DNOV009-Free Testosterone-engl,fr-13112013
Contents
1. NOvATEC IMMUNDIAGNOSTICA GMBH Free Testosterone CE Enzyme immunoassay for the quantitative determination of Testosterone in human serum or plasma Dosage immunoenzymatique pour la d termination quantitative de la testost rone libre dans le s rum ou le plasma humain Only for in vitro diagnostic use English Page Fran ais Page Bibliography Bibliographie Page Symbols Key Explication des symboles Page Summary of Test Procedure R sum de la proc dure de test Page Product Number DNOV009 96 Determinations 14 15 16 ENGLISH CE 1 INTRODUCTION Testosterone is a steroid hormone from the androgen group Testosterone is primarily secreted in the testes of males and the ovaries of females although small amounts are secreted by the adrenal glands It is the principal male sex hormone and an anabolic steroid In both males and females it plays key roles in health and well being Due to its insolubility in aqueous solutions for the most part Testosterone circulates in the blood bound to transport proteins Only a small percentage lt 1 of circulating testosterone exists as unbound or free testosterone The majority approximately 60 is bound to SHBG with high affinity while the remainder is loosely bound to albumin Both the albumin bound and free fractions may be biologically active while SHBG effectively inhibits testosterone action Testosterone effects can be classified as virilising and anabolic effe2. B1 C1 for standard 0 2wells e g DI E1 for standard 1 2wells e g F1 G1 for standard 2 2wells e g H1 A2 for standard 3 2wells e g B2 C2 for standard 4 2wells e g D2 E2 for standard 5 2wells e g F2 G2 for control It is recommended to determine standards and patient samples in duplicate Perform all assay steps in the order given and without any appreciable delays between the steps A clean disposable tip should be used for dispensing each standard and each patient sample Adjust the incubator to 37 C 1 Dispense 20 ul standards control and samples into their respective wells Add 100 ul conjugate to each well Leave well A1 for substrate blank 2 Cover wells with the foil supplied in the kit 3 Incubate for 1 hour at 37 C 4 When incubation has been completed remove the foil aspirate the content of the wells and wash each well three times with 300 ul diluted wash solution Avoid overflows from the reaction wells During each washing step gently shake the plate for 5 seconds and remove excess solution by tapping the inverted plate on an absorbent paper towel If you use automated equipment wash the wells at least 5 times Note Washing is critical Insufficient washing results in poor precision and falsely elevated absorbance values 5 Dispense 100 ul TMB Substrate Solution into all wells 6 Incubate for exactly 15 min at room temperature 22 28 C in the dark Dispense 100 yl Stop Solution into a
3. Fresh reagents should be used to determine the reason for the variations If computer controlled data reduction is used to calculate the results of the test it is imperative that the predicted values for the calibrators fall within 1096 of the assigned concentrations 11 SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS 11 1 Precision Intra Assay Variation Within run variation was determined by replicate determination 15x of three different sera in one assay The within assay variability is 10 96 Inter Assay Variation Between run variation was determined by replicate measurements of five different control sera and two different sera in 10 different assays The between assay variability is 10 96 11 2 Specificity The specificity was assessed by measuring the apparent response of the assay to the following potentially cross reactive analytes and interfering substances Anticoagulants The cross reaction of the antibody calculated at 5096 according to Abraham Testosterone 100 0 DHT 0 00008 Androstenedione 0 0043 Androsterone 0 00029 DHEA S 0 00007 Cortisol lt 0 00001 Cortisone lt 0 00001 17 p Estradiol 0 00005 Estrone 0 00001 96 Prednisone 0 00001 96 17 a Ethynilestradiol 0 00001 Norgestrel 0 00001 96 Danazol lt 0 00001 96 Aldosterone 0 00001 96 Sodium citrate 0 00001 96 EDTA 0 00001 96 Heparin 0 00001 11 3 Ana
4. lt 0 00001 96 17 B Estradiol 0 00005 Estrone lt 0 00001 Pr dnisone lt 0 00001 17 a Ethynilestradiol 0 00001 Norgestrel 0 00001 96 Danazol 0 00001 96 Aldost rone lt 0 00001 95 Citrate de sodium 0 00001 EDTA 0 00001 H parine 0 00001 11 3 Sensibilit Analytique La sensibilit est valu e en utilisant 20 r plicats de l talon O et minimum 2 de l talon 1 La plus petite concentration d tectable de testost rone libre est 0 06 pg ml 11 4 Comparaison de m thode La m thode ELISA de la testost rone libre a t compar e un autre dosage de testost rone libre disponible dans le commerce RIA 41 chantillons de s rum ont t analys s selon les deux syst mes d essais La r gression lin aire a t calcul e Testost rone Libre NovaTec 0 957 Testost rone Libre RIA 0 953 P 0 937 12 PRECAUTIONS ET AVERTISSEMENTS e En accord avec l article 1 paragraphe 2b de la directive europ enne 98 79 EC l utilisation des dispositifs m dicaux de diagnostic in vitro est destin e par le fabricant garantir la pertinence les performances et la s curit du produit Par cons quent la proc dure de dosage l information les pr cautions et mises en garde de la notice d emploi doivent tre suivies de fa on stricte L utilisation de ces kits avec des automates ou dispositifs similaires doit tre valid e Aucun changement de la conception composition et proc dure d
5. pour transporter des prot ines Seul 1 296 des testost rones circulantes existent sous une forme non li e ou libre La majorit environ 60 a une forte affinit avec le SHBG alors que le reste est faiblement li l albumine L albumine li e et les fractions libres peuvent tre biologiquement actives alors que le SHBG inhibe efficacement l action de la testost rone Les effets de la testost rone peuvent tre class s en tant qu effets virilisants et anabolisants Les effets anabolisants conduisent l augmentation de la masse musculaire et de la force l augmentation de la densit osseuse et de la r sistance osseuse l augmentation lin aire de la stimulation et de la maturation des os Les effets virilisants conduisent la maturation des organes sexuels Chez les hommes les niveaux de la testost rone diminuent graduellement avec l ge La mesure de la fraction libre ou li e du s rum de la testost rone a t propos e comme un moyen d estimation de l hormone physiologique bioactive Les niveaux de la testost rone libre sont lev s chez les femmes ayant un hyperandrog nisme associ un hirsutisme en pr sence ou non de maladie des ovaires polykystiques De plus les mesures de la testost rone libre peuvent tre plus utiles que la testost rone totale dans le cas o le SHBG est augment ou diminu ex Hypothyroidisme et ob sit 2 INDICATION D UTILISATION La m thode colorim trique immunoenzymatique comp ti
6. 1 4 0 9 ND 4 1 Contraception Orale 0 9 1 1 0 6 0 3 2 0 Post m nopause 0 8 0 9 0 5 0 1 1 7 Prenez garde au fait que la d termination d une gamme de valeurs attendues pour une population normale d une m thode donn e d pend de plusieurs facteurs comme la sp cificit et la sensibilit de la m thode utilis e et le genre de population tudi e Par cons quent chaque laboratoire doit consid rer que la gamme donn e comme une indication g n rale par le fabriquant et produit sa propre gamme de valeurs attendues bas e sur la population o est situ le laboratoire 10 CONTROLE QUALITE Chaque laboratoire doit faire des contr les de dosage des niveaux de gammes normales lev es et faibles de testost rone libre pour surveiller la performance des dosages Ces contr les doivent tre consid r s comme inconnus et les valeurs doivent tre d termin es dans chaque test effectu Les chartes de contr les qualit doivent tre maintenues pour suivre les performances des r actifs fournis Des m thodes de statistiques pertinentes doivent tre employ es pour tablir des tendances Le laboratoire individuel doit tablir des limites de performance de dosage acceptables D autres param tres devant tre surveill s impliquent les intersections 80 50 et 20 de la courbe talon pour la reproductibilit De plus l absorbance maximale doit tre dans la m me ligne que les exp riences pass es Les d viations signifi
7. TMB Le flacon contient 15 ml d un m lange de peroxyde d hydrog ne et de t tram thylbenzidine Le r actif est pr t l emploi et doit tre conserv 2 C et 8C l obscurit La solution doit tre incolore ou avoir une l g re teinte bleue Si le substrat devient bleu il a pu tre contamin et doit tre remplac 6 5 Solution stop Le flacon contient 15 ml d une solution d acide sulfurique 0 15 M R 36 38 S 26 Cette solution est pr te l emploi et doit tre conserv e entre 2 C et 8 C 6 6 Solution de lavage Diluer le contenu de la solution de lavage concentr e avec de l eau distill e jusqu un volume final de 500 ml avant utilisation Pour les petits volumes respecter la dilution au 107 La solution de lavage dilu e est stable pendant 30 jours entre 2C et 8 C Il est possible d observer la pr sence de cristaux dans la solution de lavage concentr e dans ce cas m langer temp rature ambiante jusqu la dissolution compl te des cristaux pour une meilleure efficacit diluer tout le flacon de solution de lavage jusqu 500ml en surveillant le transfert de cristaux avec le lavage de la bouteille puis m langer jusqu la dissolution compl te des cristaux 6 7 Contr le Le flacon contient 1ml d une solution de contr le pr te l emploi 9 7 PRELEVEMENT ET PREPARATION DES ECHANTILLONS Les chantillons de plasma ou de s rum humain pour ces dosages doivent tre pr lev s sur des patients
8. aluminium foil along with the desiccant supplied and stored at 2 8 C stability until expiry date 6 2 Testosterone HRP Conjugate Testosterone HRP Conjugate is a ready to use solution 6 3 Testosterone Standards Before use mix 5 min with a rotating mixer The standards are ready to use and have the following concentration of free Testosterone Standard 0 0 0 pg ml Standard 1 0 2 pg ml Standard 2 1 0 pg ml Standard 3 4 0 pg ml Standard 4 20 0 pg ml Standard 5 100 0 pg ml The solutions have to be stored at 2 8 C After first use the standards are still stabile for another 6 months if stored at 2 8 C 6 4 TMB Substrate Solution The bottle contains 15 ml of a tetramethylbenzidine hydrogen peroxide system The reagent is ready to use and has to be stored at 2 8 C in the dark The solution should be colourless or could have a slight blue tinge If the substrate turns into blue it may have become contaminated and should be thrown away 6 5 Stop Solution The bottle contains 15 ml 0 15 M sulphuric acid solution R 36 38 S 26 This ready to use solution has to be stored at 2 8 C 6 6 Wash Solution Dilute the content of the concentrated Wash Solution with distilled water to a final volume of 500 ml prior to use For smaller volumes respect the 1 10 dilution ratio The diluted wash solution is stable for 30 days at 2 8 C In concentrated wash solution it is possible to observe the presence of crystals in this case
9. improve the performance of the kit on ELISA automatic systems it is recommended to increase the number of washes Only for in vitro diagnostic use Not for internal or external use in humans or animals All components of human origin used for the production of these reagents have been tested for anti HIV antibodies anti HCV antibodies and HBsAg and have been found to be non reactive Nevertheless all materials should still be regarded and handled as potentially infectious Do not interchange reagents or strips of different production lots No reagents of other manufacturers should be used along with reagents of this test kit Do not use reagents after expiry date stated on the label Use only clean pipette tips dispensers and lab ware Do not interchange screw caps of reagent vials to avoid cross contamination Close reagent vials tightly immediately after use to avoid evaporation and microbial contamination After first opening and subsequent storage check conjugate and control vials for microbial contamination prior to further use To avoid cross contamination and falsely elevated results pipette patient samples and dispense conjugate without splashing accurately to the bottom of wells Use appropriate personal protective equipment while working with the reagents provided Follow Good Laboratory Practice GLP for handling blood products Some reagents contain small amounts of Proclin 300 as preservative Avoid the contact with skin or
10. mucosa The TMB Substrate contains an irritant which may be harmful if inhaled ingested or absorbed through the skin To prevent injury avoid inhalation ingestion or contact with skin and eyes The Stop Solution consists of a diluted sulphuric acid solution Sulphuric acid is poisonous and corrosive and can be toxic if ingested To prevent chemical burns avoid contact with skin and eyes Avoid the exposure of reagent TMB H202 to directed sunlight metals or oxidants Do not freeze the solution This method allows the determination of Free Testosterone from 0 06 pg mL to 100 0 pg mL The clinical significance of Free Testosterone determination can be invalidated if the patient was treated with cortisone or natural or synthetic steroids The incomplete or inaccurate liquid removal from the wells could influence the assay precision and or increase the background It is important that the time of reaction in each well is held constant for reproducible results Pipetting of samples should not extend beyond ten minutes to avoid assay drift If more than 10 minutes are needed follow the same order of dispensation If more than one plate is used it is recommended to repeat the dose response curve in each plate Addition of the TMB Substrate solution initiates a kinetic reaction which is terminated by the addition of the Stop Solution Therefore the TMB Substrate and the Stop Solution should be added in the same sequence to eliminate any time deviatio
11. 0 g l Tween 20 10 g l pH 7 4 Free Testosterone control 1 bottle containing 1 ml of a lot specific ready to use control solution The concentration is stated on the label Testosterone Standards 6 bottles 1 ml each Standard 0 0 0 pg ml Standard 1 0 2 pg ml Standard 2 1 0 pg ml Standard 3 4 0 pg ml Standard 4 20 0 pg ml Standard 5 100 0 pg ml A N Materials supplied 1 Strip holder 1 Cover foil 1 Test protocol 1 Distribution and identification plan A w Materials and Equipment needed ELISA microwell plate reader equipped for the measurement of absorbance at 450 nm 620 630 nm Incubator 37 C Manual or automatic equipment for rinsing wells Pipettes Vortex tube mixer Distilled water Disposable tubes Timer 5 STABILITY AND STORAGE The reagents are stable up to the expiry date stated on the label when stored at 2 8 C in the dark 6 REAGENT PREPARATION It is very important to bring all reagents samples and standards to room temperature 22 28 for at least 30 minutes before starting the test run At the end of the assay store the reagents immediately at 2 8 C avoid long exposure to room temperature 6 1 Coated snap off Strips The ready to use break apart snap off strips are coated with anti Testosterone IgG antibodies Store at 2 8 C Open the bag only when it is at room temperature Immediately after removal of strips the remaining strips should be resealed in the
12. 28 Dietzenbach Germany Tel 49 0 6074 48760 Fax 49 0 6074 487629 Email info NovaTec ID com Internet www NovaTec ID com DNOVO009 engl fr 13112013 CS 16
13. amination microbienne e Avant une nouvelle utilisation v rifier les flacons de conjugu et de contr le d j utilis s pour exclure une contamination microbienne e Pour viter la contamination crois e et des r sultats faussement lev s introduire les chantillons de patients et le conjugu exactement au fond des puits sans clabousser e Utiliser les Equipements de Protection Individuels EPI appropri s dans de l utilisation des r actifs fournis Suivre les Bonnes Pratiques de Laboratoires BPL pour la manipulation de produits sanguins Certains r actifs contiennent de petites quantit s de Proclin 300 comme conservateur Eviter le contact avec la peau ou les muqueuses 12 e Le TMB est un r actif irritant qui peut tre nocif s il est inhale ing r ou absorb par la peau Eviter toute ingestion inhalation contact avec la peau ou les yeux e La solution stop est une solution dilu e d acide sulfurique L acide sulfurique est un poison corrosif et peut tre toxique s il est ing r Eviter tout contact avec la peau et les yeux pour viter une br lure chimique e Eviter l exposition du r actif TMB H202 la lumi re du soleil aux m taux et oxydants Ne pas congeler la solution e Cette m thode permet la d termination de la testost rone libre entre 0 06 pg mL et 100 0 pg mL e La signification clinique de la d termination de la testost rone libre peut ne pas tre tablie si le patient s
14. ashed away during the washing step for total Testosterone measurement the ELISA NovaTec Testosterone kit is available After incubation a bound free separation is performed by solid phase washing The immune complex formed by enzyme labelled antigen is visualized by adding Tetramethylbenzidine TMB substrate which gives a blue reaction product The intensity of this product is inversely proportional to the amount of Testosterone in the sample Sulphuric acid is added to stop the reaction This produces a yellow endpoint colour Absorption at 450 nm is read using an ELISA microwell plate reader Testosterone in the blood is bound to SHBG 60 and in lower quantity to other protein Only the measurement of Free Testosterone lt 1 of Total Testosterone permits the estimating of the hormone biologically active 4 MATERIALS 4 1 Reagents supplied Anti Testosterone IgG Coated Wells 12 breakapart 8 well snap off strips coated with anti Testosterone IgG in resealable aluminium foil Stop Solution 1 bottle containing 15 ml sulphuric acid 0 15 mol l avoid any skin contact Testosterone HRP conjugate 1 bottle containing 15 ml of horseradish peroxidase labelled Testosterone TMB Substrate Solution 1 bottle containing 15 ml 3 3 5 5 tetramethylbenzidine H gt 0 gt TMB 0 269 l avoid any skin contact Wash solution 10x conc 1 bottle containing 50 ml of a 10x concentrated solution of phosphate buffer 20 mM NaCl 16
15. bance E des chantillons 450 nm contre une longueur d onde de r f rence de 620 630 nm ou contre le blanc au cours de 5 minutes apr s l adjonction de la solution stop 8 2 Mesure Faire le z ro du lecteur ELISA l aide du blanc dans le puits A1 Si pour des raisons techniques le lecteur d ELISA ne peut pas tre ajust z ro en utilisant le blanc dans le puits A1 soustraire la valeur d absorbance du puits A1 de toutes les autres valeurs d absorbance mesur es afin d obtenir des r sultats fiables Mesurer l absorbance de tous les puits 450 nm et enregistrer les valeurs d absorbance pour chaque contr le et chantillon de patient dans le plan de distribution et d identification Calculer les valeurs moyennes d absorbance pour tous les doublets si n cessaires 10 9 RESULTATS 9 1 Calcul des r sultats Calculer l absorbance moyenne pour chaque point de la courbe talon et de chaque chantillon Tracer la valeur d absorbance moyenne des talons par rapport la concentration Dessiner le meilleur ajustement de la courbe sur les points trac s 4 param tres logistiques Interpoler les valeurs des chantillons sur la courbe talon pour obtenir les valeurs de concentrations correspondantes en pg ml 9 2 Valeurs de R f rence Les concentrations des s rums de la testost rone libre sont dans le tableau suivant M diane Moyenne 1SD Gamme pg ml pg ml Ommen HITS 14 1347 45 42 Normal Ovulation 1 3
16. catives provenant des performances tablies peuvent indiquer un changement non remarquable dans les conditions exp rimentales ou dans la d gradations des r actifs du kit Les r actifs frais doivent tre utilis s pour d terminer la raison des variations Si la diminution des donn es contr l es par ordinateur est utilis e pour calculer le r sultat du test il est imp ratif que les valeurs pr dites pour l talonnage tombent dans les 10 des concentrations assign es 11 PERFORMANCE DU DOSAGE 11 1 Pr cision Variation Intra Dosage La variation intra dosage a t d termin e par un r plicat x15 sur trois diff rents s rums dans un dosage La variation l int rieur d un dosage est lt 10 Variation Inter Dosage La variation entre les dosages a t d termin e par un r plicat des mesures de cinq contr les de s rums diff rents et de deux s rums diff rents dans 10 dosages La variation entre les dosages est lt 10 11 2 Sp cificit analytique La sp cificit est valu e en mesurant la r ponse apparente du dosage des potentielles r activit s crois es des analytes suivants et des substances interf rentes Anticoagulants La r action crois e des anticorps calcul es 50 selon Abraham 11 Testost rone 100 0 DHT 0 00008 Androst n dione 0 0043 95 Androst rone 0 00029 DHEA S 0 00007 Cortisol 0 00001 Cortisone
17. chets Les r sidus des produits chimiques et des pr parations sont consid r s en g n ral comme des d chets dangereux L limination de ce type de d chet est r glement e par des lois et r glementations nationales et r gionales Contacter les autorit s comp tentes ou les soci t s de gestion des d chets pour obtenir des renseignements sur l limination des d chets dangereux 13 INFORMATION POUR LES COMMANDES Prod No DNOV009 Free Testosterone 96 D terminations 13 BIBLIOGRAPHY BIBLIOGRAPHIE McCann D Kirkish L 1985 J Clin Immunoassay 8 234 6 Ekins RP 1984 J Clin Immunoassay 7 2 163 80 Paulson JD et al 1977 Am J Obst Gynecol 128 851 7 Odlind V et al 1982 Clin Endocrinology 16 243 49 Green PJ 1982 Clin Chem 28 1237 Wu CH Obstet Gynecol 1982 60 188 94 14 Symbols Key Symbolschl ssel Explication des symboles Legenda Simbolos Tabela de simbolos Manufactured by Hergestellt von Fabriqu par Prodotto da Fabricado por Fabricado por In Vitro Diagnostic Medical Device In Vitro Diagnosticum Dispositif m dical de diagnostic in IVD vitro Diagnostico in vitro Producto para diagn stico In vitro Dispositivo M dico para Diagn stico In Vitro Lot Number Chargenbezeichnung Num ro de lot Lotto Numero de lote N mero de lote Expiration Date Verfallsdatum Date de p remption Scadenza Fecha de caducidad Data de Vali
18. cts Anabolic effects include growth of muscle mass and strength increased bone density and strength and stimulation of linear growth and bone maturation Virilising effects include maturation of the sex organs Testosterone levels decline gradually with age in men Measurement of the free or unbound fraction of serum testosterone has been proposed as a means of estimating the physiologically bioactive hormone Free testosterone levels are elevated in women with hyperandrogenism associated with hirsutism in the presence or absence of polycystic ovarian disease In addition free testosterone measurements may be more useful than total testosterone in situations where SHBG is increased or decreased e g hypothyroidism and obesity 2 INTENDED USE Competitive immunoenzymatic colorimetric method for quantitative determination of free Testosterone in human serum or plasma 3 PRINCIPLE OF THE ASSAY In blood Testosterone is bound to SHBG 60 and in lower quantity to other proteins for example albumin Only the measurement of Free Testosterone lt 1 of Total Testosterone permits the estimating of the biologically active hormone Microtiter strip wells are precoated with anti Testosterone antibodies solid phase Free Testosterone in the sample competes with added horseradish peroxidase labelled Testosterone enzyme labelled antigen for antibody binding The Testosterone bound to proteins does not take part to this reaction so it is w
19. dade Storage Temperature Lagertemperatur Temp rature de conservation Temperatura di conservazione Temperatura de almacenamiento Temperatura de Armazenamento Ze Keep away from sunlight Vor direkter Sonneneinstrahlung sch tzen SU Prot ger de rayonnement solaire Mantener alejado de la luz solar CE Mark CE Zeichen Marquage CE Marchio CE Marca CE Marca CE Catalogue Number Katalog Nummer R f rence du catalogue Numero di codice N mero de Cat logo N mero de Cat logo Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulter la notice d utilisation Consultare le istruzioni Consulte las Instrucciones de Uso Consultar as Instru es de Utilizagao Microplate Mikrotiterplatte Microplaque Micropiastra Microplaca Microplaca Conjugate Konjugat Conjugu Coniugato Conjugado Conjugado CONTROL Control Kontrolle contr le controllo control controle controlo CAL Calibrator resp Standard Kalibrator bzw Standard Callibrateur resp Etalon Calibratore ossia Standard Calibrador o bien Estandar SOLN Stop solution Stoppl sung Solution stop Soluzione bloccante Solu o de paragem SUB TMB TMB Substrate solution TMB Substratl sung Substrat TMB soluzione substrato TMB soluci n substrato TMB Solu o substrato TMB Washing solution 10x concentrated Waschl sung 10x konzentriert Solution de lavage concentr 10 x soluzione di lavaggio concentra
20. e Solution stop 1 flacon contenant 15 ml d acide sulfurique 0 15 mol l viter tout contact avec la peau Conjugu la Testost rone HRP 1 flacon contenant 15 ml de Testost rone marqu la peroxydase de raifort Solution de TMB 1 flacon contenant 15 ml de 3 3 5 5 T tram thylbenzidine H2O2 TMB 0 26g l viter tout contact avec la peau Solution de lavage concentr e x 10 1 flacon contenant 50 ml d une solution de tampon phosphate concentr e 10 fois 20 mM NaCl 160 g l Tween 20 10 g l pH 7 4 Contr le de testost rone libre 1 flacon contenant 1 ml d un lot sp cifique d une solution de contr le pr te l emploi La concentration est indiqu e sur l tiquette Etalons Testost rone 6 flacons 1 ml chacun Etalon 0 0 0 pg ml Etalon 1 0 2 pg ml Etalon 2 1 0 pg ml Etalon 3 4 0 pg ml Etalon 4 20 0 pg ml Etalon 5 100 0 pg ml 4 2 Mat riels fournis 1 support de plaque 1 jeu de feuilles de recouvrement 1 mode d emploi 1 sch ma de distribution et d identification 4 3 Mat riels et quipements requis Lecteur de microplaques ELISA pour mesure l absorbance 450 nm 620 630 nm Incubateur 37 C Equipement manuel ou automatique pour le rincage des puits Pipettes Vortex Eau distill e Tubes jetables Chronom tre 5 STABILITE ET CONSERVATION Les r actifs sont stables jusqu la date de p remption indiqu e sur l tiquette s ils sont co
21. e dosage ainsi que l utilisation avec d autres produits non approuv s par le fabricant ne sont autoris s seul l utilisateur est responsable de tels changements Le fabricant n est pas responsable des faux r sultats et des incidents dus ces modifications Le fabricant n est pas responsable des r sultats fournis par analyse visuelle des chantillons des patients Uniquement pour diagnostic in vitro e Si vous utilisez l quipement automatis l utilisateur a la responsabilit de s assurer que le kit a t convenablement valu Pour am liorer la performance du kit sur les syst mes automatiques ELISA on recommande d augmenter le nombre de se lave e Tous les composants d origine humaine utilis s pour la fabrication de ces r actifs ont t analys s et ont t test s non r actifs aux antig nes HBs en anticorps anti VHI et en anticorps anti VHC N anmoins tous les produits doivent tre consid r s et trait s comme tant potentiellement infectieux e Ne pas utiliser de r actifs provenant d autres fabricants avec les r actifs de ce kit e Ne pas utiliser les r actifs apr s la date de p remption indiqu e sur l tiquette e Utiliser seulement des c nes de pipette des distributeurs et du mat riel de laboratoire propres e Ne pas changer les bouchons des flacons pour viter la contamination crois e e Fermer les flacons de r actifs imm diatement apr s l utilisation pour viter l vaporation et la cont
22. jeun Conserver les chantillons 20 C si la d termination n est pas effectu e le jour du pr l vement Si les chantillons sont conserv s congel s bien m langer les chantillons d congel s avant le dosage Eviter les cycles r p t s de cong lation et de d cong lation 8 PROCEDE DU DOSAGE 8 1 Pr paration du dosage Lire attentivement la notice d emploi avant de r aliser le dosage La fiabilit des r sultats d pend du suivi strict du protocole Avant de commencer le dosage d terminer sur le formulaire fourni dans le kit le plan de distribution et d identification des chantillons et des contr les S lectionner le nombre de bandes ou de puits n cessaires et les placer sur le support Le pipetage des chantillons ne doit pas prendre plus de 10 minutes afin d viter toutes d rives du dosage Si cela dure plus de 10 minutes suivre le m me ordre d utilisation Si plusieurs plaques sont utilis es il est recommand de r p ter la courbe dose r ponse R server au moins 1 puits ex A1 Pour le blanc 2 puits ex B1 C1 Pour l talon 0 2 puits ex D1 E1 Pour l talon 1 2 puits ex F1 G1 Pour l talon 2 2 puits ex H1 A2 Pour l talon 3 2 puits ex B2 C2 Pour l talon 4 2 puits ex D2 E2 Pour l talon 5 2 puits ex F2 G2 Pour le contr le Il est recommand de d terminer les contr les et les chantillons du patient en doublets R aliser toutes les tapes du dosage dans l ordre don
23. ll wells in the same order and at the same rate as for the TMB Substrate Solution Shake the microplate gently Any blue colour developed during the incubation turns into yellow 8 Measure the absorbance E of the specimen at 450 nm against a reference wavelength of 620 630 nm or against blank within 5 min after addition of the Stop Solution 8 2 Measurement Adjust the ELISA Microwell Plate Reader to zero using the substrate blank in well A1 If due to technical reasons the ELISA reader cannot be adjusted to zero using the substrate blank in well A1 subtract the absorbance value of well A1 from all other absorbance values measured in order to obtain reliable results Measure the absorbance of all wells at 450 nm and record the absorbance values for each standard and patient sample in the distribution and identification plan Where applicable calculate the mean absorbance values of all duplicates 9 RESULTS 9 1 Calculation of results Calculate the mean absorbance for each point of the standard curve and each sample Plot the mean value of absorbance of the standards against concentration Draw the best fit curve through the plotted points Four Parameter Logistic Interpolate the values of the samples on the standard curve to obtain the corresponding values of the concentrations expressed in pg ml 9 2 Reference values Serum concentrations of free testosterone are within the following ranges Median Mean 1SD Range
24. lytic Sensitivity Sensitivity was assessed by using 20 replicates of standard 0 and minimum 2 of standard 1 The lowest detectable concentration of Free Testosterone is 0 06 pg ml 11 4 Method comparison The free testosterone ELISA was compared to another commercially available free testosterone assay RIA 41 serum samples were analysed according in both test systems The linear regression curve was calculated Free Testosterone NovaTec 0 957 Free Testosterone RIA 0 953 2 r 0 937 12 PRECAUTIONS AND WARNINGS In compliance with article 1 paragraph 2b European directive 98 79 EC the use of the in vitro diagnostic medical devices is intended by the manufacturer to secure suitability performances and safety of the product Therefore the test procedure the information the precautions and warnings in the instructions for use have to be strictly followed The use of the testkits with analyzers and similar equipment has to be validated Any change in design composition and test procedure as well as for any use in combination with other products not approved by the manufacturer is not authorized the user himself is responsible for such changes The manufacturer is not liable for false results and incidents for these reasons The manufacturer is not liable for any results by visual analysis of the patient samples If you use automated equipment the user has the responsibility to make sure that the kit has been appropriately tested To
25. mix at room temperature until complete dissolution of crystals for greater accuracy dilute the whole bottle of concentrated wash solution to 500ml on taking care also to transfer crystals with washing of the bottle then mix until crystals are completely dissolved 6 7 Control The bottle contains 1ml of a lot specific ready to use control solution 3 7 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION The determination of Free Testosterone can be performed in human serum or plasma Store specimen at 20 C if the determination is not performed on the day of the sample collection If samples are stored frozen mix thawed samples well before testing Avoid repeated freezing and thawing 8 ASSAY PROCEDURE 8 1 Test Preparation Please read the test protocol carefully before performing the assay Result reliability depends on strict adherence to the test protocol as described Prior to commencing the assay the distribution and identification plan for all specimens and standards should be carefully established on the result sheet supplied in the kit Select the required number of microtiter strips or wells and insert them into the holder Pipetting of samples should not extend beyond ten minutes to avoid assay drift If it lasts more than ten minutes follow the same order of dispensation If more than one plate is used it is recommended to repeat the dose response curve Please allocate at least 1 well e g A1 for the substrate blank 2wels e g
26. n et sans interruption entre les tapes Un c ne de pipette propre et jetable doit tre utilis pour distribuer chaque contr le et chantillon R gler l incubateur 37 C 1 Pipeter 20 ul d talons de contr les et d chantillons dans leurs puits respectifs Ajouter 100ul de conjugu dans chaque puits Garder le puits A1 pour le blanc Couvrir les puits avec le couvercle fourni dans le kit 3 Incuber pendant 1 heure 37 C la fin de l incubation enlever le couvercle aspirer le contenu des puits et laver chaque puits trois fois avec 300 ul de solution de lavage dilu e Eviter les d bordements de puits de r action Pendant chaque pas de lessive secouez doucement la plaque depuis 5 secondes et enlevez la solution d exc s en tapant la plaque invers e sur un essuie mains en papier absorbant Si vous utilisez l quipement automatis lavez les puits au moins 5 fois Note L tape de lavage est tr s importante Un lavage insuffisant peut conduire une pr cision faible et des valeurs d absorbance faussement lev es 5 Pipeter 100 ul de solution de TMB dans tous les puits 6 Incuber pendant exactement 15 min temp rature ambiante 22 28 C l obscurit Pipeter 100 ul de solution stop dans tous les puits dans le m me ordre la m me vitesse que pour la solution de TMB Secouer doucement la microplaque La couleur bleue d velopp e pendant l incubation vire au jaune 8 Mesurer l absor
27. n during the reaction Observe the guidelines for performing quality control in medical laboratories by assaying controls and or pooled sera Maximum precision is required for reconstitution and dispensation of the reagents Samples microbiologically contaminated highly lipemic or haemolysed should not be used in the assay Plate readers measure vertically Do not touch the bottom of the wells The NovaTec ELISA is only designed for qualified personnel who are familiar with good laboratory practice 12 1 Disposal Considerations Residues of chemicals and preparations are generally considered as hazardous waste The disposal of this kind of waste is regulated through national and regional laws and regulations Contact your local authorities or waste management companies which will give advice on how to dispose hazardous waste 13 ORDERING INFORMATION Prod No DNOV009 Free Testosterone 96 Determinations FRAN AIS CE 1 INTRODUCTION La testost rone est une hormone st roidienne du groupe androg ne La testost rone est secr t e dans les testicules et les ovaires bien que de petites quantit s soient secr t es dans les glandes adr nales C est l hormone sexuelle masculine principale et un st roide anabolisant Elle joue un r le essentiel dans le bien tre et la sant chez l homme et la femme En raison de son insolubilit dans les solutions aqueuses pour la plupart la Testost rone ciruclates dans le sang s est li e
28. nserv s entre 2 C et 8 C l obscurit 6 PREPARATION DES REACTIFS Il est tr s important que tous les r actifs chantillons et contr les soient port s temp rature ambiante 22 C 28 pour au moins 30 minutes avant de commencer le dosage A la fin de l essai conservent les r actifs imm diatement 2 8 C vitez la longue exposition temp rature ambiante 6 1 Bandes d tachables enduites Les bandes d tachables sont enduites d anticorps d IgG anti testost rone et sont pr tes l emploi Conserver entre 2 C et 8C N ouvrir l emballage que si la pi ce est temp rature ambiante Apr s avoir pr lev les bandes n cessaires refermer imm diatement les autres dans le sachet d aluminium avec le d shyaratant fourni et les conserver entre 2 C et 8 C elles sont stables jusqu la date de p remption 6 2 Conjugu la Testost rone HRP Solution de conjugu la Testost rone HRP pr te l emploi 6 3 Etalons de Testost rone M langer 5 minutes avant utilisation avec un vortex Les talons sont pr ts l emploi et ont les concentrations de testost rone libre suivantes Etalon 0 0 0 pg ml Etalon 1 0 2 pg ml Etalon 2 1 0 pg ml Etalon 3 4 0 pg ml Etalon 4 20 0 pg ml Etalon 5 100 0 pg ml Les solutions doivent tre conserv es entre 2 C et 8 C Apr s la premi re utilisation les contr les restent stables pendant encore 6 mois s ils sont conserv s 2 8 C 6 4 Solution
29. pg ml pg ml Normal Male 14 1347 4 5 42 Female Ovulating 1 3 1 4 0 9 ND 4 1 Oral contraceptives 0 9 1 1 0 6 0 3 2 0 Postmenopausal 0 8 0 9 0 5 0 1 1 7 Please pay attention to the fact that the determination of a range of expected values for a normal population in a given method is dependent on many factors such as specificity and sensitivity of the method used and type of population under investigation Therefore each laboratory should consider the range given by the manufacturer as a general indication and produce their own range of expected values based on the indigenous population where the laboratory works 10 QUALITY CONTROL Each laboratory should assay controls at normal high and low levels range of free testosterone for monitoring assay performance These controls should be treated as unknowns and values determined in every test procedure performed Quality control charts should be maintained to follow the performance of the supplied reagents Pertinent statistical methods should be employed to ascertain trends The individual laboratory should set acceptable assay performance limits Other parameters that should be monitored include the 80 50 and 20 intercepts of the standard curve for run to run reproducibility In addition maximum absorbance should be consistent with past experience Significant deviation from established performance can indicate unnoticed change in experimental conditions or degradation of kit reagents
30. tive est utilis e pour la d termination quantitative de la testost rone libre dans le s rum ou le plasma humain 3 PRINCIPE DU DOSAGE La testost rone pr sente dans le sang est li e la SHBG 6096 et dans des quantit s inf rieures aux autres prot ines par exemple l albumine Seule la mesure de testost rone libre lt 1 de testost rone totale permet l estimation de l hormone biologiquement active Les puits de bandes de microdosage sont enduits d anticorps anti testost rone phase solide La testost rone dans l chantillon rivalise avec la testost rone marqu e la peroxydase de raifort ajout e antig ne marqu l enzyme pour la liaison des anticorps Apr s incubation une s paration entre les produits li s et les anticorps lib r s est effectu e par le rincage de la phase solide Le complexe immun form par un antig ne marqu l enzyme est observ par un ajout de substrat T tram thylbenzidine TMB qui conduit un bleuissement du produit L intensit de ce produit est inversement proportionnelle la quantit de testost rone dans l chantillon L acide sulfurique est ajout pour arr ter la r action Ceci produit une couleur jaune Un lecteur de microplaques ELISA permet la lecture de l absorption 450 nm 4 MATERIELS 4 1 R actifs fournis Puits recouverts d IgG Anti Testost rone 12 bandes d tachables enduites d IgG anti testost rone de 8 puits en sachet d aluminium refermabl
31. uit un traitement la cortisone ou au st roides naturels ou synth tiques Si le liquide n est pas compl tement extrait des puits cela peut influence la pr cision du dosage et ou augmenter le bruit de fond Il est important que le temps de r action dans chaque puits soit constant pour la reproductibilit Le pipetage des chantillons ne doit pas prendre plus de 10 minutes afin d viter toutes d rives du dosage Si cela dure plus de 10 minutes suivre le m me ordre d utilisation Si plusieurs plaques sont utilis es il est recommand de r p ter la courbe dose r ponse dans chaque plaque e L ajout de TMB initie la r action cin tique qui se termine par l ajout de solution stop Par cons quent l addition de solution de substrat et de solution stop doit tre ajout dans la manipulation pour liminer toutes erreurs pendant la r action e Suivre le mode d emploi pour effectuer le contr le qualit dans les laboratoires m dicaux en dosant les contr les et les s rums e Une grande pr cision est n cessaire pour la reconstitution et le d p t des r actifs e Les chantillons contamin s microbiologiquement hautement lip miques ou h molys s ne doivent pas tre utilis s dans le dosage Les lecteurs de microplaques mesurent verticalement Ne pas toucher le fond des puits e Le kit ELISA de NovaTec est uniquement destin tre utilis par un personnel qualifi familiaris avec les BPL 12 1 Elimination des d
32. zione x10 soluci n de lavado concentrado x10 Solu o de lavagem concentrada 10x en Contains sufficient for n tests Ausreichend f r n Contenuto sufficiente per n saggi Contenido suficiente para Conte do suficiente para n testes Tests Contenu suffisant pour n tests nae n tests 15 SCHEME OF THE ASSAY Free Testosterone Test Preparation Prepare reagents and samples as described Establish the distribution and identification plan for all specimens and controls on the result sheet supplied in the kit Select the required number of microtiter strips or wells and insert them into the holder Assay Procedure Substrate blank Standard 0 5 Control Sample Standard 0 5 20 ul Control 20 ul Sample 20 ul Conjugate 100 ul 100 ul 100 ul Cover wells with foil supplied in the kit Incubate for 1 h at 37 C Wash each well three times with 300 ul diluted wash solution if you use automated equipment wash the wells at least 5 times TMB Substrate 100 ul 100 ul 100 ul 100 ul Incubate for exactly 15 min at room temperature in the dark Stop Solution 100 ul 100 ul 100 ul 100 ul Shake the microplate gently Photometric measurement at 450 nm against a reference wavelength of 620 630 nm or against blank within 5 minutes NovaTec Immundiagnostica GmbH Technologie amp Waldpark Waldstr 23 A6 D 631
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