DuoFLEX Cocktail Anti-S100 Anti-Tyrosinase Anti-Melan-A
Contents
1. 94 627 31 Edel G Ueda Y Nakanishi J Brinker KH Roessner A Blasius S et al Chondroblastoma in bone A clinical radiological light and immunohistochemical study Virchows Arch A Pathol Anat 1992 421 355 66 Gould VE Moll R Moll I Lee I Schwechheimer K Franke WW The intermediate filament complement of the spectrum of nerve sheath neoplasms Lab Invest 1986 55 463 74 Pileri SA Grogan TM Harris NL Banks P Campo E Chan JKC et al review Tumours of histiocytes and accessory dendritic cells an immunohistochemical approach to classification from the International Lymphoma Study Group based on 61 cases Histopathology 2002 41 1 29 Chen Y T Stockert E Jungbluth A Tsang S Coplan KA Scanlan MJ et al Serological analysis of Melan A MART 1 a melanocyte specific protein homogeneously expressed in human melanomas Proc Natl Acad Sci 1996 93 5915 9 Jungbluth AA Busam KJ Gerald WL Stockert E Coplan KA Iversen K et al An anti Melan A monoclonal antibody for the detection of malignant melanoma in paraffin embedded tissues Am J Surg Pathol 1998 22 595 602 Jungbluth AA Iversen K Coplan K Williamson B Chen Y T Stockert T et al Expression of melanocyte associated markers gp 100 and Melan A MART 1 in angiomyolipomas Virchows Arch 1999 434 429 35 Donato R Functional roles of S100 proteins calcium binding proteins of the EF hand type review Biochim Biophys Acta 1999 1450 191 231 Chen YT Stockert E Tsang S2. lokalisiert oder verstreut wurden 88 5 durch den Antik rper markiert 3 Von 30 untersuchten Chondroblastomen zeigten alle eine starke Markierung der Chondroblasten mit dem Antik rper 4 Von typischen benignen Schwannomen waren 12 12 positiv mit dem Antik rper ebenso 2 4 maligne Schwannome Von Neurofibromen zeigten 6 6 eine schwache Expression von S100 mit Ausnahme einiger isolierter Zellen und einiger aal hnlicher Zellprozesse die deutlich positiv waren 5 Erw hnenswert ist dass S100 von 15 von 133 nichtmelanozytischen prim ren kutanen Neoplasmen exprimiert wurde und zwar von 7 16 ekkrinen Karzinomen 2 8 metastatischen viszeralen Karzinomen 2 2 malignen Schwannomen und 4 5 Leiomyosarkomen 2 Von den prim ren Adenokarzinomen wurden bei 24 25 84 der Eierst cke 12 15 80 der Speicheldr sen 28 36 78 des Endometriums 15 23 65 der Niere 12 20 60 der Brust 7 28 25 des Dickdarms Rektums 2 10 20 des Magens und 2 27 7 der Lunge Adenokarzinome durch den Antik rper positiv markiert Adenokarzinome von Speiser hre Gallenblase Pankreas und Prostata waren in dieser Studie alle negativ Die meisten der prim ren Neoplasmen die S100 exprimierten waren auch f r dieses Protein in metastatischen Herden positiv 22 Von Rhabdomyosarkomen wurden 7 60 12 durch den Antik rper markiert Die S100 positiven Tumore waren auch f r Vimentin und Desmin positiv 23 Anti Tyrosinase Klon T311 wurde an benignen und malig
3. Coplan KA Old LJ Immunophenotyping of melanomas for tyrosinase implications for vaccine development Proc Natl Acad Sci USA 1995 92 18 8125 8129 Garcia Borron JC Solano F Molecular anatomy of tyrosinase and its related proteins beyond the histidine bound metal catalytic center Pigment Cell Res 2002 15 3 162 173 Jungbluth AA Iversen K Coplan K Kolb D Stockert E Chen YT Old LJ Busam K T311 an anti tyrosinase monoclonal antibody for the detection of melanocytic lesions in paraffin embedded tissues Pathol Res Pract 2000 196 4 235 242 Clarkson KS Sturdgess IC Molyneux AJ The usefulness of tyrosinase in the immunohistochemical assessment of melanocytic lesions a comparison of the novel T311 antibody anti tyrosinase with S 100 HMB45 and A103 anti melan A J Clin Pathol 2001 54 3 196 200 Hofbauer GF Kamarashev J Geertsen R Boni R Dummer R Tyrosinase immunoreactivity in formalin fixed paraffin embedded primary and metastatic melanoma frequency and distribution J Cutan Pathol 1998 25 4 204 209 Slingluff CL Jr Petroni GR Yamshchikov GV Barnd DL Eastham S Galavotti H Patterson JW Deacon DH Hibbitts S Teates D Neese PY Grosh WW Chianese Bullock KA Woodson EM Wiernasz CJ Merrill P Gibson J Ross M Engelhard VH Clinical and immunologic results of a randomized phase II trial of vaccination using four melanoma peptides either administered in granulocyte macrophage colony stimulating factor in adjuvant o
4. PT Link R f PT100 PT101 Pour plus de d tails se r f rer au Guide d utilisation du PT Link Suivre la proc dure de pr traitement indiqu e dans la notice pour la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8004 Les param tres suivants doivent tre utilis s pour le PT Link temp rature de pr chauffage 65 temp rature et dur e du d masquage d Epitope 97 pendant 20 1 minutes refroidissement 65 Retirer chaque portoir ames Autostainer contenant les lames de la cuve du PT Link et plonger imm diatement les lames dans un r cipient une cuve par ex PT Link Rinse Station R f PT109 contenant du tampon de lavage EnVision FLEX Wash Buffer 20x Ref K8007 dilu temp rature ambiante Laisser les lames dans le tampon de lavage pendant 1 5 minutes Coupes incluses en paraffine le milieu de montage aqueux Dako Faramount R f S3025 est la m thode privil gi e d application de lamelles de protection Comme pr paration alternative des chantillons le d paraffinage et la restauration de l Epitope peuvent tre r alis s dans le PT Link l aide d une proc dure modifi e Se r f rer aux instructions du Guide d utilisation du PT Link Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre s ch es l air 60 C durant 1 heure immerg es dans du xyl ne et mont es l aide d un milieu de montage permanent Eviter d utiliser de l alcoo
5. d tection relatives aux proc dures d IHC pour plus d informations concernant les points suivants 1 Principe de proc dure 2 Mat riels requis mais non fournis 3 Conservation 4 Pr paration des chantillon 5 Proc dure de coloration 6 Contr le qualit 7 D pannage 8 Interpr tation de la coloration 9 Limites g n rales Cocktail d anticorps polyclonal de lapin et monoclonal de souris pr t l emploi fourni sous forme liquide dans un tampon contenant une prot ine stabilisante et 0 015 mol L d azide de sodium Anticorps polyclonal de lapin anti S100 Anticorps monoclonal de souris anti tyrosinase humaine clone T311 Isotype IgG2 kappa Anticorps monoclonal de souris anti Melan A humain clone A103 Isotype IgG1 kappa S100 S100 isol e partir de cerveau bovin Tyrosinase prot ine tyrosinase purifi e non glycosyl e recombinante compos e de 452 acides amin s provenant de la prot ine tyrosinase humaine mature de 511 acides amin s 11 Melan A prot ine recombinante exprim e dans E coli correspondant au Melan A 7 L anticorps anti S100 a t absorb en phase solide en utilisant des prot ines de plasma humain et de s rum bovin Dans les analyses par Western blot de prot ines humaines recombinantes S100 l anticorps marque fortement la S100B faiblement la S100A1 et tr s faiblement la S100A6 Aucune r action n a t observ e avec les autres prot ines S100 test es S100A2 S100A3 et
6. einer weiteren Studie mit 316 untersuchten F llen darunter 21 Nebennierenrindentumore 16 in die Nebenniere metastasierende Karzinome 10 Ph ochromozytome und 269 extraadrenale Karzinome markierte der Antik rper 14 14 Adenomen der Nebennierenrinde 7 7 Karzinomen der Nebennierenrinde 0 16 metastatischen Karzinomen der Nebenniere und 0 10 Ph ochromozytomen Von den brigen 269 extraadrenalen Karzinomen wurde nur ein einziger Fall eines ser sen Eierstock Karzinoms markiert In einer Studie mit 18 Angiomyolipomen wurden alle 18 F lle durch den Antik rper markiert 9 Ein weiterer Bericht schildert 3 untersuchte Angiomyolipome welche ausnahmslos durch den Antik rper markiert wurden 8 307770EFG_001 p 10 12 References Bibliographie Literaturhinweise 119799 001 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Orchard GE Comparison of immunohistochemical labeling of melanocyte differentiation antibodies melan A tyrosinase and HMB 45 with NKIC3 and S100 protein in the evaluation of benign naevi and malignant melanoma Histochem J 2000 32 475 81 Wick MR Swanson PE Rocamora A Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB 45 An immunohistochemical study of 200 paraffin embedded cutaneous tumors J Cutan Pathol 1988 15 201 7 Ye F Huang S W Dong H J Histiocytosis X S 100 protein peanut agglutinin and transmission electron microscopy study Am J Clin Pathol 1990
7. homogenous labeling was seen in all cases 1 In another study of primary malignant cutaneous melanomas 2 67 67 were positive with the antibody including 5 5 spindle cell and desmoplastic tumors In 27 cases of Langerhans histiocytosis 88 5 were labeled by the antibody this included localized as well as disseminated disease 3 Of 30 chondroblastomas examined all demonstrated a strong labeling of the chondroblasts with the antibody 4 Of typical benign schwannomas 12 12 were positive with the antibody as also 2 4 malignant schwannomas Of neurofibromas 6 6 showed weak expression of S100 except for some isolated cells and a number of eel like cell processes which were distinctively positive 5 Of note is that S100 was expressed by 15 of 133 non melanocytic primary cutaneous neoplasms i e 7 16 eccrine carcinomas 2 8 metastatic visceral carcinomas 2 2 malignant schwannomas and 4 5 leiomyosarcomas 2 Of primary adenocarcinomas 24 25 84 ovary 12 15 80 salivary gland 28 36 78 endometrium 15 23 65 renal 12 20 60 breast 7 28 25 colon rectum 2 10 20 stomach and 2 27 7 lung adenocarcinomas were positively labeled by the antibody Adenocarcinomas of the oesophagus gallbladder pancreas and prostate were all negative in this study Most of the primary neoplasms that expressed S100 were also positive for this protein in metastatic foci 22 Of rhabdomyosarcomas 7 60 12 were labeled by the antibody The S100 posi
8. junction of normal skin but is not detected in other normal cells 13 Pigmented parts of the eye such as the choroid and iris also contain melanocytes Expression of tyrosinase is also found in melanocytic lesions including benign nevi and the majority of primary and metastatic malignant melanomas and not in non melanocytic tumor types 13 14 15 Additionally tyrosinase can be recognized by autologous cytotoxic T cells from melanoma patients and therefore tyrosinase peptides have utility in melanoma vaccines 16 17 Melan A Isolated as a melanoma specific antigen is a transmembrane protein composed of 118 amino acids with uncertain function 7 The Melan A gene was cloned from a human melanoma cell line and its expression on melanomas is recognized by autologous cytotoxic T cells 19 Melan A is expressed in skin retina and the majority of cultured melanocytes and melanomas whereas a vast variety of other tissues and cancers tested do not express Melan A 7 18 19 However Melan A is expressed in angiomyolipomas 9 Along with Melan A seven other melanoma antigens have been identified MAGE 1 MAGE 3 tyrosinase gp100 gp75 BAGE 1 and GAGE 1 which are all recognized by autologous cytotoxic T cells 7 Refer to Dako s General Instructions for Immunohistochemical Staining or the detection system instructions of IHC procedures for 1 Principle of Procedure 2 Materials Required Not Supplied 3 Storage 4 Specimen Preparation 5 S
9. of the patient s clinical history and other diagnostic tests by a qualified pathologist Melan A MART 1 Tyrosinase T311 EC 1 14 18 1 100 A multigene family of low molecular weight MW between 9 000 and 13 000 Ca binding proteins The family comprises 19 members that are differentially expressed in a large number of cell types Thus S100B previously S100 is most abundant in glial cells of the central and peripheral nervous system in melanocytes chondrocytes and adipocytes whereas S100A1 previously S100A S100a is most abundant in cardiomyocytes slow twitch skeletal muscle cells salivary epithelial cells and renal cells Additionally S100B is found in tumor cells and subpopulations of neurons while S100A1 has also been detected in hippocampal neurons S100A6 is expressed by fibroblasts and smooth and heart muscle cells 5 Members of the S100 family have been implicated in the Ca dependent regulation of a variety of intracellular activities e g protein phosphorylation cell proliferation including neoplastic transformation and differentiation 10 Tyrosinase A copper glycoenzyme involved in the production of melanin pigments including both eumelanin and pheomelanin 11 12 In this process tyrosinase catalyzes the hydroxylation of L tyrosine to L dopa and the oxidation of L dopa to L dopaquinone 11 12 As a marker of melanocytic lineage tyrosinase is localized to melanocytes which can be found on the dermal epidermal
10. pattern is identical to the staining pattern described in Performance characteristics Counterstaining in hematoxylin is recommended using EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code K8018 After the staining procedure has been completed the sections must be air dried for 1 hour at 60 immersed in xylene and mounted using per manent mounting medium Alcohol should be avoided with permanent mounting as it may diminish reactivity of the red chromogen Positive and negative controls should be run simultaneously using the same protocol as the patient specimens The positive control tissue should include the appendix colon and skin and the cells structures should display reaction patterns as described for these tissues in Performance characteristics in all positive specimens Cells labeled by Anti S100 antibody display red nuclear and cytoplasmic staining Cells labeled by Anti Tyrosinase antibody display brown cytoplasmic and or perinuclear staining Cells labeled by Anti Melan A antibody display brown cytoplasmic staining Normal tissues Positive labeling with Anti S100 is observed in some Langerhans cells and melanocytes of the skin interdigitating reticulum cells in lymph nodes medullary epithelial reticular cells in the thymus chondrocytes in cartilagenous tissue adipocytes in some but not other biopsies myoepithelial cells in salivary glands and breast folliculostellate cells of the pituitary gl
11. pr sentent une coloration brune cytoplasmique et ou p rinucl aire Les cellules marqu es par l anticorps anti Melan A pr sentent une coloration brune cytoplasmique Tissus sains le marquage positif par l anticorps anti S100 est observ dans certaines cellules de Langerhans et certains m lanocytes de la peau les cellules r ticulaires interdigit es dans les ganglions lymphatiques les cellules r ticulaires pith liales m dullaires dans le thymus les chondrocytes dans le tissu cartilagineux les adipocytes dans certaines biopsies seulement les cellules myo pith liales des glandes salivaires et du sein les cellules folliculo stellaires de l hypophyse ainsi que les cellules de Schwann et les cellules gliales du tissu nerveux Une faible coloration est observ e dans les cellules pith liales des glandes mammaires et sudoripares Une r action n gative l anticorps a t observ e dans les h patocytes normaux l pith lium du canal biliaire l pith lium de la v sicule biliaire oesophage l estomac ainsi que les pith liums de l intestin gr le et du gros intestin les pith liums r naux et les cellules uroth liales et endoth liales 21 Dans le c lon les cellules satellites des nerfs p riph riques du plexus d Auerbach pr sentent une coloration cytoplasmique et nucl aire mod r e forte tandis que les adipocytes et les cellules ganglionnaires du plexus d Auerbach pr sentent une coloration c
12. 5 tumeurs cellules fusiformes et desmoplastiques sur 5 Dans 27 cas d histiocytose cellules de Langerhans 88 5 taient marqu s par l anticorps y compris des maladies localis es ainsi que diss min es 3 Sur 30 chondroblastomes examin s tous ont pr sent une forte coloration des chondroblastes avec cet anticorps 4 Pour les schwannomes b nins classiques 12 sur 12 taient positifs l anticorps ainsi que 2 schwannomes malins sur 4 Pour les neurofibromes 6 sur 6 ont pr sent une faible expression de la S100 except pour certaines cellules isol es et plusieurs processus cellules filiformes qui taient distinctement positives 5 Il est noter que la S100 tait exprim e par 15 n oplasmes cutan s primaires non m lanocytaires sur 133 soit 7 carcinomes eccrines sur 16 2 carcinomes visc raux m tastasiques sur 8 2 schwannomes malins sur 2 et 4 l iomyosarcomes sur 5 2 Parmi les ad nocarcinomes primaires 24 sur 25 84 ad nocarcinomes ovariens 12 sur 15 80 ad nocarcinomes des glandes salivaires 28 sur 36 78 ad nocarcinomes de l endom tre 15 sur 23 65 ad nocarcinomes r naux 12 sur 20 60 ad nocarcinomes mammaires 7 sur 28 25 ad nocarcinomes du c lon rectum 2 sur 10 20 ad nocarcinomes de l estomac et 2 sur 27 7 ad nocarcinomes pulmonaires taient marqu s positivement par l anticorps Les ad nocarcinomes de l oesophage de la v sicule biliaire du pancr as et
13. Mensch Katze Pferd Maus Ratte und Schwein nachgewiesen Bei der Anti Tyrosinase erfolgte Immunblotting an mit dem Tyrosinase Gen transfizierten L Zellen sowie den vier Tyrosinase mRNA exprimierenden Zelllinien SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 und SK MEL 37 11 In bereinstimmung mit fr heren Berichten erkannte Klon T311 in den Immunblots aller f nf Zelllinien einen Cluster von Proteinen mit Molekulargewichten zwischen 70 80 kDa 11 Eine weitere 55 kDa Bande wurde in Blots starker reaktiver Zelllinien SK MEL 19 1 gef rbt Dar ber hinaus waren Immunblots nicht transfizierter L Zellen sowie die drei keine Tyrosinase mRNA exprimierenden Zelllinien MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 und MZ2 MEL2 2 mit Klon T311 negativ 11 Ferner blieben in Immunfluoreszenz und Immunblottingtests auch mit dem tyrosinase hnlichen Protein 1 TRP 1 gp75 transfizierte L Zellen mit Klon T311 unreaktiv ein Anzeichen daf r dass dieser Antik rper nicht mit dem melanosomassoziierten Protein TRP 1 gp75 kreuzreagiert 11 Der Anti Melan A Antik rper markiert ein Proteinpaar von 20 22 kDa beim Western Blotting von Zelllysaten aus Melan A mRNA positiven Zelllinien w hrend in Melan A mRNA negativen Zelllinien keine Markierung nachgewiesen werden konnte 7 In den Immunpr zipitaten der Melan A positiven Zelllinien SK MEL 13 und SK MEL 19 markiert der Antik rper ein Melan A entsprechendes Proteinpaar mit einem Gewicht von 20 22 kDa w hrend in Melanom Zelllinien
14. Oe ako English Intended use Synonyms for antigen Summary and explanation Reagent provided 119799 001 CE DuoFLEX Cocktail Anti S100 Anti Tyrosinase Anti Melan A Ready to Use Dako Autostainer Autostainer Plus Code IK001 For in vitro diagnostic use DuoFLEX Cocktail Polyclonal Rabbit Anti S100 Monoclonal Mouse Anti Human Melan A Clone A103 and Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 Dako Autostainer Autostainer Plus is intended for use in immunohistochemistry together with Dako Autostainer Autostainer Plus instruments Polyclonal Rabbit Anti 100 labels cells expressing S100 and is useful for the identification of S100 positive neoplasms such as malignant melanoma 1 2 Langerhans histiocytosis 3 chondroblastoma 4 and schwannoma 5 A panel of antibodies including Polyclonal Anti S100 Code Z0311 has been applied by the International Lymphoma Study Group for the classification of tumors of suspected histiocytic dendritic cell type 6 Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 is useful for the identification of melanocytic lesions and melanoma Monoclonal Mouse Anti Human Melan A Clone A103 is useful for the identification of melanomas 7 8 and is also applicable as a useful marker for angiomyolipomas 9 The clinical interpretation of any staining or its absence should be complemented by morphological studies using proper controls and should be evaluated within the context
15. S100A4 20 Lors d un test ELISA indirect l anticorps ne pr sente aucune r action avec le plasma humain et le s rum bovin Comme le d montre l analyse immunohistochimique de coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine l anticorps pr sente une r action crois e avec la prot ine homologue la S100 chez l homme le chat le cheval la souris le rat et le porc Dans le cas de l anticorps anti tyrosinase un immunoblot a t r alis l aide de cellules L transfect es avec le g ne de la tyrosinase et sur quatre lign es cellulaires exprimant ARNm de la tyrosinase SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 et SK MEL 37 11 Conform ment des rapports ant rieurs un groupe de prot ines de poids mol culaire allant de 70 80 kDa a t reconnu par le clone T311 dans les immunoblots des cinq lign es cellulaires 11 Une bande suppl mentaire de 55 kDa tait color e dans les blots de lign es cellulaires fortement positives SK MEL 19 1 En outre les immunoblots de cellules L non transfect es et de trois lign es cellulaires MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 et MZ2 MEL2 2 n exprimant pas l ARNm de la tyrosinase taient n gatives au clone T311 11 Les cellules L transfect es par la prot ine 1 li e la tyrosinase TRP 1 gp75 n ont pas non plus r agi au clone T311 lors de tests d immunofluorescence et d immunoblot ce qui indique que l anticorps ne pr sente pas de r action crois e avec la prot
16. a S100B est pr sente dans les cellules tumorales et les sous populations de neurones alors que la S100A1 a galement t d tect e dans les neurones de l hippocampe La S100A6 est exprim e par les fibroblastes et les cellules musculaires lisses et cardiaques 5 Les membres de la famille S100 ont t impliqu s dans la r gulation d pendant du Ca de diverses activit s intracellulaires par exemple la phosphorylation des prot ines la prolif ration cellulaire y compris la transformation n oplasique et la diff rentiation 10 Tyrosinase la tyrosinase est une enzyme glycosyl e contenant du cuivre impliqu e dans la production des pigments de m lanine y compris l eumelanine et la ph om lanine 11 12 Lors du processus la tyrosinase catalyse l hydroxylation de la L tyrosine en L dopa et l oxydation de la L dopa en L dopaquinone 11 12 En tant que marqueur de la lign e m lanocytaire la tyrosinase est localis e dans les m lanocytes pouvant tre trouv s au niveau de la jonction derme piderme de la peau saine mais elle n est pas d tect e dans d autres cellules 13 Les parties pigment es de l il telles que la choroide et l iris contiennent galement des m lanocytes La tyrosinase est galement exprim e dans les l sions m lanocytaires y compris les grains de beaut b nins et dans la majorit des m lanomes malins primaires et m tastatiques mais elle n est pas exprim e dans les types de tumeurs n
17. alls es zu einer unerwarteten F rbung kommt die sich nicht durch Unterschiede bei Laborverfahren erkl ren l sst und auf ein Problem mit dem Antik rper hindeutet ist der technische Kundendienst von Dako zu verst ndigen Der Antik rper Cocktail eignet sich zur Markierung von formalinfixierten und paraffineingebetteten Gewebeschnitten Gewebeproben sollten in Schnitte von ca 4 um St rke geschnitten werden Es ist eine Vorbehandlung durch hitzeinduzierte Epitopdemaskierung HIER Verfahren erforderlich Optimale Ergebnisse k nnen durch Vorbehandlung der Gewebe mit EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 erzielt werden Entparaffinierte Schnitte Die Vorbehandlung der entparaffinierten formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitte sollte mit Dako PT Link Code Nr PT100 PT101 erfolgen Weitere Informationen hierzu siehe PT Link Benutzerhandbuch Vorbehandlung gem der Beschreibung in der Packungsbeilage f r EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code Nr K8004 durchf hren F r PT Link sollten die folgenden Parameter verwendet werden Vorw rmtemperatur 65 Temperatur und Zeit f r E pitopdemaskierung 97 f r 20 1 Minuten auf 65 abk hlen Das Autostainer Objektktr gergestell mit den Objekttr gern aus dem PT Link Beh lter herausnehmen und die Objekttr ger sofort in einen Beh lter z B PT Link Rinse Station Code Nr PT109 mit verd nntem auf Zimmertemp
18. and and Schwann cells and glial cells of nervous tissue Weak labeling is found in epithelial cells of the mammary and sweat glands A negative reaction with the antibody is observed in normal hepatocytes bile duct epithelium gall bladder epithelium oesophagus stomach and small and large intestinal epithelia renal epithelia and urothelial and endothelial cells 21 In colon the satellite cells of the peripheral nerves in the plexus of Auerbach show a moderate to strong nuclear and cytoplasmic staining reaction whereas adipocytes and ganglion cells in the plexus of Auerbach show a weak to moderate nuclear and cytoplasmic staining reaction Anti Tyrosinase clone T311 was tested with a panel of 33 normal tissues using immunohistochemistry and only skin was positive 13 In normal skin melanocytes were immunoreactive while basal keratinocytes of the skin remained negative 11 13 Anti Melan A Clone A103 labels skin whereas stomach colon lung liver spleen kidney testis urinary bladder breast ovary smooth muscle and adipose tissues are not labelled by the antibody 7 9 The steroid producing cells of adrenal cortex ovary and testis have been reported to be labeled by the antibody 8 Abnormal tissues Of malignant melanomas Anti S100 labeled 31 31 100 conventional cutaneous 23 24 96 metastatic including 10 amelanotic 6 6 desmoplastic and 1 1 myxoid malignant melanomas In 30 benign and 15 dysplastic naevi universal
19. and cytokeratin J Pathol 1988 155 127 32 307770EFG_001 p 11 12 R f rence du catalogue Limites de temp rature Catalogue number X Temperature limitation Bestellnummer Zul ssiger Temperaturbereich Consult instructions for use Consulter les instructions d utilisation Gebrauchsanweisung beachten Manufacturer Batch code Fabricant Code du lot Hersteller Chargenbezeichnung Use by Utiliser jusque Verwendbar bis Ec REP PT0039 Rev C Edition 03 09 119799 001 Authorized representative in the European Community Repr sentant Autoris dans la Communaut Europ enne Autorisierter Reprasentant in der EU In vitro diagnostic medical device Dispositif m dical de diagnostic in vitro In vitro Diagnostikum su Dako North America Inc 6392 Via Real Carpinteria California 93013 USA Tel 805 566 6655 Fax 805 566 6688 Technical Support 800 424 0021 Customer Service 800 235 5763 Ec REP Dako Denmark A S Produktionsvej 42 DK 2600 Glostrup Denmark Tel 45 4485 9500 Fax 45 4485 9595 www dako com 307770EFG_001 p 12 12
20. de la prostate taient tous n gatifs dans cette tude La plupart des n oplasmes primaires qui exprimaient la S100 taient galement positifs cette prot ine dans les foyers m tastasiques 22 Pour ce qui est des rhabdomyosarcomes 7 sur 60 12 taient marqu s par l anticorps Les tumeurs positives la S100 taient galement positives la vimentine et la desmine 23 L anticorps anti tyrosinase clone T311 a t test sur des l sions m lanocytaires b nignes et malignes et il a marqu la majorit des grains de beaut b nins et des m lanomes test s On a observ une faible immunor activit de la tyrosinase dans les m lanomes de type cellulaire fusiforme et desmoplastique 11 13 14 15 La sp cificit de l anticorps anti tyrosinase pour les l sions m lanocytaires a t d montr e en colorant plus de 70 types de tumeurs non m lanocytaires diff rentes n ayant aucune immunor activit Ceci indique que l expression de la tyrosinase est limit e aux cellules provenant d une lign e m lanocytaire 13 Dans des m lanomes m tastatiques l anticorps anti Melan A clone A103 a marqu 16 cas sur 21 qui pr sentaient une coloration cytoplasmique homogene dans gt 80 90 des cellules des m lanomes l exception d un cas pr sentant une coloration localis e 7 Lors d une autre tude l anticorps a marqu 10 n vi m lanocytaires b nins sur 10 7 m lanomes primaires sur 10 et 61 m lanomes m ta
21. e mouse rat and swine For Anti Tyrosinase immunoblotting was performed using L cells transfected with the tyrosinase gene and on four cell lines that express tyrosinase mRNA SK MEL 13 SK MEL 19 SK MEL 30 and SK MEL 37 11 Consistent with previous reports a cluster of proteins ranging from 70 80 kDa was recognized by clone T311 in immunoblots of all five cell lines 11 An additional 55 kDa band was stained in blots from cell lines that are strongly reactive SK MEL 19 1 Furthermore immunoblots of untransfected L cells and three cell lines that do not express tyrosinase mRNA MZ2 MEL3 1 SK MEL 187 and MZ2 MEL2 2 were negative with clone T311 11 L cells transfected with the tyrosinase related protein 1 TRP 1 gp75 were also unreactive with clone T311 in immunofluorescent and immunoblotting assays indicating this antibody does not cross react with the melanosome associated protein TRP 1 gp75 11 Anti Melan A antibody labels a protein doublet of 20 22 kDa in Western blotting of cell Iysates from Melan A mRNA positive cell lines whereas no labeling is detected in Melan A mRNA negative cell lines 7 In immunoprecipitates of Melan A positive cell lines SK MEL 13 and SK MEL 19 the antibody labels a protein doublet of 20 22 kDa corresponding to Melan A whereas no precipitation is detected in Melan A mRNA negative melanoma cell lines 7 1 For professional users 2 This product contains sodium azide NaN a chemical highl
22. eht ist zur Verwendung in der Immunhistochemie in Verbindung mit Dako Autostainer Autostainer Plus Ger ten bestimmt Der polyklonale Kaninchen Anti S100 Antik rper markiert Zellen die S100 exprimieren und dient zur Erkennung S100 positiver Neoplasien wie z B malignem Melanom 1 2 Langerhans Zell Histiozytose 3 Chondroblastom 4 und Schwannom 5 Die International Lymphoma Study Group hat ein Antik rper Panel zu dem auch Polyclonal Anti S100 Code Nr Z0311 geh rt zur Klassifizierung von Tumoren verd chtiger histiozytischer dendritischer Zellen angewandt 6 Der monoklonale Maus Anti Human Tyrosinase Antik rper Klon T311 dient der Erkennung von Melanozytenl sionen und Melanomen Der monoklonale Maus Anti Human Melan A Antik rper Klon A103 dient der Erkennung von Melanomen 7 8 und ist ebenfalls ein hilfreicher Marker f r Angiomyolipome 9 Die klinische Auswertung einer eventuell eintretenden F rbung sollte durch morphologische Studien mit ordnungsgem en Kontrollen erg nzt werden und von einem qualifizierten Pathologen unter Ber cksichtigung der Krankengeschichte und anderer Diagnostiktests des Patienten vorgenommen werden Melan A MART 1 Tyrosinase T311 EC 1 14 18 1 S100 eine Multigenfamilie von Ca bindenden Proteinen mit niedrigem Molekulargewicht MW 9 000 13 000 Die Familie umfasst 19 Mitglieder die differenziell in einer Vielzahl von Zelltypen exprimiert werden S100B fr her S100 ist daher am h ufigs
23. en Autoprogram MELct ohne Gegenf rbung oder MELcth mit Gegenf rbung Alle Inkubationsschritte sollten bei Raumtemperatur durchgef hrt werden N here Einzelheiten bitte dem Benutzerhandbuch f r das jeweilige Ger t entnehmen Wenn die F rbeprotokolle auf dem verwendeten Dako Autostainer Ger t nicht verf gbar sind bitte den technischen Kundendienst von Dako verst ndigen Optimale Bedingungen k nnen je nach Probe und Pr parationsverfahren unterschiedlich sein und sollten vom jeweiligen Labor selbst ermittelt werden Falls der beurteilende Pathologe eine andere F rbungsintensit t w nscht kann ein Anwendungsspezialist oder Kundendiensttechniker von Dako bei der Neuprogrammierung des Protokolls helfen Die Leistung des angepassten Protokolls muss verifiziert werden indem gew hrleistet wird dass das F rbemuster mit dem unter Leistungsmerkmale beschriebenen F rbemuster identisch ist Die Gegenf rbung mit H matoxylin sollte mit EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K8018 ausgef hrt werden Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte bei 60 f r 1 Stunde luftgetrocknet werden in Xylol getaucht und mit einem permanenten Eindeckmedium eingedeckt werden Beim permanenten Eindecken sollte Alkohol vermieden werden da es die Reaktionsf higkeit des roten Chromogens einschr nken kann Positiv und Negativkontrollen sollten zur gleichen Zeit und mit demselben Protokoll wie die Patie
24. eratur gebrachtem EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code Nr K8007 eintauchen Die Objekttr ger f r 1 5 Minuten im Wash Buffer belassen Paraffineingebettete Schnitte Die bevorzugte Eindeckmethode ist die Verwendung eines w ssrigen Eindeckmediums Dako Faramount Code Nr S3025 Alternativ k nnen Entparaffinierung und Epitopdemaskierung im PT Link unter Verwendung eines modifizierten Verfahrens durchgef hrt werden Weitere Informationen finden Sie im PT Link Benutzerhandbuch Nach Abschluss des F rbeverfahrens m ssen die Schnitte bei 60 f r 1 Stunde luftgetrocknet werden in Xylol getaucht und mit einem permanenten Eindeckmedium eingedeckt werden Beim permanenten Eindecken sollte Alkohol vermieden werden da es die Reaktionsf higkeit des roten Chromogens einschr nken kann Vor dem Eindecken und w hrend der Vorbehandlung oder des anschlie enden immunhistochemischen F rbeverfahrens d rfen die Gewebeschnitte nicht austrocknen F r eine bessere Haftung der Gewebeschnitte an den Glas Objekttr gern werden Dako FLEX IHC Microscope Slides Code Nr K8020 empfohlen Als Visualisierungssystem wird EnVision DuoFLEX Doublestain System Dako Autostainer Autostainer Plus Code Nr K6807 empfohlen Die F rbeschritte und Inkubationszeiten sind in der Software der Dako Autostainer Autostainer Plus Ger te mit den folgenden Protokollen vorprogrammiert Matrix Protokoll DuoFLEX2 200 uL Abgabevolumen oder DuoFLEX3 300 uL Abgabevolum
25. ine associ e aux m lanosomes TRP 1 gp75 11 L anticorps anti Melan A marque un doublet prot ique de 20 22 kDa au cours d analyses par Western blot de lysats cellulaires issus de lign es cellulaires positives en ARNm d antig ne Melan A tandis qu aucun marquage n a t constat pour des lign es cellulaires n gatives en ARNm d antig ne Melan A 7 Dans les immunopr cipit s de lign es cellulaires SK MEL 13 et SK MEL 19 positives au Melan A l anticorps marque un doublet prot ique de 20 22 kDa correspondant au Melan A alors qu aucune pr cipitation n est d tect e dans les lign es cellulaires n gatives ARNm du Melan A 7 Pour utilisateurs professionnels 2 Ce produit contient de l azide de sodium NaNs produit chimique hautement toxique dans sa forme pure Aux concentrations du produit bien que non class comme dangereux l azide de sodium peut r agir avec le cuivre et le plomb des canalisations et former des accumulations d azides m talliques hautement explosives Lors de l limination rincer abondamment l eau pour viter toute accumulation d azide m tallique dans les canalisations 3 Comme avec tout produit d origine biologique respecter les proc dures de manipulation appropri es Porter un quipement de protection appropri pour viter le contact avec les yeux et la peau 5 Les solutions non utilis es doivent tre limin es conform ment aux r glementations locales et nationa
26. kdarm zeigen die Satellitenzellen der peripheren Nerven im Auerbach Plexus eine m ige bis starke nukle re und zytoplasmatische Farbreaktion w hrend Adipozyten und Ganglienzellen im Auerbach Plexus eine schwache bis m ige nukle re und zytoplasmatische Farbreaktion zeigen Anti Tyrosinase Klon T311 wurde mit einem Panel von 33 gesunden Geweben immunhistochemisch untersucht wobei nur Hautgewebe eine positive Reaktion zeigte 13 In gesunder Haut waren die Melanozyten immunreaktiv die basalen Keratinozyten der Haut blieben hingegen negativ 11 13 Anti Melan A Klon A103 markiert Hautproben w hrend Proben von Magen Dickdarm Lunge Leber Milz Niere Hoden Harnblase Brust Eierst cken glatter Muskulatur und Fettgewebe dagegen nicht markiert werden 7 9 Die steroidproduzierenden Zellen von Nebennierenrinde Eierst cken und Hoden wurden Berichten zufolge durch den Antik rper markiert 8 Pathologische Gewebe Von den malignen Melanomen markierte Anti S100 31 31 100 konventionellen kutanen 23 24 96 metastatischen darunter 10 amelanotischen 6 6 desmoplastischen und 1 1 myxoiden malignen Melanomen In 30 benignen und 15 dysplastischen Naevi wurde in allen F llen eine universale homogene Markierung beobachtet 1 In einer anderen Studie prim rer maligner kutaner Melanome 2 waren 67 67 100 positiv mit dem Antik rper darunter 5 5 Spindelzellen und desmoplastische Tumore In 27 F llen von Langerhans Zell Histiozytose
27. kontrolle 7 Fehlersuche und behebung 8 Auswertung der F rbung 9 Allgemeine Beschr nkungen Gebrauchsfertiger Cocktail aus polyklonalem Kaninchen und monoklonalem Maus Antik rper in fl ssiger Form in einem Puffer der stabilisierendes Protein und 0 015 mol L Natriumazid enth lt Polyklonaler Kaninchen Anti S100 Monoklonaler Maus Anti Human Tyrosinase Klon T311 Isotyp IgG2 kappa Monoklonaler Maus Anti Human Melan A Klon A103 Isotyp IgG kappa S100 Aus Rinderhirn isoliertes S100 Tyrosinase Gereinigtes rekombinantes nicht glykosyliertes Tyrosinaseprotein aus 452 Aminos uren des aus insgesamt 511 Aminos uren bestehenden reifen humanen Tyrosinaseproteins 11 Melan A Rekombinantes Protein in E coli exprimiert und Melan A entsprechend 7 Der S100 Antik rper wurde einer Festphasen Absorption mit menschlichen Plasmaproteinen und mit Serumproteinen vom Rind unterzogen Beim Western Blotting von gereinigten menschlichen rekombinanten S100 Proteinen markiert der Antik rper S100B stark S100A1 schwach und S100A6 sehr schwach Bei den anderen getesteten S100 Proteinen S100A2 S100A3 und S100A4 wurde keine Reaktion beobachtet 20 Beim indirekten ELISA Verfahren zeigt der Antik rper keine Reaktion mit Humanplasma und Rinderserum Durch immunhistochemische Untersuchungen an formalinfixierten paraffineingebetteten Gewebeschnitten wurde eine Kreuzreaktivit t dieses Antik rpers mit dem S100 quivalenten Protein von
28. l comme milieu de montage permanent car il peut diminuer la r activit de la solution chromog ne rouge Avant montage les coupes tissulaires ne doivent pas s cher lors du pr traitement ni lors de la proc dure de coloration immunohistochimique qui suit Pour une meilleure adh rence des coupes de tissus sur les lames de verre il est recommand d utiliser des lames Dako FLEX IHC Microscope Slides R f K8020 Le systeme de visualisation recommand est le EnVision DuoFLEX Doublestain System Dako Autostainer Autostainer Plus R f K6807 Les tapes de coloration et d incubation sont pr programm es dans le logiciel des instruments Dako Autostainer Autostainer Plus a l aide des protocoles suivants Protocole mod le DuoFLEX2 volume de distribution 200 uL ou DuoFLEX3 volume de distribution 300 uL Programme automatique MELct sans contre coloration ou MELcth avec contre coloration Toutes les tapes d incubation doivent tre effectu es a temp rature ambiante Pour plus de d tails se r f rer au Manuel de l op rateur sp cifique l instrument Si les protocoles ne sont pas disponibles sur l instrument Dako Autostainer utilis contacter le service technique de Dako Les conditions optimales peuvent varier en fonction du pr l vement et des m thodes de pr paration et doivent tre d termin es par chaque laboratoire individuellement Si le pathologiste qui r alise l amp valuation d sire une inte
29. l tumors of the testis and 3 4 Sertoli Leydig cell tumors of the ovary were labeled by the antibody In another study of 316 cases including 21 adrenal cortical tumors 16 metastatic carcinomas to the adrenal 10 pheochromocytomas and 269 extra adrenal carcinomas the antibody labeled 14 14 adrenal cortical adenomas 7 7 adrenal cortical carcinomas 0 16 metastatic carcinomas to the adrenal and 0 10 pheochromocytomas Of the 269 extra adrenal carcinomas a single ovarian serous carcinoma was labeled In a study of 18 angiomyolipomas all 18 were labeled by the antibody 9 In another report all three angiomyolipomas tested were labeled by the antibody 8 Ref IK001 Pour utilisation diagnostique in vitro Le cocktail DuoFLEX constitu de l anticorps polyclonal de lapin anti S100 de l anticorps monoclonal de souris anti Melan A humain clone A103 et de l anticorps monoclonal de souris anti tyrosinase humaine clone T311 Dako Autostainer Autostainer Plus est pr vu pour tre utilis en immunohistochimie avec les appareils Dako Autostainer Autostainer Plus L anticorps polyclonal de lapin anti S100 marque les cellules exprimant la S100 et facilite l identification des n oplasmes positifs la S100 comme le m lanome malin 1 2 l histiocytose cellules de Langerhans 3 le chondroblastome 4 et le schwannome 5 Un groupe d anticorps comprenant l anticorps polyclonal Anti S100 R f Z0311 a t appliqu par l International Lym
30. les Conserver entre 2 et 8 Ne pas utiliser apr s la date limite de p remption indiqu e sur le flacon Si les r actifs sont conserv s dans des conditions autres que celles indiqu es celles ci doivent tre valid es par l utilisateur Il n y a aucun signe vident indiquant l instabilit de ce produit Par cons quent des contr les positifs et n gatifs doivent tre test s en m me temps que les chantillons de patients Si une coloration inattendue est observ e qui ne peut tre expliqu e par un changement des proc dures du laboratoire et en cas de suspicion d un probl me li l anticorps contacter l assistance technique de Dako L anticorps peut tre utilis pour le marquage des coupes tissulaires incluses en paraffine et fix es au formol L paisseur des coupes d chantillons de tissu doit tre d environ 4 um Le pr traitement avec un d masquage d pitope induit par la chaleur HIER est n cessaire Des r sultats optimaux sont obtenus en pr traitant les tissus l aide de la EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x R f K8004 307770EFG_001 p 5 12 Proc dure de coloration y compris le mat riel requis mais non fourni Interpr tation de la coloration Caract ristiques de performance 119799 001 Coupes d paraffin es le pr traitement des coupes tissulaires fix es au formol et incluses en paraffine puis d paraffin es est recommand l aide du Dako
31. melanozytischen L sionen wie benignen Naevi bei der Mehrzahl der prim ren und metastatisierenden malignen Melanome und nicht bei nicht melanozytischen Tumortypen vor 13 14 15 Au erdem wird die Tyrosinase durch autologe zytotoxische T Zellen von Melanompatienten erkannt weshalb Tyrosinasepeptide in Impfstoffen gegen Melanome eingesetzt werden 16 17 Melan A isoliert als ein melanomspezifisches Antigen ist es ein Transmembranprotein mit ungekl rter Funktion das aus 118 Aminos uren besteht 7 Das Melan A Gen wurde aus einer menschlichen Melanomzelllinie geklont und seine Expression auf Melanomen wird von autologen zytotoxischen T Zellen erkannt 19 Melan A wird auf Zellen der Haut der Netzhaut und dem Gro teil der Melanozyten und Melanome aus Kultur exprimiert w hrend der weit berwiegende Teil anderer untersuchter Gewebe und Karzinome Melan A nicht exprimiert 7 18 19 Melan A wird jedoch in Angiomyolipomen exprimiert 9 Neben Melan A wurden noch sieben weitere Melanomantigene identifiziert MAGE 1 MAGE 3 Tyrosinase gp100 gp75 BAGE 1 ind GAGE 1 Diese werden alle von autologen zytotoxischen T Zellen erkannt 7 Folgende Angaben bitte den Allgemeinen Richtlinien zur immunhistochemischen F rbung von Dako oder den Anweisungen des Detektionssystems f r IHC Verfahren entnehmen 1 Verfahrensprinzip 2 Erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 3 Aufbewahrung 4 Vorbereitung der Probe 5 F rbeverfahren 6 Qualit ts
32. nen melanozytischen L sionen getestet Es markierte die meisten untersuchten benignen Naevi und Melanome Eine nur geringe Tyrosinase Immunreaktivit t wurde bei desmoplastischen und Spindelzellmelanomen beobachtet 11 13 14 15 Die Spezifit t von Anti Tyrosinase f r melanozytische L sionen wurde durch Immunf rbungen an ber 70 verschiedenen nicht melanozytischen Tumortypen aufgezeigt die durchweg keine Immunreaktivit t aufweisen was darauf hindeutet dass die Tyrosinase Expression auf Zellen melanozytischen Ursprungs beschr nkt ist 13 Bei metastatischen Melanomen wurden 16 21 F llen durch Anti Melan A Klon A103 markiert und zeigten eine positive homogene zytoplasmatische F rbung in ber 80 90 der Zellen Nur in einem Fall kam es zu einer rtlich begrenzten F rbung 7 In einer weiteren Studie mit 10 benignen Melanozyten Naevi 10 prim ren und 75 metastatischen Melanomen markierte der Antik rper 10 10 F llen der benignen Melanozyten Naevi 7 10 der prim ren und 61 75 der metastatischen Melanome 8 Von 111 Karzinomen haupts chlich Adenokarzinomen und Plattenepithelkarzinomen 40 Keimzelltumoren und 33 diversen epitheloiden Nicht Melanozyten Tumoren wurde kein einziger Fall durch den Antik rper markiert Der Antik rper markierte 5 5 Adenomen der Nebennierenrinde 16 16 prim ren und 13 13 metastatischen Nebennierenrindenkarzinomen sowie 4 4 Leydig Zelltumoren des Hodens und 3 4 Sertoli Leydig Zelltumoren der Eierst cke In
33. nsit de coloration diff rente un sp cialiste d application sp cialiste du service technique de Dako peut tre contact pour obtenir des informations sur la reprogrammation du protocole V rifier que l ex cution du protocole modifi est toujours valide en v rifiant que le sch ma de coloration est identique au sch ma de coloration d crit dans les Caract ristiques de performance Il est recommand d effectuer une contre coloration l aide d h matoxyline EnVision FLEX Hematoxylin Dako Autostainer Autostainer Plus R f K8018 Une fois la proc dure de coloration termin e les coupes doivent tre s ch es l air 60 durant 1 heure immerg es dans du xyl ne et mont es l aide d un milieu de montage permanent viter d utiliser de l alcool comme milieu de montage permanent car il peut diminuer la r activit de la solution chromog ne rouge Des contr les positifs et n gatifs doivent tre r alis s en m me temps et avec le m me protocole que les chantillons du patient Le contr le de tissu positif doit comprendre l appendice le c lon et la peau et les cellules structures doivent pr senter les sch mas de r action d crits pour ces tissus dans les Caract ristiques de performance pour tous les chantillons positifs Les cellules marqu es par l anticorps anti S100 pr sentent une coloration rouge cytoplasmique et nucl aire Les cellules marqu es par l anticorps anti tyrosinase
34. ntenproben getestet werden Das positive Kontrollgewebe sollte Appendix Kolon und Haut enthalten und die Zellen Strukturen m ssen in allen positiven Proben die f r dieses Gewebe unter Leistungsmerkmale beschriebenen Reaktionsmuster aufweisen 307770EFG_001 p 9 12 Auswertung der F rbung Leistungsmerkmale 119799 001 Mit dem Anti S100 Antik rper markierte Zellen weisen eine rote nukle re und zytoplasmatische F rbung auf Mit dem Anti Tyrosinase Antik rper markierte Zellen weisen eine braune zytoplasmatische und oder perinukle re F rbung auf Mit dem Anti Melan A Antik rper markierte Zellen weisen eine braune zytoplasmatische F rbung auf Gesunde Gewebe Positive Markierungen mit Anti S100 werden in einigen Langerhans Zellen und Melanozyten der Haut interdigitierenden Retikulumzellen in Lymphknoten medull ren Retikulumepithelzellen im Thymus Chondrozyten im Knorpelgewebe Adipozyten in einigen aber nicht allen Biopsien Myoepithelzellen in den Speicheldr sen und in der Brustdr se follikulostellaren Zellen der Hypophyse sowie Schwann Zellen und Gliazellen des Nervengewebes beobachtet Schwache Markierungen treten in Epithelzellen der Brust und Schwei dr sen auf Eine negative Reaktion mit dem Antik rper wird in gesunden Hepatozyten Gallengang und Gallenblasenepithelien in der Speiser hre und im Magen in D nn und Dickdarmepithelien Nierenepithelien sowie in Urothel und Endothelzellen beobachtet 21 Im Dic
35. ochemical staining procedure For greater adherence of tissue sections to glass slides the use of Dako FLEX IHC Microscope Slides Code K8020 is recommended 307770EFG_001 p 2 12 Staining procedure including materials required but not supplied Staining interpretation Performance characteristics 119799 001 The recommended visualization system is EnVision DuoFLEX Doublestain System Dako Autostainer Autostainer Plus Code K6807 The staining steps and incubation times are pre programmed into the software of Dako Autostainer Autostainer Plus instruments using the following protocols Template protocol DuoFLEX2 200 uL dispense volume or DuoFLEX3 300 uL dispense volume Autoprogram MELct without counterstaining or MELcth with counterstaining All incubation steps should be performed at room temperature For details please refer to the Operator s Manual for the dedicated instrument If the protocols are not available on the used Dako Autostainer instrument please contact Dako Technical Services Optimal conditions may vary depending on specimen and preparation methods and should be determined by each individual laboratory If the evaluating pathologist should desire a different staining intensity a Dako Application Specialist Technical Service Specialist can be contacted for information on re programming of the protocol Verify that the performance of the adjusted protocol is still valid by evaluating that the staining
36. on m lanocytaires 13 14 15 De plus la tyrosinase peut tre reconnue par les cellules T cytotoxiques autologues chez des patients atteints de m lanomes et par cons quent les peptides de la tyrosinase sont utiles dans les vaccins contre le m lanome 16 17 Melan A le Melan A isol en tant qu antigene sp cifique des m lanomes est une prot ine transmembranaire constitu e de 118 acides amin s dont la fonction est incertaine 7 Le g ne Melan A a t clon partir d une lign e cellulaire de m lanome humain et son expression dans les m lanomes est reconnue par les lymphocytes T cytotoxiques autologues 19 Le Melan A est exprim dans la peau la r tine et la majorit des m lanocytes et m lanomes mis en culture tandis qu une grande vari t d autres tissus et de cancers test s n expriment pas le Melan A 7 18 19 Cependant le Melan A est exprim dans les angiomyolipomes 9 Outre le Melan A sept autres antigenes des m lanomes ont t identifi s MAGE 1 MAGE 3 tyrosinase gp100 gp75 BAGE 1 et GAGE 1 qui sont tous reconnus par les lymphocytes T cytotoxiques autologues 7 307770EFG_001 p 4 12 R actifs fournis Immunog ne Sp cificit Pr cautions Conservation Pr paration des chantillons y compris le mat riel requis mais non fourni 119799 001 Se reporter aux Instructions g n rales de coloration immunohistochimique de Dako ou aux instructions du syst me de
37. phoma Study Group groupe d tude international des lymphomes pour la classification des tumeurs soup onn es d tre de type histiocytaire dendritique 6 L anticorps monoclonal de souris anti tyrosinase humaine clone T311 est utile pour l identification de l sions m lanocytaires et du m lanome L anticorps monoclonal de souris anti Melan A humain clone A103 est utile pour l identification de m lanomes 7 8 et c est galement un marqueur utile des angiomyolipomes 9 L interpr tation clinique de toute coloration ou son absence doit tre compl t e par des tudes morphologiques en utilisant des contr les appropri s et doit tre valu e en fonction des ant c dents cliniques du patient et d autres tests diagnostiques par un pathologiste qualifi Melan A MART 1 tyrosinase T311 EC 1 14 18 1 100 famille multig nique de prot ines de liaison Ca de faible poids mol culaire MW entre 9 000 et 13 000 La famille est compos e de 19 membres l expression diff rentielle dans un grand nombre de types cellulaires Ainsi la prot ine S100B anciennement S100 est plus abondante dans les cellules gliales du syst me nerveux p riph rique et central dans les m lanocytes les chondrocytes et les adipocytes tandis que la S100A1 anciennement S100A S100a est plus abondante dans les cardiomyocytes les cellules des muscles stri s rythme lent les cellules pith liales salivaires et les cellules r nales De plus l
38. r pulsed on dendritic cells J Clin Oncol 2003 21 21 4016 4026 Zajac P Oertli D Marti W Adamina M Bolli M Guller U Noppen C Padovan E Schultz Thater E Heberer M Spagnoli G Phase I II clinical trial of a nonreplicative vaccinia virus expressing multiple HLA A0201 restricted tumor associated epitopes and costimulatory molecules in metastatic melanoma patients Hum Gene Ther 2003 14 16 1497 1510 Coulie PG Brichard V Van Pel A W lfel T Schneider J Traversari C et al A new gene coding for a differentiation antigen recognized by autologous cytolytic T lymphocytes on HLA A2 melanomas J Exp Med 1994 180 35 42 Kawakami Y Eliyahu S Delgado CH Robbins PF Rivoltini L Topalian SL et al Cloning of the gene coding for a shared human melanoma antigen recognized by autologous T cells infiltrating into tumor Proc Natl Acad Sci 1994 91 3515 9 lg EC Schafer BW Heizmann CW Expression pattern of S100 calcium binding proteins in human tumors Int J Cancer 1996 68 325 32 Vanstapel M J Gatter KC de Wolf Peeters C Mason DY Desmet VD New sites of human S 100 immunoreactivity detected with monoclonal antibodies Am J Clin Pathol 1986 85 160 8 Herrera GA Turbat Herrera EA Lott RL S 100 protein expression by primary and metastatic adenocarcinomas Am J Clin Pathol 1988 89 168 76 Coindre J M de Mascarel A Trojani M de Mascarel Pages A Immunohistochemical study of rhabdo myosarcoma Unexpected staining with S100 protein
39. s Pre treatment of deparaffinized formalin fixed paraffin embedded tissue sections is recommended using Dako PT Link Code PT100 PT101 For details please refer to the PT Link User Guide Follow the pre treatment procedure outlined in the package insert for EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 The following parameters should be used for PT Link Pre heat temperature 65 epitope retrieval temperature and time 97 for 20 1 minutes cool down to 65 Remove Autostai ner slide rack with slides from the PT Link tank and immediately dip slides into a jar tank e g PT Link Rinse Station Code PT109 containing diluted room temperature EnVision FLEX Wash Buffer 20x Code K8007 Leave slides in Wash Buffer for 1 5 minutes Paraffin embedded sections Using aqueous mounting medium Dako Faramount Code S3025 is the preferred coverslipping method As alternative specimen preparation both deparaffinization and epitope retrieval can be performed in the PT Link using a modified procedure See the PT Link User Guide for instructions After the staining procedure has been completed the sections must be air dried at 60 C for 1 hour immersed in xylene and mounted using permanent mounting medium Alcohol should be avoided with permanent mounting as it may diminish reactivity of the red chromogen Before mounting the tissue sections should not dry out during the pre treatment or during the following immunohist
40. statiques sur 75 8 Sur 111 carcinomes principalement des ad nocarcinomes et des carcinomes cellules squameuses 40 tumeurs cellules germinales et 33 tumeurs pith lio des non m lanocytaires diverses aucun marquage par l anticorps n a t observ L anticorps a marqu 5 adenomes corticosurr naux sur 5 16 carcinomes corticosurr naux primaires sur 16 et 13 carcinomes corticosurr naux m tastatiques sur 13 ainsi que 4 tumeurs des cellules de Leydig du testicule sur 4 et 3 tumeurs des cellules de Sertoli Leydig de l ovaire sur 4 Lors d une autre tude portant sur 316 cas dont 21 tumeurs corticosurr nales 16 carcinomes m tastatiques de la surr nale 10 ph amp ochromocytomes et 269 carcinomes extra surr naux l anticorps a marqu 14 ad nomes corticosurr naux sur 14 7 carcinomes corticosurr naux sur 7 0 carcinome m tastatique de la surr nale sur 16 et O ph ochromocytome sur 10 Parmi les 269 carcinomes extra surr naux un seul carcinome s reux de l ovaire a t marqu Lors d une tude 18 angiomyolipomes sur 18 ont t marqu s par l anticorps 9 Dans un autre rapport les trois angiomyolipomes test s ont t marqu s par l anticorps 8 Code Nr IK001 Zur In vitro Diagnostik Der Antik rper Cocktail DuoFLEX der aus polyklonalem Kaninchen Anti S100 monoklonalem Maus Anti Human Melan A Klon A103 und monoklonalem Maus Anti Human Tyrosinase Klon 1311 Dako Autostainer Autostainer Plus best
41. taining Procedure 6 Quality Control 7 Troubleshooting 8 Interpretation of Staining 9 General Limitations Ready to use polyclonal rabbit and monoclonal mouse antibody cocktail provided in liquid form in a buffer containing stabilizing protein and 0 015 mol L sodium azide Polyclonal Rabbit Anti S100 Monoclonal Mouse Anti Human Tyrosinase Clone T311 Isotype IgGz kappa Monoclonal Mouse Anti Human Melan A Clone A103 Isotype IgG kappa 307770EFG_001 p 1 12 Immunogen Specificity Precautions Storage Specimen preparation including materials required but not supplied 119799 001 S100 S100 isolated from cow brain Tyrosinase Purified recombinant unglycosylated tyrosinase protein consisting of 452 amino acids of the 511 amino acid mature human tyrosinase protein 11 Melan A Recombinant protein expressed in E coli corresponding to Melan A 7 The S100 antibody has been solid phase absorbed with human plasma and cow serum proteins In Western blotting of purified human recombinant S100 proteins the antibody labels S100B strongly S100A1 weakly and S100A6 very weakly No reaction was observed with the other S100 proteins tested S100A2 S100A3 and S100A4 20 In indirect ELISA the antibody shows no reaction with human plasma and cow serum As demonstrated by immunohistochemistry on formalin fixed paraffin embedded tissue sections the antibody cross reacts with the S100 equivalent protein in man cat hors
42. ten in Gliazellen des zentralen und peripheren Nervensystems sowie in Melanozyten Chondrozyten und Adipozyten anzutreffen w hrend S100A1 fr her S100A S100a am h ufigsten 307770EFG_001 p 7 12 Geliefertes Reagenz Immunogen Spezifit t 119799 001 in Kardiomyozyten leicht zuckenden Skelettmuskelzellen Speichel Epithelzellen und Nierenzellen auftritt Zus tzlich tritt S100B in Tumorzellen und Subpopulationen von Neuronen auf w hrend S100A1 auch in Hippocampus Neuronen nachgewiesen wurde S100A6 wird durch Fibroblasten sowie Zellen glatter Muskulatur und des Herzmuskels exprimiert 5 Die Mitglieder der S100 Familie wurden mit der Ca abh ngigen Regulierung zahlreicher intrazellul rer Vorg nge in Verbindung gebracht z B der Protein Phosphorylierung der Zellproliferation inkl neoplastische Transformation und der Differenzierung 10 Tyrosinase ein an der Produktion von Melaninpigmenten einschlie lich Eumelanin und Pheomelanin beteiligtes Kupfer Glykoenzym 11 12 Hierbei katalysiert die Tyrosinase die Hydroxylierung von L Tyrosin zu L Dopa sowie die Oxidation von L Dopa zu L Dopaquinon 11 12 Als Marker f r den melanozytischen Ursprung kommt Tyrosinase auf den Melanozyten aus dem Bereich der dermo epidermalen Verbindung gesunder Haut vor nicht jedoch in anderen gesunden Zellen 13 Pigmentierte Bereiche der Augen wie Choroidea oder Iris enthalten ebenfalls Melanozyten Eine Tyrosinase Expression liegt ferner in
43. tive tumors were also positive for vimentin and desmin 23 Anti Tyrosinase Clone T311 was tested on benign and malignant melanocytic lesions and was found to label the majority of benign nevi and melanomas tested Low tyrosinase immunoreactivity was observed in melanomas of the desmoplastic and spindle cell type 11 13 14 15 The specificity of anti Tyrosinase for melanocytic lesions has been demonstrated by immunostaining more than 70 different non melanocytic tumors types with no immunoreactivity found indicating that expression of tyrosinase is restricted to cells of melanocytic lineage 13 307770EFG_001 p 3 12 Fran ais Utilisation pr vue Synonymes de l antig ne R sum et explication 119799 001 In metastatic melanomas Anti Melan A Clone A103 labeled 16 21 cases showing positive homogeneous cytoplasmic staining in gt 80 90 of melanoma cells except one which displayed focal staining 7 In another study of 10 benign melanocytic nevi 10 primary melanomas and 75 metastatic melanomas the antibody labeled 10 10 benign melanocytic nevi 7 10 primary melanomas and 61 75 metastatic melanomas 8 Among 111 carcinomas mainly adenocarcinomas and squamous cell carcinomas 40 germ cell tumors and 33 miscellaneous non melanocytic epithelioid tumors none were labeled by the antibody The antibody labeled 5 5 adrenal cortical adenomas 16 16 primary and 13 13 metastatic adrenal cortical carcinomas and also 4 4 Leydig cel
44. welche Melan A mRNA negativ sind keine Pr zipitation nachgewiesen wird 7 307770EFG_001 p 8 12 Vorsichtsma nahmen Lagerung Vorbereitung der Probe und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien F rbeverfahren und erforderliche aber nicht mitgelieferte Materialien 119799 001 1 Zur Anwendung durch Fachpersonal 2 Dieses Produkt enth lt Natriumazid NaNs eine in reiner Form u erst giftige Chemikalie Ansammlungen von Natriumazid k nnen auch in Konzentrationen die nicht als gef hrlich klassifiziert sind mit Blei und Kupferabflussrohren reagieren und hochexplosive Metallazide bilden Nach der Entsorgung stets mit viel Wasser nachsp len um Azidansammlungen in den Leitungen vorzubeugen 3 Wie alle Produkte biologischen Ursprungs m ssen auch diese entsprechend gehandhabt werden 4 Entsprechende Schutzkleidung tragen um Augen und Hautkontakt zu vermeiden 5 Nicht verwendete L sung ist entsprechend rtlichen bundesstaatlichen und staatlichen Richtlinien zu entsorgen Bei 2 8 aufbewahren Nach Ablauf des auf dem Fl schchen aufgedruckten Verfalldatums nicht mehr verwenden Werden die Reagenzien unter anderen als den angegebenen Bedingungen aufbewahrt m ssen diese Bedingungen vom Benutzer validiert werden Es gibt keine offensichtlichen Anzeichen f r eine eventuelle Produktinstabilit t Positiv und Negativkontrollen sollten daher zur gleichen Zeit wie die Patientenproben getestet werden F
45. y toxic in pure form At product concentrations though not classified as hazardous sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive build ups of metal azides Upon disposal flush with large volumes of water to prevent metal azide build up in plumbing 3 As with any product derived from biological sources proper handling procedures should be used Wear appropriate Personal Protective Equipment to avoid contact with eyes and skin 5 Unused solution should be disposed of according to local State and Federal regulations Store at 2 8 Do not use after expiration date stamped on vial If reagents are stored under any conditions other than those specified the conditions must be verified by the user There are no obvious signs to indicate instability of this product Therefore positive and negative controls should be run simultaneously with patient specimens If unexpected staining is observed which cannot be explained by variations in laboratory procedures and a problem with the antibody is suspected contact Dako Technical Support The antibody cocktail can be used for labeling formalin fixed paraffin embedded tissue sections Tissue specimens should be cut into sections of approximately 4 um Pre treatment with heat induced epitope retrieval HIER is required Optimal results are obtained by pretreating tissues using EnVision FLEX Target Retrieval Solution High pH 50x Code K8004 Deparaffinized section
46. ytoplasmique et nucl aire faible mod r e Un panel de 33 tissus sains a t test avec l anticorps anti tyrosinase clone T311 par immunohistochimie et seule la peau s est av r e positive 13 Dans la peau saine les m lanocytes taient immunor actifs alors que les k ratinocytes basaux de la peau sont rest s n gatifs 11 13 L anticorps anti Melan A clone A103 marque la peau alors que l estomac le c lon le poumon le foie la rate le rein le testicule la vessie le sein l ovaire les cellules de muscle lisse et les tissus adipeux ne sont pas marqu s par l anticorps 7 9 Il a t signal que les cellules productrices de st ro des du cortex surr nal de l ovaire et du testicule taient marqu es par l anticorps 8 307770EFG_001 p 6 12 Deutsch Verwendungszweck Synonyme f r das Antigen Zusammenfassung und Erkl rung 119799 001 Tissus tumoraux parmi les m lanomes malins 31 100 m lanomes malins cutan s classiques sur 31 23 96 m lanomes malins m tastatiques sur 24 dont 10 non m laniques 6 m lanomes malins desmoplastiques sur 6 et un sur un m lanome malin myxo de ont t marqu s par l anticorps anti S100 Sur 30 n vi b nins et 15 dysplasiques une coloration universelle homog ne a t observ e dans tous les cas 1 Dans une autre tude portant sur des m lanomes malins cutan s primaires 2 67 sur 67 100 taient positifs l anticorps dont
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