersp lgang eingestellt werden F r F rbedurchl ufe mit mehr als 10 Objekttr gern sollte der Zusatz Schritt auf Keine eingestellt werden Dies gew hrleistet vergleichbare Waschzeiten Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die Protokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Die Gegenf rbung in H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Empfohlen wird ein nichtw ssriges permanentes Eindeckmedium Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patientenproben getestet werden Das Positivkontrollgewebe sollte s ulenf rmige Epithelzellen Basalschicht Plattenepithelzellen und Stromazellen enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungseigenschaften beschriebenen Reak
36. von Dako berein wobei sich f r die Gesamt Positiv und Negativ Ubereinstimmung Werte von 94 5 95 8 bzw 93 1 zeigten Tabelle 3 zeigt den Vergleich der beiden Assays bei Bewertung mittels der ASCO CAP Richtlinien Tabelle 2 bereinstimmung zwischen Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP und der Anti PR Komponente des ER PR pharmDx Kit Allred Anti PR Komponente des ER PR pharmDx Kit Positiv Negativ Gesamt Monoclonal Mouse Anti Human PR A Clone PgR 636 Negativ 5 113 Positiv 115 8 123 Gesamt Prozentuale Positiv bereinstimmung 95 8 95 KI 91 1 96 8 Prozentuale Negativ Ubereinstimmung 93 1 95 KI 90 5 96 7 Prozentuale Gesamt Ubereinstimmung 94 5 95 KI 90 8 96 8 Tabelle 3 Ubereinstimmung zwischen Anti PR Clone PgR 636 ASCO CAP und Anti PR Komponente des 307142EFG_003 p 11 4 117233 003 ER PR pharmDx Kit ASCO CAP Anti PR Komponente des ER PR pharmDx Kit Positiv Negativ Gesamt Monoclonal Positiv 115 8 123 Mouse Anti Human PR Clone PgR 636 Negativ 1 112 113 Gesamt 116 Prozentuale Positiv Ubereinstimmung 99 1 95 KI 93 0 98 0 Prozentuale Negativ Ubereinstimmung 93 3 95 KI 92 8 98 0 Prozentuale Gesamt bereinstimmung 96 2 95 KI 93 0 98 0 Reproduzierbarkeit zwischen Labors Die Reproduzierbarkeit von Anti PR Clone PgR 636 wurde in drei Testlabors f nf nicht aufeinander folgende Tage lang an 21
37. y doit tre r gl e sur rinse buffer lors des cycles de coloration avec lt 10 lames Pour les cycles de coloration de plus de 10 lames l tape dite Auxiliary doit tre r gl e sur none Cela garantit des temps de lavage comparables Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus r f K8018 L utilisation d un milieu de montage permanent non aqueux est recommand e Des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons de patients Le tissu de contr le positif doit comprendre les cellules pith liales en colonnes les cellules pith liales squameuses basales et les cellules stromales De plus les cellules structures doivent pr senter des sch mas de r action semblables ceux d crits pour ce tissu la section Performances pour tous les chantillons positifs Le r actif de contr le n gatif recommand est le FLEX Negative Control Mouse Dako Autostainer Autostainer Plus r f 1S750 Le profil de coloration cellulaire est nucl aire Le marquage cytoplasmique
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