FICHE DE DEMANDE DE PROPOSITION
Contents
1. poser une goutte de suspension bact rienne sur une g lose non s lective Incuber les g loses a 35 37 C pendant 18 24 heures e Ajouter une goutte de r actif d h molyse dans la cupule 12 e Remettre le couvercle sur la galerie et incuber la galerie a 35 37 C pendant 18 24 heures 4 Interpr tation e Apres incubation enlever le couvercle lire et enregistrer les r sultats sur les formulaires de rapport e Reportez vous au tableau pour l interpr tation des r sultats e La r action d h molyse doit interpr t de la fa on suivante Examiner le fond de la cupule et noter la pr sence d une couche ou un tapis de globules rouge Dans ce cas le test doit tre interpr t comme n gatif L absence de tapis ou bouton de globules rouge est consid r comme un test positif Examiner l aspect de l inoculum dans le puits La pr sence d une solution claire au dessus du bouton de globules rouges dans le fond de la galerie doit tre interpr t e comme un test n gatif La pr sence d une couleur jaune paille brune et l absence d un bouton de globules rouge doit tre interpr t comme un test positif Si le test est difficile lire il est sugg r de lire la galerie sous une source lumineuse Test d h molyse positive Test d h molyse n gative Suspension jaune _ brune avec Solution claire diff renci e du bouton absence de bouton de globules de globules rouge e Examiner la purete de la g lose e Sur le for2. de r actifs additionnels Ces r sultats sont ensuite analys s avec le logiciel TAXiden Chaque galerie TAXiden Listeria se compose de douze puits 11 puits contenant des substrats pour des r actions biochimiques Reaction Positive Negative a Esculine ee drolyse esculine Jaune paille 2 Mannitol Arabitol La fermentation des sucres se traduit 6 Rhamnose par l acidification du milieu Jaune Violet trehalose _ L indicateur color BCP passe du violet au jaune 19 Glucose 1 Phosphate u D Glucose 11 Methyl D Mannose Methyl D Mannose Mannose H molyse des globules rouge de Couleur homog ne marron Solution claire au H molyse y 9 Absence tapis de globules dessus d un tapis mouton rouges au fond de la cupule de globules rouges Le puits N 12 est vide car utilis pour la r action d hemolyse directement dans le puit lorsque le r actif d h molyse est ajout dans la suspension bact rienne Autres conditions requises 1 Logiciel d identification TAXiden Fournit une identification bas e sur la probabilit le de probabilit et de la probabilit d une analyse de la qualit de diff renciation 2 Pipettes st riles et oeses st riles 3 Incubateur 35 37 C sans ventilation 4 R frig rateur 2 8 C 5 Stylo ou marqueur 6 Oxydase 7 P roxyde d hydrog ne pour test de catalase 8 R actifs pour coloration de Gram 9 Microscope et lames pour microscope 1
3. par autoclavage incin ration ou immersion dans un d sinfectant appropri avant leur limination 3 Les galeries et les couvercles ne sont pas compl tement sceller car les galeries ne doivent pas tre incub s dans un incubateur de CO2 probl me de ph ou un incubateur ventil vaporation excessive 4 Le r actifs pour le recherche d h molyse doit tre manipul en respectant les r gles de techniques microbiologiques afin d viter toute contamination Toujours conserver le r actif 2 8 C Eviter le contact du compte goutte avec support galerie ou autre support En cas de contact avec une source contamin e il est pr f rable de le changer Le r actif pour la recherche d h molyse ne doit pas tre utilis dans le cas de suspicion de d t rioration ou contamination Les signes de d t rioration se traduisent par une modification de couleur du milieu Le passage du rouge au brun doit faire suspecter une d gradation du milieu Dans ce cas le produit ne doit pas tre utilis Si le r sultat du test d h molyse n est pas clair la recherche d h molyse peut se faire sur une g lose au sang de mouton incub 35 837 C pendant 18 24 heures Limites d utilisation 1 Bien que les milieux s lectifs pour l isolement de Listeria spp sont formul s pour inhiber la pousse de nombreuses esp ces d autres especes peuvent ventuellement pouss es Bacillus spp Enterococcus spp et Staphylococccus spp 2 Le systeme TA
4. 0 Incubateur 25 sans ventilation Stockage et dur e de vie Les galeries TAXiden Listeria sont stables dans les sachets non ouverts et conserv s 2 8 C jusqu la date d expiration indiqu e sur l tiquette Le bouillon pour suspension et le r actif pour tude de l h molyse doivent tre conserv s entre 2 8 C Le r actif pour l tude de l h molyse doit mis 2 8C imm diatement apr s utilisation Proc dure inoculation et incubation 1 S lection des colonies pour l identification e Les souches peuvent tre test es partir de n importe quel milieu s lectif ou pas e Avant inoculation de la galerie TAXiden Listeria les souches doivent tre v rifi es pour s assurer de l appartenance au genre Listeria Petit bacille gram oxydade n gative catalase positive mobiles a 25 C et immobiles a 37 C 2 Pr paration de l inoculum e Mettre le bouillon de la suspension a temp rature ambiante avant inoculation Notice d utilisation R f FP 0133 On TAXiden Listeria Valid 30 10 13 e S lectionner une colonie bien isol e partir d une culture de 18 24 heures et mulsionner la colonie dans flacon de bouillon 2 5ml contenu dans le coffret e M langer soigneusement la suspension 3 Inoculation et incubation e Sortir la galerie de son emballage enlever le couvercle e D poser 100 ul de la suspension bact rienne dans chaque puits de la galerie e Pour v rifier la puret d
5. Xiden Listeria est concu pour identifier les organismes appartenent au genre Listeria et pas a autres genres En cas de doute sur certains tests hydrolyse esculine fermentation des sucres il est souhaitable de refaire une coloration de gram mobilit oxydase et catalase 3 Ne tester que des colonies uniques et pures dans la mesure ou des colonies m lang es peuvent donner des r sultats erron s 4 L inoculation d une g lose est recommand e car elle confirme la puret de l inoculum Contr les Qualit Le syst me d identification TAXiden doit tre contr l en utilisant des souches de contr le appropri es Les cultures suivantes sont recommand es pour le laboratoire ma a elelelalelele le alu Linoccua ATCO 33090 NCTOT1288 releielat letelsialelels NN Te EN ES ES ES ES ES EN EN ES ER Base de donn es Le syst me d identification TAXiden Listeria est fond sur des m thodes de tests biochimiques Les donn es fournies pour l interpr tation des profils de r action est bas e sur de sources de la litt rature reconnues 2 3 4 5 SMe MO fese ma xt AL o a rne Tac error Fe MERS DO OCIO Linocoua wo o 1 400 o 70 100 o 0 100 100 o weishimer 100 o os 10 o e7 100 o o se o o Esee gen 10 o 100 400 o o ar o o io s ao Livanov i00 o 97 10 s es o e os 0 90 More soo 97 o aon 100 o ea o o so fu o Le nombre indique le pourcentage de souc
6. bouillon 2 5ml IRIS nb Le bouillon doit tre a temp rature ambiante avant ensemencement 4 gouttes 100ul par puits INOCULATION nb Pour v rifier la puret Mettre 1 goutte de bouillon sur g lose non s lective dans conditions incubation standard REACTIFS ree ADDITIONNELS Puits 12 1 Goutte de r actif d h molyse TEMPS D INCUBATION 19 A neures TEMPERATURE 35 37 C LECTURES Lecture des plaques via logiciel TAXiden FINALES Lecture du test d h molyse d tails ci dessous Note Test hemolyse n gatif tapis de globules rouges ou couche distincte Test h molyse positif absence de tapis globules rouges ou couche distincte Notice d utilisation Ref FP 0133 Valid 30 10 13 TAXiden Listeria Principe du test Chaque galerie TAXiden Listeria contient 11 substrats d shydrat s pour l ex cution des tests d utilisation des glucides et une cupule vide pour l ex cution d une r action h molyse 4 La s lection des substrats est recommand e dans la norme de m thodes internationales 1 2 3 ainsi que d autres tests qui confirment l appartenance au genre Listeria hydrolyse esculine La fermentation du tr halose et arabitol 5 6 et ou permet d am liorer la diff renciation des diverses esp ces que comprend le genre L Identification des souches se fait par l enregistrement des r sultats visualis s par un changement de couleur apres 18 24 heures d Incubation Cette galerie ne n cessite pas ajout
7. hes positives Les colonnes gris es sont des tests de confirmation du genre Listeria spp JA Notice d utilisation a 1 R f FP 0133 Ys TAXiden Listeria Valid 30 10 13 ABAQUE DES COULEURS Carbohydrate R action NYOTO YSE seule Fermentation Haemolysine N gative Positive ATTENTION ne pas exposer un clairage naturel direct la lumi re provoque une modification des couleurs et une alt ration du papier Les couleurs de ce r f rentiel pourraient tre fauss es Ces couleurs constituent un guide de classification des couleurs obtenues va maiden Listeria N de demande Lab No Origine du Pr l vement Specimen type US LISTERIA N puits Well No 1 2 3 4 5 6 7 Reaction OX CAT LAT ESC MAN XYL ARL RIB RHA TRE TAG G1P MDG MDM HEM 8 9 10 11 12 R sultat Result Cotation 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 reactions
8. mulaire de r sultats TAXiden Listeria les substrats ont t organis s en triplettes 3 s ries de r actions A chaque substrat est attribu e une valeur num rique 1 2 ou 4 La somme des r actions positives pour chaque triplette constitue l un des chiffres du code octal utilis pour d terminer l identification de l esp ce Ce code est entr dans le syst me d identification TAXiden qui g n re un rapport de 3 organismes les plus probables identifi s dans la base de donn es Exemple de formulaire de r sultats val aiden Listeria Origine du Pr l vement Specimen type 6 ccc cece cece cece e eens eee eeeaeees e E E Eo A een seesies LISTERIA N puits Well No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Reaction OX CAT LAT ESC MAN XYL ARL RIB RHA TRE TAG G1P MDG MDM HEM R sultat Result Cotation 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 reactions Notice d utilisation Ref FP 0133 Valid 30 10 13 TAXiden Listeria Mises en garde et precautions Mesures de s curit 1 Le syst me TAXiden Listeria doit tre utilis par du personnel qualifi du laboratoire et respectant les techniques et precautions d asepsies microbiologiques les mat riaux utilis s doivent tre limin s en toute s curit par autoclavage incin ration ou immersion dans un d sinfectant appropri avant leur limination 2 Les mat riaux utilis s doivent tre limin s en toute s curit
9. nAxIden Systeme d identification LISTERIA Notice d utilisation i2a E Parc Eur ka E 401 avenue du Walhalla m CS83406 34060 MONTPELLIER Cedex E France T l 33 0 4 67 50 48 00 M Fax 33 0 4 67 17 09 06 ul e mail Za i2a info E www i2a info Notice d utilisation R f FP 0133 Valid 30 10 13 TAXiden Listeria Usage prevu TAXiden Listeria est un syst me pr vu pour tre utilis par du personnel de laboratoire form en milieu aseptis et avec les pr cautions microbiologiques ad quates TAXiden Listeria est une galerie de 12 puits contenant des substrats destin s l identification du genre Listeria Listeria monocytogenes Listeria innocua Listeria welshimeri Listeria grayi Listeria ivanovil Listeria seeligeri Definition des pictogrammes utilises Fabricant Dispositif M dical de Diagnostic In Vitro R f rence du catalogue Code du lot Utiliser jusque EE 1 O Limites de temp rature EC consulter le manuel d utilisation Pr sentation du produit REF Coffret contenant e Support de galeries TAXiden Listeria e Notice d utilisation avec abaques 010006 e Tableau d enregistrement des r sultats 20 flacons de bouillon pour suspension 1 flacon pour tude de l h molyse Mode Op ratoire simplifie LISTERIA SELECTION Bacille gram oxydase catalase latex mobile a 25 C et immobile a Mettre 1 colonie dans
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