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IGF-I (Insulin-Like Growth Factor I)

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1. secura num banho a 37 C usando ar comprimido ou nitrog nio 9 18 Reconstitua as amostras secas com 500 uL do calibrador O e incube a 37 C durante 10 minutos para assegurar uma completa reconstitui o misture de forma intermitente durante a incuba o Nesta altura uma amostra que se espera que seja elevada deve ser reconstitu da com 1 0 mL de calibrador 0 O resultado final deve ser corrigido pelo factor de dilui o adequado ver a sec o de Resultados para o c lculo 9 19 Ensaie 50 uL dos extractos de soro em duplicado no radioimunoensaio PROCEDIMENTO DE ENSAIO 10 1 Reconstitua os reagentes liofilizados e deixe descongelar totalmente qualquer reagente congelado N o deixe os reagentes atingir temperaturas acima de 20 25 C Misture com cuidado todos os reagentes antes de usar 10 2 Prepare tubos de 12 x 75 mm rotulados em duplicata de acordo com o Esquema do Ensaio na ltima p gina Todos os volumes s o em microlitros 10 3 Adicione reagentes aos tubos da seguinte forma a Total de tubos de contagem N o considere at ao passo 5 b Liga o n o espec fica NSB 50 uL de calibrador O c Calibrador 0 de IGF I 50 uL de calibrador O 200 uL de anti soro IGF I d Calibradores IGF I 1 5 50 uL de calibrador IGF I 200 uL de anti soro IGF I e Controlos e amostras desconhecidas 50 uL de extracto de soro 200 uL de anti soro IGF I 10 4 Incube durante 2 horas 15 minutos a 2 8 C 10 5 Adicione 200 uL d
2. 50 uL Antiserum 200 uL 200 uL 5 Blanda val och inkubera r ren i 2 timmar 15 minuter vid 2 8 C 6 Tills tt 200 uL sp r mne i varje r r 7 Blanda v l och inkubera r ren i 20 timmar 1 timme vid 2 8 C 8 Tills tt 500 uL utfallningskomplex i varje r r utom i totalaktivitetsr ren 9 Blanda v l och inkubera r ren i 2 timmar 15 minuter vid 2 8 C 10 Centrifugera vid 760 x g i 20 minuter 11 H ll av supernatanterna 12 R kna varje r r i en gammar knare i minst 60 sekunder g 1118 x 10 radie i cm rpm 63 REFERENCES BIBLOGRAPHIE LITERATUR REFERENCIAS REFERENSER 1 10 Bala R M J Lopatka A Leung E McCoy and R G McArthur Serum Immuno reactive Somatomedin Levels in Normal Adults Pregnant Women at Term Children at Various Ages and Children with Constitutionally Delayed Growth Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 52 3 508 1981 Borges J L M C Gelato A D Rogol M L Vance R M Macleod D L Loriaux J Rivier R M Blizzard R F Furlanetto W S Evans D L Kaiser G R Merriam J Speiss and W Vale Effects of Human Pancreatic Tumor Growth Hormone Releasing Factor on Growth Hormone and Somatomedin C Levels in Patients with Idiopathic Growth Hormone Deficiency The Lancet 199 July 1983 Hayek A and G T Peake Growth and Somatomedin C Responses to Growth Hormone in Dwarfed Children The Journal of Pediatrics 99 6 868
3. 14 tre amorc es avant d appliquer l chantillon voyez la section intitul e Proc dure d extraction Les colonnes de silice octad cylsilyl peuvent tre conserv es a temp rature ambiante Elles sont stables pendant 3 ans apr s ouverture de l emballage et ind finiment s il n a pas t ouvert 5 AVERTISSEMENTS ET PRECAUTIONS POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Non pr vu pour une utilisation interne ou externe sur l homme ou l animal Il s agit d une proc dure d appoint du dosage de la somatotrophine dans le diagnostic de l hypopituitarisme et de l acrom galie REACTIFS CONTENANT DES PRODUITS D ORIGINE HUMAINE Traitez les comme potentiellement infectieux Chaque don de s rum plasma intervenant dans la pr paration de ce produit a t test par une m thode agr e par la FDA et s est av r non r actif en pr sence de HBsAg d anticorps anti VHC et d anticorps anti VIH1 2 M me si ces m thodes sont extr mement pr cises elles ne garantissent pas la d tection de tous les dons infect s Ce produit peut galement contenir d autres produits d origine humaine pour lesquels il n existe aucun test agr Comme aucune m thode de test connue ne peut offrir l assurance compl te de l absence du virus de l h patite B VHB du virus de l h patite C VHC du virus de l immunod ficience humaine VIH ou d autres agents infectieux tous les produits d origine humaine doivent tre manipul s conform ment aux bonnes pratiq
4. 8 Despeje 500 uL de complexo precipitante em todos os po os excepto os tubos de contagem total 9 Misture bem incube durante 2 horas 15 minutos a 2 8 C 10 Centrifugue usando 760 x g durante 20 minutes 11 Decante os sobrenadantes 12 Conte cada tubo em um contador gama durante 60 segundos ou mais g 1118 x 10 raio em cm rpm 51 INSULINLIK TILLVAXTFAKTOR RIA KIT 1 AVSEDD ANV NDNING FOR DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Satsen inneh ller anvisningar och materiel f r kvantitativ best mning av IGF I i humant serum med radioimmunoassay RIA Proceduren r avsedd att anv ndas som en kompletterande metod f r hGH bestamning vid diagnos av hypopituitarism och akromegali 2 SAMMANFATTNING OCH BESKRIVNING Somatomedin C r en 70 aminosyrapeptid som ing r i en familj av tillv xtfaktorer vilken omfattar de insulinlika tillv xtfaktorerna I och Il somatomedin A och B samt MSA Strukturen hos somatomedin C har nyligen funnits vara identisk med IGF I vars sekvens publicerades 1978 av Rinderknecht och Humbel Proinsulin och somatomedin r lika p s s tt att b da inneh ller A och B peptider med en l nkad C peptid och b da har interna disulfider IGF I r till sin natur mycket basisk genom dess aminosyrakomposition och cirkulerar bunden till proteiner med en h g molekul r vikt p cirka 140 000 dalton IGF I f rmedlar de tillvaxtframjande funktionerna hos tillv xthormon mnet frig rs fran f
5. d azide de sodium comme conservateur Les valeurs exactes de ces concentrations sont fournies avec chaque lot Reconstituez chaque flacon avec 0 5 ml d eau purifi e et laissez les reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langez bien avant utilisation Les talons IGF I DiaSorin ont t calibr s selon la norme NBSB 87 518 de I Organisation mondiale de la sant OMS Toute comparaison avec d autres produits ou proc dures de dosage doit tre effectu e avec cette pr paration de r f rence Pour s approcher des unit s utilis es par de nombreux laboratoires commerciaux une valeur de 25 nmol l quivalant 1 unit ml a t attribu e On passe des nanomolesllitre d IGF I aux ng ml en multipliant par 7 7 Les talons de la trousse d montrent leur commutabilit avec les chantillons des patients lorsqu ils sont utilis s avec des r actifs et selon le mode d emploi de ce dosage diagnostique in vitro comme recommand 4 3 Antis rum IGF I r actif lyophilis Le s rum anti IGF I de lapin est dilu dans un tampon BSA borate avec de l h parine contenant 0 002 de thiomersal Reconstituez le flacon avec 14 ml d eau purifi e et laissez reposer entre 15 et 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langez bien avant utilisation 44 IGF I 1 r actif lyophilis De l IGF I humain synth tique 53 70 est marqu l iode 125 et dilu dans un tampon BSA borate EDTA qui co
6. n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Achat Years FIGURE 3 16 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 16 1 Precision Within Assay Variation values nmol L Mean Value SD LSG n low mood mm o s4 15 Between Assay Variation values nmol L Mean Value so ROM n 89 16 2 TRUENESS THE ASSAY TRUENESS HAS BEEN CHECKED BY THE LINEARITY TEST AND THE RECOVERY TEST Linearity Parallelism Serial Dilution Study of 3 Unknown Samples values nmol L Sample Number Undiluted Recovery Recovery Study values nmol L Percent recovery is calculated as measured value expected value x 100 Calibrator Expected Measured Percent Background Added Value Ge Set No 1 II 16 3 Analytical Sensitivity When defined as the apparent concentration at 3 standard deviations from the counts at maximum binding the minimum detectable amount is lt 2 0 nmol L 16 4 Analytical Specificity Comparison of the reactivity of IGF I antibody at the 50 suppression B Bo was made with the following peptides Peptide Cross Reactivity IGF II lt 1 0 Human Growth Hormone lt 1 0 Fibroblast Growth Factor lt 1 0 Transforming Growth Factor lt 1 0 Platelet Derived Growth Factor lt 1 0 SEE LAST PAGE FOR REFERENCES SCHEME OF THE ASSAY o venosa 11 12 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen specimens to thaw completely Extract th
7. 1981 Klapper D V M E Svoboda and J J Van Wyk Sequence Analysis of Somato medin C Confirmation of Identity with Insulin Like Growth Factor Endo crinology 112 6 2215 1983 Rieu M F Girard H Bricaire and M Binoux The Importance of Insulin Like Growth Factor Somatomedin Measurements in the Diagnosis and Surveillance of Acromegaly Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 55 1 147 1982 Rinderknecht E and R E Humbel The Amino Acid Sequence of Human Insulin like Growth Factor and Its Structural Homology with Proinsulin The Journal of Biological Chemistry 253 8 2769 1978 Rosenfeld R G S F Kemp and R L Hintz Constancy of Somatomedin Response to Growth Hormone Treatment of Hypopituitary Dwarfism and Lack of Correlation with Growth Rates Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 53 61 1 1981 Underwood L E A J D Ercole and J J Van Wyk Somatomedin C and the Assessment of Growth Pediatric Clinics of North America 27 771 1980 Wass J A H D R Clemmons L E Underwood Barrow G M Besser and J J Van Wyk Changes in Circulating Somatomedin C Levels in Bromocriptine Treated Acromegaly Clinical Endocrinology 17 369 1982 Wilson D M A M Luna R L Hintz and R G Rosenfeld Somatomedins in Adolescence The Effect of Puberty on Plasma Levels of Insulin Like Factors and Il Clinical Research 31 1 61A 1983 SYMBOLS USED
8. d Pente de la courbe d talonnage Par exemple surveillez les points d inhibition de 80 50 et 20 de la courbe d talonnage 12 CONTR LE QUALIT Chaque laboratoire doit inclure au moins deux chantillons de contr le pour chaque dosage afin de garantir la validit des r sultats du dosage D terminez ensuite l cart moyen et l cart type pour chaque contr le sur un minimum de dix 10 dosages Une gamme de valeurs acceptable peut donc tre obtenue pour ces contr les en utilisant l intervalle 2 carts types par rapport aux valeurs pr c demment calcul es Le laboratoire de contr le qualit de DiaSorin a d termin un intervalle de valeurs pour les contr les de la trousse 13 CALCUL DES R SULTATS Il existe de nombreuses m thodes de calcul des r sultats des dosages radio immunologiques Chacune est bas e sur l obtention d une courbe d talonnage en tra ant l ampleur de la liaison par rapport aux concentrations indiqu es pour les talons Ce graphe peut tre l chelle lin aire ou logarithmique Chacune de ces m thodes donne essentiellement les m mes valeurs pour les contr les et les chantillons m me si certains dosages peuvent tre mieux adapt s une m thode particuli re qu une autre La m thode de calcul pour le laboratoire de contr le qualit DiaSorin est B Bo par rapport la concentration logarithmique 13 1 Calculez le CPM moyen pour chaque talon contr le et chantillon inc
9. lodine 125 IGF I is then added followed by a second incubation for 20 hours at 2 8 C Pre precipitated carrier second antibody and polyethylene glycol are added in a single step The assay can be centrifuged and decanted after the 2 hour second antibody incubation at 2 8 C IGF I from many other mammalian sources can also be measured with this procedure A REAGENTS PROVIDED IN THE KIT IgF 1 Calibrator 0 1 vial 20 mL IgF 1 Calibrators 1 5 5 vials 0 5 mL IgF 1 Antiserum 1 vial 14 mL 135 IgF 1 Tracer 1 vial 14 mL IgF 1 Controls 2 vials 1 0 mL IgF 1 Precipitating Complex 1 vial 35 mL ODS Silica 1 pkg 25 columns Number of tests STORAGE Upon receipt the kit should be stored at 15 C or lower After reconstitution store each reagent at 15 C or lower until the expiration date on the label Reagents should not be used past the expiration date When reconstituting the contents of the vials mix gently to avoid foaming Reagents from different batches must not be mixed 4 1 IGF I calibrator O lyophilized reagent BSA borate buffer contains 0 25 sodium azide as a preservative Reconstitute the vial with 20 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 2 IGF I Calibrators 1 5 lyophilized reagent Five human intact IGF I calibrators at nominal concentrations of 3 0 75 nmol L 0 12 3 0 units mL are prediluted in BSA borate buffer containing
10. sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen Die DiaSorin IGF I Kalibratoren wurden gegen den WHO Standard NBSB 87 518 kalibriert Jeder Vergleich mit anderen Produkten oder Verfahren sollte mit dieser Referenzvorbereitung erfolgen Zur Ann herung der von vielen kommerziellen Labors verwendeten Einheiten wurde ein Wert von 25 nmol l der 1 Einheit ml entspricht festgelegt Der in Nanomol Liter angegebene IGF I Wert wird durch den Multiplikator 7 7 in ng ml umgerechnet Die Kitkalibratoren sind mit Patientenproben austauschbar wenn sie mit Reagenzien verwendet werden und dieser diagnostische In vitro Test wie empfohlen durchgef hrt wird 4 3 IGF I Antiserum lyophilisiertes Reagenz Hase anti IGF I Serum wird in BSA Boratpuffer mit Heparin verd nnt das 0 002 Thimerosal enthalt Das Flaschchen mit 14 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollstandigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 4 31 IGF I lyophilisiertes Reagenz Humanes synthetisches IGF I 53 70 wird mit Jod 125 markiert und in einem BSA Borat EDTA Puffer mit 0 008 Thimerosal als Konservierungsmittel verd nnt Das Fl schchen mit 14 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollstandigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 5 IGF I Kontrollen Stufe 1 und 2 Iyophilisiertes Reagenz Falls notwendig wird Humanserum mit der en
11. 12 x 75 mm gro es Glastestr hrchen pipettieren und 1 ml 0 5 N HCI hinzugeben Vorsichtig vortexen bis der Inhalt gut gemischt ist 9 2 Jede ODS Silicas ule an einem Spritzenverteiler befestigen 29 10 9 3 5 ml Reagenzgrad Isopropylalkohol in jede Spritze geben 9 4 Den Inhalt mit Hilfe des Spritzenkolbens durch die Spritze pressen 9 5 Die ODS Silicas ule entfernen Die ODS Silicas ule vom Spritzenende entfernen bevor der Kolben entfernt wird um eine Kontamination des Spritzeninhalts mit der in der ODS Silicasaule enthaltenen Fl ssigkeit zu vermeiden 9 6 Den Spritzenkolben aus den Spritzen entfernen 9 7 Die ODS Silicasaule wieder an den Spritzen anbringen 9 8 5 ml Methanol HPLC Gradient hinzugeben 9 9 Die Schritte 4 bis 7 wiederholen 9 10 5 ml 4 Essigsaure hinzugeben 9 11 Die Schritte 4 bis 7 wiederholen 9 12 Die Schritte 10 und 11 wiederholen 9 13 Die Probe aus Schritt 1 verwenden Langsam mit einer Flussgeschwindigkeit von 1 ml pro 2 3 Minuten durch die Patrone pressen 9 14 Die Schritte 5 bis 7 wiederholen 9 15 Die ODS Silicasaule zweimal mit 10 ml 4 Essigsaure waschen und zwischen den Waschg ngen die Schritte 5 bis 7 wiederholen 9 16 Das Eluat durch Elution des Peptids mit 4 ml Methanol HPLC Gradient in 16 x 100 mm groBen Glasr hrchen sammeln Langsam dr cken so dass das Methanol mindestens 3 Minuten lang in Kontakt mit der ODS Silicas ule bleibt 9 17 Das Methanol in einem 37 C warmen Wasse
12. 3 264 2 852 2 673 2 683 2 032 2 046 2 059 1 685 1 660 1 634 991 978 964 2 564 2577 2 590 1701 1712 1 723 TABLEAU II CPM corrig 3713 2 953 2 328 1701 1315 633 2 232 1 367 Yo li Yo B T 3 2 37 2 79 5 62 7 45 8 35 4 17 0 60 1 36 8 B Bo Conc Conc graphe finale nmol l nmol l 8 3 16 6 27 6 55 2 Des donn es d chantillons typiques et une courbe d talonnage sont pr sent es au TABLEAU II et la FIGURE 1 cette courbe est fournie titre de r f rence seulement et ne doit pas tre utilis e pour le calcul d une valeur quelconque FIGURE 1 Courbe d talonnage des chantillons IGF I B BO TRAITEMENT DES RESULTATS Le laboratoire CQ DiaSorin smoothed spline curve fit nmol L utilise un programme d ajustement de courbe cubique 20 14 LIMITATIONS DE LA PROCEDURE 14 1 Tout chantillon inconnu dont la valeur est sup rieure l talon le plus lev de la trousse doit tre correctement dilu avec l talon 0 partir de l extrait de la colonne de silice octad cylsilyl et dos de nouveau Corrigez le r sultat a l aide du facteur de dilution appropri 14 2 Les temps de num ration doivent tre suffisants pour emp cher l erreur statistique lors de la num ration par exemple l accumulation de 2 000 CPM donnera une erreur de 5 et 10 000 CPM donneront une erreur de 1 14 3 L IGF I est lev lors de la gross
13. 6 12 mL disposable syringes 8 7 Isopropyl alcohol 8 8 Methanol HPLC grade or better 8 9 4 acetic acid 8 10 0 5 N hydrochloric acid 8 11 Compressed air supply 8 12 37 C water bath 8 13 16 x 100 mm glass tubes 9 EXTRACTION OF SERUM WITH ODS SILICA COLUMNS 9 1 Pipette 250 uL of controls and unknown samples into a 12 x 75 mm glass test tube and add 1 mL of 0 5 N HCI Vortex gently until well mixed 9 2 Attach each ODS silica column to a syringe hub 9 3 Add 5 mL of reagent grade isopropyl alcohol to each syringe 9 4 Press through the syringe using the syringe plunger 9 5 Remove the ODS silica column Remove the ODS silica column from the end of the syringe before removing the plunger to avoid contaminating the syringe contents with the fluid in the ODS silica column 9 6 Remove the syringe plunger from the syringes 9 7 Replace the ODS silica column on the syringes 9 8 Add 5 mL of HPLC grade methanol 9 9 Repeat steps 4 through 7 9 10 Add 5 mL of 4 acetic acid 9 11 Repeat steps 4 through 7 9 12 Repeat steps 10 and 11 9 13 Apply the sample from step 1 Push slowly through the cartridge at a flow rate of 1 mL per 2 3 minutes 9 14 Repeat steps 5 through 7 9 15 Wash the ODS silica column 2 times with 10 mL of 4 acetic acid repeating steps 5 through 7 in between washes g 1118 x 10 radius in cm rpm 4 10 11 9 16 Collect the eluate in 16 x 100 mm glass tubes by eluting the peptide
14. ETT UTBYTESTEST Linearitet parallelitet Seriespadningsstudie av 3 okanda prover varden nmol L Outsp tt Utbyte Utbytesstudie v rden nmol L Det procentuella utbytet ber knas som uppm tt v rde forvantat varde x 100 Tillsatt F rv ntat Uppm tt v rde Procent Bakgrund kalibreringsl s v rde utbyte ning Uppsattningt 187 sa 83 IEN EEN a ol 16 3 Analytisk Kanslighet Nar den l gsta detekterbara halten definieras som den skenbara halten vid tre standardavvikelser fran aktiviteten f r maximal bindning ligger den pa lt 2 0 nmol L 16 4 Analytisk Specificitet J mf relse av korsreaktiviteten hos IGF l antikropp vid 50 h mning B Bo utf rdes med f ljande peptider Peptid korsreaktivitet IGF II lt 1 0 Humant tillv xthormon lt 1 0 Fibroblasttillv xtfaktor lt 1 0 Transformerande tillvaxtfaktor lt 1 0 Trombocytrelaterad tillvaxtfaktor lt 1 0 SE SISTA SIDAN FOR REFERENSER 62 LATHUND FOR TESTET 1 Rekonstituera de frystorkade reagenserna och l t eventuella frysta prover tina helt 2 Extrahera kontrollerna och de ok nda proverna enligt avsnitt 9 3 Mark upp r r f r dubbelprover 4 Pipettera reagens enligt f ljande schema Totalak NSB CAL Kontroller och R r Reagens tivitet 0 5 okanda prover Kalibreringsl sning O 50 uL 50 uL Kalibreringsl sningar 1 5 50 uL Extraherade kontroller 50 uL Extraherade okanda prover
15. abzusaugen achten Sie dabei darauf das Pr zipitat nicht aufzur hren 11 4 Um die konsistente Leistung eines Radioimmunoassays vollst ndig zu berwachen m ssen m glicherweise weitere Faktoren berpr ft werden DiaSorin empfiehlt die folgenden Parameter zu berpr fen um sicherzustellen dass die Leistung des Kits konstant ist a Totalaktivit t b Maximale Bindung Durchschnittliche Z hlungen pro Minute CPM des Nullkalibrator R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen c Nichtspezifische Bindung Durchschnittliche CPM des NSB R hrchens Durchschnittliche CPM der Totalaktivit t R hrchen d Steilheit der Eichkurve berwachen Sie zum Beispiel die 80 50 und 20 Suppressions Punkte der Eichkennlinie 12 QUALITATSKONTROLLE Jedem Labor wird empfohlen bei jedem Assay mindestens zwei Kontrollproben mitzutesten um die G ltigkeit aller Testergebnisse zu gew hrleisten Ein Mittelwert und eine Standardabweichung sind dann f r jede Kontrolle in mindestens zehn 10 Versuchsg ngen zu bestimmen Ein zul ssiger Wertebereich kann dann f r diese Kontrollen mit 2 Standardabweichungen der zuvor bestimmten Werte ermittelt werden Das Qualit tskontrolllabor von DiaSorin hat f r die in dieser Packung enthaltenen Kontrollen einen Bereich ermittelt 13 ERGEBNISBERECHNUNG Es gibt viele M glichkeiten die Ergebnisse von Radioimmunoassays zu berechnen Bei jeder Methode wird eine Kalibrationskurve a
16. actifs lyophilis s et laissez les r actifs congel s d congeler compl tement Ne laissez pas les r actifs atteindre une temp rature sup rieure a 25 C M langez d licatement tous les r actifs avant utilisation Installez des tubes de 12 x 75 mm tiquet s en doublet selon le Profil de dosage de la derni re page Tous les volumes sont en microlitres Ajoutez les r actifs dans les tubes comme suit a Tubes de num ration totale Laissez les de c t jusqu l tape 5 b Liaison non sp cifique NSB 50 ul d talon 0 c Etalon 0 IGF I 50 ul d talon O 200 ul d antis rum IGF I d Etalons 1 5 IGF I 50 ul d talon IGF I 200 ul d antis rum IGF I e Contr les et chantillons inconnus 50 ul d extraits de s rum 200 ul d antis rum IGF I Mettez en incubation pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C Ajoutez 200 ul d IGF 11251 dans tous les tubes M langez les tubes d licatement l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et mettez en incubation pendant 20 heures 1 heure entre 2et8 C Melangez vigoureusement le complexe pr cipitant ajoutez en 500 ul dans tous les tubes a l exception des tubes de num ration totale M langez les tubes d licatement a l aide du Vortex en vitant la formation de mousse et mettez en incubation pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C Centrifugez les tubes pendant 20 minutes a un minimum de 760 x g entre 20 et 25 C 10 10D cantez imm diatement le surnage
17. before using 4 5 IGF I Controls Level 1 and 2 lyophilized reagent Human serum is spiked if necessary with the appropriate amount of intact human IGF I to obtain a concentration within a specified range 0 02 sodium azide is added as a preservative Reconstitute the vials with 1 0 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly and treat the quality control serum as an unknown sample Ranges are printed on the control vials 4 6 IGF I Precipitating Complex lyophilized reagent Normal rabbit serum pre precipitated with goat anti rabbit serum and polyethylene glycol PEG is diluted in BSA borate buffer with 0 03 thimerosal added Reconstitute the vial with 35 mL of purified water mix THOROUGHLY until the suspension appears homogeneous and then allow the vial to stand for a minimum of 30 minutes at room temperature with occasional mixing 4 7 ODS Silica ready to use reagent Plastic columns contain octadecasilyl silica Sep Paks Columns must be primed before applying sample see Extraction Procedure section The ODS silica columns may be stored at room temperature Columns are stable for 3 years after package is opened and indefinitely if unopened 5 WARNINGS AND PRECAUTIONS FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE Not for internal or external use in humans or animals The procedure is to be used as an adjunct procedure to hGH determination in the diagnosis of hypo
18. courbe d talonnage par rapport la normale obtenue 6 3 Diminution de la liaison maximale 6 4 Liaison non sp cifique lev e 7 PR L VEMENT ET PR PARATION DES CHANTILLONS Deux cent cinquante microlitres de s rum sont n cessaires pour le dosage Pr levez le sang par ponction veineuse dans un tube de verre sous vide de 5 ou 10 ml Laissez le sang coaguler temp rature ambiante Centrifugez pendant 15 minutes 760 x g pour obtenir du s rum sans h molyse Aucun additif ou conservateur n est requis pour maintenir l int grit de l chantillon Tous les plastiques articles en verre ou autres produits entrant en contact avec l chantillon ne doivent absolument pas tre contamin s Du plasma h parin ou contenant de l EDTA peut g n rer des r sultats l g rement inf rieurs Le s rum doit tre rapidement s par des cellules et conserv une temp rature inf rieure ou gale 15 C Pour une conservation prolong e les chantillons doivent tre congel s au minimum 15 C Ils peuvent tre congel s et d congel s plusieurs reprises 8 MAT RIEL ET PRODUITS REQUIS MAIS NON FOURNIS 8 1 Tubes en verre borosilicat jetables 12 x 75 mm 8 2 Centrifugeuse thermostat pour tubes de 12 x 75 mm 8 3 Compteur de scintillation gamma pouvant mesurer l iode 125 8 4 M langeur Vortex 8 5 Dispositifs de pipetage a Micropipettes calibr es pour d livrer 50 ul 250 ul et 500 ul b Distributeurs r p
19. interfere with the IGF I assay 9 15 EXPECTED VALUES Normal Range Normal ranges should be verified by each laboratory A large number of normal samples geographic origin Minnesota Israel Maryland and Australia were studied in the development of our IGF I assay and we have found that IGF I values vary with age and in some age groups with sex therefore age and sex match controls should be used where appropriate TABLE Ill and FIGURES 2 and 3 show the results of normal values assembled from several laboratories and collated by DiaSorin Because there is pronounced skewing of the distribution during puberty it is necessary to use a log transformation statistical model to develop 95 confidence limits in setting children s ranges This is not necessary for treatment of adult values TABLE III Normal Range Study According to Age and Sex Nanomoles L years Age Group Mean n Range Mean n Range 95 confidence limits log transformation model except for adult Units mL years Age Group Mean n Range Mean n Range 8 01 10 00 061 13 024159 0 69 11 037 131 95 confidence limits log transformation model except for adult IGF4 Expected Values Using Age and Sex Nanomoles L 1mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Adult Years FIGURE 2 IGF Expected Values Using Age and Sex Units mL 95 CZ Males Confidence Limits L Females
20. ll i ordning m rkta 12 x 75 mm r r f r dubbelprov enligt Lathund f r testet p sista sidan Alla volymer r i mikroliter 10 3 Tills tt reagens till r ren enligt f ljande a Totalaktivitetsr r St ll undan dessa fram till steg 5 b Ospecifik bindning NSB 50 uL kalibreringsl sning 0 c IGF I kalibreringsl sning O 50 uL kalibreringsl sning 0 200 uL IGF I antiserum d IGF I kalibreringsl sningar 1 5 50 uL IGF I kalibreringsl sning 200 uL IGF I antiserum e Kontroller och okanda prover 50 uL serumextrakt 200 uL IGF I antiserum 10 4 Inkubera i 2 timmar 15 minuter vid 2 8 C 10 5 Tills tt 200 uL 1251 IGF I i alla r r 10 6 Vortexa r ren f rsiktigt utan att det bildas skum och inkubera dem i 20 timmar 1 timme vid 2 8 C 10 7 Skaka utf llningskomplexet kraftigt och pipettera 500 pL till alla r r utom totalaktivitetsr ren 10 8 Vortexa r ren f rsiktigt utan att det bildas skum och inkubera dem i 2 timmar 15 minuter vid 2 8 C 10 9 Centrifugera r ren i 20 minuter vid minst 760 x g vid 20 25 C 10 10Dekantera genast supernatanten fran alla r r utom totalaktivitetsr ren genom att v nda dem upp och ned i minst 2 minuter Hall r ren mot absorberande papper f r att f bort eventuella supernatantdroppar fr n kanterna innan du v nder r ren r tt igen 10 11 Anv nd gammar knare och r kna f llningen i varje r r samt totalaktivitetsr ren under tillr ckligt l ng tid f r att s
21. tidigare uppm tta v rdena DiaSorin Quality Control Laboratory har best mt ett intervall f r kontrollerna i satsen 13 RESULTATBERAKNING Det finns m nga olika metoder f r att ber kna resultaten fr n RIA test Alla r baserade p att man tar fram en kalibreringskurva genom att plotta bindningsgraden mot de angivna koncentrationerna hos kalibreringsl sningarna Diagrammet kan ha antingen linj r eller logaritmisk skala Samtliga metoder ger i stort sett samma v rden f r kontroller och prover ven om en viss ber kningsmetod kan passa b ttre f r vissa assayer n f r andra Den ber kningsmetod som anv nds p DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium r B Bo avsatt mot logaritmen f r koncentrationen 13 1 Ber kna medel CPM f r varje kalibreringsl sning kontroll och ok nt prov 13 2 Subtrahera medel CPM f r NSB r ren fr n alla v rden 13 3 Dividera det korrigerade CPM v rdet f r varje kalibreringsl sning kontroll och ok nt prov med det korrigerade CPM v rdet f r O l sningen CPM f r kalibreringsl sning eller ok nt prov CPM f r NSB B Bo x 100 CPM f r kalibreringsl sning 0 CPM f r NSB 13 4 Anv nd ett lin log papper ver tv tiopotenser eller log log papper och plotta procent B BO f r IGF I kalibreringsl sningarna lodr t axel mot koncentrationen vagrat axel 13 5 Rita en basta anpassad linje genom punkterna 13 6 Avl s IGF I halterna i de ok nda proverna fran diagrammet 13 7 Ko
22. tition calibr s pour distribuer 200 ul et 500 ul Produits et r actifs requis pour l extraction sur colonnes de silice octad cylsilyl 8 6 Seringues jetables 12 ml 8 7 Alcool isopropylique 8 8 M thanol de qualit CLHP ou sup rieure 8 9 Acide ac tique 4 8 10 Acide chlorhydrique 0 5 N 8 11 Source d air comprim 8 12 Bain d eau a 37 C 8 13 Tubes en verre de 16 x 100 mm g 1118 x 10 radius in cm rpm 9 EXTRACTION DU SERUM SUR LES COLONNES DE SILICE OCTADECYLSILYLE 9 1 9 2 9 3 9 4 9 5 9 6 9 7 9 8 9 9 9 10 9 11 9 12 9 13 9 14 9 15 9 16 9 17 9 18 9 19 Pipetez 250 ul de contr les et d chantillons inconnus dans une prouvette en verre de 12 x 75 mm et ajoutez y 1 ml d HCI 0 5 N M langez doucement a l agitateur vortex pour obtenir un m lange uniforme Fixez chaque colonne de silice octad cylsilyl a un raccord de seringue Ajoutez 5 ml d alcool isopropylique de qualit r actif dans chaque seringue Appuyez sur le piston de la seringue pour la vider Retirez la colonne de silice octad cylsilyl D tachez la colonne de l extr mit de la seringue avant de retirer le piston afin de ne pas contaminer le contenu de la seringue avec le liquide situ dans la colonne de silice octad cylsilyl Retirez les pistons des seringues Remettez les colonnes de silice octad cylsilyl en place sur les seringues Ajoutez 5 ml de m thanol de qualit CLHP R p tez l
23. transformation logarithmique afin de mettre au point des limites de confiance de 95 lors de la d finition d intervalles pour les enfants Ce n est pas utile pour le traitement des valeurs chez les adultes TABLEAU III Etude conduite avec des valeurs normales en fonction de l ge et du sexe Nanomoles l ans Classe d ge 8 01 10 00 15 34 5 92 39 75 17 29 9 16 32 64 10 01 13 99 21 90 8 65 55 46 32 15 9 30 111 10 14 00 18 00 42 84 15 17 33 105 83 42 68 15 12 94 140 80 Adulte 27 55 9 09 46 01 30 03 11 63 48 43 Mod le de transformation logarithmique avec limites de confiance 95 sauf pour les adultes 21 Unit s ml ans Classe d ge 200 599 049 17 023106 04 12 0 17 1 11 8 01 10 00 0 61 13 024159 069 11 0 37 1 31 Mod le de transformation logarithmique avec limites de confiance 95 sauf pour les adultes IGF Expected Values Using Age and Sex Nanomoles L 1mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Adult Years FIGURE 2 22 IGF Expected Values Using Age and Sex Units mL 95 CZ Males Confidence Limits L Females n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Achat Years FIGURE 3 16 CRITERES DE QUALITE SPECIFIQUES 16 1 Pr cision Variation intra dosage valeurs nmol l AE e U BL moyenne got Variation inter dosage valeurs nmol l Valeur Ecart type CM
24. vare sig inv rtes eller utv rtes bruk pa m nniskor eller djur Proceduren skall anv ndas som en kompletterande metod vid hGH best mning f r diagnos av hypopituitarism och akromegali REAGENSER SOM INNEH LLER MATERIAL AV HUMANT URSPRUNG skall behandlas som potentiellt smittfarliga Varje donerad enhet serum plasma som anv nts f r beredning av produkten har testats med en metod godk nd av USA s l kemedelsverk FDA och befunnits negativ vad g ller f rekomst av HBsAg antikroppar mot HCV och antikroppar mot HIV 1 2 Aven om dessa metoder ar mycket tillf rlitliga utg r de ingen garanti for att samtliga infekterade enheter uppt cks Produkten kan ven inneh lla annat material av humant ursprung f r vilket det inte finns n got godk nt test Eftersom ingen k nd testmetod kan ge en fullst ndig garanti f r att det inte f rekommer hepatit B virus HBV hepatit C virus HCV humant immunbristvirus HIV eller andra infekti sa agenser skall alla produkter som inneh ller material av humant ursprung hanteras i enlighet med god laboratoriepraxis och med l mpliga f rsiktighets tg rder Se handboken Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories fr n U S Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health 4 e upplagan maj 1999 eller aktuell upplaga 53 REAGENSER SOM INNEHALLER NATRIUMAZID FORSIKTIGT Vissa reagenser i satsen innehaller natriumazid Natriumazid kan reagera med bly och koppar i a
25. 0 1 sodium azide as a preservative Exact values are assigned with each lot Reconstitute each vial with 0 5 mL of purified water and allow the vials to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using The DiaSorin IGF I calibrators have been calibrated against the World Health Organization W H O standard NBSB 87 518 Any comparisons with other products or procedures should be done with this reference preparation To approximate the units used by many commercial laboratories a value of 25 nmol L equal to 1 unit mL has been assigned Nanomoles liter of IGF I is converted to ng mL by the multiplier 7 7 The kit calibrators demonstrate commutability with patient samples when used with reagents and operating procedure of this in vitro diagnostic test as recommended 4 3 IGF I Antiserum lyophilized reagent Rabbit anti IGF I serum is diluted in BSA borate buffer with heparin containing 0 002 thimerosal Reconstitute the vial with 14 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly before using 4 4 1 IGF I lyophilized reagent Human synthetic IGF I 53 70 is labeled with iodine 125 and is diluted in BSA borate EDTA buffer which contains 0 008 thimerosal as a preservative Reconstitute the vial with 14 mL of purified water and allow it to stand for 15 20 minutes until the contents are completely dissolved mix thoroughly
26. 1 978 633 17 0 964 Patient Unknowns 1 2 564 2 577 2 232 60 1 8 3 16 6 2 590 2 1 701 1 712 1 367 36 8 27 6 55 2 1 723 Typical sample data and a calibrator curve are shown in TABLE Il and FIGURE 1 this curve is for reference only and should not be used for the calculation of any value IGF I SAMPLE CALIBRATOR CURVE B B0 r QT nmol L FIGURE 1 REDUCTION DATA The DiaSorin QC lab uses a smoothed spline curve fit 14 LIMITATIONS OF THE PROCEDURE 14 1 Any unknown sample whose value reads greater than the highest kit calibrator must be appropriately diluted from the ODS silica column extract with calibrator 0 and assayed again Correct result using the appropriate dilution factor 14 2 Counting times should be sufficient to prevent the introduction of error due to statistical error in counting for example accumulation of 2 000 CPM will yield 5 error 10 000 CPM will yield 1 error 14 3 IGF I is elevated in pregnancy and the values were found to rise with gestation age Other conditions are known to reduce levels of IGF I including poor nutritional status fasting or hypothyroidism Hepatitis can also influence the levels of IGF I In the diagnosis of hypopituitarism provocative tests for human growth hormone should also be used when IGF I results are low A normal IGF I result is very unlikely in the diagnosis of hypopituitarism except in the case of hyperprolactinema or craniopharyngioma No drugs at this time are found to
27. 79 Le dosage de l IGF I a t pr conis comme outil de d pistage et de traitement des enfants souffrant d une d ficience en hormone de croissance Son utilisation diagnostique en association avec les dosages de somatotrophine ou comme outil d valuation de la r action d un enfant l administration d hormone de croissance lui a conf r une place de choix dans les laboratoires d endocrinologie surtout en mati re de troubles de la croissance 7 Le dosage de l IGF I joue galement un r le majeur dans le diagnostic et le traitement de l acrom galie Les taux d IGF I peuvent permettre d valuer les r sultats d un traitement de cette affection base de bromocriptine 3 DESCRIPTION DE LA M THODE DE DOSAGE Le dosage radio immunologique de I IGF I con u par DiaSorin est un dosage de d s quilibrage double anticorps qui comprend une proc dure d extraction la silice octad cylsilyl e des chantillons s riques Une fois la proc dure d extraction termin e le RIA est pratiqu par l ajout d chantillon et d anticorps anti IGF I de lapin suivi d une incubation de 2 heures entre 2 et 8 C L IGF I marqu l iode 125 est ensuite ajout avant une deuxi me incubation de 20 heures entre 2 et 8 C Un vecteur pr alablement pr cipit un deuxi me anticorps et le poly thyl ne glycol sont ajout s en une seule tape Le dosage peut tre centrifug et d cant apr s incubation du deuxi me anticorps pendant 2 h
28. ARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka cancer OBSERVERA Den radioaktivitet som anges p bipacksedeln kan skilja sig n got fr n den aktivitet som anges p etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet Etiketterna p kartongen och p flaskan med sp r mnet anger den verkliga radioaktivitetsm ngden vid kalibreringsdatum medan bipacksedeln anger den teoretiska radioaktiviteten f r satsen TECKEN SOM KAN TYDA P EN KVALITETSF RS MRING HOS REAGENSERNA I SATSEN 6 1 F rekomst av onormalt partikelformigt material i n gon av reagenserna 6 2 En f r ndring av kalibreringskurvans l ge eller lutning j mf rt med vad som normalt erh lles 6 3 En s nkning av maximal bindning 6 4 En h g ospecifik bindning 54 7 PROVTAGNING OCH PROVHANTERING Det kr vs 250 uL serum f r en assay Ta blodprov genom venpunktion med ett 5 eller 10 mL glasr r av vacutainertyp Lat blodet koagulera i rumstemperatur Centrifugera i 15 minuter vid 760 x g sa att hemolysfria serumprover erh lles Inga tillsatser eller konserveringsmedel beh vs f r att bibeh lla intakta prover Alla plastartiklar glasvaror och annan materiel som kommer i kontakt med provet m ste vara helt fria fran kontaminerande material EDTA eller hepariniserad plasma kan ge n got l gre resultat Serumet skall genast separeras fran cellerna och f rvaras vid h gst 15 C Vid l ngtidsf rvaring skall prov
29. E moyenne Faile a 11 15 15 Moyen 14 18 103 15 23 16 2 PURETE LA PURETE DU DOSAGE A ETE VERIFIEE PAR LES TESTS DE LINEARITE ET DE RECUPERATION Lin arit parall lisme Etude de dilution en s rie de 3 chantillons inconnus ws nmol l Num ro Non dilu en Zero EE R cup ration Etude de la r cup ration valeurs nmol l Le pourcentage de r cup ration est calcul comme suit a Ge 100 Valeur Etalon ajout Valeur Valeur Ge r f rence escompt e mesur e feup raton _ Ge Lot N 1 BE as E IT CC aS o aa fd oi 183 w toNe2 ER RR eee RR 16 3 Sensibilit Analytique D finie comme la concentration obtenue 3 carts types de l activit de liaison maximale la quantit minimale d celable est de lt 2 0 nmol l 16 4 Sp cificit Analytique La comparaison de la r activit de l anticorps anti IGF I au point d inhibition de 50 B Bo a t effectu e avec les peptides suivants Peptide r action crois e IGF II lt 1 0 Somatotrophine lt 1 0 Facteur de croissance de fibroblastes lt 1 0 Facteur de croissance transformant lt 1 0 Facteur de croissance d riv des plaquettes lt 1 0 CONSULTEZ LA DERNIERE PAGE POUR LES REFERENCES 24 PROCEDURE DE DOSAGE 10 11 12 Reconstituez les r actifs lyophilis s et laissez les chantillons congel s d congeler compl tement Extrayez les contr les et les chantillons inconnus sel
30. IGF I Insulin Like Growth Factor I 125 RIA Kit For the quantitative determination of IGF I Somatomedin C in human serum Instruction Manual Manuel d Instructions Testanleitung Manual de instru es Bruksanvisning Catalog No REF KAT NR N de Catalogo Katalognummer 53065 DiaSorin Stillwater Minnesota 55082 0285 U S A TABLE OF CONTENTS EngliS NEE Fran ais Deutsch ai ein Ve LTE SVENSKA ees INSULIN LIKE GROWTH FACTOR RIA KIT 1 INTENDED USE FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE This kit contains instructions and materials for the quantitative determination of IGF I in human serum by radioimmunoassay RIA The procedure is to be used as an adjunct procedure to hGH determination in the diagnosis of hypopituitarism and acromegaly 2 SUMMARY AND EXPLANATION Somatomedin C is a 70 amino acid peptide which is part of a family of growth factors which includes insulin like growth factors and Il somatomedins A and B and MSA Somatomedin C was recently found to be identical in structure to IGF I whose sequence was published in 1978 by Rinderknecht and Humbel There are similarities between proinsulin and somatomedin in that both contain A and B peptides with a C peptide linked and both have internal disulfides IGF I is highly basic in nature due to its amino acid composition and circulates bound to high molecular weight proteins of approximately 140 000 daltons IGF I mediates the growth promoting action
31. NSB tubes from all counts 13 3 Divide the corrected CPM of each calibrator control or unknown sample by the corrected CPM of the calibrator 0 CPM of Calibrator or Unknown Sample CPM of NSB B Bo x 100 CPM of calibrator O CPM of NSB 13 4 Using 2 cycle semi log or log logit graph paper plot percent B BO for the IGF I calibrators vertical axis versus the concentration horizontal axis 13 5 Draw a best fit line through the points 13 6 Interpolate the levels of IGF I in the unknown samples from the plot 13 7 Correct for appropriate reconstitution volume For example If 250 uL of serum was extracted and reconstituted with 500 uL of calibrator O multiply the value interpolated from the curve by 2 If 250 ul of serum was extracted and reconstituted with 1 0 mL of calibrator 0 multiply the value interpolated from the curve by 4 13 8 Calculate maximum binding by dividing CPM of calibrator 0 by the average total counts obtained in the total count tubes g 1118 x 10 radius in cm rpm TABLE II DiaSorin IGF I Sample Data Yo Graph Final Duplicate Average Corrected Bound Conc Conc Tube CPM CPM CPM B T B Bo nmol L nmol L Total 10 830 10 991 10 991 NSB 351 345 3 2 338 Calibrator 0 4 060 4 058 3 713 37 2 4 055 Calibrators nmol L 1 2 9 3 332 3 298 2 953 79 5 3 264 2 7 3 2 852 2 673 2 328 62 7 2 683 3 16 4 2 032 2 046 1 701 45 8 2 059 4 29 9 1 685 1 660 1 315 35 4 1 634 5 82 5 99
32. WITH DEVICES CONTROL English Frangais Deutsch Portugu s Svenska European Conformit aux CE Konformitats Conformidade com Europeisk Conformity normes europ ennes kennzeichnung as normas europeias verensst mmeise lee Date limite Mindesthaltbar K 2 Expiration Date d utilisation keitsdatum Prazo de validade Utgangsdatum Manufacturer Fabricant Hersteller Fabricante Tilverkare Consult Consulter les SES Consulte as Instructions instructions instru es de Se bruksanvisningen for Use d utilisation sung beachten es utiliza o In vitro E ae In vitro Diagn stico in Ur diagnostic Diagnostic in vitro Diagnostikum vitro Diagnostik in vitro Lot No No de lot Chargen Nr N 2 do lote Batch nummer Maximum Temp rature 2 Temperatura temperature maximale H chsttemperatur m xima Max temperatur Antiserum Antis rum Antiserum Anti soro Antiserum Precipitating lel Pg P Precipitado no SA reagent R actif pr cipitant Fallungsreagenz Utfallningsreagens reagente Tracer antigen labelled with 1 Traceur antig ne marqu l iode Tracer 51 markiertes Antigen Tra ador antigeno marcado com 1 Sp relement antigen betecknad med 3 Calibrator talon Kalibrator Calibrador Kalibrator Control serum S rum de contr le Kontrollserum Soro de controlo Kontrollserum Reconstitute with Reconstituer Mit X ml Reconstituir Reko
33. a oral N o coma nem beba nas reas designadas para trabalho radioactivo As reas onde possam ocorrer fugas devem ser limpas e lavadas com detergente lcali ou solu o de descontamina o radiol gica Qualquer vidro usado deve ser enxaguado completamente em gua antes de lavar qualquer outro material de vidro do laborat rio Para m dicos ou institui es que recebem r dio is topos sob uma licen a espec fica A recep o uso transfer ncia e elimina o de materiais radioactivos est o sujeitos aos regulamentos e condi es de sua licen a espec fica ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico que provoca cancro segundo o Estado da Calif rnia a Peon 41 ATENGAO O simbolo de radioactividade impresso na embalagem pode ser ligeiramente diferente do s mbolo impresso no r tulo da caixa e no r tulo do frasco do tra ador O r tulo da caixa e do frasco do tra ador indicam a quantidade real de radioactividade na data de calibragem enquanto a embalagem indica a radioactividade te rica no kit 6 INDICA ES DE POSS VEL DETERIORA O DOS REAGENTES DO KIT 6 1 A presen a de part culas anormais em qualquer dos reagentes 6 2 Um deslocamento na inclina o ou posi o da curva do calibrador em rela o que normalmente obtida 6 3 Uma diminui o na liga o maxima 6 4 Uma liga o n o espec fica alta 7 RECOLHA DE ESP CIMES E PREPARA O S o necess rios duzentos e cinquenta microlitr
34. a radioaktiva material f r endast tas emot f rv rvas gas och anv ndas av l kare veterin rer med praktik inom veterin rmedicin kliniska laboratorier eller sjukhus och f r endast anv ndas f r kliniska tester in vitro eller laboratorietester in vitro vilka ej inneb r n gon inv rtes eller utv rtes administrering av materialet eller av str lning fr n det till m nniskor eller djur F r mottagande f rv rv innehav anv ndning och verl telse g ller de regler och den allm nna licens som utf rdats av den amerikanska Nuclear Regulatory Commission eller av den stat med vilken kommissionen har ing tt ett avtal f r ut vande av regulatorisk myndighet 1 Radioaktivt material f r endast f rvaras p en speciellt avsedd plats Endast auktoriserad personal f r ha tillg ng till radioaktivt material Pipettera aldrig radioaktivt material med munnen Undvik att ta eller dricka i lokaler d r radioaktivt material anv nds Ytor d r spill kan f rekomma skall torkas av och d refter reng ras med ett alkaliskt reng ringsmedel eller en radiologisk dekontamineringsl sning Alla glasvaror som anv nds m ste sk ljas noga med vatten innan de diskas tillsammans med andra glasvaror f r laboratoriebruk NR Pen F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en specifik licens N r ni tar emot anv nder verl ter och kasserar radioaktivt material g ller reglerna och villkoren i er specifika licens V
35. abnormal particulate matter in any of the reagents 6 2 A shift in the slope or position of the calibrator curve from what is normally obtained 6 3 A decrease in maximum binding 6 4 A high nonspecific binding a PON 7 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION Two hundred and fifty microliters of serum are required for the assay Collect blood by venipuncture in 5 or 10 mL evacuated glass tube Allow the blood to clot at room temperature Centrifuge for 15 minutes using 760 x g to obtain hemolysis free serum No additives or preservatives are required to maintain the integrity of the sample All plastics glassware or other material coming into contact with the specimen should be entirely free of any contamination EDTA or heparinized plasma may cause slightly lower results The serum should be promptly separated from the cells and stored at 15 C or lower For long term storage samples should be frozen at 15 C or lower Specimens can be frozen and thawed several times 8 EQUIPMENT AND MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED 8 1 Disposable borosilicate glass tubes 12 x 75 mm 8 2 Temperature controlled centrifuge to accommodate 12 x 75 mm tubes 8 3 Gamma scintillation counter capable of counting iodine 125 8 4 Vortex 8 5 Pipetting devices a Micropipettors calibrated to deliver 50 uL 250 uL and 500 uL b Repeating dispensers calibrated to deliver 200 uL and 500 uL Materials and Reagents Required for ODS silica Column Extraction 8
36. acteurs de croissance qui comprend les facteurs de croissance insulinomim tiques de types 1 et 2 les somatom dines A et B et la MSA Il a r cemment t d couvert que la structure de la somatom dine C tait identique celle de I IGF I dont la s quence a t publi e en 1978 par Rinderknecht et Humbel Il existe des similitudes entre la proinsuline et la somatom dine toutes deux contiennent des peptides A et B li s un peptide C et toutes deux sont dot es de disulfures internes L IGF a une nature tr s basique due sa composition en acides amin s et circule sous forme li e des prot ines de haut poids mol culaire d environ 140 000 daltons L IGF I relaie les actions activatrices de croissance de la somatotrophine Il est lib r par une grande vari t de tissus dans l organisme en r ponse la somatotrophine et il est soumis un m canisme de r trocontr le qui forme une boucle sous haute surveillance entre l hypothalamus et I hypophyse Hormis la somatotrophine deux des plus importants facteurs influen ant la teneur en IGF I du s rum humain sont l ge et le sexe Les taux d IGF I sont minimes la naissance puis augmentent au cours de la petite enfance et de l enfance Les taux les plus lev s sont atteints pendant l adolescence avant de baisser lentement au cours de l ge adulte Les femmes pr sentent des taux d IGF I l g rement sup rieurs ceux des hommes pendant l adolescence et l ge adulte
37. alibreringsl sningen skall sp das pa l mpligt s tt fran kolonnen med ODS kiselsyraextrakt med kalibreringsl sning O och d refter testas pa nytt Korrigera resultatet med l mplig spadningsfaktor 14 2 Aktiviteten i r ren m ste r knas under tillr ckligt lang tid for att man ska kunna undvika statistiska fel till exempel ger en rakning av 2 000 CPM ett fel pa 5 medan 10 000 CPM ger ett fel pa 1 14 3 IGF I f rh js vid graviditet och kar med graviditetens l ngd Andra tillst nd ar k nda f r att reducera niv erna av IGF I d ribland bristf llig n ringsstatus fastande och hypotyreoidism ven hepatit kan p verka IGF I niv erna Vid diagnos av hypopituitarism b r ocks provokationstest f r humant tillv xthormon anv ndas n r IGF I resultaten r l ga Ett normalt IGF l resultat r mycket osannolikt vid diagnos av hypopituitarism utom f r hyperprolaktinemi eller kraniofaryngiom Inga l kemedel har i skrivande stund funnits interferera med IGF l assayen 15 FORVANTADE VARDEN Referensomrade Normala omr den b r fastst llas av varje laboratorium Ett stort antal prover geografiskt ursprung Minnesota Israel Maryland och Australien har studerats under utvecklingen av v r IGF l assay och vi har funnit att IGF I v rden varierar med lder och inom vissa ldergrupper med k n N r s r l mpligt b r d rf r matchande kontroller med h nsyn till lder och k n anv ndas Tabell III och figur 2 och 3 visa
38. ant dans tous les tubes l exception des tubes de num ration totale en les renversant pendant 2 minutes minimum Placez les tubes sur du papier absorbant pour liminer toutes les gouttes de surnageant qui peuvent rester sur les bords avant de les replacer l endroit 10 11 Utilisez un compteur de scintillation gamma pour effectuer la num ration du pr cipit dans chaque tube et dans les tubes de num ration totale pendant le temps n cessaire l obtention d une exactitude statistique consultez la section Limitations de la proc dure COMMENTAIRES SUR LA PROCEDURE 11 1 11 2 11 3 11 4 Ajoutez chaque aliquote de r actif au tiers inf rieur du tube a essai pour garantir le m lange complet des r actifs Certains fabricants vendent des tubes jetables qui donnent des liaisons non sp cifiques lev es Si le surnageant est aspir dans le pr cipit prenez soin de ne pas remuer le pr cipit Pour surveiller compl tement la pr cision constante d un dosage RIA il faut parfois v rifier des facteurs suppl mentaires DiaSorin sugg re de v rifier les param tres suivants afin d assurer la constance des performances de la trousse a Num rations totales b Liaison maximale Coups moyens par minute CPM du tube de I talon 0 CPM moyen des tubes de num ration totale g 1118 x 10 radius in cm rpm 18 c Liaison non sp cifique CPM moyen du tube NSB CPM moyen des tubes de num ration totale
39. anzen zu behandeln REAGENZIEN MIT NATRIUMAZID VORSICHT Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Natriumazid das gegebenenfalls mit Blei oder Kupferleitungen reagieren und h chst explosive Metallazide bilden kann Zur Entsorgung mit reichlichst Wasser nachsp len um Azidaufbau zu vermeiden Weitere Informationen finden Sie im Abschnitt Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts Dekontaminierung von Abfl ssen in Laborsp lbecken zur Entsorgung von Azidsalzen des Handbuches Safety Management Sicherheitsma nahmen Nr CDC 22 herausgegeben von den Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA 1976 Europ ische Gemeinschaften Gefahrenbezeichnungen f r gef hrliche Stoffe Richtlinie 1999 45 EG R 20 21 22 Gesundheitssch dlich beim Einatmen Verschlucken und Ber hrung mit der Haut R 32 Entwickelt bei Ber hrung mit S ure sehr giftige Gase S28 Bei Ber hrung mit der Haut sofort mit viel Wasser abwaschen REAGENZIEN MIT THIMEROSAL Einige Reagenzien in diesem Kit enthalten Thimerosal das eine Quecksilberkomponente enthalt Die Entsorgung von elementarem oder anorganischem Quecksilber sowie von Quecksilberoxiden und komponenten muss unter strikter Einhaltung aller lokalen einzelstaatlichen und bundesstaatlichen Vorschriften erfolgen WARNHINWEIS Dieses Produkt enth lt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien Geburtsdefekte oder andere reproduktive Sch
40. ar med nominella koncentrationer p 3 0 75 nmol L 0 12 3 0 enheter mL f rdigsp dda i BSA boratbuffert inneh llande 0 1 natriumazid som konserveringsmedel Exakta v rden anges f r varje batch Rekonstituera innehallet i varje flaska med 0 5 mL renat vatten och lat flaskorna sta 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st Blanda noga f re anv ndning DiaSorins IGF I kalibreringsl sningar har kalibrerats mot WHO s standard NBSB 87 518 Alla j mf relser med andra produkter eller metoder skall ske med denna referensstandard som utg ngspunkt F r att approximera enheterna som anv nds av m nga kommersiella laboratorier anges v rdet 25 nmol L som likv rdigt med 1 enhet mL Nanomol iter IGF I omvandlas till ng mL genom att multiplicera med 7 7 Kalibreringsl sningarna i satsen kan betraktas som likv rdiga med patientprover n r de anv nds med de reagenser och metoder som rekommenderas f r detta diagnostiska in vitro test 4 3 IGF I antiserum frystorkad reagens Kaninserum mot IGF I spatt med BSA boratbuffert med heparin inneh llande 0 002 timerosal Rekonstituera flaskans innehall med 14 mL renat vatten och lat sta 15 20 minuter tills inneh llet ar fullst ndigt uppl st Blanda noga f re anv ndning 4 4 IGF I frystorkad reagens Humant syntetiskt IGF I 53 70 markt med jod 125 och uppl st i BSA borat EDTA buffert inneh llande 0 008 timerosal som konserveringsmedel Rekonstituera flaskans inneh ll me
41. at 2 8 C 10 5 Add 200 uL of 1251 IGF I to all tubes 10 6 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 20 hours 1 hour at 2 8 C 10 7 Vigorously mix the precipitating complex add 500 uL to all tubes except the total count tubes 10 8 Vortex the tubes gently without foaming and incubate for 2 hours 15 minutes at 2 8 10 9 Centrifuge the tubes for 20 minutes using a minimum of 760 x g at 20 25 C 10 10Immediately decant the supernatant from all the tubes except the total count tubes by inverting them for a minimum of 2 minutes Blot the tubes with absorbent paper to remove any drops of supernatant that may be remaining on the rims before turning the tubes upright 10 11 Using a gamma scintillation counter count the precipitate of each tube and the total count tubes for a sufficient time to achieve statistical accuracy see Limitations of the Procedure section PROCEDURAL COMMENTS 11 1 Add each aliquot of reagent to the lower third of the assay tube to ensure complete mixture of reagents 11 2 Some manufacturer s disposable tubes yield elevated nonspecific bindings 11 3 If you choose to aspirate the supernatant from the precipitate be careful not to disturb the precipitate 11 4 To completely monitor the consistent performance of an RIA there are additional factors which may be checked DiaSorin suggests a check of the following 5 parameters to assure consistent kit performance a Total Counts b Maximum Bi
42. c Conc Tubo CPM CPM CPM B T B Bo nmol L nmol L Total 10 830 10 991 10 991 NSB 351 345 3 2 338 Calibrador 0 4 060 4 058 3 713 37 2 4 055 Calibradores nmol L 1 2 9 3 332 3 298 2 953 79 5 3 264 2 7 3 2 852 2 673 2 328 62 7 2 683 3 16 4 2 032 2 046 1 701 45 8 2 059 4 29 9 1 685 1 660 1 315 35 4 1 634 5 82 5 991 978 633 17 0 964 Pacientes desconhecidos 1 2 564 2 577 2 232 60 1 8 3 16 6 2 590 2 1 701 1 712 1 367 36 8 27 6 55 2 1 723 Os dados t picos da amostra e a curva do calibrador s o apresentados na TABELA Il e na FIGURA 1 esta curva serve apenas como refer ncia e n o dever ser usada para o c lculo de qualquer valor 45 Curva de calibrador de amostra IGF I B BO TTT FIGURA 1 DADOS DE REDU O O Laborat rio de controlo de qualidade da DiaSorin usa um ajuste de curva spline suave 14 LIMITA ES DO PROCEDIMENTO 14 1 Qualquer amostra desconhecida que apresente uma leitura maior do que o calibrador kit mais alto deve ser apropriadamente dilu da da coluna ODS s lica com o calibrador O e testada novamente Corrija o resultado usando um factor de dilui o apropriado 14 2 Devem ser feitas contagens suficientes para evitar a introdu o de erros devidos a erro estat stico na contagem por exemplo um ac mulo de 2 000 CPM levar a um erro de 5 10 000 CPM levar a um erro de 1 14 3 O IGF I elevado durante a gravidez e os valores aumentam com o tempo de gesta o S o
43. c rio e compostos de merc rio deve ser efectuada em estrita conformidade com todas as normas estatais e locais ADVERT NCIA Este produto cont m um elemento qu mico que provoca malforma es cong nitas ou outros preju zos reprodu o segundo o Estado da Calif rnia REAGENTES COM IODO 125 Este kit cont m material radioactivo que n o excede 4uCi 148kBq de iodo 125 Devem ser tomadas todas as precau es apropriadas e usadas boas pr ticas laboratoriais no armazenamento manuseamento e elimina o deste material Para m dicos ou institui es que recebem r dio is topos sob uma licen a geral Este material radioactivo pode ser recebido adquirido possu do e usado apenas por m dicos veterin rios na pr tica da medicina veterin ria laborat rios cl nicos e hospitais e apenas para testes laboratoriais ou testes cl nico in vitro que n o envolvam administra o interna ou externa do material ou a radia o deste para seres humanos ou animais A sua recep o aquisi o posse uso e transfer ncia est o sujeitos aos regulamentos e licen a geral da Comiss o Reguladora Nuclear dos Estados Unidos ou do estado com o qual a Comiss o entrou em acordo para o exerc cio da autoridade reguladora 1 O armazenamento de qualquer material radioactivo deve ser limitado a uma rea especificamente designada O acesso a materiais radioactivos deve ser limitado apenas a pessoal autorizado N o pipete material radioactivo por vi
44. conhecidas outras condi es que reduzem os n veis de IGF I incluindo um estado nutricional pobre o jejum ou o hipotiroidismo A hepatite pode tamb m influenciar os n veis de IGF I No diagn stico do hipopituitarismo devem ser usados tamb m testes provocados da hormona do crescimento humano quando os resultados de IGF I s o baixos Um resultado de IGF I normal muito improv vel no diagn stico do hipopituitarismo ou o craniofaringioma Nesta altura n o se conhece nenhum medicamento que interfira no ensaio de IGF 1 9 15 VALORES ESPERADOS Intervalo normal Os intervalos normais devem ser verificados por cada laborat rio No desenvolvimento do nosso ensaio de IGF I foram estudados um grande n mero de amostras normais origem geogr fica Minnesota Israel Maryland e Austr lia e n s encontr mos que os valores de IGF I variam com a idade e em algumas faixas et rias com o sexo portanto os controlos emparelhados de idade e sexo devem ser usados onde apropriado TABELA Ill e FIGURAS 2 e 3 apresentam os resultados de valores normais procedentes de v rios laborat rios e reunidos pela DiaSorin Por causa de haver uma distor o pronunciada da distribui o durante a puberdade necess rio usar um modelo estat stico de transforma o do registo para desenvolver uns limites de confian a de 95 em faixas de ajuste de crian as Isto n o necess rio para o tratamento de valores de adultos 46 TABELA III Estudo de interva
45. controlado entre o hipot lamo e a gl ndula pituitaria A parte da hormona do crescimento dois dos mais importantes factores que influenciam a concentra o de IGF I no soro s o a idade e o sexo Os n veis de IGF I s o mais baixos no nascimento e aumentam durante a inf ncia Os n veis mais altos s o atingidos durante a adolesc ncia e descem lentamente durante a idade adulta As mulheres apresentam uns n veis de IGF I levemente mais altos do que os homens durante a adolesc ncia e a idade adulta 11 A medi o de IGF I foi defendida como instrumento de despistagem e controlo em crian as deficientes em hormona do crescimento O seu uso em diagn stico acompanhado por medi es de hormona do crescimento ou como instrumento para avaliar a resposta de uma crian a a quem se ministra hormona do crescimento levou o a um lugar not vel no laborat rio end crino particularmente quando se faz face a doen as do crescimento 2 Um segundo uso importante da medi o de IGF I encontra se no diagn stico e tratamento da acromegalia Os n veis de IGF I podem ser eficazes para avaliar os resultados do tratamento com bromocriptina da acromegalia 3 PRINC PIO DO ENSAIO O RIA IGF I da DiaSorin um ensaio de desequil brio de anticorpo duplo que inclui um procedimento de extrac o de ODS s lica para amostras de soro Ap s o procedimento de extrac o o radioimunoensaio executado utilizando uma adi o de amostra e anti IGF I de c
46. d 14 mL renat vatten och lat sta 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st Blanda noga f re anv ndning 4 5 IGF I kontroller niv 1 och 2 frystorkade reagenser Humant serum med tillsats vid behov av l mplig m ngd intakt humant IGF I f r att erh lla en halt inom det angivna omr det Med tillsats av 0 02 natriumazid som konserveringsmedel Rekonstituera inneh llet i varje flaska med 1 0 mL renat vatten och l t st 15 20 minuter tills inneh llet r fullst ndigt uppl st Blanda noga och behandla kvalitetskontrollserumet som ett ok nt prov Haltintervallet anges p flaskorna med kontrollen 4 6 IGF I utf llningskomplex frystorkad reagens Normalt kaninserum f rutf llt med antikaninserum fr n get och polyetylenglykol PEG sp tt med BSA boratbuffert med tillsats av 0 03 timerosal Rekonstituera flaskans inneh ll med 35 mL renat vatten Blanda NOGA tills suspensionen ser homogen ut och lat den sedan sta minst 30 minuter i rumstemperatur Blanda da och da 4 7 ODS kiselsyra reagens f rdig f r anv ndning Plastkolonner inneh llande oktadekasilyl kiselsyra Sep Paks Kolonnerna m ste primas innan proverna appliceras se avsnittet om extraktion Kolonnerna med ODS kiselsyra kan f rvaras i rumstemperatur Kolonnerna r stabila i 3 r i ppnad f rpackning och under obegr nsad tid i o ppnad f rpackning 5 VARNINGAR OCH F RSIKTIGHETS TG RDER FOR DIAGNOSTISKT BRUK IN VITRO Ej avsett f r
47. den hervorruft REAGENZIEN MIT JOD 125 Dieses Kit enth lt radioaktives Material mit nicht mehr als 2 uCi 74 kBq Jod 125 Bei der Lagerung Handhabung und Entsorgung dieses Materials sind entsprechende Vorsichtsma nahmen und gute Laborpraktiken einzuhalten F r rzte bzw Institutionen welche im Rahmen einer Generallizenz Radioisotope erhalten Entgegennahme Erwerb Besitz und Verwendung dieses radioaktiven Materials sind nur rzten veterin rmedizinisch t tigen Tier rzten klinischen Laboren oder Krankenh usern und nur f r klinische In vitro Tests oder In vitro Labortests gestattet bei denen kein interner oder externer Kontakt des Materials oder seiner Strahlung mit Menschen oder Tieren stattfindet Entgegennahme Erwerb Besitz Verwendung und Weitergabe des Materials unterliegen den Vorschriften und der Generallizenz der US Nuclear Regulatory Commission US amerikanische Strahlenschutzbeh rde bzw des Staates mit dem diese Beh rde ein Abkommen zur Aus bung ihrer berwachungsfunktion abgeschlossen hat 1 Die Lagerung des radioaktiven Materials ist auf einen speziell daf r bestimmten Bereich zu beschr nken Der Zugang zu radioaktivem Material ist nur befugten Personen zu gestatten Radioaktives Material nicht mit dem Mund pipettieren Im vorgesehenen radioaktiven Arbeitsbereich nicht essen oder trinken Versch ttetes Material aufwischen und Bereich anschlie end mit alkalischem Reinigungsmittel oder radiologischer Dekontam
48. e IFG I 1125 a todos os tubos 10 6 Misture com cuidado os tubos sem fazer espuma e incube durante 20 horas 1 hora a 2 8 C 10 7 Misture vigorosamente o complexo precipitante adicione 500 uL a todos os tubos excepto os tubos de contagem total 10 8 Misture com cuidado os tubos sem fazer espuma e incube durante 2 horas 15 minutos a 2 8 C 10 9 Centrifugue os tubos durante 20 minutes usando no m nimo 760 x g a 20 25 C g 1118x 10 raio em cm rpm 43 10 10Decante imediatamente os sobrenadantes de todos os tubos excepto os tubos de contagem total invertendo os durante um tempo minimo de 2 minutos Seque os tubos com papel absorvente para retirar qualquer gota de sobrenadante que possa ter permanecido nas bordas antes de colocar os tubos direitos 10 11 Usando um contador de cintila o gama conte o precipitado de cada tubo e dos tubos de contagem total por tempo suficiente para atingir precis o estat stica ver sec o de Limita es do Procedimento 11 COMENT RIOS SOBRE O PROCEDIMENTO 11 1 Adicione cada al quota de reagente para o ter o inferior do tubo de ensaio para garantir a mistura completa dos reagentes 11 2 Os tubos descart veis de alguns fabricantes produzem liga es n o espec ficas elevadas 11 3 Se opta por aspirar o sobrenadante do precipitado tome cuidado para n o perturbar o precipitado 11 4 Para monitorar completamente o desempenho consistente de um ensaio RIA h factores adiciona
49. e controls and unknown samples according to section 9 of the product insert Identify tubes in duplicate Dispense reagents according to the following scheme Total NSB Cal Controls and Tubes Reagents Counts 0 5 unknown samples Calibrator 0 50 uL 50 uL Calibrators 1 5 50 uL Extracted Controls 50 uL Extracted Unknown Samples 50 uL Antiserum 200 uL 200 uL Mix well incubate for 2 hours 15 minutes at 2 8 C Dispense 200 uL of Tracer into all wells Mix well incubate for 20 hours 1 hour at 2 8 C Dispense 500 uL Precipitating Complex into all wells except the Total Count tubes Mix well incubate for 2 hours 15 minutes at 2 8 C Centrifuge using 760 x g for 20 minutes Decant the supernatants Count each tube in a gamma counter for 60 seconds or longer g 1118 x 10 radius in cm rpm TROUSSE DE DOSAGE RADIO IMMUNOLOGIQUE DU FACTEUR DE CROISSANCE INSULINOMIMETIQUE DE TYPE 1 1 INDICATION POUR USAGE DIAGNOSTIQUE IN VITRO Cette trousse contient les instructions et les r actifs permettant d effectuer la d termination quantitative par dosage radio immunologique RIA de l IGF I dans le s rum humain Il s agit d une proc dure d appoint du dosage de la somatotrophine dans le diagnostic de l hypopituitarisme et de l acrom galie 2 RESUME ET COMMENTAIRE La somatom dine C est un peptide compos de 70 acides amin s faisant partie d une famille de f
50. e unbekannte Probe deren Wert gr Ber ist als der gr Bte Kalibratorwert des Kits muss aus dem ODS Silicas ulenextrakt entsprechend mit Nullkalibrator verd nnt und erneut getestet werden Das Ergebnis muss mit dem entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigiert werden 14 2 Die Z hlzeiten sollten ausreichend lang sein um das Auftreten von Fehlern aufgrund von statistischen Fehlern bei der Zahlung zu vermeiden 2 000 CPM ergeben z B 5 Fehler 10 000 CPM ergeben 1 Fehler 14 3 Die IGF I Werte sind w hrend einer Schwangerschaft erh ht und es wurde festgestellt dass die Werte mit zunehmender Dauer der Schwangerschaft ansteigen Unter anderen Bedingungen zu denen ein schlechter Ern hrungsstatus Fasten und Hypothyroidismus z hlen sinken dagegen die IGF I Konzentrationen Durch Hepatitis k nnen die IGF I Konzentrationen ebenfalls beeinflusst werden Bei der Diagnose von Hypopituitarismus sollten provokative Tests bez glich des menschlichen Wachstumshormons auch angewendet werden wenn die IGF I Ergebnisse gering ausfallen Ein normales IGF I Ergebnis ist bei der Diagnose von Hypopituitarismus sehr unwahrscheinlich au er im Falle von Hyperprolaktin mie oder Kraniopharyngiom Zurzeit sind keine Drogen bekannt durch die der IGF I Assay beeintr chtigt wird H 15 ERWARTETE WERTE Normalbereich Die Normalbereiche sollten von jedem Labor berpr ft werden Im Laufe der Entwicklung unseres IGF I Assays wurde eine gro e Anzahl von nor
51. en 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 10 5 Zu allen R hrchen 200 ul 1251 IGF I hinzugeben g 1118 x 10 Radius in cm U min 30 10 6 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 20 Stunden 1 Stunde lang bei 2 8 C inkubieren 10 7 Den pr zipitierenden Komplex gr ndlich mischen 500 ul zu allen R hrchen auBer den Totalaktivit t R hrchen zugeben 10 8 Die R hrchen vorsichtig ohne Schaumbildung vortexen und 2 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 10 9 Die R hrchen 20 Minuten lang mit mindestens 760 x g bei 20 25 C zentrifugieren 10 10Die berst nde durch mindestens 2 Minuten langes Umdrehen der R hrchen sofort aus allen R hrchen au er den Totalaktivit t R hrchen dekantieren Bevor Sie die R hrchen aufrecht stellen die R hrchen auf Saugpapier abtupfen um alle eventuellen Tropfen von berst nden auf den R ndern zu entfernen 10 11Mit einem Gammaszintillationsz hler das Pr zipitat jedes R hrchens und der Totalaktivit t R hrchen eine ausreichende Zeit lang messen um statistische Genauigkeit zu erhalten siehe den Abschnitt Grenzen des Verfahrens 11 ANMERKUNGEN ZUM VERFAHREN 11 1 Jedes Aliquot des Reagenzes in das untere Drittel des Testr hrchens hinzugeben damit sich die Reagenzien vollst ndig vermischen 11 2 Die Einweg R hrchen einiger Hersteller f hren zu hohen nichtspezifischen Bindungen 11 3 Falls Sie es vorziehen den berstand vom Pr zipitat
52. ent als zus tzliches Verfahren zur hGH Bestimmung bei der Diagnose von Hypopituitarismus und Akromegalie 27 REAGENZIEN MIT MATERIAL HUMANEN URSPRUNGS Dieses Produkt ist als potenzieller Infektionserreger zu behandeln Alle in der Herstellung dieses Produktes verwendeten Serum bzw Plasmaspendeeinheiten wurden nach einer FDA genehmigten Methode getestet und f r nicht reaktiv auf Hepatitis B Oberflachenantigen HBsAg Hepatitis C Antik rper HCV und Antik rper f r HIV 1 2 befunden Obwohl diese Methode auBerst genau ist bietet sie keine Gew hr daf r dass alle infizierten Einheiten identifiziert werden k nnen Dieses Produkt kann auch Material humanen Ursprungs enthalten f r welches es noch kein genehmigtes Testverfahren gibt Da keine der zur Zeit bekannten Testmethoden absolute Gew hr f r die Abwesenheit des Hepatits B Virus HBV Hepatitis C Virus HCV des Retrovirus HIV oder anderer Infektionserreger bieten kann sind alle Produkte mit Komponenten humanen Ursprungs unter Einhaltung guter Laborpraktiken und entsprechender Vorsichtsma nahmen laut Empfehlungen des Leitfadens der Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health amerikanische Krankheitsforschungszentren Staatliche Gesundheitsinstitute Biosafety in Micro biological and Biomedical Laboratories Biosicherheit in mikrobiologischen und biomedizinischen Laboren 4 Auflage Mai 1999 oder aktuelle Auflage als potenzielle infekti se Subst
53. ente pronto a usar As colunas de pl stico cont m s lica quimicamente ligada a octadecilsilano ODS Sep Paks As colunas devem ser preparadas antes de aplicar a amostra ver a sec o de Procedimento de Extrac o As colunas de ODS silica podem ser armazenadas temperatura ambiente As colunas s o est veis durante 3 anos ap s a embalagem ter sido aberta e indefinidamente em caso de a embalagem ficar fechada 5 AVISOS E PRECAU ES PARA USO DIAGN STICO IN VITRO N o recomendado para o uso interno ou externo em seres humanos ou animais Este procedimento deve ser usado como procedimento anexo determina o de hGH no diagn stico do hipopituitarismo e a acromegalia 40 REAGENTES COM MATERIAL DE FONTE HUMANA Trate como se fossem potencialmente infecciosos Cada unidade de doador de soro plasma usada na prepara o deste produto foi testada por um m todo aprovado pela FDA e determinada como sendo n o reactiva para a presen a de HBsAg anticorpo para HCV e anticorpo para HIV 1 2 Embora estes m todos sejam muito precisos n o garantem que todas as unidades infectadas sejam detectadas Este produto tamb m pode conter outros materiais de origem humana para os quais n o h teste aprovado Como nenhum m todo de teste conhecido pode oferecer seguran a total em rela o aus ncia do v rus da hepatite B HBV do v rus da hepatite C HCV do v rus da Imunodefici ncia Humana HIV ou de outros agentes infeccios
54. entrifugieren Die berst nde dekantieren Jedes R hrchen mindestens 60 Sekunden lang in einem Gamma Z hler z hlen g 1118 x 10 Radius in cm U min 38 KIT RIA DE FACTOR DE CRESCIMENTO TIPO INSULINA 1 USO INDICADO PARA USO DIAGN STICO IN VITRO Este kit cont m instru es e materiais para a determina o quantitativa de IGF I no soro humano atrav s de radioimunoensaio RIA Este procedimento deve ser usado como procedimento anexo determina o de hGH no diagn stico do hipopituitarismo e a acromegalia 2 RESUMO E EXPLICA O A somatomedina C um pept deo amino cido 70 que faz parte da fam lia dos factores de crescimento que inclui os factores de crescimento tipo insulina e Il as somatomedinas A e B e MSA Recentemente foi verificado que a somatomedina C tem a mesma estrutura do IGF I cuja sequ ncia foi publicada em 1978 por Rinderknecht e Humbel Tanto a pr insulina como a somatedina cont m pept deos A e B com um pept deo C ligado e ambas t m dissulfetos internos O IGF I de natureza muito b sica devido sua composi o de amino cidos e circula ligado a prote nas de peso molecular alto de aproximadamente 140 000 daltons 1 O IGF I medeia as ac es de est mulo do crescimento da hormona do crescimento E libertado por certos tecidos do corpo como resposta hormona do crescimento e est sob o controlo de um mecanismo de retroalimenta o que forma um circuito firmemente
55. erna h llas frysta vid h gst 15 C Proverna kan frysas och tinas flera g nger 8 N DV NDIG UTRUSTNING OCH MATERIEL SOM EJ MEDF LJER 8 1 Borosilikatr r f r eng ngsbruk 12 x 75 mm 8 2 Temperaturreglerad centrifug som passar f r 12 x 75 mm r r 8 3 Gammar knare som kan r kna jod 125 8 4 Vortex 8 5 Pipetteringshj lpmedel a Mikropipetter kalibrerade f r 50 250 och 500 pL b Repeterande dispensorer kalibrerade f r 200 och 500 ul Material och reagenser som beh vs f r extraktion i kolonner med ODS kiselsyra 8 6 12 mL sprutor f r engangsbruk 8 7 Isopropylalkohol 8 8 Metanol HPLC klassad eller b ttre 8 9 4 ttiksyra 8 10 0 5 N saltsyra 8 11 Tryckluft 8 12 37 C vattenbad 8 13 16 x 100 mm glasr r 9 EXTRAKTION AV SERUM I KOLONNER MED ODS KISELSYRA 9 1 Pipettera 250 uL kontroller och ok nda prover i ett 12 x 75 mm glasprovr r och tills tt 1 mL 0 5 N HCI Vortexa f rsiktigt s att inneh llet blandas val 9 2 Aptera varje kolonn med ODS kiselsyra pa en spruta 9 3 Tills tt 5 mL reagensklassad isopropylalkohol till varje spruta 9 4 Tryck inneh llet genom sprutan med sprutkolven 9 5 Avl gsna kolonnen med ODS kiselsyra Avl gsna kolonnen fran sprutan innan kolven tas bort detta f r att inte kontaminera sprutans inneh ll med v tska fran kolonnen 9 6 Avl gsna kolvarna fran sprutorna 9 7 S tt tillbaka kolonnerna med ODS kiselsyra pa sprutorna 9 8 Tills tt5 mL HPLC klassad metano
56. ers for Disease Control and Prevention Atlanta GA U S 1976 European Communities Hazardous Substance Risk Phrases Council Directive 1999 45 EC R20 21 22 Harmful by inhalation in contact with skin and if swallowed R32 Contact with acids liberates very toxic gas 28 After contact with skin wash immediately with plenty of water REAGENTS CONTAINING THIMEROSAL Some reagents in this kit contain thimerosal which contains a mercury compound Disposal of elemental mercury inorganic mercury mercury oxides and mercury compounds should be done in strict compliance with all local state and federal regulations WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause birth defects or other reproductive harm REAGENTS CONTAINING IODINE 125 This kit contains radioactive material which does not exceed 2 uCi 74 kBq of iodine 125 Appropriate precautions and good laboratory practices should be used in the storage handling and disposal of this material For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a general license This radioactive material may be received acquired possessed and used only by physicians veterinarians in the practice of veterinary medicine clinical laboratories or hospitals and only for in vitro clinical or laboratory tests not involving internal or external administration of the material or the radiation therefrom to human beings or animals Its receipt acquisition posse
57. es tapes 4 7 Ajoutez 5 ml d acide ac tique a 4 R p tez les tapes 4 7 R p tez les tapes 10 et 11 Appliquez l chantillon de l tape 1 Enfoncez lentement la cartouche un d bit de 1 mltoutes les 2 3 minutes R p tez les tapes 5 7 Lavez la colonne de silice octad cylsilyl 2 fois avec 10 ml d acide ac tique 4 en r p tant les tapes 5 7 entre les lavages Pr levez l luat dans des tubes en verre de 16 x 100 mm en luant le peptide avec 4 ml de m thanol de qualit CLHP Appuyez lentement afin que le m thanol reste en contact avec la colonne de silice octad cylsilyl pendant 3 minutes minimum Laissez le m thanol s vaporer siccit dans un bain d eau 37 C en utilisant de l air comprim ou de l azote Reconstituez les chantillons d shydrat s avec 500 ul d talon 0 et mettez les en incubation 37 C pendant 10 minutes pour obtenir une reconstitution compl te m langez de temps en temps sur l agitateur Vortex pendant l incubation Un chantillon dont on escompte des valeurs lev es doit tre reconstitu avec 1 0 ml d talon 0 ce moment l Le r sultat final doit tre corrig par le facteur de dilution appropri voyez la section R sultats pour le calcul Dosez 50 ul des extraits de s rum en double dans le dosage radio immunologique 10 PROCEDURE DE DOSAGE 11 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 7 10 8 10 9 Reconstituez les r
58. esse et il a t d montr que ses valeurs augmentaient avec l ge gestationnel D autres conditions sont connues pour r duire les taux d IGF I y compris un mauvais tat nutritionnel le je ne et l hypothyro die L h patite peut galement influencer les taux d IGF l Des tests de provocation de la somatotrophine doivent galement tre utilis s dans le diagnostic de l hypopituitarisme lorsque les r sultats IGF I sont faibles Un taux normal d IGF I est tr s improbable lors du diagnostic d hypopituitarisme sauf en cas d hyperprolactin mie ou de craniopharyngiome A l heure actuelle aucun m dicament n est connu pour interf rer avec le dosage de I IGF I 9 15 VALEURS ESCOMPT ES Valeurs normales Les valeurs normales doivent tre v rifi es par chaque laboratoire Nous avons tudi un grand nombre d chantillons normaux provenance Minnesota Isra l Maryland et Australie durant la mise au point de notre dosage de l IGF I et nous avons constat que les taux d IGF I varient avec l ge et dans certaines classes d ge selon le sexe du patient Par cons quent des contr les assortis en termes d ge et de sexe doivent tre utilis s si besoin est Le TABLEAU III et les FIGURES 2 et 3 donnent les r sultats de valeurs normales obtenues par plusieurs laboratoires et rassembl es par DiaSorin Etant donn la distribution dissym trique prononc e au cours de la pubert il est n cessaire d utiliser un mod le statistique de
59. eures entre 2 et 8 C L IGF I issu d autres mammif res peut galement tre dose l aide de cette proc dure 4 REACTIFS FOURNIS DANS LA TROUSSE Etalon 0 IgF 1 1 flacon 20 ml Etalons 1 5 IgF 1 5 flacons 0 5 ml Antis rum IgF 1 1 flacon 14 ml Traceur IgF 1 1 1 flacon 14 ml Contr les IgF 1 2 flacons 1 0 ml Complexe pr cipitant IgF 1 1 flacon 35 ml Silice octad cylsilyl 1 paquet 25 colonnes Nombre de dosages CONSERVATION d s r ception la trousse doit tre conserv e a 15 C au minimum Apr s reconstitution conservez chaque r actif une temp rature inf rieure ou gale 15 C jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette Les r actifs ne doivent pas tre utilis s au del de la date de p remption Pendant la reconstitution du contenu des flacons agitez d licatement pour viter la formation de mousse Les r actifs de lots diff rents ne doivent pas tre m lang s 4 1 Etalon 0 IGF I r actif lyophilis Tampon BSA borate contenant 0 25 d azide de sodium comme conservateur Reconstituez le flacon avec 20 ml d eau purifi e et laissez reposer pendant 15 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langez bien avant utilisation 4 2 Etalons 1 5 IGF I r actif lyophilis Cinq talons IGF I humains intacts des concentrations nominales comprises entre 3 0 et 75 nmol l 0 12 3 0 unit s ml sont pr dilu s dans un tampon BSA borate contenant 0 1
60. iel Wenn 250 ul Serum mit 500 ul Nullkalibrator extrahiert und rekonstituiert wurden den aus der Kurve interpolierten Wert mit dem Faktor 2 multiplizieren Wenn 250 ul Serum mit 1 0 mi Nullkalibrator extrahiert und rekonstituiert wurden den aus der Kurve interpolierten Wert mit dem Faktor 4 multiplizieren Die maximale Bindung wird berechnet indem die CPM des Nullkalibrators durch die in den Totalaktivit t R hrchen erhaltenen durchschnittlichen Gesamtz hlungen dividiert wird 32 TABELLE II DiaSorin IGF I ProbenDaten Kurven End Zweifache Durchschn Korrigierte Gebunden konz konz R hrchen CPM CPM CPM B T B Bo nmol l nmol l Gesamt 10 830 10 991 10 991 NSB 351 345 3 2 338 Nullkalibrator 4 060 4 058 3 713 37 2 4 055 Kalibratoren nmol l 1 2 9 3 332 3 298 2 953 79 5 3 264 2 7 3 2 852 2 673 2 328 62 7 2 683 3 16 4 2 032 2 046 1 701 45 8 2 059 4 29 9 1 685 1 660 1 315 35 4 1 634 5 82 5 991 978 633 17 0 964 Unbekannte Patientenproben 1 eas 0577 2 232 60 1 8 3 16 6 2 1 701 1 712 1 367 36 8 27 6 55 2 1 723 Typische Probendaten und eine Eichkurve werden in TABELLE II und ABBILDUNG 1 gezeigt diese Kurve dient nur als Beispiel und sollte nicht zur Berechnung von Probenwerten verwendet werden IGF I PROBENEICHKURVE B BO eieune 4 ABBILDUNG 1 DATENREDUKTION Das Qualitatskontrolllabor von DiaSorin verwendet eine geglattete Spline Kurvenanpassung 33 14 GRENZEN DES VERFAHRENS 14 1 Jed
61. inationsl sung waschen Alle benutzten 28 9 Peon Glasbeh lter vor dem Waschen mit anderen Laborbeh ltern aus Glas gr ndlichst mit Wasser sp len F r Arzte oder Einrichtungen die im Rahmen einer Sondergenehmigung Radioisotope erhalten Entgegennahme Gebrauch Weitergabe und Entsorgung radioaktiven Materials unterliegen den Vorschriften und Bedingungen der jeweiligen Sondergenehmigung WARNHINWEIS Dieses Produkt enthalt eine Chemikalie die nach Angaben des US Bundesstaates Kalifornien krebserregend ist ACHTUNG Die auf der Packungsbeilage angegebene Radioaktivitat kann von der auf dem Etikett des Kartons und des Tracer Flaschchens angegebenen etwas abweichen Sowohl das Etikett des Kartons als auch das Etikett des Tracer Fl schchens geben den tats chlichen Wert der Radioaktivit t am Kalibrationsdatum an w hrend die Packungsbeilage die theoretische Radioaktivit t darstellt 6 ANZEICHEN F R MOGLICHEN VERFALL DER KITREAGENZIEN 6 1 Existenz anormaler Feinpartikel in einem der Reagenzien 6 2 Eine Verschiebung des Anstiegs bzw der Position der Kalibrierkurve im Vergleich zu den normalen Ergebnissen 6 3 Eine Abnahme der maximalen Bindung 6 4 Eine hohe nichtspezifische Bindung 7 PROBENGEWINNUNG UND VORBEREITUNG F r den Assay werden zweihundertf nfzig Mikroliter Serum ben tigt Das Blut durch Venenpunktur in einem evakuierten Glasr hrchen f r 5 oder 10 ml sammeln Blut bei Raumtemperatur gerinnen lassen Zur Gewinnung von h m
62. ions locales r gionales et nationales AVERTISSEMENT ce produit contient un produit chimique connu dans l tat de Californie comme tant l origine de malformations cong nitales ou de troubles de la reproduction REACTIFS CONTENANT DE L IODE 125 Cette trousse contient un produit radioactif qui ne d passe pas 2uCi 74 kBq d iode 125 Les pr cautions appropri es et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilis es pour la conservation la manipulation et la mise au rebut de ce produit Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence g n rale Ce produit radioactif peut tre re u acquis d tenu et utilis uniquement par des m decins des v t rinaires dans le cadre de la pratique de m decine v t rinaire des laboratoires cliniques ou des h pitaux et uniquement pour des analyses cliniques ou de laboratoire in vitro n impliquant pas l administration interne ou externe du produit ni par rayonnement l homme ou l animal Sa r ception son acquisition sa d tention son utilisation et son transfert sont sujets aux r glementations et la licence g n rale de l US Nuclear Regulatory Commission ou de l tat avec lequel la Commission a conclu un accord pour l exercice de l autorit r glementaire 1 Le produit radioactif doit tre conserv dans son r cipient d origine un endroit d sign 2 L acc s aux produits radioactifs doit tre limit au per
63. is que devem ser verificados A DiaSorin sugere a verifica o dos par metros seguintes para assegurar um desempenho consistente do kit a Contagens totais b Liga o m xima M dia de contagens por minuto CPM de Tubo calibrador O M dia da CPM do total dos tubos de contagem c Liga o n o espec fica CPM m dia de Tubo NSB M dia da CPM do total de tubos de contagem d Inclina o da curva do calibrador Por exemplo monitore os pontos de supress o 80 50 e 20 da linha do calibrador 12 CONTROLO DE QUALIDADE Cada laborat rio deve incluir ao menos duas amostras de controlo em cada ensaio para assegurar a validade dos resultados de cada ensaio Deve se ent o determinar o desvio m dio e o desvio padr o para cada controlo usando um m nimo de dez 10 ensaios Pode se ent o obter um intervalo aceit vel de valores para esses controlos usando 2 desvios padr o dos valores previamente determinados O Laborat rio de Controlo de Qualidade da DiaSorin determinou um intervalo para os controlos inclu dos neste kit 13 C LCULO DE RESULTADOS Existem v rios m todos para calcular resultados de ensaios RIA Cada um baseia se em obter uma curva de calibragem plotando a extens o da liga o versus as concentra es declaradas dos calibradores Este gr fico pode ser em escala linear ou logar tmica Cada um destes m todos d essencialmente os mesmos resultados para controlos e amostras embora certos ensaios possam se e
64. junto Noi LIT y bre St TT Mis 06 ConjuntoNo 2 PT 16 3 Sensibilidade Anal tica Quando definida como a concentra o aparente em 3 desvios padr o das contagens na liga o m xima a quantidade m nima detect vel de lt 2 0 nmol L 16 4 Especificidade Anal tica A compara o da reactividade do anticorpo IGF I no B Bosupress o de 50 foi feita com os seguintes pept deos Pept deo reactividade cruzada IGF II lt 1 0 Hormona do crescimento humana lt 1 0 Factor de crescimento de fibroblastos lt 1 0 Factor de crescimento transformador lt 1 0 Factor de crescimento derivado das plaquetas lt 1 0 CONSULTE A ULTIMA PAGINA PARA OBTER REFERENCIAS 50 ESQUEMA DO ENSAIO Reconstitua os reagentes liofilizados e deixe descongelar totalmente qualquer esp cime congelado 2 Extraia os controlos e amostras desconhecidas de acordo com a sec o 9 da embalagem do produto 3 Identifique dois tubos 4 Despeje os reagentes de acordo com o seguinte esquema Contagens NSB CAL Controlos e amostras Tubos Reagentes totais 0 5 desconhecidas Calibrador 0 50 50 Calibradores 1 5 s ul HL Controlos extra dos 50 50 uL Amostras uL 50 uL desconhecidas 200 uL extra das Anti soro 200 HL 5 Misture bem incube durante 2 horas 15 minutos a 2 8 C 6 Despeje 200 uL do tra ador em todos os po os 7 Misture bem incube durante 20 horas 1 hora a 2 8 C
65. kerst lla statistisk noggrannhet se avsnittet Metodbegr nsningar KOMMENTARER TILL PROCEDURERNA 11 1 Tills tt alla reagenss till den nedersta tredjedelen av provr ret s att reagenserna kan blandas fullst ndigt 11 2 Eng ngsr r fr n vissa tillverkare ger en f rh jd ospecifik bindning 11 3 Om du v ljer att suga bort supernatanten fr n f llningen m ste du vara f rsiktig s att du inte r r upp f llningen g 1118 x 10 radie i cm rpm 56 11 4 F r att bekr fta att ett RIA test ger konsekventa resultat kan man kontrollera ett antal andra faktorer DiaSorin rekommenderar att man regelbundet kontrollerar f ljande parametrar f r att vara s ker p att satsen ger konsekventa resultat a Totalaktivitet b Maximal bindning Medelv rdet av antal kn pp per minut CPM f r r ret med 0 l sning CPM medelv rdet f r totalaktivitetsr ren c Ospecifik bindning CPM medelv rdet f r NSB r ret CPM medelv rdet f r totalaktivitetsr ren d Kalibreringskurvans lutning F lj exempelvis kalibreringskurvans punkter f r 80 50 och 2096 h mning 12 KVALITETSKONTROLL Alla laboratorier skall ta med minst tv kontroller vid varje assay f r att garantera att resultaten r korrekta Man b r fastst lla ett medelv rde och en standardavvikelse f r varje kontroll genom att k ra den i minst tio test Man kan f fram ett godk nt omr de f r kontrollerna genom att anv nda 2 standardavvikelser f r de
66. l 9 9 Upprepa steg 4 7 9 10 Tills tt 5 mL 4 ttiksyra 9 11 Upprepa steg 4 7 9 12 Upprepa steg 10 och 11 9 13 Applicera provet fr n steg 1 Tryck l ngsamt genom patronen med en fl deshastighet pa 1 mL per 2 3 minuter 9 14 Upprepa steg 5 7 9 15 Tv tta kolonnen med ODS kiselsyra tv g nger med 10 mL 4 ttiksyra och upprepa steg 5 6 och 7 mellan tvattningarna g 1118 x 10 radie i cm rpm 55 10 11 9 16 Samla upp eluatet i 16 x 100 mm glasr r genom att sp da peptiden med 4 mL HPLC klassad metanol Tryck langsamt sa att metanolen har kontinuerlig kontakt med kolonnen med ODS kiselsyra i minst 3 minuter 9 17 Indunsta metanolen sa att den torkar i ett 37 C vattenbad med hj lp av tryckluft eller kvave 9 18 Rekonstituera de torkade proverna med 500 uL 0 kalibreringsl sning och inkubera vid 37 C i 10 minuter f r att s kerst lla en fullst ndig rekonstitution vortexa da och da under inkubationen Ett prov som f rv ntas vara f rh jt skall har rekonstitueras med 1 0 mL av kalibreringsl sning O Det slutliga resultatet skall korrigeras med lamplig spadningsfaktor se avsnittet Resultatberakning 9 19 Testa ett dubbelprov av 50 uL serumextrakt i radioimmunoassayen TESTPROCEDUR 10 1 Rekonstituera de frystorkade reagenserna och l t frysta reagenser tina fullst ndigt Se till att reagenserna ej blir varmare an 20 25 C Blanda alla reagenser f rsiktigt f re anv ndning 10 2 St
67. l schchen 20 ml IgF 1 Kalibratoren 1 5 5 Fl schchen 0 5 ml IgF 1 Antiserum 1 Fl schchen 14 ml 15 IgF 1 Tracer 1 Fl schchen 14 ml IgF 1 Kontrollen 2 Fl schchen 1 0 ml Pr zipitierender IgF 1 Komplex 1 Fl schchen 35 ml ODS Silica 1 Pckg 25 S ulen Anzahl der Tests 26 LAGERUNG Der Kit sollte bei 15 C oder bei tieferen Temperaturen aufbewahrt werden Nach der Rekonstitution sind alle Reagenzien bis zu dem auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum bei 15 oder bei tieferen Temperaturen zu lagern Die Reagenzien d rfen nach dem Verfallsdatum nicht verwendet werden Bei der Rekonstitution den Inhalt der Flaschchen vorsichtig mischen um Schaumbildung zu vermeiden Reagenzien aus verschiedenen Chargen d rfen nicht vermischt werden 4 1 IGF I Nullkalibrator lyophilisiertes Reagenz BSA Boratpuffer enthalt 0 25 Natriumazid als Konservierungsmittel Das Flaschchen mit 20 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen vor dem Gebrauch gr ndlich mischen 4 2 IGF I Kalibratoren 1 5 lyophilisiertes Reagenz F nf intakte humane IGF I Kalibratoren werden in Nominalkonzentrationen von 3 0 75 nmol l 0 12 3 0 Einheiten ml in BSA Boratpuffer mit 0 1 Natriumazid als Konservierungsmittel vorverd nnt Jeder Charge sind genaue Werte zugeteilt Jedes Fl schchen mit 0 5 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L
68. lera olika v vnader som svar p tillv xthormon och regleras av en terkopplingsmekanism som bildar en noggrant kontrollerad slinga mellan hypotalamus och hypofysen Alder och k n r tv av de viktigaste faktorerna som ut ver tillv xthormon p verkar IGF I koncentrationen i serumet IGF l niv erna r l gst vid f dseln och kar under sp dbarns lder och barndom De h gsta niv erna n s under uppv xttiden ton ren och minskar l ngsamt under mogen lder Kvinnor uppvisar n got h gre IGF I niv er n m n under ton ren och vuxen lder 1 IGF I m tningar har rekommenderats som ett verktyg f r unders kning av behandling av barn med tillv xthormonbrist Dess anv ndning inom diagnostik tillsammans med tillv xthormonm tningar eller som ett verktyg f r att utv rdera barns svar p administrerat tillv xhormon har gett proceduren en dominerande plats i endokrina laboratorier s rskilt vid behandling av tillv xtrubbningar 7 IGF I m tningar r ocks anv ndbara vid diagnostik och behandling av akromegali IGF I niv erna g r det enklare att utv rdera resultaten efter bromokryptinbehandling av akromegali 3 ANALYSPRINCIP DiaSorin IGF I RIA r en dubblerad antikropp obalansassay som innefattar en procedur f r extraktion av ODS kiselsyra oktadekasilyl kiselsyra f r serumprover Efter extraktionen utf rs RIA med prover och anti IGF I fr n kanin f ljt av 2 timmars inkubation vid 2 8 C D refter ti
69. lls tts jod 125 IGF I f ljt av en andra inkubation i 20 timmar vid 2 8 C F rutf lld b rare en andra antikropp och polyetylenglykol tills tts i ett enda steg Efter tv timmars inkubation vid 2 8 C av den andra antikroppen centrifugeras och dekanteras assayr ren IGF I fran m nga andra d ggdjur kan ocks m tas med denna metod A _ REAGENSER I F RPACKNINGEN IgF 1 kalibreringsl sning O 1 flaska 20 mL IgF 1 kalibreringsl sningar 1 5 5 flaskor 0 5 mL IgF 1 antiserum 1 flaska 14 mL 13 IgF 1 sp r mne 1 flaska 14 mL IgF 1 kontroller 2 flaskor 1 0 mL IgF 1 utfallningskomplex 1 flaska 35 mL ODS kiselsyra 1 f rpackning 25 kolonner Antal test F RVARING O ppnad f rpackning f rvaras vid h gst 15 C Efter rekonstituering f rvaras varje reagens vid h gst 15 C till det utg ngsdatum som anges p etiketten Reagenserna f r ej anv ndas efter utg ngsdatum N r man rekonstituerar inneh llet i flaskorna m ste man blanda f rsiktigt f r att undvika skumbildning Reagens fr n skilda batcher f r ej blandas 52 4 1 IGF I kalibreringsl sning O frystorkad reagens BSA boratbufferten innehaller 0 25 natriumazid som konserveringsmedel Rekonstituera flaskans inneh ll med 20 mL renat vatten och lat sta 15 20 minuter tills inneh llet ar fullst ndigt uppl st Blanda noga f re anv ndning 4 2 IGF I kalibreringsl sningar 1 5 frystorkade reagenser Fem humanintakta IGF I kalibreringsl sning
70. lo normal de acordo com a idade e o sexo Nanomoles L anos Faixa et ria 95 de limites de confian a em modelo de transforma o de registo excepto para adultos Unidades mL anos Faixa et ria 8011000 061 13 0 241 59 0 69 11 0 37 1 31 95 de limites de confian a em modelo de transforma o de registo excepto para adultos 47 IGF4 Expected Values Using Age and Sex Nanomoles L 1mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Adult Years FIGURA 2 48 IGF Expected Values Using Age and Sex Units mL 95 CZ Males Confidence Limits L Females n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Achat Years FIGURA 3 16 CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE DESEMPENHO 16 1 Precis o Varia o intra ensaio valores nmol L Valorm dio Desvio padr o CV n Baixo 7 OTT Varia o intra ensaio valores nmol L Valor m dio Desvio padr o CV n Baixo 89 J m f 125 15 49 16 2 PRECISAO A PRECISAO DO ENSAIO FOI VERIFICADA ATRAVES DO TESTE DA LINEARIDADE E DO TESTE DE RECUPERA O Linearidade Paralelismo Estudo serial de dilui o de 3 mostras desconhecidas valores nmol L N o dilu do Recupera o Estudo de recupera o valores nmol L A percentagem de recupera o calculada como valor medido valor esperado x 100 adicionado medido recupera o Con
71. lungen bei maximaler Bindung definiert wird betragt sie lt 2 0 nmol l 16 4 Analytische Spezifit t Der Vergleich der Reaktivit t des IGF I Antik rpers bei der 50 prozentigen Suppression B Bo wurde mit den folgenden Peptiden durchgef hrt Peptid Kreuzreaktivit t IGF II lt 1 0 Menschliches Wachstumshormon lt 1 0 Fibroblastenwachstumsfaktor lt 1 0 Transformationswachstumsfaktor lt 1 0 Von Thrombozyten abgeleiteter Wachstumsf lt 1 0 LITERATURANGABEN FINDEN SIE AUF DER LETZTEN SEITE 37 TESTSCHEMA ONO 10 11 12 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Proben vollstandig auftauen lassen Die Kontrollen und unbekannten Proben gem B Abschnitt 9 der Produktbeilage extrahieren R hrchen in doppelter Anordnung aufstellen Reagenzien wie folgt dispensieren Totalakt NSB KAL Kontrollen und R hrchen Reagenzien ivit t 0 5 unbekannte Proben Nullkalibrator 50 ul 50 ul Kalibratoren 1 5 50 ul Extrahierte Kontrollen 50 ul Extrahierte unbekannte 50 ul Proben 200 ul 200 ul Antiserum Gut mischen 2 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren 200 ul Tracer in alle Wells dispensieren Gut mischen 20 Stunden 1 Stunde lang bei 2 8 C inkubieren 500 ul pr zipitierenden Komplex in alle Wells dispensieren mit Ausnahme der Totalaktivit t R hrchen Gut mischen 2 Stunden 15 Minuten lang bei 2 8 C inkubieren Mit 760 x g 20 Minuten lang z
72. malen Proben geografische Herkunft Minnesota Israel Maryland und Australien untersucht und wir haben herausgefunden dass die IGF I Werte je nach Alter und in einigen Altersgruppen je nach Geschlecht variieren daher sollten gegebenenfalls Kontrollen von Personen mit entsprechendem Alter und Geschlecht verwendet werden In TABELLE Ill sowie in den ABBILDUNGEN 2 und 3 werden die Ergebnisse von Normalwerten dargestellt die von DiaSorin aus verschiedenen Labors zusammengetragen und kollationiert wurden Da w hrend der Pubert t eine deutliche Verzerrung der Verteilung auftrit muss ein statistisches Modell zur logarithmischen Transformation angewendet werden um bei der Festlegung der Wertebereiche f r Kinder Grenzwerte mit 95 iger Sicherheit zu erhalten F r die Handhabung von Erwachsenenwerten ist dies nicht erforderlich TABELLE Ill Normalbereichsstudie nach Alter und Geschlecht Nanomol l Jahre Altersgruppe 8 01 10 00 15 34 5 92 39 75 17 29 9 16 32 64 10 01 13 99 21 90 8 65 55 46 32 15 9 30 111 10 14 00 18 00 42 84 17 33 105 83 42 68 12 94 140 80 27 55 36 9 09 46 01 30 03 41 11 63 48 43 Logarithmisches Transformationsmodell mit Grenzwerten mit 95 iger Sicherheit au er f r Erwachsene 34 Einheiten ml Jahre Altersgruppe ee Bereich CT T m ur 8 01 10 00 0 24 1 59 oe 11 0 37 1 31 10 01 13 99 0 35 2 22 0 37 4 44 14 00 18 00 0 69 4 23 0 52 5 63 Logarithmisches Transformationsmodell mit Grenzwer
73. misture perfeitamente antes de usar 4 4 IGF II reagente liofilizado O IGF I humano sint tico 53 70 marcado com iodo 125 e dilu do em tamp o de BSA borato EDTA que cont m 0 008 de timerosal como conservante Reconstitua o frasco com 14 mL de gua depurada e deixe o em descanso durante 15 20 minutos at o respectivo conte do estar completamente dissolvido misture perfeitamente antes de usar 4 5 Controlos IGF I N veis 1 e 2 reagente liofilizado O soro humano enriquecido se necess rio com quantidades apropriadas de IGF I humano intacto para obter uma concentra o dentro das faixas especificadas Acrescenta se 0 02 de azida de s dio como conservante Reconstitua os frascos com 1 0 mL de gua depurada e deixe o em descanso durante 15 20 minutos at o respectivo conte do estar completamente dissolvido misture perfeitamente e trate o soro de controlo de qualidade como uma amostra desconhecida Os intervalos est o impressos nos frascos de controlo 4 6 Complexo precipitador IGF I reagente liofilizado O soro de coelho normal pr precipitado com soro anti coelho de cabra e glicol polietileno PEG dilu do em tamp o de BSA borato com adi o de 0 03 de timerosal Reconstitua o frasco com 35 mL de gua depurada misture PERFEITAMENTE at a suspens o ficar homog nea e depois deixe o em descanso durante um m nimo de 30 minutos temperatura ambiente misturando ocasionalmente 4 7 ODS Silica reag
74. ncaixar melhor em um m todo em especial do que em outro O m todo de c lculo para o Laborat rio de Controlo de Qualidade DiaSorin B Bo versus a concentra o do registo 13 1 Calcule a CPM m dia para cada calibrador controlo e amostra desconhecida 13 2 Subtraia a CPM m dia dos tubos NSB de todas as contagens 13 3 Divida a CPM corrigida de cada calibrador controlo ou amostra desconhecida pela CPM corrigida do calibrador 0 CPM do calibrador de amostra desconhecida CPM de NSB B Bo x 100 CPM do calibrador 0 CPM de NSB 44 13 4 Usando 2 pap is de gr fico ciclo semi log ou log logit plote a percentagem B BO para os calibradores IGF I eixo vertical versus a concentra o eixo horizontal 13 5 Desenhe uma linha de melhor ajuste atrav s dos pontos 13 6 Interpole os n veis de IGF I nas amostras desconhecidas a partir do gr fico 13 7 Corrija para o volume de reconstitui o apropriado Por exemplo Se foram extra das 250 uL de soro e foram reconstitu das com 500 uL do calibrador 0 multiplique o valor interpolado da curva por 2 Se foram extra das 250 uL de soro e foram reconstitu das com 1 0 mL de calibrador 0 multiplique o valor interpolado da curva por 4 13 8 Calcule a liga o m xima dividindo a CPM do calibrador O pela m dia de contagens totais obtida nos tubos de contagem total TABELA II Dados de Amostra do IGF I Sda DIASORIN Gr fico Final Duplicado Media Corrigido Limite Con
75. nding Average counts per minute CPM of calibrator 0 Tube Average CPM of Total Count Tubes c Nonspecific Binding Average CPM of NSB Tube Average CPM of Total Count Tubes d Slope of Calibrator Curve For example monitor the 80 50 and 20 suppression points of the calibrator line 12 QUALITY CONTROL Each laboratory should include at least two control samples in every assay to ensure the validity of each assay s results A mean and standard deviation should then be deter mined for each control using a minimum of ten 10 assays An acceptable range of values may then be obtained for these controls using 2 standard deviations of the values previously determined The DiaSorin Quality Control Laboratory has determined a range for the controls included in this kit 13 CALCULATION OF RESULTS There are many methods in existence for calculating results of RIAs Each is based on obtaining a calibration curve by plotting the extent of binding against stated concentrations of the calibration calibrators This graph may be either linear or logarithmic scale Each of these methods gives essentially the same values for controls and samples although certain assays may fit better into one particular method versus another The calculation method for the DiaSorin Quality Control Laboratory is B Bo versus log concentration 13 1 Calculate the average CPM for each calibrator control and unknown sample 13 2 Subtract the average CPM of the
76. ngelegt indem die prozentualen Bindungen gegen die angegebenen Konzentrationen der Kalibratoren aufgetragen werden Diese Kurve kann entweder eine lineare oder eine logarithmische Skala besitzen Jede dieser Methoden f hrt im Wesentlichen zu denselben Werten f r Kontrollen und Proben bei einigen Assays ist die eine Methode jedoch m glicherweise besser geeignet als die andere Die Umrechnungsmethode f r das DiaSorin Qualit tskontrolllabor ist B Bo gegen log Konzentration g 1118 x 10 Radius in cm U min 31 13 1 13 2 13 3 B Bo 13 4 13 5 13 6 13 7 13 8 Die durchschnittliche CPM fir die einzelnen Kalibratoren Kontrollen und unbekannten Proben berechnen Die durchschnittliche CPM der NSB R hrchen von allen Zahlungen abziehen Die korrigierte CPM der einzelnen Kalibratoren Kontrollen oder unbekannten Proben durch die korrigierte CPM des Nullkalibrators teilen CPM des Kalibrators oder der unbekannten Probe CPM der NSB x 100 CPM des Nullkalibrators CPM der NSB Auf halblogarithmischem Millimeterpapier 2 Zyklen oder doppelt logarithmischem Millimeterpapier prozentuale Bindungen B BO f r die IGF I Kalibratoren vertikale Achse gegen die Konzentration horizontale Achse auftragen Durch die Punkte eine Ausgleichsgerade ziehen Die Konzentrationen von IGF I in den unbekannten Proben aus der Auftragung interpolieren Mit dem entsprechenden Rekonstitutionsvolumen korrigieren Beisp
77. nstituera X mL avec X mL aufl sen com X mL med X mL Radioactive Radioactif Radioaktiv Radioactivo Radioaktiv p Gesundheits i E Harmful Nocif schadlich Nocivo Skadligt Distribu Par DiaSorin S A 11 rue Georges Besse 92160 Antony France E ce DiaSorin Inc 1951 Northwestern Avenue P O Box 285 Stillwater MN 55082 0285 U S A Phone 651 439 9710 FAX 651 779 7847 For Customer Service in the U S and Canada Call Toll Free 800 328 1482 In the United Kingdom Call 44 118 9364200 FAX 44 118 9792061 10417 PRINTED IN U S A
78. ntient 0 008 de thiomersal comme conservateur Reconstituez le flacon avec 14 ml d eau purifi e et laissez reposer pendant 15 a 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langez bien avant utilisation 4 5 Contr les IGF I niveaux 1 et 2 r actif lyophilis Le s rum humain est dop si besoin est avec la quantit ad quate d IGF I humain intact afin d obtenir une concentration comprise dans l intervalle sp cifi 0 02 d azide de sodium est ajout comme conservateur Reconstituez les flacons avec 1 0 ml d eau purifi e et laissez les reposer entre 15 et 20 minutes jusqu dissolution compl te du contenu m langez soigneusement et traitez le s rum de contr le qualit comme un chantillon inconnu Les intervalles figurent sur les tiquettes des flacons de s rum de contr le 4 6 Complexe pr cipitant IGF I r actif lyophilis Du s rum de lapin normal pr alablement pr cipit avec du s rum anti lapin de ch vre et du poly thyl ne glycol PEG est dilu dans un tampon BSA borate contenant 0 03 de thiomersal Reconstituez le flacon avec 35 ml d eau purifi e m langez SOIGNEUSEMENT jusqu ce que la suspension apparaisse homog ne puis laissez le flacon reposer pendant 30 minutes minimum temp rature ambiante en m langeant de temps en temps 4 7 Silice octad cylsilyl r actif pr t l emploi Les colonnes en plastique contiennent de la silice octad cylsilyl e Sep Pak Elles doivent
79. oelho seguida de 2 horas de incuba o a 2 8 C Depois realiza se uma adi o de IGF I iodo 125 seguida de uma segunda incuba o durante 20 horas a 2 8 C Num nico passo aditam se um portador pr precipitado um segundo anticorpo e glicol polietileno O ensaio pode ser centrifugado e decantado ap s 2 horas de incuba o do segundo anticorpo a 2 8 C O IGF I de muitos outros mam feros tamb m pode ser medido com este procedimento 4 REAGENTES FORNECIDOS NO KIT Calibrador O IgF 1 1 frasco 20 mL Calibradores 1 5 IgF 1 5 frascos 0 5 mL Anti soro IgF 1 1 frasco 14 mL Tra ador SIgF 1 1 1 frasco 14 mL Controlos IgF 1 2 frascos 1 0 mL Complexo precipitante IgF 1 1 frasco 35 mL ODS S lica 1 pkg 25 colunas N mero de testes 39 ARMAZENAMENTO Ao ser recebido o kit deve ser armazenado a 15 C ou menos Ap s a reconstitui o armazene cada reagente a 15 C ou menos at data de validade no r tulo Os reagentes n o devem ser usados ap s o prazo de validade Ao reconstituir o conte do dos frascos misture com cuidado para evitar a forma o de espuma N o misture reagentes de lotes diferentes 4 1 Calibrador O GF I reagente liofilizado O tamp o de BSA borato cont m 0 25 de azida de s dio adicionado como conservante Reconstitua o frasco com 20 mL de gua depurada e deixe o em descanso durante 15 20 minutos at o respectivo conte do estar completamente dissolvido misture perfeitamente antes de usa
80. olysefreiem Serum Blutproben 15 Minuten lang mit 760 x g zentrifugieren Zur Aufrechterhaltung der Probenreinheit sind weder Zusatzstoffe noch Konservierungsmittel erforderlich Alle mit der Probe in Kontakt gekommenen Kunststoffbeh lter Glasbeh lter oder anderen Materialien sind von jeder Verunreinigung freizuhalten EDTA oder heparinisiertes Plasma k nnen zu geringf gig niedrigeren Ergebnissen f hren Das Serum sollte unverz glich von den Zellen separiert und bei 15 C oder tieferen Temperaturen aufbewahrt werden F r eine lange Lagerung sollten Proben bei 15 C oder tieferen Temperaturen eingefroren werden Proben k nnen mehrmals eingefroren und aufgetaut werden 8 ZUS TZLICH BEN TIGTE GER TE UND MATERIALIEN 8 1 Einweg Borosilikatglasr hrchen 12 x 75 mm 8 2 Temperaturgesteuerte Zentrifuge f r 12 x 75 mm R hrchen 8 3 Gammaszintillationszahler zur Messung von Jod 125 8 4 Vortexer 8 5 Pipettierger te a Auf die Abgabe von 50 ul 250 ul und 500 ul kalibrierte Mikropipetten b Auf die Abgabe von 200 ul und 500 ul kalibrierte Multipipetten Zur ODS Silica S ulenextraktion ben tigte Materialien und Reagenzien 8 6 12 ml Einwegspritzen 8 7 Isopropylalkohol 8 8 Methanol HPLC Gradient oder besser 8 9 4 Essigs ure 8 10 0 5 N Salzsaure 8 11 Druckluftversorgung 8 12 Wasserbad bei 37 C 8 13 16 x 100 mm Glasr hrchen 9 EXTRAKTION VON SERUM MIT ODS SILICAS ULEN 9 1 250 ul der Kontrollen und unbekannten Proben in ein
81. on les instructions donn es la section 9 de la notice d utilisation Identifiez les tubes en double Distribuez les r actifs conform ment au profil suivant Num ration NSB Etalon Contr les et Tubes r actifs totale 0 5 chantillons inconnus Etalon 0 50 ul 50 ul Etalons 1 5 50 ul Contr les extraits 50 ul Echantillons inconnus 50 ul extraits 200 ul 200 ul Antis rum M langez bien mettez en incubation pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C Distribuez 200 ul de traceur dans toutes les cupules M langez bien mettez en incubation pendant 20 heures 1 heure entre 2 et 8 C Distribuez 500 ul de complexe pr cipitant dans toutes les cupules l exception des tubes de num ration totale M langez bien et mettez en incubation pendant 2 heures 15 minutes entre 2 et 8 C Centrifugez 760 x g pendant 20 minutes D cantez les surnageants Comptez chaque tube dans un compteur gamma pendant 60 secondes ou plus g 1118 x 10 radius in cm rpm 25 IGF I RIA KIT 1 VERWENDUNGSZWECK NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Diese Packung enth lt Anleitungen und Material f r die quantitative Bestimmung von IGF I in Humanserum mit dem Radioimmunoassay RIA Das Verfahren dient als zus tzliches Verfahren zur hGH Bestimmung bei der Diagnose von Hypopituitarismus und Akromegalie 2 ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLARUNG Somatomedin C ist ein 70 Amino
82. onen 17 Die IGF I Messung wurde als Screening und Behandlungshilfsmittel bei Kindern mit defektem Wachstumshormon bef rwortet Durch ihre Anwendung bei der Diagnose zusammen mit Wachstumshormonmessungen oder als Hilfsmittel zur Beurteilung der Reaktion eines Kindes auf verabreichtes Wachstumshormon hat die Messung einen bedeutenden Stellenwert in Hormonlabors erlangt vor allem bei der Behandlung von Wachstumsst rungen 7 Eine zweite wichtige Anwendung der IGF I Messung ist die Diagnose und Behandlung von Akromegalie IGF I Konzentrationen k nnen bei der Auswertung der Ergebnisse einer Akromegaliebehandlung mit Bromokriptin hilfreich sein 3 TESTPRINZIP Der IGF I RIA von DiaSorin ist ein Doppelantik rper Dys quilibriumtest der ein ODS Silica Extraktionsverfahren f r Serumproben umfasst Nach dem Extraktionsverfahren wird der RIA durch die Zugabe von Proben und Hase anti IGF I durchgef hrt gefolgt von einer zweist ndigen Inkubation bei 2 8 C Anschlie end wird Jod 125 IGF I hinzugegeben gefolgt von einer zweiten Inkubation von 20 Stunden bei 2 8 C Ein zuvor pr zipitierter Tr ger ein zweiter Antik rper und Polyethylenglykol werden in einem einzigen Schritt hinzugegeben Der Test kann nach zwei Stunden Antik rperinkubation bei 2 8 C zentrifugiert und dekantiert werden Der IGF I Wert von zahlreichen anderen S ugetieren kann mit Hilfe dieses Verfahrens ebenfalls gemessen werden 4 KITREAGENZIEN IgF 1 Nullkalibrator 1 F
83. onnu 13 2 Soustrayez le CPM moyen des tubes NSB de toutes les num rations 13 3 Divisez le CPM corrig de chaque talon contr le ou chantillon inconnu par le CPM corrig de I talon 0 CPM de l talon ou de l chantillon inconnu CPM de NSB B Bo x 100 CPM de l talon 0 CPM de NSB 13 4 En utilisant du papier quadrill semi logarithmique ou logarithmique 2 cycles tracez le pourcentage B BO pour les talons IGF I axe vertical par rapport la concentration axe horizontal 13 5 Tracez la droite de meilleur ajustement d un point a l autre 13 6 Interpolez les niveaux d IGF I dans les chantillons inconnus d apr s le trac 13 7 Corrigez en fonction du volume de reconstitution ad quat Par exemple si 250 ul de s rum ont t extraits et reconstitu s avec 500 ul d talon 0 multipliez la valeur interpol e depuis la courbe par 2 Si 250 ul de s rum ont t extraits et reconstitu s avec 1 0 ml d talon O multipliez la valeur interpol e depuis la courbe par 4 13 8 Calculez la liaison maximale en divisant le CPM de I talon O par les num rations totales moyennes obtenues dans les tubes de num ration totale Tube Total NSB Etalon 0 Etalons nmol l 1 2 9 2 7 3 3 16 4 4 29 9 5 82 5 Donn es D ECHANTILLONS IGF I DE DiaSorin Echantillons de patients inconnus 1 2 CPM CPM double moyen 10 830 10 991 10 991 351 345 338 4 060 4 058 4 055 3 332 3 298
84. os todos os produtos que cont m materiais de fonte humana devem ser manuseados de acordo com boas pr ticas laboratoriais usando as precau es adequadas tal como descrito no Manual dos Centros Americanos para Controlo e Preven o de Doen as e Institutos Nacionais de Sa de Bioseguran a em Laborat rios Microbiol gicos e Biom dicos Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed Maio de 1999 ou edi o actual REAGENTES COM AZIDA DE SODIO CUIDADO Alguns reagentes presentes neste kit cont m azida de s dio A azida de s dio pode reagir com chumbo ou cobre para formar azidas de metal altamente explosivo Ao eliminar lave com grande quantidade de gua para impedir a forma o de azida Para mais informa es consulte Descontamina o de drenos de pias de laborat rios para remover sais de azidas no Manual Guia Gest o de Seguran a N CDC 22 emitido pelos Centros de Controlo e Preven o de Doen as GA EUA 1976 Frases de Risco de Subst ncias Perigosas da Comunidade Europeia Directiva do Conselho 1999 45 EC R20 21 22 Nocivo pela inala o em contacto com a pele e se ingerido R32 O contacto com cidos liberta g s muito t xico S28 Ap s contacto com a pele lave imediatamente com gua em abund ncia REAGENTES CONTENDO TIMEROSAL Alguns reagentes neste kit cont m timerosal que cont m um composto de merc rio A remo o de merc rio elementar merc rio inorg nico xidos de mer
85. os de soro para o ensaio Recolha sangue por venipunctura num tubo de vidro vazio de 5 ou 10 mL Deixe o sangue coagular temperatura ambiente Centrifugue durante 15 minutes usando 760 x g para obter soro sem hem lise N o s o necess rios aditivos ou conservantes para manter a integridade da amostra Qualquer pl stico vidro ou outro material que entrar em contacto com o esp cime deve estar completamente descontaminado O EDTA ou o plasma heparinizado pode provocar uns resultados levemente mais baixos O soro deve ser imediatamente separado das c lulas e armazenado a 15 C ou menos Para um armazenamento prolongado as amostras devem ser congeladas a uma temperatura de 15 C ou menos Os esp cimes podem ser congelados e descongelados v rias vezes 8 EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESS RIOS N O FORNECIDOS 8 1 Tubos de vidro descart veis de borosilicato 12 x 75 mm 8 2 Centr fuga controlada por temperatura para acomodar tubos de 12 x 75 mm 8 3 Contador de cintila o gama capaz de contar iodo 125 8 4 V rtex 8 5 Dispositivos para pipetar a Micropipetadores calibrados para administrar 50 uL 250 uL e 500 uL b Distribuidores de repeti o calibrados para administrar 200 uL e 500 uL Materiais e reagentes necess rios para ODS silica Extrac o de coluna 8 6 Seringas descart veis de 12 mL 8 7 lcool isopropil 8 8 Metanol grau HPLC ou melhor 8 9 cido ac tico a 4 8 10 0 5 N de cido hidrocl rico 8 11 Aba
86. pituitarism and acromegaly REAGENTS CONTAINING HUMAN SOURCE MATERIAL Treat as potentially infectious Each serum plasma donor unit used in the preparation of this product has been tested by a U S FDA approved method and found non reactive for the presence of HBsAg antibody to HCV and antibody to HIV 1 2 While these methods are highly accurate they do not guarantee that all infected units will be detected This product may also contain other human source material for which there is no approved test Because no known test method can offer complete assurance that hepatitis B virus HBV hepatitis C virus HCV Human Immunodeficiency Virus HIV or other infectious agents are absent all products containing 2 human source material should be handled in accordance with good laboratory practices using appropriate precautions as described in the Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 ed May 1999 or current edition REAGENTS CONTAINING SODIUM AZIDE CAUTION Some reagents in this kit contain sodium azide Sodium azide may react with lead or copper plumbing to form highly explosive metal azides On disposal flush with a large volume of water to prevent azide build up For further information refer to Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts in the Manual Guide Safety Management No CDC 22 issued by the Cent
87. r 4 2 IGF I Calibradores 1 5 reagente liofilizado Cinco calibradores IGF I humano intacto em concentra es nominais de 3 0 75 nmol L 0 12 3 0 unidades mL s o pr dilu dos num tamp o de BSA borato contendo 0 1 de azida de s dio como conservante Os valores exactos s o atribu dos a cada lote Reconstitua cada frasco com 0 5 mL de gua depurada e deixe os frascos em descanso durante 15 20 minutos at o respectivo conte do estar completamente dissolvido misture perfeitamente antes de usar Os calibradores IGF I da DiaSorin foram calibrados de acordo com a Norma NBSB 87 518 da Organiza o Mundial da Sa de OMS WHO Qualquer compara o com outros produtos ou procedimentos deve ser efectuada com base nesta prepara o de refer ncia Para aproximar se das unidades utilizadas por muitos laborat rios comerciais foi atribu do um valor de 25 nmol L igual a 1 unidade mL Nanomoles litro de IGF I convertido em ng mL pelo multiplicador 7 7 Os calibradores do kit demonstram permutabilidade com amostras de pacientes quando usados com reagentes e um procedimento operacional deste teste de diagn stico in vitro tal como recomendado 4 3 Anti soro IGF I reagente liofilizado Soro anti IGF I de coelho dilu do em tamp o de BSA borato com heparina contendo 0 002 de timerosal Reconstitua o frasco com 14 mL de gua depurada e deixe o em descanso durante 15 20 minutos at o respectivo conte do estar completamente dissolvido
88. r resultaten av normala v rden som insamlats av DiaSorin fr n flera laboratorier Eftersom det f religger en uttalad obalans i distributionen under puberteten r det n dv ndigt att anv nda en logaritmisk statistisk omvandlingsmodell f r att utveckla 95 procentiga konfidensgr nser f r fastst llning av omr den f r barn Detta r ej n dv ndigt med v rden f r vuxna TABELL III Studie av referensomr den efter lder och k n Nanomol L r Mic Gm EE arde arde Logaritmisk omvandlingstabell med 95 procentiga konfidensgranser ej f r vuxna Enheter mL ar arde arde 801 1000 061 13 024159 0 69 11 037131 Logaritmisk omvandlingstabell med 95 procentiga konfidensgr nser ej f r vuxna 59 IGF4 Expected Values Using Age and Sex Nanomoles L 1mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Adult Years FIGUR 2 60 IGF Expected Values Using Age and Sex Units mL 95 CZ Males Confidence Limits L Females n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Achat Years FIGUR 3 16 SPECIFIKA PRESTANDA 16 1 Precision Variation inom serier varden nmol L Medelv rde SD CM n Lag 71 oe aa 15 Variation mellan serier v rden nmol L Medelv rde CM l s OR DEE WEE RE Ee 61 16 2 RIKTIGHET RIKTIGHETEN FOR ASSAYEN HAR KONTROLLERATS GENOM ETT LINEARITETSTEST OCH
89. rbad mit Hilfe von Druckluft oder Stickstoff zu trockenem Methanol verdampfen lassen 9 18 Die getrockneten Proben mit 500 ul Nullkalibrator rekonstituieren und bei 37 C 10 Minuten lang inkubieren um eine vollstandige Rekonstitution sicherzustellen w hrend der Inkubation intermittierend vortexen Eine Probe bei der ein erh hter Wert erwartet wird sollte zu diesem Zeitpunkt mit 1 0 mi Nullkalibrator rekonstituiert werden Das Endergebnis muss durch den entsprechenden Verd nnungsfaktor korrigiert werden N heres zur Berechnung finden Sie im Abschnitt ber die Ergebnisse 9 19 50 ul der Serumextrakte in zweifacher Ausf hrung im Radioimmunoassay testen TESTVERFAHREN 10 1 Lyophilisierte Reagenzien rekonstituieren und gefrorene Reagenzien vollst ndig auftauen lassen Die Reagenzien d rfen nicht auf mehr als 20 25 C erw rmt werden Alle Reagenzien vor dem Gebrauch leicht mischen 10 2 Beschriftete 12 x 75 mm R hrchen gem dem Testschema auf der letzten Seite in doppelter Ausf hrung vorbereiten Alle Volumen sind in Mikroliter angegeben 10 3 Reagenzien den R hrchen wie folgt zugeben a Totalaktivit t R hrchen Bis Schritt 5 beiseite legen b Nichtspezifische Bindung NSB 50 ul Nullkalibrator c IGF I Nullkalibrator 50 ul Nullkalibrator 200 ul IGF I Antiserum d IGF I Kalibratoren 1 5 50 ul IGF I Kalibrator 200 ul IGF I Antiserum e Kontrollen und unbekannte Proben 50 ul Serumextrakte 200 ul IGF I Antiserum 10 4 2 Stund
90. rrigera till l mplig rekonstitutionsvolym Exempel Om 250 uL serum har extraherats och rekonstituerats med 500 uL O l sning multiplicera det avl sta v rdet i kurvan med 2 Om 250 uL serum har extraherats och rekonstituerats med 1 0 mL 0 l sning multiplicera det avl sta v rdet i kurvan med 4 13 8 Ber kna maximal bindning genom att dividera CPM f r O l sningen med medelv rdet f r totalaktivitetsr ren 57 TABELL II DiaSorin IGF I ProvData Diagram Slutlig Dubbelprov Medel Korrigerad Bunden konc konc Ror CPM CPM CPM B T B Bo nmol L nmol L Total 10 830 10 991 10 991 NSB 351 345 3 2 338 Kalibreringsl sning 04 060 4 058 3 713 37 2 4 055 Kalibreringsl sningar 1 5 nmol L 1 2 9 3 332 3 298 2 953 79 5 3 264 2 7 3 2 852 2 673 2 328 62 7 2 683 3 16 4 2 032 2 046 1 701 45 8 2 059 4 29 9 1 685 1 660 1 315 35 4 1 634 5 82 5 991 978 633 17 0 964 Patient okanda 1 2 564 2 577 2 232 60 1 8 3 16 6 2 590 2 1 701 1 712 1 367 36 8 27 6 55 2 1 723 Typiska provdata och en kalibreringskurva visas i tabell II och figur 1 Denna kurva r endast avsedd som ett exempel och skall inte anv ndas f r att ber kna n gra v rden IGF I EXEMPEL P KALIBRERINGSKURVA d UNIT B B0 nmol L Figur 1 DATAREDUKTION DiaSorins kvalitetskontrollaboratorium anv nder en mjuk anpassning till spline funktioner 58 14 METODBEGR NSNINGAR 14 1 Varje ok nt prov som ger ett h gre v rde n den h gsta k
91. s of growth hormone It is released from a variety of tissues in the body in response to growth hormone and is under the control of a feedback mechanism forming a tightly controlled loop between the hypothalamus and the pituitary gland Other than growth hormone two of the most important factors influencing IGF I concentration in the serum are age and sex IGF I levels are lowest at birth and rise throughout infancy and childhood The highest levels are attained during adolescence and decline slowly during adulthood Females exhibit slightly higher IGF I levels than males during adolescence and adult years IGF I measurement has been advocated as a screening and management tool in growth hormone deficient children Its use in diagnosis along with growth hormone measurements or as a tool to assess a child s response to administered growth hormone has led it to a prominent place in the endocrine laboratory particularly when dealing with growth disorders 7 A second major use of IGF I measurement is in the diagnosis and treatment of acromegaly IGF I levels may be helpful to assess the results of bromocryptine treatment of acromegaly 3 PRINCIPLE OF THE ASSAY The DiaSorin IGF I RIA is a double antibody disequilibrium assay which includes an ODS silica extraction procedure for serum samples After the extraction procedure the RIA is performed employing addition of sample and rabbit anti IGF I followed by a 2 hour incubation at 2 8 C
92. sauren langes Peptid das zu einer Familie von Wachstumsfaktoren geh rt zu der die insulin hnlichen Wachstumsfaktoren und Il Somatomedin A und B sowie MSA z hlen Vor kurzem wurde herausgefunden dass Somatomedin C strukturell mit IGF I identisch ist dessen Sequenz im Jahre 1978 von Rinderknecht und Humbel ver ffentlicht wurde Zwischen Proinsulin und Somatomedin bestehen insofern Ahnlichkeiten als beide Substanzen A und B Peptide die mit einem C Peptid verkn pft sind sowie interne Disulfide enthalten IGF I ist aufgrund seiner Aminosaurezusammensetzung stark basischer Natur und zirkuliert gebunden an Proteine mit einem hohen Molekulargewicht von ungefahr 140 000 Dalton IGF I vermittelt die Wachstumsf rderungsvorg nge des Wachstumshormons Es wird in zahlreichen Geweben des K rpers als Reaktion auf das Wachstumshormon freigesetzt und durch einen R ckkopplungsmechanismus gesteuert der eine eng kontrollierte Schleife zwischen Hypothalamus und Hypophyse bildet Neben dem Wachstumshormon sind Alter und Geschlecht zwei der wichtigsten Einflussfaktoren f r die IGF I Konzentration im Serum Die IGF I Konzentrationen sind bei der Geburt am niedrigsten und steigen im Laufe von S uglingsalter und Kindheit an Die h chsten Konzentrationen werden im Jugendalter erreicht und nehmen im Erwachsenenalter langsam wieder ab Weibliche Personen weisen im Jugend und Erwachsenenalter geringf gig h here IGF I Konzentrationen auf als m nnliche Pers
93. sonnel autoris uniquement 3 Ne pipetez pas des solutions radioactives avec la bouche 15 4 Ne mangez pas et ne buvez pas dans les zones de travail radioactives 5 En cas de d versement de produits radioactifs nettoyez la zone puis lavez la l aide d un d tergent alcalin ou d une solution de d contamination radioactive Tout article en verre utilis doit tre enti rement rinc l eau avant d tre lav avec les autres articles en verre du laboratoire Pour les praticiens ou les tablissements recevant des radio isotopes dans le cadre d une licence sp cifique La r ception l utilisation le transfert et la mise au rebut de produits radioactifs sont sujets aux r glementations et conditions de votre licence sp cifique AVERTISSEMENT ce produit contient un produit chimique connu dans l tat de Californie comme tant canc rig ne ATTENTION la radioactivit imprim e sur la notice d utilisation peut tre l g rement diff rente de celle qui est imprim e sur l tiquette de la bo te et sur l tiquette du flacon du traceur Les tiquettes de la bo te et du flacon du traceur indiquent la dose r elle de radioactivit la date de calibrage alors que la notice d utilisation indique la radioactivit th orique de la trousse 6 INDICATIONS D UNE DETERIORATION POSSIBLE DES R ACTIFS DE LA TROUSSE 6 1 Pr sence de particules anormales dans l un quelconque des r actifs 6 2 Ecart de pente ou de position de la
94. ssion use and transfer are subject to the regulations and the general license of the U S Nuclear Regulatory Commission or of the state with which the Commission has entered into an agreement for the exercise of regulatory authority 1 Storage of radioactive material should be limited to a specifically designated area Access to radioactive materials must be limited to authorized personnel only Do not pipette radioactive material by mouth Do not eat or drink within designated radioactive work areas Areas where spills may occur should be wiped up then washed with an alkali detergent or radiological decontamination solution Any glassware used must be rinsed completely with water before washing with other laboratory glassware For practitioners or institutions receiving radioisotopes under a specific license The receipt use transfer and disposal of radioactive materials are subject to the regulations and conditions of your specific license WARNING This product contains a chemical known to the State of California to cause cancer ATTENTION Radioactivity printed in the package insert may be slightly different from the radioactivity printed on the box label and on the tracer vial label The box label and the tracer vial label indicate the actual amount of radioactivity at the calibration date where the package insert indicates the theoretical radioactivity of the kit 6 INDICATIONS OF POSSIBLE DETERIORATION OF KIT REAGENTS 6 1 The presence of
95. stecimento de ar comprimido 8 12 Banho de gua a 37 C 8 13 Tubos de vidro de 16 x 100 mm 9 EXTRAC O DE SORO COM COLUNAS DE ODS S LICA 9 1 Pipete 250 uL de controlos e amostras desconhecidas num tubo de vidro para teste 12 x 75 mm e acrescente 1 mL de 0 5 N HCI Agite com cuidado at misturar bem 9 2 Aplique cada coluna de ODS s lica no centro da seringa 9 3 Adicione 5 mL de lcool isopropil grau reagente a cada seringa 9 4 Pressione o mbolo da seringa 9 5 Remova a coluna de ODS s lica Remova a coluna de ODS s lica do fundo da seringa antes de retirar o mbolo para evitar a contamina o do conte do da seringa com o flu do na coluna de ODS s lica 9 6 Remova o mbolo das seringas 9 7 Reponha a coluna de ODS silica nas seringas 42 9 8 Adicione 5 mL de metanol grau HPLC 9 9 Repita os passos 4 a 7 9 10 Adicione 5 mL de cido ac tico a 4 9 11 Repita os passos 4 a 7 9 12 Repita os passos 10 e 11 9 13 Aplique a amostra do passo 1 Fa a passar lentamente o cartucho a um ritmo de 1 mL por 2 3 minutos 9 14 Repita os passos 5 a 7 9 15 Lave a coluna de ODS silica 2 vezes com 10 mL de cido ac tico a 4 repetindo os passos 5 a 7 entre duas lavagens 9 16 Junte o elu do em tubos de vidro de 16 x 100 mm eluindo o pept deo com 4 mL de metanol grau HPLC Puxe lentamente de maneira ao metanol ficar em contacto com a coluna de ODS silica durante um m nimo de 3 minutos 9 17 Evapore o metanol at
96. ten mit 95 iger Sicherheit auBer f r Erwachsene IGF Expected Values Using Age and Sex Nanomoles L 95 Z Matos Contidence Limits CJ Females n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Adult Years ABBILDUNG 2 35 IGF Expected Values Using Age and Sex Units mL 95 CZ Males Confidence Limits L Females n above bars 1 mo 1 99 2 00 5 99 6 00 8 00 8 01 10 00 10 01 13 99 14 18 Achat Years ABBILDUNG 3 16 TESTCHARAKTERISTIKA 16 1 Pr zision Testinterne Varianz Werte nmol l Mittelwert SD VK n Niedrig 71 oe aa 15 Varianz zwischen verschiedenen Tests Werte nmol l I Mittelwert Niedrig ag m G 15 Mittel 36 16 2 RICHTIGKEIT DIE RICHTIGKEIT DES TESTS WURDE DURCH LINEARITATSTEST UND WIEDERFINDUNGSTEST GEPR FT Linearit t Parallelit t Serienverd nnung von 3 unbekannten Proben Werte nmol l 1 po 1 mei 265 206 Wiederfindung Wiederfindungsuntersuchung Werte nmol l Die Wiederfindungsrate wird wie folgt berechnet Gemessener Wert erwarteter Wen 100 Hintergrund Hinzugef gter Erwarteter Gemessener Prozent Kalibrator Wert Wert Wiederfind Satz Nr 1 3 as a EE 187 o o sa o oi onga ECA E RR ER RR 16 3 Analytische Sensitivitat Wenn die geringste nachweisbare Konzentration als die scheinbare Konzentration bei 3 Standardabweichungen von den Zah
97. tsprechenden Menge an intaktem humanem IGF I versetzt um eine Konzentration innerhalb des angegebenen Bereichs zu erzielen Zugabe von 0 02 Natriumazid als Konservierungsmittel Jedes Fl schchen mit 1 0 ml destilliertem Wasser rekonstituieren und 15 20 Minuten bis zur vollst ndigen L sung des Inhalts stehen lassen gr ndlich mischen und das Qualit tskontrollserum als unbekannte Probe behandeln Die Wertebereiche sind auf den Kontrollfl schchen aufgedruckt 4 6 Pr zipitierender IGF I Komplex lyophilisiertes Reagenz Normales Hasenserum das zuvor mit Ziegen anti Hasenserum und Polyethylenglykol PEG prazipitiert wird wird in BSA Boratpuffer unter Zugabe von 0 03 Thimerosal verd nnt Das Flaschchen mit 35 ml destilliertem Wasser rekonstituieren GRUNDLICH mischen bis die Suspension ganz homogen ist und dann f r mindestens 30 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen und gelegentlich umr hren 4 7 ODS Silica gebrauchsfertiges Reagenz Die Kunststoffsaulen enthalten Octadecylsilyl Silica Sep Paks Vor Anwendung der Probe m ssen die S ulen geprimed werden siehe Abschnitt ber das Extraktionsverfahren Die ODS Silicas ulen k nnen bei Raumtemperatur aufbewahrt werden Die S ulen sind bei ge ffneter Packung 3 Jahre lang und bei unge ffneter Packung unbegrenzt stabil 5 WARNHINWEISE UND VORSICHTSMASSNAHMEN NUR ZUR IN VITRO DIAGNOSTIK Nicht f r internen oder externen Gebrauch bei Menschen oder Tieren Dieses Verfahren di
98. ues de laboratoire en prenant les pr cautions appropri es d crites dans le document des Centers for Disease Control and Prevention National Institutes of Health Manual Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 4 d mai 1999 ou derni re dition REACTIFS CONTENANT DE L AZIDE DE SODIUM ATTENTION certains r actifs de cette trousse contiennent de l azide de sodium Celui ci peut r agir avec la plomberie en plomb ou en cuivre et former des azotures m talliques ultra explosifs Pour leur mise au rebut rincez grande eau pour emp cher l accumulation d azide Pour plus d informations consultez Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts dans le manuel Guide Safety Management n CDC 22 publi par les Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA 1976 D claration des risques relatifs aux substances dangereuses des communaut s europ ennes Directive du conseil 1999 45 CE R 20 21 22 Nocif en cas d inhalation d ingestion et de contact avec la peau R 32 Un contact avec les acides d gage un gaz tr s toxique S28 Apr s un contact avec la peau lavez imm diatement a grande eau REACTIFS CONTENANT DU THIOMERSAL Certains r actifs de cette trousse contiennent du thiomersal a base de compos de mercure La mise au rebut de l l ment mercure du mercure inorganique des oxydes de mercure et des compos s de mercure doit strictement respecter les r glementat
99. vloppsledningar och bilda h gexplosiva metallazider Nar reagensen kasseras m ste man efterspola med stora m ngder vatten f r att f rhindra att azid ackumuleras F r mer information h nvisas till avsnittet Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts i handboken Safety Management No CDC 22 utgiven av Centers for Disease Control and Prevention Atlanta GA USA 1976 Europeiska Gemenskapens Riskfraser f r farliga preparat EG direktiv 1999 45 EEC R20 21 22 Farligt vid inandning hudkontakt och f rt ring R32 Utvecklar mycket giftig gas vid kontakt med syra S28 Vid kontakt med huden tv tta genast med mycket vatten REAGENSER SOM INNEH LLER TIMEROSAL Vissa reagenser i satsen inneh ller timerosal som inneh ller en kvicksilverf rening Kassering av ren kvicksilver oorganisk kvicksilver kvicksilveroxider och kvicksilverf reningar skall ske enligt g llande lokala och nationella best mmelser VARNING Produkten inneh ller en kemikalie som enligt staten Kalifornien r k nd f r att orsaka medf dda missbildningar eller andra reproduktionsrelaterade skador REAGENSER SOM INNEH LLER JOD 125 Satsen inneh ller radioaktivt material som ej verstiger 2 uCi 74 kBq jod 125 Adekvata f rsiktighets tg rder m ste vidtas och god laboratoriepraxis f ljas vid f rvaring hantering och kassering av detta material F r mottagningar och institutioner som tar emot radioisotoper under en allm n licens Dett
100. with 4 mL of HPLC grade methanol Push slowly so that the methanol remains in contact with the ODS silica column for a minimum of 3 minutes 9 17 Evaporate the methanol to dryness in a 37 C water bath using compressed air or nitrogen 9 18 Reconstitute the dried samples with 500 uL of calibrator O and incubate at 37 C for 10 minutes to ensure complete reconstitution vortex intermittently during incubation A sample that is expected to be elevated should be reconstituted with 1 0 mL of calibrator 0 at this time The final result should be corrected by the appropriate dilution factor see Results section for calculation 9 19 Assay 50 uL of the serum extracts in duplicate in the radioimmunoassay ASSAY PROCEDURE 10 1 Reconstitute the lyophilized reagents and allow any frozen reagents to thaw completely Do not allow reagents to reach temperatures above 20 25 C Mix all reagents gently before using 10 2 Set up labeled 12 x 75 mm tubes in duplicate according to the Scheme of the Assay on the last page All volumes are in microliters 10 3 Add reagents to the tubes as follows a Total count tubes Set aside until step 5 b Nonspecific binding NSB 50 uL of calibrator 0 c IGF I calibrator 0 50 uL of calibrator O 200 uL of IGF I Antiserum d IGF I calibrators 1 5 50 uL of IGF I calibrator 200 uL of IGF I Antiserum e Controls and unknown samples 50 uL of serum extracts 200 uL of IGF I Antiserum 10 4 Incubate for 2 hours 15 minutes

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