(LISTOS)ESManual de instrucciones CHSL
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1. Alx532 Interpretaci n Std Res Std Res p POS Indiferente POSITIVO LGV ND POS NO SE DETECTA ND ND NO VALORABLE e Ejemplo de resultado Site ID Protocol Sample ID Sample Status FAM Std Res FAM Ct Alx532 Std Res Alx532 Ct TXR Std Res TXR Ct Type UNKN oK NEG 0 00 POS 30 74 NEG UNKN oK NEG 0 00 POS 31 04 NEG UNKN oK NEG 0 00 POS 30 36 POS Gr fica 1 Canal TxR LGV Resultado obtenido al amplificar dos controles negativos y un control positivo LGV Control negativo A11 en azul ausencia de se al Control negativo A12 en gris ausencia de se al Control positivo LGV A13 en naranja se observa se al con Ct 30 57 SitelD Protocol Sample ID Sample Status FAM Std Res FAM Ct Alx532 Std Res Alx532 Ct TXR Std Res UNKN oK NEG 0 00 POS 30 74 NEG UNKN oK NEG 0 00 POS 31 04 NEG UNKN oK NEG 0 00 POS 30 36 POS Gr fica 2 Canal Alx532 control interno Resultado obtenido al amplificar dos controles negativos y un control positivo LGV Control negativo A11 en azul se observa se al con Ct 30 74 Control negativo A12 en gris se observa se al con Ct 31 04 Control positivo LGV A13 en naranja se observa se al con Ct 30 36 10 Control de calidad Se recomienda que se lleven a cabo controles positivos y negativos cada vez que se realice un an lisis Cada lote del kit RealCycler CHSL G ha sido testado seg n las especificaciones de la PCR a tiempo real utilizando el equi2. EXRI GENIE MOLECULAR Progenie molecular Artes y Oficios 37 Valencia 46021 Espa a Tel 902 91 05 05 Fax 902 91 05 06 RealCycler CHSL G v 1 1 Uso previsto RealCycler CHSL G es un kit de reactivos que permite la detecci n cualitativa por PCR a tiempo real del ADN de Chlamydia trachomatis serotipo L agente causal del linfogranuloma ven reo en muestras cl nicas El sistema incluye un control interno de amplificaci n para prevenir los falsos negativos debidos a la inhibici n de la reacci n 2 Especificaciones Especificidad Chlamydia trachomatis serotipo L gen pmpH La validaci n de la especificidad ha sido realizada seg n ensayos experimentales y el an lisis BLAST www ncbi nlm nih gov blast 3 Estabilidad y almacenamiento Todos los componentes del kit RealCycler CHSL G deben ser almacenados a 20 C El kit es estable a 20 C hasta la fecha de caducidad ver etiqueta externa del kit 4 Descripci n del m todo La reacci n en cadena de la polimerasa PCR est basada en la amplificaci n de una regi n espec fica del genoma del pat geno usando primers y sondas espec ficos En la PCR a tiempo real se utilizan sondas marcadas con fluorocromos Hay una emisi n de fluorescencia que es proporcional a la cantidad de ADN presente en la muestra El Cycle threshold Ct es el ciclo de la PCR en el que se detecta inicialmente un aumento en la se al de fluorescencia La amplificaci n de Chlamydia tracho
3. matis serotipo L se detecta en TxR y la del control interno en Alx532 5 Composici n RealCycler CHSL G incluye la mezcla de reacci n Amplimix y un Control Positivo ADN LGV Todos los reactivos est n listos para su uso sin a adir ni reconstituir ning n componente Componente Viales N m Volumen Conserv AmpliMix 1 850 uL 15 25 OC Control Positivo 1 120 uL 15 2500 ADN LGV 6 Material y equipamiento adicional requerido y no suministrado Equipo de PCR a tiempo real Kit de extracci n de ADN Guantes desechables Pipetas calibradas Puntas de pipeta con filtro Congelador 20 C www progenie molecular com 7 Advertencias y precauciones Todos los componentes del kit deben mantenerse en fr o mientras se est n manipulando Despu s de a adir el ADN minimizar el tiempo necesario para iniciar el programa de amplificaci n Los tubos con la mezcla de amplificaci n no deben exponerse a la luz durante un periodo de tiempo prolongado Descongelar y congelar repetidas veces los reactivos puede disminuir la sensibilidad del kit Usar guantes desechables Usar pipetas calibradas y puntas de pipeta con filtro Los ensayos deben llevarse a cabo por personal cualificado y siguiendo las buenas pr cticas de laboratorio No usar el kit despu s de la fecha de caducidad Uso exclusivo para investigaci n 8 Muestras cl nicas Recoger las muestras en tubos est rile
4. po SmartCycler Cepheia 11 Observaciones Tabla de compatibilidad de fluor foros Fluor foro Fluor foro alternativo FAM TET CAL Fluor Gold 540 HEX JOE VIC CAL Fluor Orange 560 Alexa 532 Texas Red ROX LC Red 610 CAL Fluor Red 610 Fecha de publicaci n Marzo 2012
5. s Almacenarlas y transportarlas congeladas a 20 C hasta su uso Utilizar ADN bien purificado y libre de inhibidores de la PCR 9 Procedimiento a Extracci n de ADN El ADN se debe extraer de las muestras cl nicas utilizando un procedimiento de extracci n adecuado Hay diferentes kits de extracci n de ADN disponibles de distintos fabricantes El volumen de la muestra depende del protocolo utilizado Por favor realizar la extracci n de ADN siguiendo las instrucciones del fabricante Este kit ha sido validado con los siguientes sistemas de extracci n QlAamp DNA Blood Mini kit referencias 51104 51106 QIAGEN Maxwell 16 Cell LEV DNA Purification kit referencia AS1140 Promega Corporation Este kit puede ser utilizado con los siguientes sistemas de extracci n BioRobot EZ1 QIAGEN QlAcube QIAGEN NucliSENS easyMAG bioM rieux b Protocolo stage 2 Repeat as times 3 Temperature Cycle T Advance to Next Stage Selecci n de fluor foros TXR detecta Chlamydia trachomatis serotipo L Alx532 detecta el control interno c Preparaci n de la reacci n Descongelar la AmpliMix y el Control Positivo LGV Tomar una al cuota de 17 5 uL de Amplimix y a adir 7 5 uL del ADN de cada muestra o control a cada tubo Colocar los tubos en el equipo Seleccionar el protocolo CHSL G Iniciar el programa de amplificaci n d Interpretaci n de los resultados TLA
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